Nghiên cứu kỹ thuật điều chế và xây dựng một số tiêu chuẩn của cao đặc long đởm

ĐẶT VẤN ĐỀCùng với sự phát triển của Y học hiện đại, Y học cổ truyền cũng ngày càngđóng vai trò quan trọng trong việc phòng và chữa bệnh. Các thuốc có nguồn gốcthiên nhiên của Y học cổ truyền có nhiều ưu điểm, đó là nguồn nguyên liệu có thểtự trồng trọt, tự khai thác, ít tác dụng phụ, tương đối an toàn khi sử dụng, có thểdùng lâu dài.Long đởm là một trong những dược liệu được sử dụng trong y học cổ truyềnđể điều trị vàng da, viêm gan, viêm miệng, chán ăn và các bệnh viêm nhiễm khác24,27. Long đởm đã được sử dụng rộng rãi, có thể kết hợp cùng nhiều vị thuốckhác trong các bài thuốc đông y và có tác dụng phòng và chữa nhiều loại bệnh,... Đểgóp phần từng bước hiện đại hóa thuốc cổ truyền nhằm tạo ra sản phẩm trung gianvà tiêu chuẩn hóa được nguyên liệu đầu vào để bào chế các dạng bào chế thuốc hiệnđại khác, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu kỹ thuật điều chế vàxây dựng một số tiêu chuẩn cho cao đặc long đởm” với các mục tiêu sau:1. Nghiên cứu kỹ thuật điều chế cao đặc long đởm.2. Xây dựng một số tiêu chuẩn cho cao đặc long đởm.3. Đánh giá độ ổn định của cao đặc long đởm.

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THOAN NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT ÐIỀU CHẾ VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ TIÊU CHUẨN CỦA CAO ÐẶC LONG ÐỞM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THOAN NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT ÐIỀU CHẾ VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ TIÊU CHUẨN CỦA CAO ÐẶC LONG ÐỞM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. KS.DS. Nguyễn Thị Việt Hương 2. Ths. Ma Thị Hồng Nga Nơi thực hiện: BM Công Nghiệp Dược - ÐH Dược HN HÀ NỘI - 2013 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô giáo KS.DS. Nguyễn Thị Việt Hương, người đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tận tình và giúp đỡ em hoàn thành khóa luận này. Em xin chân thành cảm ơn Th.S Ma Thị Hồng Nga, Th.S Nguyễn Thị Hạnh Thủy, DS. Trần Ngọc Bảo, những người đã giúp đỡ và chỉ bảo em rất nhiều trong thời gian làm khóa luận. Đồng thời xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới toàn thể các thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Công Nghiệp Dược đã tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em hoàn thành khóa luận đúng thời hạn. Em cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo trường đại học Dược Hà Nội, những người đã dạy dỗ và chỉ bảo em tận tình trong suốt những năm tháng học tập tại trường. Cuối cùng với lòng biết ơn vô hạn, xin được gửi lời cảm ơn tới gia đình, người thân, bạn bè và đặc biệt là người mẹ của em đã luôn luôn động viên và khích lệ em trong suốt thời gian qua. Em xin chân thành cảm ơn! Hà nội, tháng 5 năm 2013. Sinh viên Nguyễn Thị Thoan. MỤC LỤC Danh mục các kí hiệu, chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, đồ thị Đặt vấn đề 1 Chương 2. Tổng quan 2 1.1. Tổng quan về cây long đởm 2 1.1.1. Nguồn gốc và phân bố 2 1.1.2. Đặc điểm thực vật 3 1.1.3. Bộ phận dùng 4 1.1.4. Thành phần hóa học 4 1.1.5. Công dụng - tác dụng 6 1.1.5.1. Công năng - chủ trị theo YHCT 6 1.1.5.1. Công dụng – tác dụng theo y học hiện đại 7 1.2. Cao thuốc 8 1.2.1. Định nghĩa 8 1.2.2. Một số đặc điểm của cao thuốc 8 1.2.3. Kỹ thuật điều chế cao thuốc 8 1.3. Độ ổn định của thuốc 9 1.3.1. Định nghĩa 9 1.3.2. Tiêu chuẩn đánh giá độ ổn định 10 1.3.3. Các kiểu thử nghiệm đánh giá độ ổn định 10 1.3.3.1. Thử nghiệm khắc nghiệt 10 1.3.3.2. Thử nghiệm dài hạn (trong điều kiện thực) 10 Chương 2. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 12 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị 12 2.1.1. Nguyên liệu 12 2.1.2. Hóa chất, dung môi 12 2.1.3. Thiết bị, dụng cụ 12 2.2. Nội dung nghiên cứu 13 2.2.1. Nghiên cứu kỹ thuật điều chế cao đặc long đởm 13 2.2.1.1. Nghiên cứu kỹ thuật chiết xuất dược liệu long đởm 13 2.2.1.2. Nghiên cứu kỹ thuật cô dịch chiết thành cao đặc 14 2.2.2. Xây dựng một số tiêu chuẩn của cao 14 2.2.3. Đánh giá độ ổn định của cao 14 2.3. Phương pháp thực nghiệm 14 2.3.1. Phương pháp điều chế cao đặc 14 2.3.1.1. Qui trình điều chế chung cho cao đặc long đởm 14 2.3.1.2. Định tính bằng phương pháp SKLM 16 2.3.1.3. Phương pháp định lượng 16 2.3.1.4. Phương pháp chiết xuất 18 2.3.1.5. Phương pháp cô dịch chiết 19 2.3.2. Xây dựng một số tiêu chuẩn của cao. 19 2.3.3. Phương pháp đánh giá độ ổn định của cao đặc long đởm 20 Chương 3. Thực nghiệm, kết quả và bàn luận 21 3.1. Kiểm tra chất lượng của dược liệu long đởm 21 3.1.1. Mô tả 21 3.1.2. Soi bột 21 3.1.3. Định tính bằng SKLM 21 3.1.4. Định lượng bằng HPLC 22 3.2. Điều chế cao đặc long đởm 23 3.2.1. Giai đoạn chiết xuất dược liệu long đởm 23 3.2.1.1. Lựa chọn tỷ lệ dược liệu và dung môi 23 3.2.1.2. Xác định thời gian chiết 26 3.2.2. Giai đoạn cô dịch chiết thành cao đặc 28 3.2.2.1. PP cô chân không. 28 3.2.2.2. PP cô thường. 28 3.3. Xây dựng một số tiêu chuẩn cho cao đặc long đởm 31 3.3.1. Tiêu chuẩn vật lý 31 3.3.2. Tiêu chuẩn hóa học 33 3.4. Đánh giá độ ổn định của cao đặc long đởm 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DĐVN Dược điển Việt Nam DĐTQ Dược điển Trung Quốc Tỷ lệ DL/DM Tỷ lệ dược liệu và dung môi CCl 4 Carbon tetraclorid Dd Dung dịch DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl HPLC Sắc kí lỏng hiệu năng cao kl/tt khối lượng/thể tích sGOT Glutamic Oxaloacetic Transaminase sGPT Glutamic Pyruvic Transaminase SKLM Sắc kí lớp mỏng Pp Phương pháp TNHH Trách nhiệm hữu hạn TQ Trung Quốc TT Thuốc thử Rf Hệ số lưu giữ YHCT Y học cổ truyền DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1. Kết quả SKLM gentiopicrin long đởm 22 Bảng 3.2. Khối lượng cao đặc ứng với các tỷ lệ dược liệu và dung môi 24 Bảng 3.3. Hàm ẩm cao đặc ứng với các tỷ lệ dược liệu và dung môi 24 Bảng 3.4. Hiệu suất qui trình ứng với các tỷ lệ dược liệu và dung môi 24 Bảng 3.5. Hàm lượng gentiopicrin ứng với các tỷ lệ dược liệu và dung môi 25 Bảng 3.6. Hiệu suất qui trình và hàm lượng hoạt chất ứng với các tỷ lệ DL/DM 25 Bảng 3.7. Kết quả định lượng hoạt chất gentiopicrin qua thời gian chiết 27 Bảng 3.8. Thời gian cô ứng với 2 phương pháp 29 Bảng 3.9. Khối lượng cao đặc ứng với 2 phương pháp 29 Bảng 3.10. Hàm ẩm của cao đặc ứng với 2 phương pháp 29 Bảng 3.11. Hiệu suất qui trình ứng với 2 phương pháp 29 Bảng 3.12. Hàm lượng gentiopicrin ứng với 2 phương pháp 30 Bảng 3.13. Hiệu suất qui trình, hàm lượng hoạt chất và thời gian cô của 2 pp 30 Bảng 3.14. kết quả thử tính chất cảm quan 31 Bảng 3.15. Kết quả hàm ẩm cao đặc long đởm 32 Bảng 3.16. Kết quả đo pH của dung dịch cao đặc long đởm 1% (kl/tt) 33 Bảng 3.17. Kết quả thử độ tan của cao trong nước 33 Bảng 3.18. Kết quả SKLM cao đặc long đởm 34 Bảng 3.19: Hàm lượng gentiopicrin trong cao đặc long đởm 35 Bảng 3.20. Giá trị trung bình và độ lệch chuẩn của hàm lượng gentiopicrin 35 Bảng 3.21. Chỉ tiêu theo dõi độ ổn định của cao đặc long đởm 36 Bảng 3.22. Kết quả theo dõi độ ổn định của mẻ 1 ở điều kiện thường 37 Bảng 3.23. Kết quả theo dõi độ ổn định của mẻ 2 ở điều kiện thường 37 Bảng 3.24. Kết quả theo dõi độ ổn định của mẻ 3 ở điều kiện thường 3 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1. Hoa và lá của cây long đởm (Gentiana scabra Bunge.) 3 Hình 1.2: Rễ và thân rễ Long đởm (Gentiana scabra Bunge.) 4 Hình 1.3. Công thức một số hoạt chất từ long đởm 5 Hình 2.1. Rễ long đởm thu mua từ công ty TNHH Đông Dược Phúc Hưng 12 Hình 2.2. Sơ đồ qui trình điều chế cao đặc long đởm 15 Hình 3.1. Đặc điểm vi học của bột long đởm 21 Hình 3.2. Sắc ký đồ dược liệu 22 Hình 3.3. Sắc ký đồ HPLC của dược liệu 22 Hình 3.4. Sắc ký đồ HPLC của chuẩn gentiopicrin 23 Hình 3.5. Đồ thị hiệu suất qui trình và hàm lượng gentiopicrin qua các tỷ lệ DL/D M 26 Hình 3.6. Sắc ký đồ cao long đởm 33 Hình 3.7. Sắc ký đồ HPLC của cao đặc long đởm 34 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với sự phát triển của Y học hiện đại, Y học cổ truyền cũng ngày càng đóng vai trò quan trọng trong việc phòng và chữa bệnh. Các thuốc có nguồn gốc thiên nhiên của Y học cổ truyền có nhiều ưu điểm, đó là nguồn nguyên liệu có thể tự trồng trọt, tự khai thác, ít tác dụng phụ, tương đối an toàn khi sử dụng, có thể dùng lâu dài. Long đởm là một trong những dược liệu được sử dụng trong y học cổ truyền để điều trị vàng da, viêm gan, viêm miệng, chán ăn và các bệnh viêm nhiễm khác [24],[27]. Long đởm đã được sử dụng rộng rãi, có thể kết hợp cùng nhiều vị thuốc khác trong các bài thuốc đông y và có tác dụng phòng và chữa nhiều loại bệnh, Để góp phần từng bước hiện đại hóa thuốc cổ truyền nhằm tạo ra sản phẩm trung gian và tiêu chuẩn hóa được nguyên liệu đầu vào để bào chế các dạng bào chế thuốc hiện đại khác, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu kỹ thuật điều chế và xây dựng một số tiêu chuẩn cho cao đặc long đởm” với các mục tiêu sau: 1. Nghiên cứu kỹ thuật điều chế cao đặc long đởm. 2. Xây dựng một số tiêu chuẩn cho cao đặc long đởm. 3. Đánh giá độ ổn định của cao đặc long đởm. [...]... hoạt chất chính gentiopicrin có trong cao để từ đó lựa chọn được phương pháp cô thích hợp 2.3.2 Phương pháp xây dựng một số tiêu chuẩn của cao Cao đặc thu được sau khi điều chế theo qui trình điều chế cao đặc long đởm với các thông số đã chọn, chúng tôi tiến hành xây dựng một số tiêu chuẩn cho cao bao gồm 2 tiêu chuẩn chính: 2.3.2.1 Tiêu chuẩn vật lý Bao gồm các tiêu chuẩn sau: - Xác định thể chất, màu,... nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu kỹ thuật điều chế cao đặc long đởm Đi từ dược liệu để điều chế ra cao đặc phải trải qua 2 giai đoạn chính là: giai đoạn chiết xuất và giai đoạn cô dịch chiết thành cao đặc Trong quá trình chiết và quá trình cô, có những thông số ảnh hưởng đến hiệu suất qui trình cũng như hàm lượng hoạt chất chính có trong cao đặc được điều chế ra Nghiên cứu về kỹ thuật chiết xuất và kỹ thuật. .. Để nghiên cứu kỹ thuật điều chế cao đặc long đởm, chúng tôi tiến hành nghiên cứu kỹ thuật chiết xuất dược liệu long đởm và kỹ thuật cô dịch chiết thành cao nhằm mục đích tối ưu hóa được qui trình điều chế cao đặc long đởm ở mục 2.3.1.1 (trang 15) 3.2.1 Giai đoạn chiết xuất dược liệu long đởm 3.2.1.1 Lựa chọn tỷ lệ dược liệu và dung môi nước Trong quá trình chiết xuất, tỷ lệ dược liệu và dung môi có... nghiệm đều theo 1 qui trình chung 2.3.1.1 Qui trình điều chế chung cho cao đặc long đởm a Sơ đồ qui trình điều chế chung 15 Hình 2.2 Sơ đồ qui trình điều chế cao đặc long đởm b Mô tả qui trình điều chế chung Qui trình điều chế đi từ rễ long đởm đến cao đặc long đởm bao gồm 3 giai đoạn chính sau: - Giai đoạn 1: Chuẩn bị nguyên liệu Dược liệu thu mua của công ty TNHH Đông Dược Phúc Hưng được loại tạp,... tiến hành xây dựng một số tiêu chuẩn vật lý, hóa học cho cao bao gồm: tính chất cảm quan (thể chất, màu sắc, mùi vị), hàm ẩm của cao, pH của dd cao 1% (kl/tt), độ tan của cao trong nước, định tính và định lượng hoạt chất gentiopicrin có trong cao, góp phần tiêu chuẩn hóa nguyên liệu đầu vào cho các dạng bào chế hiện đại khác đi từ cao đặc long đởm 2.2.3 Đánh giá độ ổn định của cao Theo dõi và đánh giá... cao đặc: pp mất khối lượng do làm khô [5] - Xác định pH của dung dịch cao 1% (kl/tt): bằng máy đo pH [5] - Xác định độ tan của cao trong dung môi nước: pp hòa tan đơn giản 2.3.2.2 Tiêu chuẩn hóa học Bao gồm các tiêu chuẩn sau: - Định tính cao đặc: bằng SKLM [5] - Định lượng hoạt chất chính trong cao đặc: bằng pp HPLC [22] 20 2.3.3 Phương pháp đánh giá độ ổn định của cao đặc long đởm Cao đặc long đởm. .. và dung môi nước, thời gian chiết đã chọn, tiến hành cô dịch chiết thu được bằng các phương pháp cô khác nhau, trong cùng một điều kiện như nhau, dựa vào thời gian cô, hiệu suất qui trình và hàm lượng hoạt chất chính gentiopicrin có trong cao đặc để từ đó lựa chọn được phương pháp cô thích hợp 2.2.2 Xây dựng một số tiêu chuẩn của cao Sau khi điều chế thu được cao đặc long đởm, chúng tôi tiến hành xây. .. điều chế theo quy trình điều chế cao đặc long đởm với các thông số đã chọn, được tiến hành thử độ ổn định theo phương pháp như sau: a Điều kiện bảo quản: Điều kiện thường (nhiệt độ: 30 ± 2ºC và độ ẩm: 75 ± 5%) b Cách lấy mẫu: Tiến hành lấy mẫu 3 lần, mỗi lần cách nhau 3 tháng vào các mốc thời gian khác nhau như sau: - 0 tháng: thời điểm điều chế ra cao đặc - 3 tháng: tính từ thời điểm điều chế ra cao. .. được điều chế ra Nghiên cứu về kỹ thuật chiết xuất và kỹ thuật cô dịch chiết thành cao nhằm góp phần tối ưu hóa qui trình điều chế chung cho cao đặc long đởm 2.2.1.1 Nghiên cứu kỹ thuật chiết xuất dược liệu long đởm Ở đây chúng tôi áp dụng qui trình điều chế chung cho cao đặc long đởm với dung môi dùng để chiết xuất là nước và tiến hành theo phương pháp ngâm nóng Dung môi nước có ưu điểm là rẻ tiền, dễ... HPLC của chuẩn gentiopicrin - Nhận xét: thời gian lưu của peak dược liệu và thời gian lưu của peak gentiopicrin chuẩn là tương đương nhau, hàm lượng hoạt chất chính gentiopicrin có trong dược liệu long đởm đem đi khảo sát > 1,0% - Kết luận: Dược liệu đem khảo sát đạt tiêu chuẩn chất lượng theo DĐTQ 2010 (hàm lượng gentiopicrin trong dược liệu không ít hơn 1,0%) 3.2 Điều chế cao đặc long đởm Để nghiên cứu . bào chế thuốc hiện đại khác, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu kỹ thuật điều chế và xây dựng một số tiêu chuẩn cho cao đặc long đởm với các mục tiêu sau: 1. Nghiên cứu kỹ thuật. dung nghiên cứu 13 2.2.1. Nghiên cứu kỹ thuật điều chế cao đặc long đởm 13 2.2.1.1. Nghiên cứu kỹ thuật chiết xuất dược liệu long đởm 13 2.2.1.2. Nghiên cứu kỹ thuật cô dịch chiết thành cao đặc. mục tiêu sau: 1. Nghiên cứu kỹ thuật điều chế cao đặc long đởm. 2. Xây dựng một số tiêu chuẩn cho cao đặc long đởm. 3. Đánh giá độ ổn định của cao đặc long đởm. 2 CHƯƠNG 1.