Nghiên cứu về đặc điểm thực vật thành phần hóa học dược liệu chỉ thiên

BỘ Y tẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ược HÀ NỘI TRẦN THỊ THANH VÂN NGHIÊN CỨU VỂ ĐẶC ĐIỂM THỰC v ậ t v à THÀNH PHẦN HÓA HỌC Dược LIẸU CHỈ THIÊN • • • (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ ỉ»ít1ĩÌj 'v ỉẹ \' .* Người hướng dẫn Noi thực hiện - Thòi gian thực hiện PGS. TS VŨ VĂN ĐIỀN BỘ MÔN DƯỢC HỌC c ổ TRUYỀN b Ộ Mô n t h ự c v Ật TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI 2 /2 0 0 7 -5 /2 0 0 7 HÀ NỘI, THẮNG 5, 2007 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình hoàn thành khoá luận tốt nghiệp, tôi đã nhận được sự chỉ bảo và giúp đỡ tận tình của các thầy ,cô giáo. Tôi xin bày tỏ lòng biết Cfn sâu sắc và kính trọng nhất tới: PGS. TS Vũ Văn Điền - Bộ môn dược học cổ truyền là người thầy đã trực tiếp hướng dẫn, đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho tôi. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Th.s Nguyễn Quốc Huy - Bộ môn Thực vật cùng các thầy cô giáo, các cán bộ, kỹ thuật viên của các bộ môn: Dược học cổ truyền, Thực vật, Dượe liệu, các phòng ban trong trường đại học Dược Hà Nội đã tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp tôi hoàn thành khoá luận này. Cuối cùng tôi xin gửi lời cảm ơn tói gia đình, ngưòi thân, bạn bè đã luôn khích lệ, động viên, ủng hộ để tôi có được kết quả như ngày hôm nay. Hà Nội, ngày 20/5/2007 Sinh viên Trần Thị Thanh Vân MỤC LỤC é • ĐẶT VẤN Đ Ể . 1 PHẦN 1: TỔNG QUAN 2 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CHI ELEPHANTOPUS 2 1.1.1.Vị trí phân loại 2 1.1.2. Đặc điểm chung của họ Cúc- Asteraceae 2 1.1.3. Đặc điểm chung của chi Elephantopus 3 1.1.4. Các loài trong chi Elephantpus 3 1.2. BỘ PHẬN DÙNG VÀ CHẾ BIÊN 5 1.3. THÀNH PHẦN HOÁ HỌC . . . 5 1.4. TÁC DỤNG VÀ CÔNG DỤNG 6 1.5. MỘT SỐ BÀI THUỐC c ó CHỈ THIÊN 7 1.5.1. Chữa cảm sốt thế phong nhiệt 7 1.5.2.Chữa cảm nóng, sốt nóng đơn thuần, 7 1.5.3.Chữa ho do viêm họng đỏ, viêm amidan cấp . 7 1.5.4.Chữah o 7 1.5.5.Chữa đái buốt, đái ra máu, đái đục, đái có chất nhày, đái ra sỏi 7 PHẦN 2 : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 8 2.1. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƠNG PHÁP THựC NGHIỆM 8 2.1.1. Nguyên liệu 8 2.1.2. Phương pháp thực nghiệm 8 2.2. KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 11 2.2.1. Nghiên cứu về thực vật 11 2.2.2. Nghiên cứu về hoá học 18 2.3. BÀN LUẬN 35 2.3.1. Về kết quả nghiên cứu thực vật 35 2.3.2. Về các kết quả nghiên cứu hoá học 36 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 37 3.1. KẾT LUẬN . . . 37 3.1.1. Thực vật 37 3.1.2. Hoá học 37 3.2. ĐỀ XUẤT . 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHU LUC CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT AS : Ánh sáng CSB : Chỉ số bọt Dd, dd : Dung dịch ĐH : Đại học ĐHQGHN : Đại học Quốc gia Hà Nội SKLM ; Sắc ký lớp mỏng SKĐ : Sắc ký đồ TT : Thuốc thử DANH MỤC CÁC BẢNG 1. Bảng 1 : Kết quả định tính các nhóm chất trong cây Chỉ thiên 25 2. Bảng 2 : Thí nghiệm xác định chỉ số bọt 26 3. Bảng 3 : Kết quả định lượng saponin toàn phần 29 4. Bảng 4 : Kết quả SKLM của saponin trong hệ S5 31 5. Bảng 5 : Kết quả định lượng Aavonoid toàn phần . 33 6 . Bảng 6 : Kết quả SKLM của Aavonoid trong hệ F1 34 DANH MỤC CÁC HÌNH 1. Hình 1 : Cây chỉ thiên 11 2. Hình 2 : Lá cây Chỉ thiên 11 3. Hình 3 : Toàn cây Chỉ thiên 11 4. Hình 4 : Quả Chỉ thiên 11 5. íỉình 5 : Cấu tạo chi tiết lá Chỉ thiên 13 6 . Hình 6 : Vi phẫu bẹ lá Chỉ thiên 14 7. Hình 7 : Cấu tạo chi tiết bẹ lá Chỉ thiên 14 8 . Hình 8 : Vi phẫu rễ Chỉ thiên ! 15 9. Hình 9 : Cấu tạo chi tiết rễ Chỉ thiên 16 10. Hình 10 : Vi phẫu thân Chỉ thiên 17 11. Hình 11 : Cấu tạo chi tiết thân Chỉ thiên 17 12. Hình 12 : Bột lá Chỉ thiên :18 13. Hình 13 : Chiết xuất saponin toàn phần 28 14. Hình 14 : Chiết xuất flavonoid toàn phần 32 15. Hình 15 : sắc ký đồ của flavonoid . 35 16. Hình 16 : sắc ký đồ của saponin 35 ĐẶT VÂN ĐỂ Hiện nay, xu hướng điều trị bệnh bằng thuốc có nguồn gốc thiên nhiên, đặc biệt là từ cây cỏ đang ngày càng tăng. Trước xu hướng đó, con người ngày càng chú trọng vào việc nghiên cứu, tìm kiếm, khai thác nguồn tài nguyên thiên nhiên này. Elephantopus là chi gồm toàn cây thảo, gồm 32 loài phân bố rộng khắp thế giới (vùng khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đói) [11]. ở Việt Nam có 3 loài trong đó có 2 loài được dùng làm thuốc. Cây chỉ thiên, là tên của một số loài thuộc chi Eỉephantopus, có thể gặp ở mọi noi, từ vùng núi cao khoảng 1500m xuống đến trung du, đồng bằng và hải đảo. Cây ưa sáng, chịu hạn tốt, phát tán và lan rộng rất nhanh. Cây chỉ thiên rất dễ kiếm và có trữ lượng lớn. Hiện nay ở nước ta, cây Chỉ thiên còn chưa được nghiên cứu nhiều và chưa được khai thác hiệu quả. Vì vậy để đánh giá một cách đầy đủ, góp phần khai thác và sử dụng dược liệu này một cách hợp lý, an toàn, hiệu quả và rộng rãi, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: " Nghiên cứu về đặc điểm thực vật và thành phần hoá học dược liệu Chỉthỉên^\ Trong khuôn khổ khoá luận này, chúng tôi nghiên cứu một số nội dung sau: - Mô tả đặc điểm thực vật, kiểm tra tên khoa học loài nghiên cứu, mô tả đặc điểm vi học góp phẩn xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu. - Định tính các nhóm chất trong dược liệu. - Định lượng saponin, ũavonoid trong dược liệu. - Phân tích saponin, Aavonoid toàn phần bằng SKLM PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CHI ELEPHANTOPUS\ 1.1.1. Vị trí phân loại Theo các tài liệu [7], [1 1 ], [24], chi Elephantopus có vị trí phân loại như sau: Giới thực vật (Plantae) Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Phân ngành Ngọc lan (Magnoliophytina) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp Cúc (Asteridae) Liên bộ Cúc (Asteranae) Bộ Cúc (Asterales) Họ Cúc (Asteraceae) Chi Elepliantopus 1.1.2. Đặc điểm chung của họ Cúc- Asteraceae [1], [12], [18] Cây thảo, cây bụi, ít khi cây gỗ hay dây leo. Rễ đôi khi phồng lên thành củ. Lá đơn, thường mọc so le, ít khi mọc đối, có khi mọc thành hình hoa thị, không có lá kèm. Phiến ít khi nguyên, thường khía răng hay chia thuỳ. Cụm hoa đầu, gồm nhiều hoa mọc ở kẽ những vảy và bao bọc bỏi một tổng bao lá bắc (gồm một hay nhiều dãy lá bắc ròi hay dính nhau). Đế hoa có lá bắc ở giữa các hoa, thường lồi, ít khi kéo dài hay bị lõm ở ngoài. Hoa lưỡng tính hay đơn tính, ít khi khác gốc, có 2 loại hoa (thường những hoa ở phía ngoài là hoa lưõi nhỏ, còn ở trong là hoa hình ống). Đài hoa biến đổi nhiều, có khi biến đổi thành một mào lông, ít khi khô và hình mày, ở trên nhụy. Tràng hợp, chẻ 4-5, van, đều hay đối xứng 2 bên, ít khi 2 môi. Nhị 5, trên cánh hoa, phần lớn tụt vào trong ống tràng, chỉ nhị rời nhau, bao phấn dính liền thành một ống, rất ít khi ròi, bao phấn hai ô, nẻ dọc. Bầu hạ, 1 ô đựng 1 noãn, 2 lá noãn, vòi dài, đầu nhụy xẻ đôi, có lông thu. Noãn thẳng đứng từ gốc Quả bế, không cuống, nhiều khi có mào lông hay có móc. Hạt không có nội nhũ, phôi thẳng vói lá mầm phẳng- lồi 1.1.3. Đặc điểm chung của chi Elephantopus [11] Cỏ cứng, lá mọc so le, cụm hoa đầu các hoa tập hợp trên một bao chung gồm 2-3 lá bắc lón hơn. Bao riêng có 6 - 8 lá bắc không bằng nhau, nhọn, có lưòfn ở lưng, cứng, có 2-5 hoa trong mỗi đầu riêng giống nhau, đều, mào lông có râu rộng ở gốc, phân nhánh hay đơn. Tràng hình ống, thuỳ 5, nhị 5, bao phấn dính nhau, có mỏ thành bản, vứi gốc hình mũi tên nhiều hay ít. Bầu hạ có lông nhung, vòi dạng sọi, đầu nhuỵ dạng sợi Quả bế có 10 cạnh. 1.1.4. Các loài trong chi Elephantopus Theo tài liệu [9], ờ Việt Nam có 3 loài Elephantopus scaber L., Elephantopus mollis H.B et Kunth., Elephantopus spicatus BJuss Theo tài liệu [11], ở Việt Nam có 2 loài Elephantopus scaber L., Elephantopus mollỉs H.B et Kunth. * Elephantopus scaber L - Cúc chỉ thiên, cỏ lưỡi mèo, chân voi nhám • Đặc điểm thực vật: Cây thảo, sống nhiều năm, cao 30-60 cm. Thân hình trụ, cứng, có lông thô, phân nhiều nhánh khi có ^ hoa. Lá mọc ở gốc thành hình hoa thị, thuôn thon, tù ờ . đầu, dài 6-12 cm, rộng 3-5 cm, phiến lá uốn lượn và men theo cuốne ôm lấy thân, lá phía trên nhỏ dần, mép Nguồn: Từ điển cây thuốc Việt Nam (1999) [...]... pháp thực nghiệm 2.I.2.I Nghiên cứu về thực vật * Mô tả đặc điểm thực vật và kiểm tra tên khoa học của mẫu nghiên cứu: 8 - Quan sát, mô tả cây tại thực địa Lấy mẫu và làm tiêu bản khô Lưu tại phòng tiêu bản (HNIP) Bộ môn Thực vật- Trường ĐH Dược Hà Nội - Đối chiếu mẫu cây thu hái với các tài liệu về thực vật và mẫu luu giữ tại các trung tâm khoa học lớn: Bộ môn Thực vật- Trường ĐH Dược Hà Nội, Viện Dược. .. (Hình 1, 2, 3, 4) Lấy mẫu cây về ép khô, lưu mẫu tại Phòng tiêu bản, Bộ môn Thực vật, Trường ĐH Dược Hà Nội (Mã tiêu bản; HNIP/15305/07) và dùng để đối chiếu với các mẫu lưu tại một số cơ quan nghiên cứu khoa học Qua đặc điểm thực vật của cây, đối chiếu với các tài liệu về thực vật [9], [10], [ 1 1 ], [13], [16], [17], [22], [28], [29] và so sánh với các mẫu lưu tại Viện Dược liệu (mẫu số 128D), tại Khoa... môn Thực vật- Trường ĐH Dược Hà Nội, Viện Dược liệu, Khoa Sinh- ĐHQGHN, Viện sinh thái và tài nguyên môi trường * Nghiên cứu đặc điểm vi học: làm vi phẫu rễ, lá; soi bột lá theo tài liệu [5], [8 ] 2.1.2.2 Nghiên cứu về hoá học • Định tính các nhóm chất hữu cơ theo các phương pháp thường qui dược ghi trong các tài liệu [3], [4], [6 ], [15], [27] • Nghiên cứu saponin: - Định tính saponin bằng SKLM dùng... tròn, kích thước không đều nhau, có thành rất mỏng và các góc có khoảng gian bào nhỏ Hình 10: Vi phẫu thân Chỉ thiên 1 Biểu bì 3 Mô mểm vỏ 2 Mô dày 5 Libe 6 Tầng phát sinh libe- gỗ 4 Mô cứng 7 GỖ 8 Mô mềm ruột Hình 11: Cấu tạo chi tiết thân Chỉ thiên 2.2J.3 Đặc điểm bột lá Lá cây Chỉ thiên sau khi rửa sạch, sấy khô, tán thành bột Rây lấy phần bột mịn Đặc điểm bột lá Chỉ thiên: màu xanh xám ánh trắng, mùi... toàn phần Sấy cắn đến khối lượng không đổi, cân, tính hàm lượng theo dược liệu khô tuyệt đối Hàm lượng Aavonoid toàn phần được tính theo công thức: F {% ) = ị xioo w X (1 - ố) Trong đó: F : Hắm lượng Aavonoid tính theo dược liệu khô tuyệt đối (%) a : Khối lượng Aavonoid toàn phần (g) m : Khối lượng dược liệu đem chiết (g) b : Hàm ẩm của dược liệu (%) 10 2.2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.2.1 Nghiên cứu. .. lượiig saponin tính theo dược liệu khô tuyệt đối (%) a : Khối lượng saponin toàn phần (g) m : Khối lượng dược liệu đem chiết (g) b : Hàm ẩm của dược liệu (%) • Nghiên cứu về flavonoid: - Định tính flavonoid bằng SKLM dùng bản mỏng tráng sắn Silicagel GF254 (Merck) theo phương pháp ghi trong tài liệu [3], [15] 9 - Định lượng Aavonoid toàn phần bằng phương pháp cân Chiết Aavonoid toàn phần bằng dung môi hữu... dược liệu (%) 10 2.2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.2.1 Nghiên cứu về thực vật 2.2.1.1 Đăc điểm hình thái thưc vát và kiểm tra tên khoa hoc Vi Hình 1: Cây chỉ thiên Hình 2: Lá cây Chỉ thiên Hình 3: Toàn cây Chỉ thiên Hình 4: Quả Chỉ thiên Cây thảo, cao 25- 40 cm Thân hình trụ, cứng, có lông thô, màu trắng, phân nhiều nhánh khi có hoa Lá mọc ở gốc thành hình hoa thị, lá thuôn, tù ở đầu, mép lá có răng cưa nhỏ,... hiển vi ở vật kính 10,40 thấy có các đặc - Mảnh mạch (1) 17 Mạch xoắn (2) Sợi (3) Mảnh mô mềm (4) Mảnh biểu bì mang lỗ khí (5) Tinh thể calci oxalat hình cầu gai (6 ) LỖ khí (7) Lông che chở (8 ) 3 Hình 12: Bột lá Chỉ thiên 2.2.2 Nghiên cứu về hoá học 3.1.2.1 Định tính sơ bộ các nhóm chất trong dược Uệu ❖ Đinh tính alcaloid Cho khoảng 3g bột dược liệu vào bình nón dung tích lOOml, thấm ẩm dược liệu bằng... thứ một nắm Sắc uống PHẦN 2 : THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THựC NGHIỆM 2.1.1 Nguyên liệu ❖ Đối tượng nghiên cứu: - Đối tượng nghiên cứu: cây Chỉ thiên {Elephantopus scaber L., Asteraceae) - Nơi thu hái mẫu: Xã Trung Giáp, huyện Phù Ninh, Tỉnh Phú Thọ - Thời điểm thu hái mẫu: tháng 2 và 3/ 2007 ❖ Phưcfng tiện nghiên cứu: * Thiết bị- máy móc: - Kính hiển vi: Leica BME, Leica CME... Qua các phản ứng định tính ở trên, chúng tôi sơ bộ kết luận trong cây Chỉ thiên có chứa: saponin, flavonoid, coumarin, acid hữu cơ, đường khử 25 và polysaccharid Do đó hưổng nghiên cứu của chúng tôi tập trung vào nhóm saponin và flavonoid trong cây Chỉ thiên 3.1.2.2 Nghiên cứu về saponin ♦ Xác đinh chỉ số tao bot t* Cân 40g bột dược liệu, cho vào bình nón dung tích 500ml thêm lOOml nước, đun sôi nhẹ . 11 2.2.1. Nghiên cứu về thực vật 11 2.2.2. Nghiên cứu về hoá học 18 2.3. BÀN LUẬN 35 2.3.1. Về kết quả nghiên cứu thực vật 35 2.3.2. Về các kết quả nghiên cứu hoá học 36 PHẦN 3: KẾT LUẬN. sử dụng dược liệu này một cách hợp lý, an toàn, hiệu quả và rộng rãi, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: " Nghiên cứu về đặc điểm thực vật và thành phần hoá học dược liệu Chỉthỉên^ Trong. BỘ Y tẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ược HÀ NỘI TRẦN THỊ THANH VÂN NGHIÊN CỨU VỂ ĐẶC ĐIỂM THỰC v ậ t v à THÀNH PHẦN HÓA HỌC Dược LIẸU CHỈ THIÊN • • • (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ ỉ»ít1ĩÌj 'v