LÊ THỊ HIỀN NGHIÊN cứu về đặc điểm THỰC vật, THÀNH PHẦN hóa học của LOÀI TRÂN CHÂU HOA CHỤM (lysimachia congestiflora hemsl ) KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU VỀ ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LỒI TRÂN CHÂU HOA CHỤM (Lysimachia congestiflora Hemsl.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ HIỀN Mã SV: 1401204 NGHIÊN CỨU VỀ ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LỒI TRÂN CHÂU HOA CHỤM (Lysimachia congestiflora Hemsl.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: DS.NCS Nguyễn Thanh Tùng HVCH Lê Ngọc Văn Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình nghiên cứu, hồn thành khóa luận tốt nghiệp Bộ môn Dược liệu trường Đại học Dược Hà Nội, nhận nhiều quan tâm, động viên, bảo tận tình từ q thầy cơ, gia đình bạn bè Lời xin bày tỏ lời cảm ơn biết ơn sâu sắc đến DS NCS Nguyễn Thanh Tùng người thầy tận tụy trực tiếp hướng dẫn, nhiệt tình giúp đỡ dẫn dắt tơi từ ngày đầu bỡ ngỡ đến hết chặng đường thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn Dược sĩ Lê Ngọc Văn, người anh hướng dẫn đồng hành, bảo hết mực, giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới tồn thể thầy trường Đại học Dược Hà Nội nói chung mơn Dược liệu nói riêng tận tình dạy bảo truyền đạt kiến thức suốt năm tháng ngồi ghế nhà trường Tôi xin cảm ơn chân thành tới toàn thể anh chị, bạn bè làm việc em đồng hành, giúp đỡ động viên thời gian thực khóa luận Cuối tơi xin bày tỏ yêu thương biết ơn vô hạn tới gia đình, người thân ln chỗ dựa tinh thần vững để tiếp thêm động lực giúp cố gắng trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày 21 tháng năm 2020 Sinh viên Lê Thị Hiền MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan đặc điểm thực vật phân bố chi Lysimachia L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Lysimachia L 1.1.2 Lịch sử phân loại chi Lysimachia L 1.1.3 Đặc điểm hình thái thực vật chi Lysimachia L .4 1.1.4 Phân bố loài thuộc chi Lysimachia L 1.2 Tổng quan thành phần hóa học lồi thuộc chi Lysimachia L Việt Nam .8 1.2.1 Nhóm hợp chất flavonoid 1.2.2 Nhóm hợp chất saponin .9 1.2.3 Các hợp chất thuộc nhóm khác 11 1.3 Công dụng tác dụng sinh học loài thuộc chi Lysimachia L 12 1.3.1 Cơng dụng lồi thuộc chi Lysimachia L 12 1.3.2 Tác dụng sinh học loài thuộc chi Lysimachia L 12 1.4 Tổng quan loài Lysimachia congestiflora Hemsl 13 1.4.1 Đặc điểm thực vật phân bố .13 1.4.2 Thành phần hóa học 14 1.4.3 Công dụng tác dụng sinh học 15 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .16 2.1 Đối tượng phương tiện nghiên cứu .16 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.2.1 Nội dung nghiên cứu đặc điểm thực vật .17 2.2.2 Nội dung nghiên cứu thành phần hóa học 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Phương pháp giám định tên khoa học .18 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu hiển vi .18 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu hóa học .18 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm thực vật giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu 25 3.2 Kết nghiên cứu đặc điểm vi học dược liệu 26 3.2.1 Đặc điểm vi phẫu .26 3.2.2 Đặc điểm vi phẫu thân 27 3.2.3 Đặc điểm bột dược liệu 27 3.3 Kết định tính thành phần hóa học 28 3.4 Kết định lượng polyphenol toàn phần dược liệu 29 3.5 Kết định lượng flavonoid toàn phần dịch chiết dược liệu 30 3.5.1 Khảo sát cực đại hấp thụ .30 3.5.2 Thẩm định phương pháp định lượng 31 3.6 Kết triển khai sắc kí lớp mỏng dịch chiết lồi L congestiflora Hemsl 35 3.6.1 Khảo sát hệ dung môi khai triển 35 3.6.2 Kết triển khai sắc kí lớp mỏng dịch chiết thân loài L congestiflora Hemsl 36 3.7 Kết bán định lượng myricetin loài L congestiflora Hemsl HPTLC 37 3.7.1 Xây dựng đường chuẩn định lượng 37 3.7.2 Kết bán định lượng .38 CHƯƠNG BÀN LUẬN 41 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Nội dung STT Số thứ tự NP/PEG Natural products/ Polyethylenglycol GAE Gallic Acid Equivalent (Đương lượng acid gallic) QE Quercetin Euivalent (Đương lượng quercetin) HPTLC High performance thin layer chromatograph (Sắc ký lớp mỏng hiệu cao) DPPH 2,2'-Diphenyl-1-picrylhydrazyl DĐVN Dược điển Việt Nam TT Thuốc thử DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Phân bố loài thuộc chi Lysimachia L Việt Nam 1.2 Công thức số hợp chất flavonoid loài L congestiflora 15 Hemsl 2.1 Độ lặp lại tối đa chấp nhận nồng độ khác 21 2.2 Độ thu hồi chấp nhận nồng độ khác 22 3.1 Kết định tính sơ nhóm chất dịch chiết mẫu nghiên 29 cứu 3.2 Kết đo độ hấp thụ dãy dung dịch chuẩn G1 đến G5 30 3.3 Kết thẩm định độ phù hợp hệ thống phương pháp định 31 lượng 3.4 Kết đo độ hấp thụ dãy dung dịch chuẩn C1 đến C5 32 3.5 Kết thẩm định độ lặp lại phương pháp định lượng 33 3.6 Kết thẩm định độ phương pháp định lượng 33 3.7 Kết thẩm định giới hạn định lượng giới hạn phát 34 phương pháp định lượng DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ STT 1.1 1.2 Tên hình Cấu trúc số khung flavonoid Cơng thức saponin nhóm olean-12-en nhóm 13β,28eopxyoleanan Trang 11 3.1 Ảnh chụp đặc điểm thực vật loài L congestiflora Hemsl 25 3.2 Ảnh vi phẫu L congestiflora Hemsl 26 3.3 Ảnh vi phẫu thân L congestiflora Hemsl 27 3.4 Một số đặc điểm bột loài L congestiflora Hemsl 28 3.5 3.6 Đồ thị biểu diễn mối tương quan độ hấp thụ nồng độ acid gallic chuẩn Đồ thị biểu diễn mối tương quan độ hấp thụ nồng độ quercetin 30 32 Ảnh chụp sắc kí đồ dịch chiết L congestiflora Hemsl myricetin chuẩn triển khai với hệ dung môi toluen - ethyl 3.7 acetat - acid formic (5:5:1) quan sát ở: (a) UV 254 nm trước phun thuốc thử NP/PEG, (b) UV 366 nm trước phun 35 thuốc thử NP/PEG, (c) UV 366 nm sau phun thuốc thử NP/PEG Ảnh chụp sắc kí đồ dịch chiết L congestiflora Hemsl myricetin chuẩn triển khai với hệ dung môi toluen - ethyl 3.8 acetat - acid formic (14:10:1) quan sát ở: (a) UV 254 nm trước phun thuốc thử NP/PEG, (b) UV 366 nm trước phun 35 thuốc thử NP/PEG, (c) UV 366 nm sau phun thuốc thử NP/PEG Ảnh chụp sắc kí đồ dịch chiết thân, loài L congestiflora 3.9 Hemsl myricetin chuẩn triển khai với hệ dung môi toluen ethyl acetat - acid formic (5:5:1) quan sát UV 366 nm sau 36 phun thuốc thử NP/PEG 3.10 Đồ thị 2D biểu diễn diện tích pic sắc kí thân L congestiflora Hemsl 36 3.11 3.12 3.13 Đồ thị 3D biểu diễn diện tích pic sắc kí thân L congestiflora Hemsl Đồ thị biểu diễn lượng mẫu đưa lên mỏng diện tích pic Đồ thị biểu diễn lượng mẫu đưa lên mỏng diện tích pic 37 38 38 Ảnh chụp sắc kí đồ định lượng myricetin L congestiflora Hemsl triển khai với hệ dung môi toluen - ethyl acetat - acid 3.14 formic (14:10:1) quan sát tại: (a) UV 254 nm trước phun 39 thuốc thử NP/PEG; (b) UV 366 nm trước phun thuốc thử NP/PEG; (c) UV 366 nm sau phun thuốc thử NP/PEG 3.15 Đồ thị thể tính chọn lọc đặc hiệu phương pháp 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Chi Trân châu (Lysimachia L.), chi lớn họ Anh Thảo (Primulaceae Rich.) với khoảng 180 loài ghi nhận toàn giới, phân bố chủ yếu vùng khí hậu ơn đới cận nhiệt đới Bắc bán cầu, với số lồi vùng nhiệt đới Đơng Nam Á, Nam Mỹ, châu Phi, châu Úc châu Á, có Việt Nam [30] Phần lớn lồi chi ưa bóng, ưa ẩm, mọc rừng rậm ẩm, dọc sông suối, mọc tán rừng, mọc rải rác ven rừng thưa; phát triển tốt nơi bóng ven đường mịn, sườn núi hay vách đá [3] Tính đến nay, chi có khoảng 20 lồi ghi nhận Việt Nam phân bố khắp tỉnh từ Bắc vào Nam Trong dân gian dùng làm thức ăn làm thuốc chữa bệnh Trân châu nhị dài (L lobeloides Wall.) dùng để chữa ho, vú sưng đau, tiêu viêm, thấp khớp, phù nề, kiết lỵ; Trân châu rau (L clethroides Duby) dùng để chữa bạch đới, cam tích, lỵ, đau họng, sưng vú, làm thuốc điều kinh; Trân châu hoa chụm (L congestiflora Hemsl.) dùng để chữa viêm gan, lỵ, ho nhiều đờm, trẻ em co giật [3], [9] Ngồi ra, lồi thuộc chi Lysimachia L cịn sử dụng làm thuốc Y học cổ truyền Trân châu ba (L insignis Hemsl.) có tác dụng điều huyết, huyết, hành khí, tán ứ, sơ phong thơng lạc, bình can; Trân châu hoa chụm (L congestiflora Hemsl.) có tác dụng phong tán hàn, khái hóa đảm, tiêu tích giải độc [3] Mặc dù nhiều lồi thuộc chi Trân châu có giá trị làm thuốc, vừa có giá trị vườn thương mại vừa phương thuốc thảo dược truyền thống [11], nhiên thông tin đặc điểm thực vật thành phần hóa học lồi thuộc chi Lysimachia L Việt Nam hạn chế Trong tài liệu công bố mô tả sơ đặc điểm hình thái, sinh thái, tính vị tác dụng cơng dụng số lồi thuộc chi Việt Nam, có lồi Trân châu hoa chụm (L congestiflora Hemsl.) Nhằm mục đích cung cấp liệu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học lồi L congestiflora Hemsl Việt Nam, làm sở cho nghiên cứu sâu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu này, khóa luận “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học lồi Trân châu hoa chụm (Lysimachia congestiflora Hemsl.)” thực Đề tài gồm mục tiêu sau: - Nghiên cứu đặc điểm thực vật, giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu ... ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ HIỀN Mã SV: 1401204 NGHIÊN CỨU VỀ ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LỒI TRÂN CHÂU HOA CHỤM (Lysimachia congestiflora Hemsl. ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người... nghiệm dược liệu này, khóa luận ? ?Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học loài Trân châu hoa chụm (Lysimachia congestiflora Hemsl. )? ?? thực Đề tài gồm mục tiêu sau: - Nghiên cứu đặc điểm thực. .. Việt Nam, có lồi Trân châu hoa chụm (L congestiflora Hemsl. ) Nhằm mục đích cung cấp liệu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học loài L congestiflora Hemsl Việt Nam, làm sở cho nghiên cứu sâu xây dựng