Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng lên sự sinh tổng hợp anthocyanin trong nuôi cấy tế bào dâu tây (fragaria annanassa l )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHẠM THỊ MỸ TRÂM KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG LÊN SỰ SINH TỔNG HỢP ANTHOCYANIN TRONG NUÔI CẤY TẾ BÀO DÂU TÂY (FRAGARIA ANANASSA L.) Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 07 năm 2011 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA – ĐHQG – TP HCM Cán hướng dẫn khoa học: Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG – TP.HCM, ngày tháng năm 2011 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: 1…………………………………………………………………………… 2.………………………………………………………………………… 3…………………………………………………………………………… 4…………………………………………………………………………… 5…………………………………………………………………………… Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: PHẠM THỊ MỸ TRÂM MSHV: 03108147 Ngày, tháng, năm sinh: 14/08/1985 Nơi sinh: Quảng Ngãi Chuyên nghành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60 42 80 1- TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng lên sinh tổng hợp anthocyanin nuôi cấy tế bào dâu tây (Fragaria ananassa L.) 2- NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Nhân giống dâu tây, tạo mơ sẹo thích hợp cho tạo huyền phù tế bào - Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng lên tăng sinh huyền phù tế bào - Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến sinh tổng hợp anthocyanin tế bào huyền phù 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 7/2010 4- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 7/2011 5- HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TS LÊ THỊ THUỶ TIÊN Tp HCM, ngày CÁN BỘ HƯỚNG DẪN tháng năm 2011 CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) TRƯỞNG KHOA (Họ tên chữ ký) -i- LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô Lê Thị Thuỷ Tiên, người tận tình hướng dẫn, định hướng, truyền đạt kiến thức chuyên ngành kinh nghiệm thực tiễn q báu Cơ ln giúp đỡ động viên tơi suốt q trình thực đề tài tốt nghiệp Đồng thời, xin chân thành cảm ơn tồn thể q Thầy Cơ tận tâm truyền đạt kiến thức kinh nghiệm cho suốt khóa học vừa qua Xin cảm ơn q Thầy Cô, cán thuộc môn Công nghệ Sinh học trường Đại học Bách khoa Tp.HCM nhiệt tình dẫn, hỗ trợ phương tiện, dụng cụ thí nghiệm tạo điều kiện cho tơi hồn thành bảo vệ đề tài Xin cảm ơn cha mẹ người thân gia đình ln ủng hộ động viên suốt thời gian học tập thực đề tài Cảm ơn tập thể lớp CHCNSH09 giúp đỡ chia sẻ khó khăn với tơi học tập trình thực đề tài Trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM HVTH Phạm Thị Mỹ Trâm - ii - TÓM TẮT Anthocyanin hợp chất màu thiên nhiên, thuộc nhóm flavonoid, ứng dụng thực phẩm, mỹ phẩm dược phẩm Với ưu vượt trội so với chất màu nhân tạo, anthocyanin từ thực vật kể dâu tây quan tâm nghiên cứu Kỹ thuật nuôi cấy tế bào thực vật môi trường lỏng (nuôi cấy huyền phù tế bào) phương pháp thích hợp để thu nhận anthocyanin Ảnh hưởng mật độ tế bào, hàm lượng đường, chất điều hoà sinh trưởng thực vật tốc độ lắc máy lắc vòng lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây Fragaria ananassa L khảo sát Huyền phù tế bào hình thành từ mơ sẹo có nguồn gốc từ dâu tây môi trường Murashige Skoog (1962) (MS) bổ sung saccharose 30 g/l, 2,4-D 1,0 mg/l KIN 0,3 mg/l Huyền phù tế bào tăng trưởng tốt mật độ tế bào gam tế bào tươi 20 ml môi trường lỏng Thành phần mơi trường thích hợp cho tăng trưởng huyền phù tế bào môi trường MS bổ sung saccharose 30 g/l, 2,4-D 1,3 mg/l KIN 0,5 mg/l tốc độ lắc 100 vòng/phút Đồng thời, ảnh hưởng cường độ ánh sáng, tiền chất phenylalanine lên sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây khảo sát nghiên cứu Kết thực nghiệm cho thấy, huyền phù tế bào nuôi cường độ ánh sáng 4000 lux phenylalanine nồng độ 40 mg/l bổ sung vào ngày thứ q trình ni cấy làm tăng hoạt động sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây với hàm lượng anthocyanin thu 12,57.10-3% FW - iii - ABSTRACT Anthocyanins are natural pigments, a subclass of the flavonoids, used in foods, cosmetics and pharmaceuticals With better advantages in comparision with artificial colorants, anthocyanin from plants including strawberry is interested in researching The technique of plant cell cultures in liquid medium (cell suspension cultures) is one of appropriate methods to extract anthocyanin Effects of cell density, sucrose concentration, plant growth regulator and shaking speed on the growth of cell suspension cultures from Lam Dong strawberry (Fragaria ananassa L.) were investigated Cell suspension cultures were initated from calli derived from strawberry leaves on Murashige and Skoog (1962) medium supplemented with 2,4-D 1.0 mg/l and kinetin 0.3 mg/l Cell suspension cultures grew best at cell density of g fresh cell in 20 ml liquid medium Optimum medium for the growth of cell suspension was MS medium supplemented with sucrose 30 g/l , 2,4-D 1.3 mg/l and kinetin 0.5 mg/l at 100 rpm And, the effects of light intensity and precursor phenylalanine on the biosynthesis of anthocyanin of strawberry cell suspension were also investigated in this study Experimental results show that cell suspension cultured under 4000 lux light intensity and phenylalanine 40 mg/l supplemented on day 7th increased the activity of the anthocyanin biosynthesis of strawberry cell suspension with a concentration of anthocyanin obtained 12.57x10-3% FW - iv - MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH x DANH MỤC ẢNH xi DANH MỤC ĐỒ THỊ xii CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Hợp chất thứ cấp từ thực vật 2.1.1 Giới thiệu hợp chất thứ cấp từ thực vật 2.1.2 Ý nghĩa hợp chất thứ cấp thực vật 2.1.3 Sản xuất hợp chất thứ cấp thực vật phương pháp nuôi cấy in vitro 2.2 Cây dâu tây 10 2.2.1 Lịch sử phát triển dâu tây 10 2.2.2 Phân loại 11 2.2.3 Đặc điểm hình thái 11 2.2.4 Đặc điểm sinh trưởng 12 2.2.5 Thành phần dinh dưỡng 13 2.2.6 Ứng dụng dâu tây đời sống 14 2.3 Anthocyanin 15 2.3.1 Định nghĩa 15 2.3.2 Tính chất hóa lý anthocyanin 15 2.3.3 Con đường sinh tổng hợp anthocyanin 18 -v- 2.3.4 Anthocyanin dâu tây 20 2.3.5 Anthocyanin chất màu thực phẩm 20 2.3.6 Những lợi ích sức khỏe anthocyanin với người 21 2.4 Kỹ thuật nuôi cấy tế bào in vitro 22 2.4.1 Nuôi cấy mô sẹo 23 2.4.2 Nuôi cấy dịch huyền phù tế bào 24 2.5 Các phương pháp làm gia tăng hàm lượng anthocynin nuôi cấy tế bào thực vật 25 2.5.1 Chọn dòng tế bào 25 2.5.2 Nguồn carbon 26 2.5.3 Chất điều hoà sinh trưởng 26 2.5.4 Nguồn đạm, phosphate 27 2.5.5 Tiền chất hữu 28 2.5.6 Chất kích thích hệ thống bảo vệ thực vật 28 2.5.7 Các yếu tố vật lý 29 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 31 3.2 Nguyên vật liệu 31 3.3 Phương pháp nghiên cứu 33 3.3.1 Sơ đồ nghiên cứu chung 33 3.3.2 Nhân giống 34 3.3.3 Khảo sát ảnh hưởng cytokinin lên tạo chồi dâu tây in vitro 34 3.3.4 Tạo sẹo 35 3.3.5 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng lên hình thành tăng sinh mơ sẹo từ cuống dâu tây in vitro 35 3.3.6 Tạo huyền phù tế bào 36 3.3.7 Khảo sát ảnh hưởng mật độ tế bào lên tăng trưởng huyền phù 36 tế bào dâu tây 36 - vi - 3.3.8 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 37 3.3.9 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường lên tăng trưởng huyền 37 phù tế bào dâu tây 37 3.3.10 Khảo sát ảnh hưởng 2,4-D lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 38 3.3.11 Khảo sát ảnh hưởng KIN lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 38 3.3.12 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ lắc lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 39 3.3.13 Khảo sát sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây 39 3.3.14 Khảo sát ảnh hưởng chiếu sáng lên sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây 40 3.3.15 Khảo sát ảnh hưởng phenylalanine lên sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây 40 3.3.16 Khảo sát thời điểm bổ sung phenylalanine thích hợp cho sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây 41 3.3.17 Phương pháp chiết tách anthocyanin 41 3.3.18 Xác định hàm lượng anthocyanin phương pháp pH vi sai 42 3.3.19 Phương pháp xử lí số liệu 43 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 4.1 Ảnh hưởng cytokinin lên tạo chồi dâu tây in vitro 45 4.2 Ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng lên hình thành tăng sinh mơ sẹo từ cuống dâu tây in vitro 47 4.3 Sự tạo huyền phù tế bào dâu tây 51 4.4 Ảnh hưởng mật độ tế bào lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 51 4.5 Ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 54 - vii - 4.6 Ảnh hưởng nồng độ đường lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 55 4.7 Ảnh hưởng 2,4-D lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 57 4.8 Ảnh hưởng KIN lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây 59 4.9 Ảnh hưởng tốc độ lắc lên tăng trưởng huyền phù tế bào dâu tây mơi trường có bổ sung KIN 0,5 mg/l 60 4.10 Sự sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây 62 4.11 Ảnh hưởng chiếu sáng lên sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào 63 4.12 Ảnh hưởng phenylalanine lên sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây 65 4.13 Thời điểm bổ sung phenylalanine thích hợp lên sinh tổng hợp anthocyanin tế bào huyền phù dâu tây 66 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 69 5.1 Kết luận 70 5.2 Đề nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 PHỤ LỤC 82 - 78 - 59.Nyman, S and Simola, L.K., 1988 The uptake of phenylalanine into suspension-cultured cells of Atropa belladonna Physiologia Plantarum, 74(4): 623 – 630 60 Rajendran, L., Ravishankar, G.A., Venkataraman, L.V and Prathiba, K.R., 1992 Anthocyanin production in callus cultures of Daucus carota L as influenced by nutrient stress and osmoticum Biotechnol Lett, 14: 707 — 14 61 Ramachandra Rao, S., Ravishankar, G.A., 2002 Plant cell cultures: chemical factories of secondary metabolites Biotechnol Adv, 20: 101 – 153 62 Raskin, I., Ribnicky, D.M., Komarnytsky, S., Ilic, N., Poulev, A., Borisjuk, N., Brinker, A., Moreno, D.A., Ripoll, C., Yakoby, N., O’Neal, J.M., Cornwell, T., Pastor, I and Fridlender, B., 2002 Plants and human health in the twenty-first century Trends Biotechnol, 20: 522 – 531 63 Sakamoto, K., Iida, K., Sawamura, K., Hajiro, K., Asada, Y., Yoshikawa, T and Furuya, T., 1994 Anthocyanin production in cultured cellsof Aralia cordata Thunb Plant Cell Tissue Org Cult, 36(1): 21 – 26 64 Sakila, S., Ahmed, M.B., Roy, U.K., Biswas, M.K., Karim, R., Razvy, M.A., Hossain, M., Islam, R and Hoque, A., 2007 Micropropagation of strawberry (Fragaria ananassa Duch.) A newly introduced crop in Bangladesh Journal of Scientific Research, (2): 151 – 154 65 Sato, K., Nakayama, M and Shigeta, J., 1996 Culturing conditions affecting the production of anthocyanin in suspended cell cultures of strawberry Plant Sci, 113: 91 – 98 66 See, K.S., Bhatt, A and Keng, C.L., 2011 Effect of sucrose and methyl jasmonate on biomass and anthocyanin production in cell suspension culture of Melastoma malabathricum (Melastomaceae) Rev Biol Trop, 59 (2): 597 – 606 67 Smetanska, I., 2008 Production of secondary metabolite using plant cell cultures Biochem Engin/Biotechnol, 111: 187 – 228 - 79 - 68 Stintzing, F.C and Carle, R., 2004 Functional properties of anthocyanins and betalins in plants, food and in human nutrition Trends in Food Science and Technology, 15: 19 – 38 69 Stoner, G.D., Wang, L.S and Chen, T., 2007 Chemoprevention of esophageal squamous cell carcinoma Toxicol Appl Pharmacol, 224: 337 – 349 70 Stoner, G.D., Wang, L.S., Zikri, N., Chen, T., Hecht, S.S., Huang, C., Sardo, C and Lechner, J.F., 2007 Cancer prevention with freeze-dried berries and berry components Semin Cancer Biol, 7: 403 – 410 71 Strack, D., 1997 Phenolic metabolism In: Dey, P.M and Harborne, J.B Plant Biochemistry London: Academic Press, pp 387 – 416 72.Tabata, H., 2006 Production of paclitaxel and the related taxanes by cell suspension cultures of Taxus species Curr Drug Target, 7(4): 453 – 461 73 Tan, S.H., Musa, R., Ariff, A and Maziah, M., 2010 Effect of plant growth regulators on callus, cell suspension and cell line selection for flavonoid production from pegaga (Centella asiatica L urban) American Journal of Biochemistry and Biotechnology (4): 284 – 299 74 Thanh, N.T and Paek, K.Y., 2010 Cell suspension culture Panax ginseng C A Meyer: Role of plant growth regulators and medium composition on biomass and ginsenoside production VNU Journal of Science, Natural Sciences and Technology, 26: 191 – 196 75 Timberlake, C.F and Herry, B.S., 1986 Plant pigments as natural food colors Endeavour (OXF), 10: 31 – 36 76 Vajranabhalah, S.N and Mehta, A.R., 1977 Effects of kinetin on growth and nucleic acid metabolism in suspension cultures of L Cucumis melo Ann Bot 41 (3): 483 – 491 77 Van der Meer, I.M., Stam, M.E., Van Tunen, A.J., Mol, J.N.M and Stuitje, A.R., 1992 Antisense inhibition of flavonoid biosynthesis in petunia anthers results in male sterility Plant Cell, 4: 253 – 262 78 Vanisree, M and Tsay, H.S., 2004 Plant cell cultures - An alternative and - 80 - efficient source for the production of biologically important secondary metabolites International J Appl Sci Engin, 2: 29 – 48 79 Vijaya Sree, N., Udayasri, P.V.V., Aswani kumar, Y., Ravi Babu, B., Phani kumar, Y and Vijay Varma, M., 2010 Advancements in the production of secondary metabolites Journal of Natural Products, 3: 112 – 123 80 Wang, H and Strasburg, M.G., 1999 Antioxidant and antiinflammatory actives of anthocyanins and their aglycon, cyanin from tart cherries J.Nat Prod, 62 (2): 294 – 296 81 Wang, L.S and Stoner, G.D., 2008 Anthocyanins and their role in cancer prevention Cancer Lett, 269 (2): 281 – 290 82 Wang, S.Y and Lin, H.S., 2000 Antioxidant activity in fruit and leaves of blackberry, raspberry, and strawberry is affected by cultivar and maturity Journal of Agricultural and Food Chemistry, 48: 140 – 146 83 Wrolstad R E., 2001 Current Protocols in Food Analytical Chemistry (Characterization and Measurement of Anthocyanins by UV-Visible Spectroscopy) John Wiler & Sons Inc 84 Yamakawa, T., Kato, S., Ishida, K., Kodama, T and Minoda, Y., 1983 Production of anthocyanins by Vitis cells in suspension culture Journal of Agric Biol Chem, 47: 2185 — 2191 85 Yamamoto, Y., Mizuguchi, R., and Yamada, Y., 1982 Selection of a high and stable pigment – producing strain in cultured Euphorbia milli cells Theor Appl Gen, 61: 113 – 116 85 Zhang, W., Seki, M and Furusaki, S., 1997 Effect of temperature and its shift on growth and anthocyanin production in suspension cultures of strawberry cells Journal of Plant science, 207 – 214 87 Zhang, W and Furusaki S., 1997 Regulation of anthocyanin synthesis in suspension cultures of strawberry cell by pH Journal of Biotechnology Letters, 1057 – 1061 - 81 - 88 Zhang, W., Seki, M., Fourusaki, S and Middelberg, A.P.J., 1998 Anthocyanin synthesis, growth and nutrient uptake in suspension cultures of strawberry cells Journal of fermentation and Bioengineering, 86 (1): 72 – 78 Internet 89 http://www.amthuc.com.vn/In-am-thuc_dau-tay-giup-trai-tim-khoe manh 90 http://www.armeniapedia.org/index.php?title=Fragraria_vesca 91.http://www.bacninh.gov.vn/Story/NongNghiepKhuyenNong/KHCNNongNghiep /2009/1/16140.html 92 http://www.biologyreference.com/Re-Se/Secondary-Metabolites-in-Plants 93 http://www.charlies-web.com/specialtopics/anthocyanin.html 94 http://www.itaexpress.com.vn/tin_ita/s_c_kh_e/c_m_nang_s_c_kh_e/dau_tay 95 http://www.kyluc.vn/Ky-Luc/Ky-luc-dia-phuong/Lam-Dong/Da-Lat/Noi nhieu dau tay nhat Viet Nam.aspx 96 http://www pdfcast.org/pdf/the-strawberry-plant 97 http://vi.wikipedia.org/wiki/Dâu- tây 98 http://www.vndgkhktnn.vietnamgateway.org - 82 - PHỤ LỤC - 83 - PHỤ LỤC KẾT QUẢ SỰ TĂNG SINH CỦA HUYỀN PHÙ TẾ BÀO TRONG CÁC THÍ NGHIỆM Sự gia tăng thể tích tế bào lắng (SCV) huyền phù tế bào với mật độ tế bào khác Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào mật độ tế bào : 10 (g/ml môi trường lỏng) Mật độ tế bào (g/ml) : 10 Tuần nuôi cấy Sự gia tăng SCV (ml) TB + SD 0,2 0,2 0,1 0,17 + 0,06 0,1 0,15 0,1 0,12 + 0,03 0,05 0,1 0,05 0,07 + 0,03 0,05 0,1 0,05 0,07 + 0,03 0,05 0,05 0,03 + 0,02 (TB: giá trị trung bình, SD: độ lệch chuẩn) Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào mật độ tế bào : 20 (g/ml môi trường lỏng) Mật độ tế bào (g/ml) : 20 Tuần nuôi cấy Sự gia tăng SCV (ml) TB + SD 0,15 0,2 0,25 0,2 + 0,05 0,4 0,15 0,45 0,33 + 0,16 0,4 0,3 0,45 0,38 + 0,08 0,25 0,25 0,35 0,28 + 0,06 0,25 0,25 0,35 0,28 + 0,06 - 84 - Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào mật độ tế bào : 30 (g/ml môi trường lỏng) Mật độ tế bào (g/ml) : 30 Sự gia tăng SCV (ml) Tuần nuôi cấy TB + SD 0,1 0,25 0,25 0,2 + 0,09 0,2 0,15 0,35 0,23 + 0,1 0,25 0,25 0,35 0,28 + 0,06 0,2 0,25 0,15 0,2 + 0,05 0,15 0,3 0,15 0,2 + 0,09 Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào mật độ tế bào : 40 (g/ml môi trường lỏng) Mật độ tế bào (g/ml) : 40 Sự gia tăng SCV (ml) Tuần nuôi cấy TB + SD 0,25 0,1 0,1 0,15 + 0,09 0,4 0,3 0,1 0,27 + 0,15 0,5 0,2 0,15 0,28 + 0,19 0,3 0,15 0,15 0,2 + 0,09 0,25 0,1 0,15 0,17 + 0,08 - 85 - Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào mật độ tế bào : 50 (g/ml môi trường lỏng) Mật độ tế bào (g/ml) Sự gia tăng SCV (ml) Tuần nuôi cấy : 50 TB + SD 0,05 0,1 0,05 0,07 + 0,03 0,15 0,2 0,05 0,13 + 0,07 0,2 0,45 0,1 0,25 + 0,18 0,15 0,4 0,1 0,22 + 0,16 0,15 0,4 0,05 0,2 + 0,18 2. Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào sáng tối Sự gia tăng SCV (ml) Điều kiện chiếu sáng TB + SD Ngoài sáng 0,2 0,2 0,15 0,18 + 0,03 Trong tối 0,3 0,35 0,35 0,32 + 0,03 3. Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào nồng độ đường khác Sự gia tăng SCV (ml) Nồng độ đường (g/l) TB + SD 20 0,25 0,2 0,1 0,18 + 0,08 30 0,35 0,4 0,4 0,38 + 0,03 40 0,15 0,3 0,2 0,22 + 0,08 50 0,25 0,2 0,15 0,2 + 0,05 - 86 - Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào nồng độ 2,4-D khác 2,4-D Sự gia tăng SCV (ml) 1,0 0,4 0,5 0,35 0,42 + 0,08 1,3 0,65 0,6 0,9 0,68 + 0,1 1,5 0,4 0,25 0,4 0,35 + 0,09 1,7 0,2 0,2 0,05 0,15 + 0,09 (mg/l) TB + SD Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào nồng độ KIN khác Sự gia tăng SCV (ml) KIN (mg/l) TB + SD 0,1 0,25 0,1 0,25 0,2 + 0,09 0,3 0,2 0,3 0,15 0,22 + 0,08 0,5 0,25 0,35 0,45 0,35 + 0,1 Sự gia tăng SCV huyền phù tế bào mơi trường có bổ sung KIN 0,5 mg/l với tốc độ lắc khác Sự gia tăng SCV (ml) Tốc độ lắc (vòng/phút) TB + SD 100 0,25 0,35 0,45 0,35 + 0,1 120 0,15 0,15 0,3 0,2 + 0,09 150 0,2 0,2 0,15 0,18 + 0,03 - 87 - PHỤ LỤC KẾT QUẢ SỰ SINH TỔNG HỢP ANTHOCYANIN CỦA HUYỀN PHÙ TẾ BÀO TRONG CÁC THÍ NGHIỆM Sự sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây Độ hấp thu mẫu tế bào huyền phù theo thời gian ApH 4.5 ApH Tuần A ATB Lần lặp λ536 λ680 λ530 λ680 0,028 0,019 0,034 0,027 0,002 0,02 0,011 0,019 0,011 0,001 0,0013 + 0,0006 0,032 0,019 0,034 0,022 0,001 0,048 0,029 0,03 0,014 0,003 0,02 0,011 0,021 0,019 0,007 0,032 0,019 0,038 0,029 0,004 0,077 0,052 0,058 0,041 0,008 0,036 0,008 0,035 0,015 0,008 0,038 0,008 0,045 0,025 0,01 0,051 0,022 0,044 0,03 0,015 0,037 0,018 0,034 0,028 0,013 0,055 0,036 0,044 0,041 0,016 0,028 0,017 0,025 0,02 0,006 0,041 0,02 0,04 0,028 0,009 0,025 0,012 0,024 0,018 0,007 0,0047 + 0,0021 0,0087 + 0,0012 0,0147 + 0,0015 0,0073 + 0,0015 - 88 - Sự biến thiên hàm lượng anthocyanin huyền phù tế bào theo thời gian Hàm lượng anthocyanin (% FW x 10-3) Thời gian (tuần) TB + SD 0,82 0,41 0,41 0,55 + 0,23 1,23 2,87 1,64 1,91 + 0,85 3,28 3,28 4,10 3,55 + 0,47 6,15 5,33 6,56 6,01 + 0,62 2,46 3,69 2,87 3,01 + 0,62 Ảnh hưởng chiếu sáng lên gia tăng hàm lượng anthocyanin huyền phù tế bào Độ hấp thu mẫu tế bào huyền phù cường độ ánh sáng khác Ánh sáng 2800 4000 Lần lặp ApH ApH 4.5 A λ536 λ680 λ530 λ680 0,043 0,025 0,038 0,032 0,012 0,04 0,021 0,029 0,021 0,011 0,072 0,036 0,064 0,042 0,014 0,051 0,022 0,044 0,03 0,015 0,037 0,018 0,034 0,028 0,013 0,055 0,036 0,044 0,041 0,016 0,031 0,016 0,037 0,037 0,015 0,044 0,014 0,041 0,029 0,018 0,067 0,026 0,042 0,023 0,022 ATB 0,0123 + 0,0015 0,0147 + 0,0015 0,0183 + 0,0035 - 89 - Hàm lượng anthocyanin tích luỹ tế bào huyền phù điều kiện sáng khác Cường độ ánh sáng Hàm lượng anthocyanin (% FW x 10-3) (lux) TB + SD lux (tối hoàn toàn) 4,92 4,51 5,74 5,06 + 0,63 2800 6,15 5,33 6,56 6,01 + 0,63 4000 6,15 7,38 9,02 7,52 + 1,44 Ảnh hưởng phenylalanine đến sinh tổng hơp anthocyanin huyền phù tế bào Độ hấp thu mẫu tế bào huyền phù cường độ ánh sáng khác ApH Phenylalanine 10 20 30 40 ApH 4.5 Lần lặp λ536 λ680 λ530 λ680 A 0,052 0,033 0,044 0,034 0,009 0,04 0,019 0,05 0,036 0,007 0,058 0,032 0,056 0,041 0,011 0,076 0,046 0,077 0,058 0,011 0,045 0,021 0,054 0,042 0,012 0,068 0,037 0,064 0,048 0,015 0,031 0,015 0,028 0,03 0,018 0,044 0,019 0,045 0,035 0,015 0,026 0,012 0,025 0,023 0,012 0,081 0,049 0,067 0,062 0,027 0,121 0,092 0,094 0,088 0,023 0,043 0,021 0,039 0,042 0,025 ATB 0,009 + 0,002 0,0127 + 0,0021 0,015 + 0,003 0,025 + 0,002 - 90 - 50 60 0,037 0,02 0,038 0,029 0,008 0,059 0,03 0,059 0,04 0,01 0,085 0,052 0,052 0,032 0,013 0,03 0,015 0,03 0,021 0,006 0,063 0,036 0,05 0,031 0,008 0,03 0,014 0,033 0,022 0,005 0,0103 + 0,0025 0,0063 + 0,0015 Hàm lượng anthocyanin tích luỹ tế bào huyền phù nồng độ phenylalanine khác Phenylalanine Hàm lượng anthocyanin (% FW x 10-3) (mg/l) TB + SD 10 3,69 2,87 4,51 3,69 + 0,82 20 4,51 4,92 6,15 5,19 + 0,85 30 7,38 6,15 4,92 6,15 + 1,23 40 9,43 11,07 10,25 10,25 + 0,82 50 3,28 4,1 5,33 4,24 + 0,58 60 2,46 3,28 2,05 2,6 + 0,63 - 91 - Ảnh hưởng bổ sung phenylalanine theo thời gian đến sinh tổng hợp anthocyanin tế bào huyền phù dâu tây Độ hấp thu mẫu tế bào huyền phù theo thời gian bổ sung phenylalanine Thời gian bổ sung (ngày) ApH ApH 4.5 Lần lặp λ536 λ680 λ530 λ680 0,081 0,049 0,067 0,062 0,027 0,121 0,092 0,094 0,088 0,023 0,043 0,021 0,039 0,042 0,025 0,072 0,028 0,052 0,043 0,035 0,051 0,02 0,052 0,049 0,028 0,083 0,045 0,077 0,068 0,029 0,03 0,014 0,033 0,027 0,01 0,027 0,012 0,036 0,034 0,013 0,031 0,018 0,03 0,026 0,009 14 A ATB 0,025 + 0,002 0,031 + 0,0038 0,011 + 0,002 Hàm lượng anthocyanin tích luỹ tế bào huyền phù bổ sung phenylalanine theo tuần Hàm lượng anthocyanin (% FW x 10-3) Thời gian bổ sung (ngày) TB + SD 9,43 11,07 10,25 10,25 + 0,82 14,35 11,89 11,48 12,57 + 1,55 14 4,1 5,33 3,69 4,37 + 0,85 - 92 - PHẦN LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: Phạm Thị Mỹ Trâm Ngày, tháng, năm sinh:14/08/1985 Nơi sinh: Bình Sơn – Quảng Ngãi Địa liên lạc: 165 – Tổ – Khối – TT Krơng Năng – Tỉnh ĐắkLắk Q TRÌNH ĐÀO TẠO  Từ 09/2003 đến 12/2007 : Sinh viên Khoa Công nghệ Thực phẩm – Trường Đại học Nông Lâm - Tp Hồ Chí Minh  Từ 09/2009 đến nay: Học viên cao học khóa 2008 ngành Cơng nghệ Sinh học - Trường Đại học Bách Khoa - Thành phố Hồ Chí Minh Q TRÌNH CƠNG TÁC  Từ 01/2010 đến nay: Giảng viên Bộ môn Khoa học Môi trường – Trường Đại học Thủ Dầu Một – Tỉnh Bình Dương ... sát số yếu tố ảnh hưởng l? ?n sinh tổng hợp anthocyanin nuôi cấy tế bào dâu tây (Fragaria ananassa L. ) 2- NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Nhân giống dâu tây, tạo mô sẹo thích hợp cho tạo huyền phù tế bào. .. thích hợp cho tạo huyền phù tế bào - Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng l? ?n tăng sinh huyền phù tế bào - Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến sinh tổng hợp anthocyanin tế bào huyền phù 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ:... bào dâu tây 39 3.3.13 Khảo sát sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây 39 3.3.14 Khảo sát ảnh hưởng chiếu sáng l? ?n sinh tổng hợp anthocyanin huyền phù tế bào dâu tây