Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro của lá trà hoa vàng Cúc Phương (Camellia cucphuongensis NinhRosmann)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TÙNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO CỦA LÁ TRÀ HOA VÀNG CÚC PHƯƠNG (Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TÙNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO CỦA LÁ TRÀ HOA VÀNG CÚC PHƯƠNG (Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU - DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Hoàng Tuấn PGS TS Đỗ Thị Hà HÀ NỘI 2019 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lịng kính trọng, biết ơn lời cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Hoàng Tuấn - Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội PGS TS Đỗ Thị Hà – Khoa Hóa Thực vật, Viện Dược Liệu, thầy tận tình hướng dẫn, định hướng, truyền cảm hứng giúp đỡ em nhiều trình thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu thầy cô Trường Đại Học Dược Hà Nội tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức, hướng dẫn nhiệt tình tạo điều kiện thuận lợi để em học hỏi hồn thành việc học Thạc sỹ Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới anh, chị Bộ môn Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội Khoa Hóa Thực vật Viện Dược Liệu tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành tốt q trình làm thực nghiệm Lời sau cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới bố mẹ, anh chị bạn bè bên cạnh ủng hộ, động viên em suốt học tập, nghiên cứu hoàn thành đề tài Hà Nội, tháng năm 2019 Học viên Nguyễn Đức Tùng DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Chữ viết tắt ADN Acid Deoxyribo Nucleic BĐM Bình định mức C Catechin CC Cao chiết cồn 96% CCD Cao chiết phân đoạn dichloromethan CCE Cao chiết phân đoạn ethyl acetat CCH Cao chiết phân đoạn n-hexan CCBu Cao chiết phân đoạn n-buthanol CTCT Công thức cấu tạo EC Epicatechin ECG Epicatechin gallat EGC Epigallocatechin EGCG Epigallocatechin gallat EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol DPPH 2,2-Diphenyl-1 picrylhydrazyl GAE Đương lượng acid gallic HMBC Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết (Heteronuclear Multiple Bond Connectivity) HPLC Sắc ký lỏng cao áp (High performance liquid chromatography) HPLC-MS Sắc ký lỏng khối phổ (High-performance liquid chromatography-mass spectrometry) IC50 Nồng độ ức chế 50% (Inhibitory Concentration of 50%) IR Quang phổ hồng ngoại (Infrared) GC Gallocatechin MeOH Methanol MPLC Sắc ký lỏng trung áp (Medium performance liquid chromatography) MS Khối phổ (Mass spectrometry) NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) n-BuOH n-buthanol OH Hydroxyl PĐ Phân đoạn SKLM/TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography) TT Thuốc thử TLTK Tài liệu tham khảo TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TQ Trung Quốc UV-VIS Ultraviolet–visible spectroscopy VN Việt Nam DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Danh mục lồi Camellia L có hoa vàng Việt Nam 10 Bảng 3.1 Kết định tính sơ nhóm chất có trà hoa vàng 33 cúc phương Bảng 3.2 Độ hấp thụ quang dãy dung dịch chuẩn 36 Bảng 3.3 Kết xác định độ lặp lại phương pháp đo quang 37 Bảng 3.4 Kết xác định độ thu hồi phương pháp 38 Bảng 3.5 Kết xác định độ hấp thụ quang mẫu trắng 38 Bảng 3.6 Kết thẩm định phương pháp định lượng polyphenol 39 phương pháp đo quang Bảng 3.7 Kết định lượng polyphenol tổng số Trà hoa vàng cúc 39 phương Bảng 3.8 Bảng so sánh liệu phổ 1H, 13C-NMR CC1 kaempferol 43 Bảng 3.9 Bảng so sánh liệu phổ 1H, 13C-NMR CC2 methyl gallat 44 Bảng 3.10 Bảng so sánh liệu phổ 1H, 13C-NMR CC3 acid gallic 46 Bảng 3.11 Bảng so sánh liệu phổ 1H, 13C-NMR CC4 astragalin 47 Bảng 3.12 Kết thử hoạt tính chống oxy hóa mẫu cao ethanol 96% 49 Bảng 3.13 Kết thử hoạt tính chống oxy hóa mẫu cao n-hexan 49 Bảng 3.14 Kết thử hoạt tính chống oxy hóa mẫu cao ethyl acetat 50 Bảng 3.15 Kết thử hoạt tính chống oxy hóa mẫu cao 51 dicholoromethan Bảng 3.16 Kết thử hoạt tính chống oxy hóa mẫu cao n-buthanol 52 Bảng 3.17 Kết thử hoạt tính chống oxy hóa quercetin 52 Bảng 3.18 Giá trị IC50 phân đoạn cao 53 Bảng 3.19 Một số điểm khác biệt C flava C cucphuongensis 55 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ STT Tên hình Trang Hình 3.1 Ảnh chụp số phận Trà hoa vàng cúc phương 28 Hình 3.2 Ảnh vi phẫu Trà hoa vàng cúc phương 30 Hình 3.3 Ảnh vi phẫu thân Trà hoa vàng cúc phương 31 Hình 3.4 Một số dặc điểm bột Trà hoa vàng cúc phương 32 Hình 3.5 Phổ hấp thụ dung dịch khoảng bước sóng từ 300 – 800nm 36 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ chất chuẩn 37 bước sóng 750,5 nm Hình 3.7 Sơ đồ chiết cao cồn 96% cao phân đoạn Trà hoa vàng 40 Hình 3.8 Sắc ký lớp mỏng hợp chất 41 Hình 3.9 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Trà hoa vàng 42 Hình 3.10 Cấu trúc hóa học hợp chất kaempferol 44 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học hợp chất methyl gallat 45 Hình 3.12 Cấu trúc hóa học hợp chất acid gallic 46 Hình 3.13 Cấu trúc hóa học hợp chất astragalin 48 Hình 3.14 Đồ thị phụ thuộc tỉ lệ gốc tự bị trung hòa theo nồng độ mẫu cao 49 ethanol 96% Hình 3.15 Đồ thị phụ thuộc tỉ lệ gốc tự bị trung hịa theo nồng độ mẫu cao 49 n-hexan Hình 3.16 Đồ thị phụ thuộc tỉ lệ gốc tự bị trung hòa theo nồng độ mẫu cao 50 ethyl acetat Hình 3.17 Đồ thị phụ thuộc tỉ lệ gốc tự bị trung hòa theo nồng độ mẫu cao 51 dicholoromethan Hình 3.18 Đồ thị phụ thuộc tỉ lệ gốc tự bị trung hịa theo nồng độ mẫu cao 52 n-buthanol Hình 3.19 Đồ thị phụ thuộc tỉ lệ gốc tự bị trung hòa theo nồng độ mẫu quercetin 52 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại chi Camellia L 1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Camellia L 1.2.1 Đặc điểm hình thái thực vật chi Camellia L 1.2.2 Đặc điểm phân bố chi Camellia L 1.3 Thành phần hóa học chi Camellia L 11 1.4 Về tác dụng, công dụng chi Camellia L 13 1.4.1 Công dụng 13 1.4.2 Tác dụng chống oxy hóa 13 1.5 Một số nét Trà hoa vàng cúc phương (Camellia cucphuongensis) 14 1.5.1 Tên khoa học 14 1.5.2 Đặc điểm hình thái phân bố 14 PHẦN 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 16 2.1.1 Nguyên liệu 16 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 16 2.1.3 Hóa chất, dung môi 16 2.1.4 Máy móc, thiết bị dụng cụ 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Giám định tên khoa học đặc điểm thực vật nghiên cứu 18 2.2.2 Định tính nhóm chất hữu thường gặp phản ứng hóa học 18 2.2.3 Định lượng polyphenol toàn phần 22 2.2.4 Chiết xuất, phân lập 2-3 hợp chất từ phân đoạn tiềm 25 2.2.5 Nghiên cứu tác dụng sinh học 26 PHẦN 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 3.1 Nghiên cứu thực vật học Trà hoa vàng cúc phương 28 3.1.1 Đặc điểm hình thái 28 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu thân 31 3.1.3 Bột 32 3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 32 3.2.1 Định tính nhóm chất hữu phản ứng hóa học 32 3.2.2 Định lượng polyphenol toàn phần 35 3.2.3 Chiết xuất, phân lập 2-3 hợp chất từ phân đoạn tiềm 40 3.2.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 43 3.3 Kết thử tác dụng thu dọn gốc tự DPPH in vitro cao tổng cao phân đoạn Trà hoa vàng cúc phương phân đoạn 49 3.3.1 Đối với mẫu cao ethanol 96% 49 3.3.2 Đối với mẫu cao n-hexan 49 3.3.3 Đối với mẫu cao ethyl acetat 50 3.3.4 Đối với mẫu cao dichloromethan 51 3.3.5 Đối với mẫu cao n-buthanol 52 3.3.6 Đối với mẫu đối chứng dương quercetin 52 PHẦN 4: BÀN LUẬN 54 4.1 Về thực vật 54 4.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 55 4.3 Nghiên cứu tác dụng sinh học 56 KẾT LUẬN 58 5.1 Nghiên cứu thực vật học Trà hoa vàng cúc phương 58 5.2 Nghiên cứu thành phần hóa học Trà hoa vàng cúc phương 58 5.3 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro Trà hoa vàng cúc phương phép thử DPPH 58 KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 Tài liệu tiếng Việt 60 Tài liệu tiếng Anh 61 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Bộ liệu phổ hợp chất CC1 Phụ lục 2: Bộ liệu phổ hợp chất CC2 Phụ lục 3: Bộ liệu phổ hợp chất CC3 Phụ lục 4: Bộ liệu phổ hợp chất CC4 Phụ lục 5: Tiêu khô Trà hoa vàng cúc phương Phụ lục 6: Bài báo đăng Tạp chí Dược học số 03/2019 (Số 515 năm 59), tr 62-67 Phụ lục 7: Ảnh Trà hoa vàng cúc phương thực địa Phụ lục 8: Phiếu giám định tên khoa học chứng nhận lưu mẫu tiêu Phụ lục 3: Bộ liệu phổ hợp chất CC3 Phụ lục 4: Bộ liệu phổ hợp chất CC4 Phụ lục 5: Tiêu khô Trà hoa vàng cúc phương Phụ lục 6: Bài báo đăng Tạp chí Dược học số 03/2019 (Số 515 năm 59), tr 6267 Phụ lục 7: Ảnh Trà hoa vàng cúc phương thực địa Phụ lục 8: Phiếu giám định tên khoa học chứng nhận lưu mẫu tiêu ... 58 5.1 Nghiên cứu thực vật học Trà hoa vàng cúc phương 58 5.2 Nghiên cứu thành phần hóa học Trà hoa vàng cúc phương 58 5.3 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro Trà hoa vàng cúc phương. .. thác giá trị loài Trà hoa vàng cách hiệu Từ lý trên, tiến hành thực nghiên cứu đề tài ? ?Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro Trà hoa vàng cúc phương. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TÙNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO CỦA LÁ TRÀ HOA VÀNG CÚC PHƯƠNG