Phân lập vi khuẩn bacillus Subtilis trong phân heo

Phân lập vi khuẩn bacillus Subtilis trong phân heo

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** NGUYỄN QUỲNH NAM PHÂN LẬP VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TRONG PHÂN HEO VÀ THỬ ĐỐI KHÁNG VỚI E COLI GÂY BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** PHÂN LẬP VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TRONG PHÂN HEO VÀ THỬ ĐỐI KHÁNG VỚI E COLI GÂY BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS.Nguyễn Ngọc Hải Nguyễn Quỳnh Nam Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2006 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY ***000*** ISOLATE BACILLUS SUBTILIS IN PIG FECES AND TEST THE ANTAGONISM WITH E COLI K88 Graduation thesis Major: Biotechnology Professor Student Dr Nguyễn Ngọc Hải Nguyễn Quỳnh Nam Term: 2002 - 2006 Ho Chi Minh City 09/2006 LỜI CẢM TẠ Con xin thành kính khắc ghi cơng lao khó nhọc cha mẹ, Ngƣời sinh thành, dƣỡng dục hy sinh tất anh em ăn học nên ngƣời Con xin cảm ơn gia đình chỗ dựa vững cho vững bƣớc qua khó khăn Em xin chân thành cảm ơn: Ban Giám Hiệu Trƣờng Đại Học Nông Lâm Tp HCM, ban Chủ Nhiệm môn Công Nghệ Sinh Học tạo điều kiện cho em thực thành cơng khóa luận TS Nguyễn Ngọc Hải tận tình hƣớng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi trang bị cho em kiến thức cần thiết để em hoàn tất khóa luận Tồn thể Thầy, Cơ trang bị cho em kiến thức q báu Các Thầy, Cơ phòng thực tập vi sinh hết lòng giúp đỡ cho em kinh nghiệm quí báu để em thực thành cơng khóa luận Các anh chị, bạn thực tập phòng vi sinh khuyến khích , ủng hộ giúp đỡ để em thực tốt khóa luận Các bạn lớp cơng nghệ sinh học 28 ln bên mình, động viên nhiệt tình giúp đỡ suốt thời gian học tập nhƣ lúc thực khóa luận Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng 07 năm 2006 Nguyễn Quỳnh Nam iii TÓM TẮT Enterotoxigenic E coli nguyên nhân gây bệnh tiêu chảy phổ biến heo heo cai sữa, hạn chế kháng sinh việc khống chế E coli gây bệnh tiêu chảy, chế phẩm sinh học từ Bacillus subtilis chƣa thực hiệu phòng trị bệnh Trong đề tài phân lập chủng Bacillus subtilis phân heo có khả ức chế mạnh phát triển E coli gây bệnh tiêu chảy heo Chúng phân lập đƣợc 22 chủng Bacillus subtilis phân heo, có 13 chủng tạo đƣợc vịng kháng khuẩn với E coli, tổng hợp kháng sinh ức chế phát triển E coli đƣợc kích thích nồng độ E coli đủ lớn, kháng sinh đƣợc Bacillus subtilis tổng hợp từ giai đoạn sớm phát triển ( - 12 ) có diện E coli Có chủng cho thấy ức chế mạnh mẽ E coli nhạy cảm với loại kháng sinh đƣợc thử nghiệm trừ colistin iv MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm tạ i Tóm tắt ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt iv Danh sách hình v Danh sách bảng vi MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 E coli gây bệnh tiêu chảy 2.2 Enterotoxigenic E coli 2.2.1 Độc tố nhạy nhiệt LT 2.2.1.1 Cấu tạo LT-1 2.2.1.2 Cơ chế tác động độc tố LT-1 2.2.2 Độc tố kháng nhiệt 2.2.2.1 Độc tố kháng nhiệt STa 2.2.2.2 Độc tố kháng nhiệt STb 2.2.3 Yếu tố gắn vào thành tế bào ruột ETEC 2.3 Chế phẩm sinh học 2.3.1 Định nghĩa 2.3.2 Cơ chế tác động 2.3.3 Ứng dụng chế phẩm sinh học 2.3.4 Yêu cầu chế phẩm sinh học 10 2.3.5 Đặc điểm chế phẩm sinh học dạng bào tử Bacillus subtilis 10 2.4 Bacillus subtilis 11 2.4.1 Đặc điểm phân loại 11 2.4.2 Đặc điểm hình thái 11 2.5 Kháng sinh đƣợc tổng hợp Bacillus subtilis 13 2.5.1 Giới thiệu 13 2.5.2 Peptide antibiotic đƣợc tổng hợp ribosome 14 2.5.2.1 Subtilin 14 2.5.2.2 Subtilosin 15 2.5.2.3 Sublancin 16 2.5.2.4 TasA 16 2.5.3 Peptide antibiotic không đƣợc tổng hợp ribosome 18 2.5.3.1 Surfactin 17 2.5.3.2 Fengycin 19 2.5.3.3 Mycosubtilin 29 2.5.3.4 Bacilysocin 20 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 v 3.1 Thời gian địa điểm thực đề tài 22 3.1.1 Thời gian 22 3.1.2 Địa điểm 22 3.2 Vật liệu thí nghiệm 22 3.2.1 Mẫu thí nghiệm 22 3.2.2 Hóa chất 22 3.2.3 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 22 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 3.3.1 Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis phân heo 22 3.3.2 Các phản ứng thử sinh hóa 23 3.3.3 Thử đối kháng với E coli môi trƣờng TSA 24 3.3.4 Đánh giá đối kháng với E coli môi trƣờng TSB 24 3.3.5 Thử kháng sinh đồ 24 3.3.6 Đánh giá khả phân giải tinh bột môi trƣờng thạch tinh bột 1% 24 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Kết 25 4.1.1 Kết phân lập Bacillus subtilis phân heo 25 4.1.2 Kết thử đối kháng với E coli môi trƣờng TSA 27 4.1.3 Kết đối kháng môi trƣờng TSB 29 4.1.4 Kết thử kháng sinh đồ 30 4.1.5 Kết đánh giá khả phân giải tinh bột 32 4.2 Thảo luận 32 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 33 5.1 Kết luận 33 5.2 Đề nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC 39 vi DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT ETEC : Enterotoxigenic E coli EAEC : Enteroaggregative E coli LT : Heat-labile toxin ST : Heat-stable toxin CT : Cholera enterotoxin EAST : Enteroaggreative stable-toxin ENS : Enteric nervous system GC-C : Guanylate cyclase C ABC : ATP-binding cassette vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 4.1 : Kết phân lập môi trƣờng TSA 25 Hình 4.2 : Đối kháng Bacillus subtilis với E coli môi trƣờng TSA với nồng độ pha loãng canh khuẩn E coli 10-2 27 Hình 4.3 : Kết kháng sinh đồ 31 Hình 4.4 : Hình phân giải tinh bột Bacillus subtilis Biểu đồ 4.1: Biểu đồ biểu thay đổi E coli qua thời điểm 28 viii DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 4.1 : Kết độ lớn vòng kháng khuẩn chủng Bacillus subtilis phân lập đƣợc với E coli nồng độ pha loãng 10-2 môi trƣờng TSA 27 Bảng 4.2 : Kết số lƣợng CFU/ml E coli qua khoảng thời gian giờ, 12 giờ, 24 giờ, 36 29 Bảng 4.3 : Kết thử kháng sinh đồ chủng đƣợc thử đối kháng 30 Bảng 4.4 : Kết tạo vòng phân giải tinh bột chủng Bacillus subtilis phân lập đƣợc môi truờng thạch tinh bột 1% ix 32 ... 1.2.2 Yêu cầu Phân lập chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân heo hộ nuôi heo Đồng Nai Bình Dƣơng Chọn lọc đƣợc dịng Bacillus subtilis kháng khuẩn E coli Đánh giá đối kháng chủng Bacillus subtilis. .. ***000*** PHÂN LẬP VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TRONG PHÂN HEO VÀ THỬ ĐỐI KHÁNG VỚI E COLI GÂY BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Giáo vi? ?n hƣớng dẫn: Sinh vi? ?n... hóa… .Trong lồi vi khuẩn khác thuộc giống bacillus Bacillus subtilis đƣợc tập trung nhiều dịng vi khuẩn Bacillus subtilis không mang gene gây độc cho ngƣời thú, trình hình thành bào tử Bacillus subtilis