Nghiên cứu xác định ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường tới quá trình sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của các chủng vi nấm đã phân lập được từ khu vực quảng trường ba đình

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Hoàng Anh Thắng NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG TỚI Q TRÌNH SINH TỔNG HỢP VÀ HOẠT TÍNH COLLAGENASE CỦA CÁC CHỦNG VI NẤM ĐÃ PHÂN LẬP ĐƢỢC TỪ KHU VỰC QUẢNG TRƢỜNG BA ĐÌNH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - Năm 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Hoàng Anh Thắng NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ MƠI TRƢỜNG TỚI Q TRÌNH SINH TỔNG HỢP VÀ HOẠT TÍNH COLLAGENASE CỦA CÁC CHỦNG VI NẤM ĐÃ PHÂN LẬP ĐƢỢC TỪ KHU VỰC QUẢNG TRƢỜNG BA ĐÌNH Chuyên ngành : Vi sinh vật h c Mã số : 60420107 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Lại Văn Hòa PGS TS Hà Nội - Năm 2014 i Th Việt Hà LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Lại Văn Hòa, PGS TS Bùi Thị Việt Hà, bảo, giúp đỡ hướng dẫn suốt q trình thực đề tài, giúp tơi vượt qua khó khăn để hồn thành khóa luận tốt nghiệp, bảo cho kiến thức, kinh nghiệm quý báu sống Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô cán môn Vi sinh vật học; thầy cô, cán Khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự Nhiên nhiệt tình giảng dạy, hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ suốt năm học v a qua Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ths Phùng Công Thưởng đồng chí thuộc Khoa Vi sinh vật & Môi trường, Viện 69 chia sẻ, giúp đỡ tạo điều kiện lớn để tơi hồn thành đề tài Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè, người bên tôi, động viên giúp đỡ mặt vật chất lẫn tinh thần suốt thời gian v a qua Hà Nội, ngày 10 tháng 11 năm 2014 Học viên Hoàng Anh Thắng Chƣơng 1.1 Sơ 1.2 Sơ 1.3 N collage 1.3.1 1.3.2 vi 1.3.3 protea 1.4 ộ Chƣơng ĐỐI T 2.1 Đ 2.2 V 2.2.1 2.2.2 2.3 Ph 2.3.1 nghiên 2.3.2 nấm sa 2.3.3 hiển v 2.3.4 co An 2.3 trƣ củ 2.3 sin 2.3 ức cá 2.3 trƣ co 2.3 ch ch 2.3 ức cá 2.3 Chƣơng 3.1 3.2 sin 3.2 3.2 3.2 3.2 nu chủng vi nấm nghiên cứu 3.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr nhiệt độ môi trƣờng ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase chủng vi nấm 3.3.1 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr 3.3.2 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr 3.3.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr 3.3.4 Xác đ nh mối tƣơng quan ba điều kiện nhiệt độ môi trƣờng nuôi cấy với khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm 3.4 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr trƣờng nuôi cấy ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase chủng vi nấm 3.4.1 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr trƣờng 0,6aw 3.4.2 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr trƣờng 0,65aw 3.4.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr trƣờng 0,7aw 3.5 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase chủng vi nấm 3.5.1 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr độ ẩm môi trƣờng 60% 3.5.2 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr độ ẩm môi trƣờng 70% 3.5.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr độ ẩm môi trƣờng 80% 3.5.4 Xác đ nh mối tƣơng quan ba điều kiện độ ẩm môi trƣờng không khí với khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm 3.6 Kết nghiên cứu xác đ nh tổ hợp điều kiện môi trƣờng ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase chủng vi nấm KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ẢNH VI NẤM PHÂN HỦY CƠ CHẤT PHỤ LỤC SỐ LIỆU NGHIÊN CỨU MỤC LỤC HÌNH VÀ BẢNG NỘI DUNG Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo hydroxyproline Hình 1.2 Trình tự xếp acid amỉn phân tử Collagen Hình 1.3 Nghiên cứu hoạt tính collagenase 12 chủng Coccidioides immitis thạch Czapek có 0,5% collagen gân bị type I Hình 3.1 Aspergillus clavato - nanica Batista (T38) Hình 3.2 Aspergillus silvaticus Fennell and Raper (T65) Hình 3.3 Aspergillus asperescens Stolk (T116) Hình 3.4 Aspergillus ustus Thom and Church (D45) Hình 3.5 Acremonium ochraceum Gams (T104) Hình 3.6 Cladosporium cladosporioides(Fres.) de Vries (T44) Hình 3.7 Didymostilbe sp (D132) Hình 3.8 Gloeosporium sp (D160) Hình 3.9 Nectria inventa Pethybridge (D94) Hình 3.10 Penicillium cyaneo - fulvum Biourge (T72) Hình 3.11 Penicillium chrysogenum Thom (T142) Hình 3.12 Penicillium casei Staub (D71) Hình 3.13 Penicillium italicum Wehmer (D100) Hình 3.14 Penicillium citrinum Thom (D148) Hình 3.15 Scopulariopsis chartarum Morton and Smith (D162) Bảng 1.1 Các loại collagen gen cấu trúc Bảng 1.2 So sánh thành phần acid amin collagen loại protein khác Bảng 1.3 Sự phân bố amino acid chuỗi polypeptide Bảng 3.1 Danh sách 15 chủng vi nấm lựa chọn nghiên cứu Bảng 3.2 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm pH8 Bảng 3.3 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm pH8,5 Bảng 3.4 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm pH9 Bảng 3.5 Mối tương quan pH vùng kiềm với khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm Bảng 3.6 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện 14 C Bảng 3.7 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện 16 C Bảng 3.8 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện 18 C Bảng 3.9 Mối tương quan ba điều kiện nhiệt độ môi trường nuôi cấy với khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm Bảng 3.10 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện hoạt độ nước môi trường 0,6aw Bảng 3.11 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện hoạt độ nước môi trường 0,65aw Bảng 3.12 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện hoạt độ nước môi trường 0,7aw Bảng 3.13 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường 60% Bảng 3.14 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường 70% Bảng 3.15 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường 80% Bảng 3.16 Mối tương quan ba điều kiện độ ẩm khơng khí mơi trường ni cấy với khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm Bảng 3.17 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm ĐKTH Bảng 3.18 Giá trị hệ số phân giải collagen 15 chủng vi nấm điều 66 kiện độc lập tương ứng với ĐKTH 10 P cacei 11 P chrysogenum 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 15 S chartarum Phụ lục 18: Khả phát triển 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm mơi trường khơng khí 60% TT Tên chủng Khuẩn lạc A asperescens 10 A clavato-nanica 22 A silvaticus Acr.ochraceum 21 C cladosporioides 12 A ustus Didymostilbe sp 17 Gloeospoium sp 31 N inventa 22 10 P cacei 11 P chrysogenum 12 12 P citrinum 14 13 P cyaneo-fulvum 12 14 P italicum 15 15 S chartarum 16 Phụ lục 19: Khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm mơi trường khơng khí 60% TT Tên chủng Khuẩn lạc A asperescens 18 A clavato-nanica 44 A silvaticus 12 Acr.ochraceum 50 C cladosporioides 22 A ustus 13 Didymostilbe sp 25 Gloeospoium sp 41 N inventa 25 10 P cacei 37 11 P chrysogenum 45 12 P citrinum 29 13 P cyaneo-fulvum 38 14 P italicum 38 15 S chartarum 24 Phụ lục 20: Khả phát triển 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm mơi trường khơng khí = 70% TT Tên chủng Khuẩn lạc A asperescens 13 A clavato-nanica 16 A silvaticus 15 Acr.ochraceum 19 C cladosporioides A ustus 11 Didymostilbe sp 18 Gloeospoium sp 21 N inventa 21 10 P cacei 12 11 P chrysogenum 12 P citrinum 19 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 10 15 S chartarum 10 Phụ lục 21: Khả sinh tổng hợp collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm mơi trường khơng khí 70% TT Tên chủng Khuẩn lạc A asperescens 2 A clavato-nanica A silvaticus Acr.ochraceum C cladosporioides A ustus Didymostilbe sp Gloeospoium sp N inventa 10 P cacei 11 P chrysogenum 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 15 S chartarum Phụ lục 22: Khả phát triển 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường khơng khí = 80% TT Tên chủng Khuẩn lạc A asperescens 16 A clavato-nanica 21 A silvaticus 15 Acr.ochraceum 28 C cladosporioides 12 A ustus Didymostilbe sp 15 Gloeospoium sp 20 N inventa 28 10 P cacei 12 11 P chrysogenum 14 12 P citrinum 18 13 P cyaneo-fulvum 11 14 P italicum 18 15 S chartarum 14 Phụ lục 23: Khả sinh tổng hợp collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường khơng khí 80% TT Tên chủng Khuẩn lạc A asperescens 41 A clavato-nanica 50 A silvaticus 44 Acr.ochraceum 44 C cladosporioides 37 A ustus 25 Didymostilbe sp 26 Gloeospoium sp 31 N inventa 42 10 P cacei 43 11 P chrysogenum 40 12 P citrinum 43 13 P cyaneo-fulvum 45 14 P italicum 46 15 S chartarum 20 Phụ lục 24: Khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm ĐKTH (nhiệt độ 16 C, RH = 70%; pH 8,5; aw = 0,65) Theo dõi khả phát triển = 8,5; aw = 0,65) (Đường kính STT Chủng vi nấm sau ngày A asperescens A clavato-nanica A silvaticus Acr.ochraceum C cladosporioides A ustus Didymostilbe sp Gloeospoium sp N inventa 10 P cacei 11 P chrysogenum 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 15 S chartarum ... Anh Thắng NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG TỚI Q TRÌNH SINH TỔNG HỢP VÀ HOẠT TÍNH COLLAGENASE CỦA CÁC CHỦNG VI NẤM ĐÃ PHÂN LẬP ĐƢỢC TỪ KHU VỰC QUẢNG TRƢỜNG BA ĐÌNH Chuyên... nghiên cứu Bảng 3.2 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm pH8 Bảng 3.3 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm pH8,5... 1.3.2 Nghiên cứu sinh tổng hợp hoạt tính collagenase vi nấm Sinh tổng hợp hoạt tính collagenase đƣợc nhiều tác giả nghiên cứu thấy rằng, có nhiều yếu tố ảnh hƣởng tới phát triển vi nấm ảnh hƣởng tới