Nghiên cứu điều chế cao lỏng hà thủ ô đỏ chế và xây dựng một số tiêu chuẩn hóa học bằng phương pháp tlc uv

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HỒNG NGỌC NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO LỎNG HÀ THỦ Ô ĐỎ CHẾ VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ TIÊU CHUẨN HÓA HỌC BẰNG PHƯƠNG PHÁP TLC – UV KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI- 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HỒNG NGỌC MÃ SINH VIÊN: 1501359 NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO LỎNG HÀ THỦ Ô ĐỎ CHẾ VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ TIÊU CHUẨN HÓA HỌC BẰNG PHƯƠNG PHÁP TLC – UV KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Phạm Thái Hà Văn Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyềnĐại học Dược Hà Nội HÀ NỘI- 2020 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu hồn thành khóa luận này, em nhận nhiều giúp đỡ quý báu từ thầy cơ, bạn bè gia đình Trước hết, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới ThS Phạm Thái Hà Văn, người thầy tận tình hướng dẫn, hết lòng bảo tạo điều kiện giúp đỡ em q trình học tập, nghiên cứu, hồn thành khóa luận Em xin cảm ơn thầy Bộ môn Dược cổ truyền tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập nghiên cứu mơn Em xin bày tỏ lịng biết ơn tới thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội truyền đạt cho em kiến thức quý báu giúp em học tập phát triển thân Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến người thân gia đình, bạn bè quan tâm, ủng hộ, động viên suốt thời gian nghiên cứu thực đề tài Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2020 Sinh viên Ngọc Vũ Thị Hồng Ngọc MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan hà thủ ô đỏ 1.1.1 Vị trí phân loại đặc điểm thực vật hà thủ ô đỏ 1.1.2 Bộ phận dùng cách chế biến 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng theo y học cổ truyền 1.2 Vài nét 2,3,5,4’ – tetrahydroxystilben – – O – β – D – glucosid 1.2.1 Đặc điểm tính chất hóa lý THSG 1.2.2 Tính chất dược lý THSG 1.3 Tổng quan kỹ thuật điều chế cao dược liệu 1.3.1 Khái niệm cao dược liệu 1.3.2 Phân loại cao dược liệu 1.3.3 Chiết xuất dược liệu phương pháp ngâm 1.3.4 Kỹ thuật điều chế cao dược liệu 10 1.3.5 Chỉ tiêu chất lượng cao dược liệu 13 1.4 Kỹ thuật sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký lớp mỏng kết hợp với quang phổ hấp thụ tử ngoại (TLC - UV) 13 1.4.1 Kỹ thuật sắc ký lớp mỏng (TLC) 13 1.4.2 Sắc ký lớp mỏng kết hợp với quang phổ hấp thụ tử ngoại 16 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị nghiên cứu 17 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Thiết bị hóa chất 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Phương pháp điều chế cao lỏng hà thủ ô đỏ chế 18 2.3.2 Định tính số nhóm chất phương pháp hóa học sắc ký lớp mỏng 19 2.3.3 Định lượng THSG phương pháp sắc ký lớp mỏng kết hợp quang phổ hấp thụ tử ngoại 20 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Điều chế cao lỏng hà thủ ô đỏ chế 24 3.2 Định tính số nhóm hoạt chất cao lỏng hà thủ đỏ chế 24 3.2.1 Định tính phản ứng hóa học 24 3.2.2 Định tính sắc ký lớp mỏng 25 3.3 Khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại THSG 27 3.4 Thẩm định phương pháp định lượng 28 3.4.1 Khảo sát độ thích hợp hệ thống 28 3.4.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính THSG 29 3.5 Kết định lượng THSG mẫu dược liệu mẫu cao lỏng hà thủ ô đỏ chế 31 BÀN LUẬN 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT HTÔĐ Hà thủ đỏ HTƠĐC Hà thủ đỏ chế DLC Dược liệu chế DLS Dược liệu sống THSG 2,3,5,4’- tetrahydroxystilben-2-O-β-D-glucosid DĐVN Dược điển Việt Nam MeOH Methanol EtOH Ethanol EtOAc Ethyl acetat DL Dược liệu DM Dung môi RSD Relative standard deviation SD Standard deviation UV Ultraviolet TLC Thin layer chromatography GC Gas chromatography HPLC High-performance liquid chromatography HPTLC High-performance thin layer chromatography SKLM Sắc ký lớp mỏng TT Thuốc thử TB Trung bình DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các stilben phân lập từ rễ hà thủ ô đỏ Bảng 1.2 Nồng độ Ethanol thích hợp với số nhóm hoạt chất 11 Bảng 1.3 Một số chất làm pha tĩnh cho TLC 13 Bảng 2.1 Thể tích chấm định lượng 21 Bảng 3.1 Cảm quan cao lỏng HTÔĐC 24 Bảng 3.2 Tỉ trọng mẫu cao lỏng 24 Bảng 3.3 Kết định tính phản ứng hóa học cao lỏng HTÔĐC 24 Bảng 3.4 Độ hấp thụ UV mẫu THSG chuẩn bước sóng 319nm 30 Bảng 3.5 Kết định lượng THSG mẫu thử 31 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Một số anthraquinon có hà thủ đỏ Hình 1.2 Cơng thức THSG Hình 1.3 Phổ hấp thụ UV (MeOH) THSG Hình 3.1 Sắc ký đồ hệ (1), (2), (3), (4) (366nm) 26 Hình 3.2 Sắc ký đồ định tính DL cao lỏng hà thủ đỏ chế 26 Hình 3.3 Phổ UV cực đại hấp thụ THSG 28 Hình 3.4 Sắc ký đồ khảo sát độ thích hợp hệ thống phương pháp 28 Hình 3.5 Sắc ký đồ định lượng THSG (366nm) 29 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ THSG độ hấp thụ 31 ĐẶT VẤN ĐỀ Hà thủ ô đỏ vị thuốc sử dụng phổ biến y học cổ truyền Việt Nam Trung Quốc với tác dụng dưỡng huyết; bổ âm; bồi bổ can, thận; nhuận tràng thông tiện, làm đen râu tóc [3], [19] Nhiều nghiên cứu khoa học tác dụng hà thủ ô đỏ tim, gan, thần kinh; tác dụng chống oxy hóa mạnh, chống gốc tự [14], [18], [26], [28] Hiện nay, hà thủ ô đỏ thị trường phần lớn dạng chế biến với phụ liệu đậu đen Dược điển Việt Nam V khơng quy định tiêu hóa học hà thủ ô đỏ chế Phương pháp sắc thuốc phương pháp dân gian áp dụng từ lâu để sử dụng hà thủ ô đỏ phương pháp lại có nhược điểm nhiều thời gian phá hủy hoạt chất dễ bị phân hủy nhiệt độ cao Trong đó, cao lỏng chế phẩm tiện lợi, dùng trực tiếp [1] để uống đưa vào dạng bào chế khác, khắc phục nhược điểm sắc thuốc Vì vậy, cần thiết nghiên cứu phương pháp điều chế cao lỏng hà thủ ô đỏ sau chế biến xây dựng số tiêu hóa học cho sản phẩm 2,3,5,4’ – tetrahydroxystilben – – O – β – D – glucosid (THSG) stilben chiếm tỉ lệ cao hà thủ ô đỏ [8] Dược điển Trung Quốc, Dược điển Mỹ quy định tiêu định lượng hà thủ ô đỏ hàm lượng THSG [15], [29] Trong đó, tiêu định lượng hà thủ ô đỏ Dược điển Việt Nam V hàm lượng anthraquinon [6] Sắc ký lớp mỏng điều chế công cụ tách hoạt chất dược liệu hiệu Hoạt chất chiết từ vết sắc ký cho độ tinh khiết cao Mặt khác, thiết bị khai triển sắc ký ngày đại dẫn đến phương pháp sắc ký lớp mỏng ngày tối ưu hóa [5] So với sắc ký lỏng hiệu cao, kết hợp sắc ký lớp mỏng quang phổ hấp thụ tử ngoại phân tích định lượng hoạt chất dược liệu phương pháp đơn giản, chi phí thấp, áp dụng định lượng artemisinin cao hoa vàng [6] Xuất phát từ thực tiễn đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu “Nghiên cứu điều chế cao lỏng hà thủ ô đỏ chế xây dựng số tiêu chuẩn hóa học phương pháp TLC – UV” với mục tiêu: 1 Điều chế cao lỏng hà thủ ô đỏ chế Khảo sát số tiêu chuẩn hóa học (định tính phản ứng hóa học sắc ký lớp mỏng, định lượng THSG mẫu cao lỏng hà thủ ô đỏ chế phương pháp TLC – UV) Chú thích: – 4: Mẫu chiết EtOAc (1: DLS, 2: DLC, 3: cao cồn 50%, 4: cao nước); 5: emodin; 6: physcion; 7: THSG; – 11: Mẫu chiết MeOH (8: DLS, 9: DLC, 10: cao cồn 50%, 11: cao nước) Nhận xét: Trên sắc ký đồ, mẫu đối chiếu emodin (5), physcion (6), THSG (7) cho vết rõ nét, khơng có vết lạ Dưới đèn tử ngoại 366nm, emodin có màu vàng đậm, physcion có màu vàng nhạt, THSG có màu xanh dương Các mẫu thử – cho vết emodin, physcion, THSG có màu sắc Rf tương đương với mẫu chuẩn; đó, mẫu cho vết rõ nét mẫu Các mẫu thử – 11 cho vết THSG rõ ràng, vết emodin không rõ Mẫu 8, phát vết có Rf tương đương với mẫu đối chiếu physcion cịn mẫu 10, 11 khơng rõ vết có Rf tương đương với mẫu đối chiếu physcion So sánh sắc ký đồ mẫu chiết EtOAc với sắc ký đồ mẫu chiết MeOH thấy sắc ký đồ mẫu chiết EtOAC cho nhiều vết rõ nét mẫu chiết MeOH; vết emodin, physcion, THSG sắc ký đồ mẫu chiết EtOAc rõ ràng mẫu chiết MeOH rõ vết THSG physcion, không rõ emodin So sánh sắc ký đồ mẫu cao cồn 50% với sắc ký đồ mẫu cao nước chiết lại EtOAc MeOH, thấy vết emodin, physcion, THSG sắc ký đồ cao cồn 50% đậm màu vết sắc ký đồ cao nước Như vậy, phương pháp ngâm chiết nhiều hoạt chất phương pháp sắc nước truyền thống 3.3 Khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại THSG Quét phổ UV chất chuẩn THSG/EtOAc máy quang phổ UV – VIS 27 Hình 3.3 Phổ UV cực đại hấp thụ THSG Chú thích: A: Phổ UV THSG, B: Các bước sóng hấp thụ cực đại THSG Nhận xét: phổ UV THSG cho thấy đỉnh hấp thụ cực đại bước sóng 211, 223, 242, 319 nm Qua tham khảo nghiên cứu trước [10], [22] nghiên cứu lựa chọn bước sóng 319 nm để định lượng THSG 3.4 Thẩm định phương pháp định lượng 3.4.1 Khảo sát độ thích hợp hệ thống Tiến hành chấm lặp lại lần mẫu chuẩn THSG chuẩn bị mục 2.3.5.1, thể tích chấm 100 µl, ghi lại giá trị Rf Kết sau: Hình 3.4 Sắc ký đồ khảo sát độ thích hợp hệ thống phương pháp 28 Chú thích: – 6: mẫu chuẩn THSG Nhận xét: vết THSG chuẩn sắc ký đồ có màu sắc rõ nét, khơng có vết lạ, giá trị Rf lặp lại cao cho thấy điều kiện sắc ký lựa chọn phù hợp đảm bảo độ ổn định phép phân tích định lượng 3.4.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính THSG - Triển khai sắc ký lớp mỏng theo mục 2.3.5.2, kết thu hình 3.6 Hình 3.5 Sắc ký đồ định lượng THSG (366nm) Chú thích: TRANG: mẫu trắng, CHUAN 1: mẫu chuẩn 1, CHUAN 2: mẫu chuẩn 2, CHUAN 3: mẫu chuẩn 3, CHUAN 4: mẫu chuẩn 4, CHUAN 5: mẫu chuẩn 5, CAO CON: mẫu cao cồn 50%, CAO NUOC: mẫu cao nước, HTODC: mẫu hà thủ ô đỏ chế Nhận xét: Trên sắc ký đồ, mẫu trắng mẫu chuẩn khơng có vết lạ; vết THSG có màu xanh dương quan sát đèn UV 366nm; mẫu thử cao cồn 50%, cao nước, DL hà thủ ô đỏ chế cho vết tách rõ ràng, có vết tương ứng với mẫu chuẩn màu sắc Rf Độ hấp thụ mẫu THSG chuẩn trình bày bảng 3.6 29 Bảng 3.4 Độ hấp thụ UV mẫu THSG chuẩn bước sóng 319nm Mẫu Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn Vc (µl) 60 80 100 120 140 mc (mg) 1,008 1,344 1,680 2,016 2,352 Cđ (mg/ml) 0,2016 0,2688 0,336 0,4032 0,4704 L1 0,183 0,232 0,276 0,393 0,443 L2 0,185 0,232 0,278 0,394 0,443 L3 0,184 0,234 0,279 0,391 0,446 L4 0,186 0,235 0,279 0,391 0,446 L5 0,186 0,235 0,279 0,390 0,452 TB 0,1848 0,2336 0,2782 0,3918 0,446 SD 0,0013 0,0015 0,0013 0,0016 0,0037 RSD% 0,71 0,65 0,47 0,42 0,82 A Chú thích: Vc: thể tích chấm định lượng (µl) mc: lượng THSG tương ứng thể tích chấm mc = Co∗Vc 1000 (mg) Cđ: nồng độ THSG đo độ hấp thụ, Cđ = mc/5(mg/ml) Nhận xét: Kết cho thấy độ lệch chuẩn tương đối (RSD) độ hấp thụ A mẫu chuẩn THSG nhỏ 5,0% [13], độ hấp thụ A trung bình tăng dần theo thể tích chấm mẫu 30 Độ hấp thụ A Đường chuẩn THSG 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 0.00 y = 1.0128x - 0.0334 R² = 0.9719 0.10 0.20 0.30 Nồng độ Cđ (mg/ml) 0.40 0.50 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ THSG độ hấp thụ Nhận xét: đường chuẩn đánh giá thông qua hệ số tương quan R Kết đánh giá đường chuẩn THSG R = 0,986 (R2 = 0,9719) cho thấy đường chuẩn xây dựng có độ tuyến tính cao, đảm bảo thực phép phân tích định lượng THSG Phương trình đường chuẩn y = 1,0128x – 0,0334 Trong đó: y: độ hấp thụ, x: nồng độ THSG (mg/ml) 3.5 Kết định lượng THSG mẫu dược liệu mẫu cao lỏng hà thủ ô đỏ chế Áp dụng phương pháp xây dựng, tiến hành đánh giá hàm lượng THSG DL hà thủ ô đỏ chế cao lỏng hà thủ ô chế Kết định lượng THSG mẫu thử trình bày bảng 3.7: Bảng 3.5 Kết định lượng THSG mẫu thử Mẫu thử A DL hà thủ ô đỏ chế Cao cồn 50% Cao nước Lần 0,257 0,407 0,125 Lần 0,257 0,407 0,122 31 Lần 0,259 0,409 0,122 Lần 0,259 0,409 0,110 Lần 0,259 0,409 0,110 TB 0,2582 0,4082 0,1178 Cđ (mg/ml) 0,2879 0,4360 0,1493 mTHSG (mg) 71,9787 109,0047 37,3223 0,79 1,08 0,36 HL% Chú thích: A: độ hấp thụ quang Cđ: nồng độ THSG mẫu thử Cđ = 𝐴+0,0334 1,0128 (mg/ml) mTHSG: lượng THSG mẫu thử (mg) HL%: Hàm lượng THSG mẫu thử Nhận xét: Lượng THSG mẫu thử định lượng cao: lượng THSG Hà thủ ô đỏ chế 70mg, lượng THSG cao chiết cồn 50% 100mg, lượng THSG cao chiết nước gần 40mg Hàm lượng THSG mẫu Hà thủ ô đỏ sau chế biến 0,79% thấp hàm lượng THSG mẫu cao cồn 50% (1,08%) cao hàm lượng THSG mẫu cao nước (0,36%) Mẫu cao cồn 50% cho hàm lượng THSG cao mẫu cao nước mẫu dược liệu 32 BÀN LUẬN - Về điều chế cao lỏng, phương pháp chiết xuất ngâm lạnh, phương pháp đơn giản, thao tác dễ thực hiện, dễ nâng cấp quy mô Dung môi điều chế lựa chọn EtOH có giá thành rẻ, dễ thu hồi giúp tiết kiệm dung mơi gây độc hại So với phương pháp sắc thuốc truyền thống, ngâm nhiệt độ phịng thí nghiệm khơng gây phân hủy hoạt chất bị phân hủy với nhiệt độ cao; dung mơi EtOH chiết nhiều hoạt chất phân cực hịa tan tạp chất (tinh bột, protein, …) dung môi nước Theo quy định tiêu chuẩn cao lỏng DĐVN V [6], cao lỏng điều chế đạt tiêu cảm quan màu sắc, thể chất, mùi vị - Về định tính sắc ký lớp mỏng, hệ dung môi toluen: ethanol: acid acetic băng (8: 2: 0,5) tách physcion, emodin số hoạt chất khác rõ nét so với hệ dung môi pha động DĐVN V [6] So với Dược điển Mỹ [29], sử dụng EtOAc dung môi chuẩn bị mẫu chấm SKLM Kết sắc ký đồ cho thấy EtOAc hòa tan nhiều hoạt chất mẫu dược liệu cao lỏng tốt MeOH Từ đó, chúng tơi lựa chọn sử dụng dung môi EtOAc cho bước chuẩn bị mẫu thử phép phân tích định lượng THSG hà thủ ô đỏ chế hai mẫu cao lỏng So sánh sắc ký đồ dược liệu sống dược liệu chế, nhận thấy vết sắc ký đồ hà thủ ô đỏ chế tách rõ nét so với hà thủ ô đỏ chưa chế biến Qua đây, thấy rằng, chế biến hà thủ đỏ làm giảm tạp chất có dược liệu mà giữ hoạt chất có - Về kết định lượng THSG mẫu dược liệu hà thủ ô đỏ chế, cao cồn 50% cao nước, mẫu hà thủ ô đỏ chế khảo sát đạt quy định hàm lượng THSG Dược điển Trung Quốc [15] (hàm lượng THSG 0,7%) Mặt khác, hàm lượng THSG mẫu cao lỏng chiết cồn 50% cao hàm lượng THSG mẫu dược liệu Điều cho thấy, tỉ lệ dung môi: dược liệu, thời gian chiết, số lần chiết ảnh hưởng tới nồng độ hoạt chất chiết từ hà thủ ô đỏ chế Hàm lượng THSG mẫu cao chiết cồn 50% cao hàm lượng THSG 33 mẫu cao nước chứng tỏ THSG bị phân hủy trình chiết nước nhiệt độ cao 34 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT A Kết luận Đã tiến hành điều chế cao lỏng từ hà thủ ô đỏ chế phương pháp ngâm với dung môi EtOH 50% sắc nước Đã đánh giá tiêu cảm quan (thể chất, màu sắc, mùi vị) tỉ trọng hai mẫu cao lỏng Định tính cao lỏng có nhóm hoạt chất anthraquinon, flavonoid, tanin phản ứng hóa học Định tính sắc ký lớp mỏng phát emodin, physcion, THSG hà thủ ô đỏ sống, hà thủ ô đỏ chế, cao cồn 50% cao nước Định lượng THSG phương pháp TLC – UV dược liệu hà thủ ô đỏ chế, cao cồn 50%, cao nước: hàm lượng THSG hà thủ ô đỏ chế 0,7%, mẫu cao cồn 50% 1,0% mẫu cao nước 0,3% B Đề xuất - Tiêu chuẩn định tính sắc ký lớp mỏng cao lỏng hà thủ ô đỏ chế phát emodin, physcion, THSG - Tiêu chuẩn định lượng cao lỏng hà thủ ô đỏ chế hàm lượng THSG 1% - Định lượng đồng thời emodin, physcion, tanin (acid gallic) cao lỏng hà thủ ô đỏ chế HPLC 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ môn Công nghiệp Dược (2017), Kỹ thuật chiết xuất dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr 16-74 Bộ môn Dược liệu (2007), Thực tập Dược liệu, Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr 51-62 Bộ Y tế- Vụ Khoa học Đào tạo (2013), Dược học cổ truyền, NXB Y Học, Hà Nội, tr 250-251 Bộ Y tế (2011), Dược liệu học, NXB Y Học, Hà Nội, tr 340-343 Bộ Y tế (2012), Hóa phân tích, NXB Y Học, Hà Nội, tr 205-212 Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, NXB Y Học, Hà Nội, tr 1180-1181 Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung cộng (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ Thuật, Hà Nội, tr 884-888 Phạm Thanh Huyền, Nguyễn Thị Hà Ly (2017), "Điều tra phân bố đánh giá chất lượng nguồn gen hà thủ ô đỏ (Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson) phục vụ công tác bảo tồn phát triển Việt Nam", Tạp chí Khoa học Đại học quốc gia Hà Nội: Khoa học Y Dược, 33(1), tr 24- 31 Nguyễn Thị Thu Huyền (2014), Nghiên cứu phương thuốc tơ tử giáng khí thang thăm dị dạng bào chế, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 10 Nguyễn Thị Hà Ly, Phương Thiện Phương cộng (2017), "Phân lập thiết lập chất đối chiếu 2,3,5,4'-tetrahydroxystilben-2-0-β-D-Glucosid từ dược liệu hà thủ ô đỏ", Tạp chí Dược liệu, 22(4), tr 216-221 11 Nguyễn Thị Hà Ly, Lê Xuân Duy cộng (2014), "Thành phần hóa học rễ hà thủ đỏ thu hái Việt Nam", Tạp chí Dược liệu, 19(2), tr 86-91 12 Sengkham Choumlivong (2019), Khảo sát số tiêu chất lượng cao khô hà thủ ô đỏ chế TLC– Videoscan, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 13 Trần Cao Sơn (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, NXB Khoa học Kỹ Thuật, Hà Nội, tr 16-59 Tiếng Anh 14 Cheung F., Leung A., et al (2014), "Tyrosinase inhibitory activity of a glucosylated hydroxystilbene in mouse melan-a melanocytes", Journal of natural products, 77(6), pp 1270-1274 15 China Pharmacopoeia Committee (2015), Pharmacopoeia of the people's republic of China, pp 348-350 16 Hao D., Gu X., et al (2015), Medicinal plants chemistry, biology and omics, Woodhead Publishing, pp 465-529 17 Li‐Shuang L., Gu X., et al (2006), "Stilbene glycosides from the roots of Polygonum multiflorum Thunb and their in vitro antioxidant activities", Journal of Food Lipids, 13(2), pp 131-144 18 Lim K., Kwon J., et al (2014), "Emodin inhibits tonic tension through suppressing PKCδ‐mediated inhibition of myosin phosphatase in rat isolated thoracic aorta", British journal of pharmacology, 171(18), pp 4300-4310 19 Lin L., Ni B., et al (2015), "Traditional usages, botany, phytochemistry, pharmacology and toxicology of Polygonum multiflorum Thunb.: a review", Journal of ethnopharmacology, 159, pp 158-183 20 Nguyen Thi Thoa, Pham Thanh Binh, et al (2018), "Phenolic constituents from Fallopia multiflora (Thunberg) Haraldson", Journal of Chemistry, 2018, pp 1-5 21 Nicoletti M (2011), "HPTLC fingerprint: a modern approach for the analytical determination of botanicals", Revista Brasileira de Farmacognosia, 21(5), pp 818-823 22 Qian J., Hou M., et al (2020), "A review on the extraction, purification, detection, and pharmacological effects of 2, 3, 5, 4’-tetrahydroxystilbene-2-O-βD-glucoside from Polygonum multiflorum", Biomedicine & Pharmacotherapy, 124, pp 109923-109934 23 Takhtajan A (2009), Flowering plants, Springer Science & Business Media, pp 37-39 24 Wagner H., Bauer R., et al (2011), Chromatographic fingerprint analysis of herbal medicines, Springer, pp 439-450 25 Wagner H., Bladt S (2009), Plant drug analysis: a thin layer chromatography atlas, Springer Science & Business Media, pp 53-67 26 Wu J., Hu W., et al (2017), "Current pharmacological developments in 2,3,4′,5-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside (TSG)", European journal of pharmacology, 811, pp 21-29 27 Xu M., Zheng M., et al (2006), "A new stilbene glucoside from the roots of Polygonum multiflorum Thunb", Archives of pharmacal research, 29(11), pp 946-951 28 Zhang L., Chen J (2018), "Biological effects of tetrahydroxystilbene glucoside: an active component of a rhizome extracted from Polygonum multiflorum", Oxidative medicine and cellular longevity, 2018, pp 1-15 Trang Web 29 The United States Pharmacopeial Convention (2015, 13/02/2015), "Polygonum multiflorum root", Retrieved 10/6/2020, https://hmc.usp.org/monographs/polygonum-multiflorum-root-1-0 2020, from PHỤ LỤC Phụ lục Kiểm tra nguyên liệu hà thủ ô đỏ chế Cảm quan, soi bột dược liệu - Mô tả hình thái: phiến mỏng, màu nâu đen - Mùi: có mùi thơm dược liệu - Vị đắng, chát - Soi bột dược liệu Vi phẫu bột dược liệu HTƠĐC Chú thích: 1: mảnh mạch, 2: mảnh mang màu, 3: mảnh bần, 4: sợi Nhận xét: Chỉ tiêu cảm quan, soi bột dược liệu với mô tả chuyên luận Hà thủ ô đỏ Dược điển Việt Nam V Như vậy, hà thủ ô dùng nghiên cứu đạt tiêu tiêu cảm quan soi bột dược liệu Xác định hàm ẩm Cân khoảng 0,5g hà thủ ô đỏ chế, xác định hàm ẩm máy đo hàm ẩm OHAUS Tiến hành đo lần, tính kết trung bình Kết đo hàm ẩm dược liệu HTÔĐC Lần đo Hàm ẩm h (%) 9,43 10,00 8,94 Trung bình 9,4567 SD 0,53 Nhận xét: Hàm ẩm hà thủ ô đỏ chế 9,4567% ± 0,53 Như vậy, hà thủ ô đỏ chế sử dụng nghiên cứu đạt tiêu hàm ẩm chuyên luận Hà thủ ô đỏ chế Dược điển Trung Quốc 2015 Định tính số nhóm chất phản ứng hóa học Kết định tính phản ứng hóa học HTƠĐC Hoạt chất Alkaloid Phản ứng Hà thủ ô chế Phản ứng với TT Mayer ̶ Phản ứng với TT Dragendorff ̶ Phản ứng với TT Bouchardat ̶ Anthraquinon Phản ứng Borntraeger Flavonoid Tanin Saponin Coumarin Acid amin + Phản ứng Cyanidin + Phản ứng NaOH 10% + Phản ứng với NH3 + Phản ứng với DD FeCl3 5% + Phản ứng với DD FeCl3 5% + Phản ứng với chì acetat 10% + Phản ứng tạo bọt ̶ Phản ứng mở - đóng vịng lacton ̶ Quan sát huỳnh quang ̶ Phản ứng với TT diazo ̶ TT ninhydrin 3% ̶ Chú thích: + : phản ứng xảy ra, ̶ : phản ứng không xảy Nhận xét: Nguyên liệu hà thủ ô đỏ chế chứa anthraquinon, flavonoid, tanin Phụ lục 2: Kết đo độ hấp thụ THSG bước sóng 319 nm ... THSG hà thủ ô đỏ sống, hà thủ ô đỏ chế, cao cồn 50% cao nước Định lượng THSG phương pháp TLC – UV dược liệu hà thủ ô đỏ chế, cao cồn 50%, cao nước: hàm lượng THSG hà thủ ô đỏ chế 0,7%, mẫu cao. .. TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HỒNG NGỌC MÃ SINH VIÊN: 1501359 NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO LỎNG HÀ THỦ Ô ĐỎ CHẾ VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ TIÊU CHUẨN HÓA HỌC BẰNG PHƯƠNG PHÁP TLC – UV KHÓA LUẬN TỐT... hà thủ ô đỏ chế xây dựng số tiêu chuẩn hóa học phương pháp TLC – UV? ?? với mục tiêu: 1 Điều chế cao lỏng hà thủ ô đỏ chế Khảo sát số tiêu chuẩn hóa học (định tính phản ứng hóa học sắc ký lớp mỏng,