Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng kháng vi sinh vật của cây lở leo thu hái tại hòa bình

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ MINH HỒNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG VI SINH VẬT CỦA CÂY LỞ LEO THU HÁI TẠI HỊA BÌNH KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HÀ NỘI – 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ MINH HỒNG Mã sinh viên: 1501191 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG VI SINH VẬT CỦA CÂY LỞ LEO THU HÁI TẠI HÒA BÌNH KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hoàng Quỳnh Hoa Ths Phạm Thị Linh Giang Nơi thực hiện: Bộ môn Thực vật – Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Vi Sinh & Sinh học Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2020 Lời cảm ơn Lời đầu tiên, với lòng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô trường Đại học Dược Hà Nội nói chung, thầy mơn Thực Vật- Trường Đại học Dược Hà Nội nói riêng giảng dạy, truyền đạt cho em kiến thức, kinh nghiệm suốt năm học qua, đồng thời giúp đỡ, tạo điều kiện để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn đến TS Hoàng Quỳnh Hoa ThS Phạm Thị Linh Giang, người tận tình giúp đỡ, trực tiếp bảo, góp ý, hết lịng hỗ trợ em suốt q trình làm khóa luận môn Em xin gửi lời cảm ơn tới TS Đỗ Ngọc Quang - Bộ môn Vi sinh & Sinh học - Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình dẫn, giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn chị Phạm Mỹ Hạnh - kĩ thuật viên môn Thực Vật Trường Đại học Dược Hà Nội hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ em suốt trình nghiên cứu Nhân dịp này, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới tồn thể cán bộ mơn Thực Vật - Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ, bảo tạo điều kiện tốt phịng thí nghiệm dụng cụ, thiết bị để em hoàn thành tốt việc nghiên cứu, thực nghiệm mơn Cuối cùng, em xin bày tỏ lịng biết ơn tới gia đình, bạn bè bạn sinh viên K70 nghiên cứu môn Thực Vật giúp đỡ, động viên cổ vũ em suốt thời gian qua Do thời gian nghiên cứu hạn hẹp, kiến thức cịn hạn chế nên em khơng tránh khỏi việc mắc thiếu sót q trình thực khóa luận Em kính mong nhận ý kiến góp ý q báu q thầy để đề tài khóa luận hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 22 tháng 06 năm 2020 Sinh viên Nguyễn Thị Minh Hồng MỤC LỤC Lời cảm ơn MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.1 Đặc điểm thực vật họ Dây khế (Connaraceae) 1.1.2 Vị trí phân loại chi Cnestis 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Cnestis 1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học chi Cnestic Jussieu 1.2.1 Hợp chất phenolic 1.2.2 Sterol 1.2.3 Dẫn chất glucosid 1.2.4 Acid béo dẫn chất 1.2.5 Ancol 1.2.6 Coumarin 1.2.7 Acid amin 1.3 Tác dụng sinh học chi Cnestis 1.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn 1.3.2 Chống co giật 1.3.3 Hoạt động chống oxy hóa 1.3.4 Chống tế bào ung thư 1.3.5 Tác dụng an thần, giải tỏa căng thẳng 1.3.6 Giảm đau chống viêm 1.3.7 Hạ đường huyết 1.3.8 Tác dụng chống trầm cảm 1.3.9 Tác dụng bảo vệ gan 1.3.10 Tác dụng nhuận tràng 10 1.3.11 Một số độc tính chi Cnestis 10 1.4 Kinh nghiệm sử dụng loài thuộc chi Cnestis kinh nghiệm dân gian nước giới 11 1.4.1 Trên giới 10 1.4.2 Tại Việt Nam 11 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 12 2.2 Phương tiện nghiên cứu 12 2.2.1 Hóa chất – Thuốc thử 12 2.2.2 Máy móc thiết bị dùng nghiên cứu 12 2.2.3 Chủng vi khuẩn kiểm định 13 2.3 Nội dung nghiên cứu 13 2.4 Phương pháp nghiên cứu 13 2.4.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 13 2.4.2 Nghiên cứu hóa học 14 2.4.3 Nghiên cứu tác dụng kháng vi sinh vật, nấm 19 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 24 3.1.1 Đặc điểm hình thái Lở leo 24 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu 25 3.1.3 Đặc điểm soi bột 29 3.2 Định tính thành phần hóa học thân Lở leo 30 3.2.1 Định tính phản ứng hóa học 30 3.2.2 Định tính sắc ký lớp mỏng 36 3.3 Tác dụng kháng vi khuẩn nấm dịch chiết thân Lở leo 37 BÀN LUẬN 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ABTS 2, 2-azino-bis (3- ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) C Cnestis DĐVN-V Dược điển Việt Nam DMSO Dimethyl sulfoxit DPPH 1, 1- diphenyl-2-picryl hydrazyl ELISA Enzyme linked immunosorbent assay EPM Elevated plus maze FBG Fasting blood glucose FST Forced swimming test HPTLC High-performance thin-layer chromatography HTC Hepatoma tissue culture IC50 Half maximal inhibitory concentration LDB Light/dark box MBC Minimum bactericidal concentration MES Maximal electroshock seizure MIC Minimal inhibitory concentration Rf Radio frequency RRL Rabbit reticulocyte lysate TLC Thin-layer chromatography TTC Triphenyl tetrazolium Chloride VSV Vi sinh vật DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các chủng VSV dùng để thử nghiệm kháng sinh sử dụng làm chứng dương 21 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất phản ứng hóa học 31 Bảng 3.2 Giá trị Rf màu sắc vết sắc ký đồ 37 Bảng 3.3 Khối lượng cắn thu mẫu nghiên cứu 37 Bảng 3.4 Kết thử tác dụng kháng vi sinh vật 38 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Một số hợp chất phenolic chi Cnestis Error! Bookmark not defined Hình 1.2 Cấu trúc hóa học β-sitosterol Hình 1.3 Cấu trúc hóa học β-sitosterol-glucosid Hình 1.4 Cấu trúc hóa học afrormosin-7-O-betasD-galactosid Hình 1.5 Một số acid béo dẫn chất acid béo chi Cnestis Hình 1.6 Cấu trúc hóa học triacontanol Hình 1.7 Một số hợp chất coumarin chi Cnestis Hình 1.8 Cấu trúc hóa học methionin sulfoximin Hình 3.1 Hình thái Lở leo 24 Hình 3.2 Hình thái hoa Lở leo 25 Hình 3.3 Đặc điểm vi phẫu thân Lở leo 26 Hình 3.4 Đặc điểm vi phẫu Lở leo 28 Hình 3.5 Đặc điểm bột thân Lở leo 29 Hình 3.6 Đặc điểm bột Lở leo 30 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu thử thân, màu thuốc thử vanilin H2SO4 ánh sáng thường 37 Hình 3.8 Tác dụng kháng khuẩn dịch chiết Lở leo chủng Staphylococcus aureus Bacillus subtilis 39 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nước nhiệt đới, khí hậu nóng ẩm quanh năm, với địa hình phức tạp, hệ thực vật đa dạng với khoảng 10000 loài thực vật bậc cao, 600 loài nấm 800 loài rêu [7] Với tài nguyên thực vật kho tàng tri thức sử dụng cỏ làm thuốc đa dạng, nước ta biết đến nước có y học cổ truyền phong phú đặc sắc Người Mường dân tộc thiểu số nước ta, tiếng với nhiều thuốc nam độc đáo Văn hóa xã hội cộng đồng người Mường gắn liền với thuốc thuốc Họ sử dụng cỏ để chữa trị nhiều bệnh thông thường có bệnh ngồi da Bên cạnh số thuốc có tác dụng chữa bệnh ngồi da nghiên cứu kỹ thành phần hóa học tác dụng sinh học, Lở leo thuốc sử dụng lâu đời Hịa Bình với tác dụng kháng khuẩn Theo kết điều tra sơ thuốc người Mường Hồ Bình, Lở leo xác định lồi thuộc chi Cnestis nhiên thông tin điểm thực vật, thành phần hoá học tác dụng sinh học thuốc chưa đầy đủ [11] Để góp phần nâng cao giá trị khoa học thuốc sử dụng theo kinh nghiệm dân gian, đồng thời giúp cho việc sử dụng Lở leo hiệu hơn, đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng kháng vi sinh vật Lở leo thu hái Hịa Bình” thực với mục tiêu sau: Hồn thiện mơ tả đặc điểm thực vật giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu Định tính thành phần hóa học mẫu nghiên cứu phản ứng hóa học sắc kí lớp mỏng Thử tác dụng kháng vi khuẩn nấm dịch chiết toàn phần mẫu nghiên cứu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.1 Đặc điểm thực vật họ Dây khế (Connaraceae) Cây gỗ nhỏ, bụi dây leo Lá mọc so le, khơng kèm, có cuống lá; phiến lông chim lẻ, kép lá; chét mọc gần đối so le Cụm hoa đầu cành, giả đầu cành, nách Hoa lưỡng tính đơn tính, đối xứng tỏa tia, đối xứng hai bên Đài hoa gồm đài, rời hợp gần gốc, xếp lợp xếp rời Tràng hoa gồm cánh hoa xếp lợp rời Bộ nhị gồm 5-10, bao phấn mở dọc Lá noãn (1-)5(-8), rời, ngăn, rậm lơng Vịi nhụy hình dùi hình chỉ; đầu nhụy gần giống hình đầu, đơn thùy Noãn noãn, bên, thẳng đứng Quả thường đại đơn độc [23] [49] Họ Dây khế có 19 chi gồm: Agelaea, Burttia, Cnestidium, Cnestis, Connarus, Ellipanthus, Hemandradenia, Jaundea, Jollydora, Manotes, Paxia, Pseudoconnarus, Rourea, Roureopsis, Santalodes, Santaloides, Spiropetalum, Taeniochlaena, Vismianthus gồm khoảng 350 lồi [51] 1.1.2 Vị trí phân loại chi Cnestis Jussieu Theo hệ thống phân loại Takhtajan [45], vị trí phân loại chi Cnestis sau: Giới thực vật (Plantae) Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa hồng (Rosidae) Bộ Chua me đất (Oxalidales) Họ Dây khế (Connaraceae) Chi Cnestis Jussieu 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Cnestis Dây leo hay nhỡ có cành leo, có mọc đứng lúc đầu Lá kép lông chim lẻ với chét nguyên Cụm hoa nách ngọn, đơn độc thành bó Hoa mẫu 5, lưỡng tính, đài bị dính gốc Cánh hoa ngắn dài đài Nhị 49 Yakubu MT, Adams DM, Akanji MA, Oladiji AT (2011), “Laxative Activity of Aqueous Root Extract of Cnestis ferruginea (VAHL ex DC) in Loperamide induced Constipated rats”, Nigerian Journal of Gastroenterology & Hepatology, 3, 1-2 Tài liệu tiếng Pháp: 50 Jeannoda VL, Creppy EE, Beck G, Dirheimer G (1983), “Comptes Rendus des Seances de L'academie des sciences”, Sciences de la vie, 296(7), 335-338 Nguồn Internet 51 http://www.plantsoftheworldonline.org/taxon/urn:lsid:ipni.org:names:264264-1 truy cập ngày 21/6/2020 PHỤ LỤC Danh mục phụ lục Phụ lục Giấy chứng nhận mã số tiêu Phụ lục Giấy giám định tên khoa học Phụ lục Sắc ký đồ giá trị Rf vết sắc ký đồ ánh sáng bước sóng 254 nm trước phun thuốc thử vanilin - H2SO4 Phụ lục Sắc ký đồ giá trị Rf vết sắc ký đồ ánh sáng bước sóng 366 nm trước phun thuốc thử vanilin - H2SO4 Phụ lục Sắc ký đồ giá trị Rf vết sắc ký đồ ánh sáng trắng sau phun thuốc thử vanilin - H2SO4 Phụ lục Hình ảnh chồng phổ sắc ký đồ dịch chiết thân Lở leo Phụ lục Kết tác dụng kháng VSV Lở leo Phụ lục Giấy chứng nhận mã số tiêu Phụ lục Giấy giám định tên khoa học Phụ lục Sắc ký đồ giá trị Rf vết sắc ký đồ ánh sáng bước sóng 254 nm trước phun thuốc thử vanilin - H2SO4 Phụ lục Sắc ký đồ giá trị Rf vết sắc ký đồ ánh sáng bước sóng 366 nm trước phun thuốc thử vanilin - H2SO4 Phụ lục Sắc ký đồ giá trị Rf vết sắc ký đồ ánh sáng trắng sau phun thuốc thử vanilin - H2SO4 Phụ lục 6: Hình ảnh chồng phổ sắc ký đồ dịch chiết thân Lở leo Chú thích: Track 1: Mẫu thân Lở leo; Track 2: Mẫu Lở leo Phụ lục 7: Kết tác dụng kháng VSV dịch chiết thân Lở leo ... cho vi? ??c sử dụng Lở leo hiệu hơn, đề tài ? ?Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng kháng vi sinh vật Lở leo thu hái Hịa Bình? ?? thực với mục tiêu sau: Hồn thiện mơ tả đặc điểm thực. .. TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ MINH HỒNG Mã sinh vi? ?n: 1501191 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG VI SINH VẬT CỦA CÂY LỞ LEO THU HÁI TẠI HỊA BÌNH KHỐ LUẬN... dung nghiên cứu 13 2.4 Phương pháp nghiên cứu 13 2.4.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 13 2.4.2 Nghiên cứu hóa học 14 2.4.3 Nghiên cứu tác dụng kháng vi sinh vật,