Xây dựng phương pháp multiplex PCR sàng lọc phát hiện thành phần biến đổi gen (GM) trong sản phẩm có nguồn gốc từ đậu nành và bắp

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGUYỄN PHAN VIỄN PHƯƠNG XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP MULTIPLEX-PCR SÀNG LỌC PHÁT HIỆN THÀNH PHẦN BIẾN ĐỔI GEN (GM) TRONG SẢN PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐẬU NÀNH VÀ BẮP Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, Tháng 01/2020 Cơng trình hồn thành tại: Trường Đại học Bách Khoa - ĐHQG HCM Cán hướng dẫn khoa học 1: TS Nguyễn Tiến Dũng Cán hướng dẫn khoa học 2: TS Hoàng Mỹ Dung Cán chấm nhận xét 1: TS Nguyễn Hoàng Chương Cán chấm nhận xét 2: PGS.TS Nguyễn Thúy Hương Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa – ĐHQG HCM ngày 14 tháng 01 năm 2020 Thành phần hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: Chủ tịch hội đồng: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng 2.Thư ký hội đồng: PGS.TS Lê Thị Thủy Tiên Ủy viên phản biện 1: TS Nguyễn Hoàng Chương Ủy viên phản biện 2: PGS.TS Nguyễn Thúy Hương Ủy viên hội đồng: TS Nguyễn Tiến Dũng Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC PGS.TS Nguyễn Đức Lượng GS.TS Phan Thanh Sơn Nam ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập-Tự do-Hạnh phúc …o0o… …o0o… NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Nguyễn Phan Viễn Phương MSHV: 1670719 Ngày, tháng, năm sinh: 27/09/1990 Nơi sinh: An Giang Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60420201 I TÊN ĐỀ TÀI: Xây dựng phương pháp Multiplex-PCR sàng lọc phát thành phần biến đổi gen (GM) sản phẩm có nguồi gốc từ đậu nành bắp II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Xây dựng phương pháp Multiplex-PCR sàng lọc phát thành phần biến đổi gen (GM) sản phẩm có nguồi gốc từ đậu nành bắp với nội dung sau Nghiên cứu xây dựng phương pháp Multiplex-PCR phục vụ cho mục tiêu sàng lọc vật liệu biến đổi gen Đánh giá hiệu lực phương pháp đề xuất Khảo sát thực trạng thương mại sản phẩm biến đổi gen từ bắp đậu nành thị trường khu vực thành phố HCM III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 11/02/2019 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 08/12/2019 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TS Nguyễn Tiến Dũng TS Hoàng Mỹ Dung TP HCM, Ngày 03, tháng 01, năm 2020 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS Nguyễn Tiến Dũng TS Hồng Mỹ Dung CHỦ NHIỆM BỘ MƠN ĐÀO TẠO TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC PGS.TS Lê Thị Thủy Tiên GS.TS Phan Thanh Sơn Nam Lời cảm ơn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Tiến sĩ Nguyễn Tiến Dũng cho em hội tạo điều kiện tốt với hướng dẫn tận tình, chi tiết giúp em hồn thành luận văn Tiến sĩ Hoàng Mỹ Dung trao đổi, góp ý nhiệt tình Ln tạo khơng khí gần gũi, vui vẻ động viên em lúc cần thiết suốt trình thực đề tài Quý Thầy, Cô trường Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh truyền đạt kiến thức cho em suốt thời gian học tập trường Cảm ơn anh, chị, em, bạn đồng nghiệp phòng Kiểm nghiệm Sinh học NAFIQAD4 khoảng thời gian sinh hoạt vui vẻ, sôi vào lúc căng thẳng Gia đình người bạn thân thiết quan tâm, lắng nghe, chia sẻ tin tưởng Thành phố Hồ Chí Minh, 01/2020 Nguyễn Phan Viễn Phương i Tóm tắt TĨM TẮT Các quy định dán nhãn sản phẩm sử dụng nguyên liệu có nguồn gốc từ trồng biến đổi gen ban hành giới Việt Nam nhằm đảm bảo quyền lựa chọn người tiêu dùng phục vụ cho việc kiểm soát an ninh sinh học Hiện nay, multiplex PCR phương pháp phân tích sử dụng phổ biến cho mục đích sàng lọc phát thành phần biến đổi gen Trong nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành tối ưu hóa đánh giá hiệu lực quy trình multiplex PCR phát đồng thời ba trình tự mục tiêu gồm hai trình tự thị biến đổi gen P-35S, T-Nos trình tự gen taxon Lectin cho sản phẩm từ đậu nành Zein cho sản phẩm từ bắp Quy trình phản ứng tối ưu với tỉ lệ nồng độ mồi 0,09:0,09:0,09 M; nhiệt độ bắt cặp mồi khuôn 59oC cho phép phát chuyên biệt P-35S, T-nos sản phẩm có chứa 0,1% đậu nành biến đổi gen sản phẩm có chứa 0,042% bắp biến đổi gen Để kiểm tra khả ứng dụng phương pháp multiplex PCR, thực so sánh kết phân tích phương pháp multiplex PCR kit thương mại SureFood GMO SCREEN 35S+NOS+FMV 42 mẫu thực tế Kết so sánh cho thấy, hai phương pháp có độ tương đồng cao với hệ số Kappa đạt 0,69 mẫu đậu nành 0,90 với mẫu bắp ii ABSTRACT ABSTRACT In many countries as well as Việt Nam, the labelling requirements for products using genetically modified organisms material have been established in order to guarantee the consumer freedom of choice and serve biosecurity control purpose At the present time, multiplex PCR is a popular anlytical method using for screening and detecting genetically modified organisms material In this research, we have carried out optimizing and validating multiplex PCR method for screening and detecting at the same time three target sequences, including two transgene indicator sequences P-35S, T-Nos and taxon sequence Lectin for products derived from soybean or Zein for products derived from maize Optimal reaction protocol, which have cocentration ratio each primer 0,09:0,09:0,09M and optimal annealing temperature 59oC can detect P-35S, T-Nos in product containing 0.1% genetically modified soybean and 0.042% genetically modified maize In order to test application efficiency of this new multiplex PCR method, we compared its testing results with trading kit SureFood GMO SCREEN 35S+NOS+FMV on 42 practical samples The comparision result showed that two methods have got high consensus with Kappa value reach 0,69 for soybean matrix samples and 0,90 for maize matrix samples iii LỜI CAM ĐOAN LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu nghiên cứu khách quan trung thực Nếu có sai sót liên quan đến đề tài, tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm Nguyễn Phan Viễn Phương iv MỤC LỤC MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan GMO, lược sử hình thành phát triển 1.1.1 Giới thiệu GMO 1.1.2 Lược sử hình thành, phát triển 1.1.3 Xu hướng ứng dụng GMO 1.2 Tình hình trồng biến đổi gen (GMC) Việt Nam giới 12 1.2.1 Trên giơi 12 1.2.2 Tại Việt Nam 13 1.3 Các quy định kiểm soát GMC giới Việt Nam 15 1.3.1 An ninh sinh học liên quan đến GMO 15 1.3.2 Quy định sử dụng sản phẩm GMC số nước giới 16 1.3.3 Quy định sử dụng sản phẩm GMC Việt Nam 17 1.4 Các phương pháp phân tích GMO thực phẩm thức ăn chăn nuôi 19 1.4.1 Phương pháp phân tích GMO dựa protein 19 1.4.2 Phương pháp phân tích GMO dựa DNA 21 1.5 Các nghiên cứu nước giới GMO 33 1.6 Mục tiêu nội dung nghiên cứu đề tài 35 1.6.1 Tính cấp thiết, ý nghĩa đề tài 35 1.6.2 Mục tiêu nghiên cứu 37 1.6.3 Nội dung nghiên cứu đề tài 37 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Vật liệu 38 2.1.1 Mẫu thử nghiệm 38 2.1.2 Primer 39 2.2 Hóa chất 40 v MỤC LỤC 2.2.1 Hóa chất tách chiết 40 2.2.2 Hóa chất cho phản ứng Multiplex PCR(Promega) 40 2.2.3 Kit thương mại đối chứng 40 2.2.4 Hóa chất cho điện di sản phẩm PCR 40 2.3 Thiết bị dung cụ 40 2.4 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát 41 2.5 Bố trí thí nghiệm 42 2.5.1 Nghiên cứu xây dựng phương pháp 42 2.5.2 Đề xuất phương pháp 46 2.5.3 Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp 46 2.5.4 So sánh độ tương đồng với kit thương mại 51 2.5.5 Khảo sát thực tế trạng sử dụng GMOs địa bàn TP.HCM 52 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 54 3.1 Kết nghiên cứu xây dựng phương pháp 54 3.1.1 Kết khảo sát tính chuyên biệt cặp mồi sử dụng 54 3.1.2 Kết tối ưu hóa thơng số kỹ thuật phương pháp 56 3.1.3 Đề xuất phương pháp 66 3.2 Kết xác nhận giá trị sử dụng phương pháp 71 3.2.1 Giới hạn phát phương pháp Triplex-PCR (LOD95) 71 3.2.2 Xác nhận thông số kỹ thuật độ xác, độ nhạy, độ đặc hiệu, tỉ lệ dương tính giả, tỉ lệ âm tính giả phương pháp triplex-PCR 73 3.2.3 Thử nghiệm độ ổn định phương pháp triplex-PCR 78 3.3 So sánh độ tương đồng phương pháp triplex-PCR với kit thương mại 81 3.4 Khảo sát thực tế trạng sử dụng GMOs địa bàn TP.HCM 84 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 86 4.1 Kết luận 86 4.2 Kiến nghị 86 TÀI LIỆU THAM KHẢO-PHỤ LỤC vi DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ Chương 1: TỔNG QUAN Bảng 1.1: Một số loại trồng, động vật biến đổi gen ứng dụng nông nhiệp, thực phẩm Bảng 1.2: Một số chủng vi sinh vật biến đổi gen sử dụng xử lý ô nhiễm Bảng 1.3: Một số sinh dược sản xuất GMO FDA cấp phép 10 Bảng 1.4: Quy định dán nhãn thực phẩm biến đổi gen số quốc gia trênthế giới 17 Bảng 1.5: Vai trò nhiệm vụ Bộ quản lý an toàn Sinh học GMC 18 Bảng 1.6: Các phương pháp phân tích GMO sử dụng kỹ thuật PCR CGE 27 Bảng 1.7: Danh mục cặp reporter-Quencher thông dụng thiết kế probe 31 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIEN CỨU Bảng 2.1: Danh mục vật liệu thực vật sử dụng cho nghiên cứu 38 Bảng 2.2: Danh mục cặp mồi dùng nghiên cứu 39 Sơ đồ 2.1: Quy trình nghiên cứu tổng quát 41 Bảng 2.3: Thông tin định lựa chọn khoảng Gradient nhiệt độ khảo sát 43 Bảng 2.4: Thành phần chu kỳ nhiệt phản ứng khảo sát Ta 44 Bảng 2.5: Tổ hợp tỷ lệ mồi Taxon:Target khảo sát 46 Bảng 2.6: Bảng mô tả mẫu mô 48 Bảng 2.7: Bảng số liệu kết thử nghiệm khảo sát thông số kỹ thuật phương pháp triplex-PCR 50 Bảng 2.8: Điều kiện thử nghiệm khảo sát độ ổn định phương pháp 51 Bảng 2.9: Bảng thu thập liệu tính hệ số Kappa 52 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN Bảng 3.1: Kết lựa chọn tỉ lệ nồng độ mồi cho phản ứng Triplex-PCR khuếch đại gen Lectin:P-35S:T-Nos 63 ii TÀI LIỆU THAM KHẢO 13 A Lievens, et al (2015), "Genetically modified animals: Options and issues for traceability and enforcement", Trends in Food Science & Technology 44 (2015) 159e176 14 Sandeep Kumar, et al (2018), "Genetically Modified Microorganisms (GMOs) for Bioremediation" Biotechnology for Environmental Management and resource Recovery, 2013, pp 191-218 15 Naeema Jan, et al (2016), An Overview on Edible Vaccines and Immunization, Austin J Nutri Food Sci - Volume Issue – 2016 16 Langridge WH (2000) Edible vaccines Scientific American, Inc 17 Bui Huong and Benjamin Petlock (2017), "Vietnam Agricultural Biotechnology Annual", GAIN Report Number: VM7071 18 V.T Forte, et al (2004), "A general multiplex-PCR assay for the general detection of genetically modified soya and maize", Food Control 16 (2005) 535– 539 Tài liệu tiếng Việt 19 Khuất Đăng Long (2013) "Về sinh vật biến đổi gen, nhận thức lợi ích, nguy rủi ro chúng" Tạp chí sinh học, 35(4):397-416 20 Nguyễn Thị Mỹ Linh cộng (2015) "Xây dựng quy trình phát gen CpTI(Cowpea Trypsin Inhibitor gene) gạo có nguồn gốc Trung Quốc phương pháp Realtime PCR" , Tạp chí phát triển KH&CN, tập 18, số T32015 21 Nguyễn Lộc Hiền cộng (2014) "Nhận diện sản phẩm chuyển gen thức ăn chăn ni kỹ thuật PCR" Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 30(2014):6-12 22 Phạm Hùng Vân (2009), PCR Realtime PCR vấn đề ứng dụng thương gặp, nhà xuất Y học 23 Trần Cao Sơn cộng (2010) Thẩm định phương pháp phân tích hóa học&sinh học, nhà xuất khoa học kỹ thuật iii TÀI LIỆU THAM KHẢO 24 Nguyễn Thị Mỹ Linh (2018), "Xây dựng quy trình phát trồng biến đổi gen (GMO) hướng đến phát 21 chuyên biệt kiện GMO Việt Nam phương pháp Real time PCR", Hội nghị khoa học lần XI Đại học Khoa học tự nhiên TP HCM 25 Nguyễn Tuấn Anh cộng sự, (2014), "Xây dựng quy trình multiplex PCR phát mộ số vi khuẩn gây tiêu chảy lợn", Tạp chí Sinh học,36(1se):8-14 Tài liệu Internet 26 http://www.isaaa.org/ 27 https://allianceforscience.cornell.edu/blog/2018/02/gmo-crops-increasingyield-20-years-progress-ahead/ 28 https://thuvienphapluat.vn/van-ban/Thuong-mai/Quyet-dinh-178-1999QD-TTg-Quy-che-ghi-nhan-hang-hoa-luu-thong-trong-nuoc-hang-hoa-xuat-nhapkhau-45630.aspx 29 http://ribe.hcmuaf.edu.vn/ribe-14412-1/vn/phan-tich-gmoimg-src-imagesnewgif-border 0.html 30 https://tuoitre.vn/gmo-va-cuoc-tranh-luan-chua-ket-thuc-750636.htm 31 http://www.who.int/foodsafety/areas_work/food-technology/faqgenetically-modified-food/en/ 32 http://kt-biotech.com/accupid-bar-gene-detection-kit/?which_page=1 33 https://baomoi.com/xuat-khau-nong-lam-thuy-san-nam-2017-dat-36-37-tyusd/c/24431443.epi 34 http://vtv.vn/kinh-te/nong-san-viet-chinh-phuc-thi-truong-xuat-khau20180222190009189.htm 35 https://international.neb.com/tools-and-resources/usageguidelines/guidelines-for-pcr-optimization-with-taq-dna-polymerase 36 https://international.neb.com/protocols/2012/09/13/multiplex-pcrguidelines-for-multiplex-pcr-5x-master-mix-m0284 37 http://khcn.cinet.vn/articledetail.aspx?articleid=963#sthash.G4RyhYOv.dp bs iv TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 https://happytrade.org/cac-loai-thuc-pham-bien-doi-gen-GMO-tai-vietnam 39 https://vietnammoi.vn/viet-nam-dang-rong-vong-tay-don-gmo-24878.html 40 https://vietnambiz.vn/20-nam-dien-tich-cay-trong-gmo-toan-cau-tang-110lan-24630.html 41 https://nongnghiep.vn/bien-viet-nam-thanh-noi-xuat-khau-giong-gmo-cuakhu-vuc-post189101.html 42 http://pamorganic.com/library/index/view/id/7/ 43 http://vbpl.vn/bonongnghiep/Pages/vbpq-print.aspx?ItemID=94028 44 http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/gmomethods/ 45 https://baomoi.com/xuat-khau-nong-lam-thuy-san-nam-2017-dat-36-37-tyusd/c/24431443.epi 46 http://vtv.vn/kinh-te/nong-san-viet-chinh-phuc-thi-truong-xuat-khau20180222190009189.htm 47 http://premierbiosoft.com/tech_notes/microarray.html 48 https://www.youtube.com/watch?v=0ATUjAxNf6U 49 https://www.thermofisher.com/vn/en/home/brands/thermoscientific/molecular-biology/molecular-biology-learning-center/molecular-biologyresource-library/spotlight-articles/8-DNA-ladder-tips.html 50 https://www.sigmaaldrich.com/technicaldocuments/articles/biology/marker-selection-guide.html 51 http://sitn.hms.harvard.edu/flash/2015/from-corgis-to-corn-a-brief-look-atthe-long-history-of-gmo-technology/ 52 https://geneticliteracyproject.org/2015/08/12/gmos-from-ancient-historyto-the-future/ 53 https://www.fda.gov/animal-veterinary/animals-intentional-genomicalterations/aquadvantage-salmon-fact-sheet 54 https://croplifevietnam.org/cong-nghe-sinh-hoc 55 http://vbpl.vn/bonongnghiep/Pages/vbpq-van-bangoc.aspx?ItemID=25420 v TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 https://www.academia.edu/10210943/Production_of_Proteins_from_Clone d_Genes 57 http://dhnammp.blogspot.com/2017/06/thong-ke-kappa-kappa-test.html 58 https://food.r-biopharm.com/products/surefood-gmo-35s-nos-fmv/ 59 http://www.elisa-antibody.com/ 60 https://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/gmomethods/ i PHỤ LỤC PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết nghiên cứu xây dựng phương pháp Hình 1.1: Trình tự khuếch đại thu từ cặp mồi phát Lectin, Zein ii PHỤ LỤC Hình 1.2: Trình tự khuếch đại thu từ cặp mồi phát P-35S, T-Nos iii PHỤ LỤC Hình 1.3: Kết BLAST trình ttự khuếch đại cặp mồii theo th thứ tự Lectin, Zein, P P-35S T-Nos lên sở liệu u NCBI iv PHỤ LỤC Phụ lụcc 2: K Kết xác nhận giá trị sử dụng ng phương pháp WS 2%, tỉ lệ dương tính 10/10 WS 1%, tỉ lệ dương tính 10/10 WS 0.5%, tỉ lệ dương tính 10/10 WS 0.1%, tỉ lệ dương tính 9/10 Giếng L: Ladder; Giếng(+): ng(+): ch chứng dương; Giếng(-): chứng âm; Giếếng 1-10: số lần phân tích lặp lại mẫu mơ Hình 2.1: Kết thử nghiệm xác nhận LOD củaa phương pháp Triplex Triplex-PCR Lectin: P-35S:T 35S:T-Nos mẫu đậuu nành nguyên hạt h (WS) v PHỤ LỤC HS 2%, tỉ lệ dương tính 10/10 HS 1%, tỉ lệ dương tính 10/10 HS 0.5%, tỉ lệ dương tính 10/10 HS 0.1%, tỉ lệ dương tính 5/10 Giếng L: Ladder; Giếng(+): ng(+): ch chứng dương; Giếng(-): chứng âm; Giếếng 1-10: số lần phân tích lặp lại mẫu mơ Hình 2.2: Kết thử nghiệm xác nhận LOD củaa phương pháp Triplex Triplex-PCR Lectin: P-35S:T 35S:T-Nos mẫu đậu nành thủyy phân (HS) (H vi PHỤ LỤC AS 2%, tỉ lệ dương tính 10/10 AS 1%, tỉ lệ dương tính 10/10 AS 0.5%, tỉ lệ dương tính 8/10 AS 0.5%, tỉ lệ dương tính 4/10 Giếng L: Ladder; Giếng(+): ng(+): chứng ch dương; Giếng(-): chứng âm; Giếếng 1-10: số lần phân tích lặp lại mẫu mơ Hình 2.3: Kết thử nghiệm xác nhận LOD củaa phương pháp Triplex Triplex-PCR Lectin: P 35S:T-Nos mẫu đậu nành acid hóa (AS) (A vii PHỤ LỤC WM 2%, tỉ lệ dương tính 10/10 WM 1%, tỉ lệ dương tính 10/10 WM 0.5%, tỉ lệ dương tính 10/10 WM 0.1%, tỉ lệ dương tính 10/10 WM 0.05%, tỉ lệ dương tính 9/10 WM 0.01%, tỉ lệ dương tính 7/10 Giếng L: Ladder; Giếng(+): ng(+): ch chứng dương; Giếng(-): chứng âm; Giếếng 1-10: số lần phân tích lặp lại mẫu mơ Hình 2.4: Kết thử nghiệm xác nhận LOD củaa phương pháp Triplex-PCR Triplex Zein: P-35S:T 35S:T-Nos mẫu bắp nguyên hạtt (WM) viii PHỤ LỤC TM 2%, tỉ lệ dương tính 10/10 TM 1%, tỉ lệ dương tính 10/10 TM 0.5%, tỉ lệ dương tính 10/10 TM 0.1%, tỉ lệ dương tính 10/10 TM 0.05%, tỉ lệ dương tính 8/10 TM 0.01%, tỉ lệ dương tính 6/10 /10 Giếng L: Ladder; Giếng(+): ng(+): ch chứng dương; Giếng(-): chứng âm; Giếếng 1-10: số lần phân tích lặp lại mẫu mơ Hình 2.5: Kết thử nghiệm xác nhận LOD củaa phương pháp Triplex-PCR Triplex Zein: P-35S:T 35S:T-Nos mẫu bột bắp xử lý nhiệtt (TM) ix PHỤ LỤC (A) Kết phân tích kit SureFood GMO SCREEN 35S+NOS+FMV (B) Kết phân tích phương pháp triplex-PCR triplex Lectin:P-35S:T Nos Giếng L :Ladder; Giếng +: chứng dương; Giếng -: mẫu đậ ậu nành không GMO; Giếng NTC:: Mastermix phản ph ứng; Giếng 1: Đậu hủ trắng; Gi Giếng 2:Đậu hủ chiên; Giếng 3: Bột đậ ậu nành uống; Giếng 4: Tương hột-1; Giếng ng 55: Chao-1; Giếng 6: Soymeal; Giếng ng 7-10: Đậu nguyên hạt-1,2,3,4; Giếng 11-19:: Thức Th ăn chăn nuôi-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9; Giếng 20: Tương hột-2; Giếng 21: Chao Hình 2.6: Kết phân tích mẫu m kit thương mại SureFood GMO SCREEN 35S+NOS+FMV(A) phương pháp triplex-PCR Lectin: P P-35S:T-Nos(B) x PHỤ LỤC (A) Kết phân tích kit SureFood GMO SCREEN 35S+NOS+FMV (B) Kết phân tích phương pháp triplex triplex-PCR Zein: P-35S:T35S:T-Nos Giếng L :Ladder; Giếng ng +: + chứng dương; Giếng -: mẫu bắp nếp; Giếng Gi NTC: Mastermix phản ứng; Giếng 1:: Snack bắp-1; b Giếng 2:Bắp Mỹ-1; Giếng 3: Hạạt giống bắp Syngenta; Giếng 4: Bắp nếp luộc;; Giếng 5: Bắp nếp-1; Giếng 6: Snack bắp-2;; Giếng 7-15: Thức ăn chăn nuôi-1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9; Giếng 16-17: Bắp Mỹ-2, 3; Gi Giếng 18: Snack bắp-3; Giếng 19-20: Bắp nếp-2, 2, 3; Giếng 21: Snack bắp-4 Hình 2.7: Kết phân tích mẫu m kit thương mại SureFood GMO SCREEN 35S+NOS+FMV(A) phương pháp triplex-PCR Zein:P 35S:T-Nos(B) LÝ LỊCH TRÍCH NGANG THƠNG TIN CÁ NHÂN Họ tên: NGUYỄN PHAN VIỄN PHƯƠNG Ngày, tháng, năm sinh: 27/09/1990 Nơi sinh: An Giang Địa liên lạc: C2-5.03, Chung cư Ehome4, đường Vĩnh Phú 41, thị xã Thuận An, Bình Dương Q TRÌNH ĐÀO TẠO 2008-2012: Theo học trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG TP HCM Chuyên ngành Sinh học 2016-2020: Theo hoc trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG TP HCM Chương trình cao học, chun ngành Cơng nghệ sinh học Q TRÌNH CƠNG TÁC 2012 đến nay: Phòng Kiểm nghiệm Sinh học, Trung tâm Chất lượng Nông lâm thủy sản vùng ... thành phần biến đổi gen (GM) sản phẩm có nguồi gốc từ đậu nành bắp II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Xây dựng phương pháp Multiplex-PCR sàng lọc phát thành phần biến đổi gen (GM) sản phẩm có nguồi gốc từ đậu. .. phí Đề tài tiến hành ? ?Xây dựng phương pháp Multiplex-PCR sàng lọc phát thành phần biến đổi gen (GM) sản phẩm có nguồn gốc từ đậu nành bắp" Mục tiêu phương pháp cho phép phát đồng thời trình tự... cứu đề tài nhằm xây dựng phương pháp MutiplexPCR để phát hiện, sàng lọc thành phần biến đổi gen sản phẩm có nguồn gốc từ bắp đậu nành lưu hành thị trường sản phẩm phục vụ cho xuất