Nghiên cứu xác định ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường tới quá trình sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của các chủng vi nấm đã phân lập được từ khu vực quảng trường ba đình

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Hoàng Anh Thắng NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG TỚI Q TRÌNH SINH TỔNG HỢP VÀ HOẠT TÍNH COLLAGENASE CỦA CÁC CHỦNG VI NẤM ĐÃ PHÂN LẬP ĐƢỢC TỪ KHU VỰC QUẢNG TRƢỜNG BA ĐÌNH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - Năm 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Hoàng Anh Thắng NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ MƠI TRƢỜNG TỚI Q TRÌNH SINH TỔNG HỢP VÀ HOẠT TÍNH COLLAGENASE CỦA CÁC CHỦNG VI NẤM ĐÃ PHÂN LẬP ĐƢỢC TỪ KHU VỰC QUẢNG TRƢỜNG BA ĐÌNH Chuyên ngành : Vi sinh vật h c Mã số : 60420107 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Lại Văn Hòa PGS TS Hà Nội - Năm 2014 i Th Việt Hà LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Lại Văn Hòa, PGS TS Bùi Thị Việt Hà, bảo, giúp đỡ hướng dẫn suốt q trình thực đề tài, giúp tơi vượt qua khó khăn để hồn thành khóa luận tốt nghiệp, bảo cho kiến thức, kinh nghiệm quý báu sống Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô cán môn Vi sinh vật học; thầy cô, cán Khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự Nhiên nhiệt tình giảng dạy, hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ suốt năm học v a qua Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ths Phùng Công Thưởng đồng chí thuộc Khoa Vi sinh vật & Môi trường, Viện 69 chia sẻ, giúp đỡ tạo điều kiện lớn để tơi hồn thành đề tài Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè, người bên tôi, động viên giúp đỡ mặt vật chất lẫn tinh thần suốt thời gian v a qua Hà Nội, ngày 10 tháng 11 năm 2014 Học viên Hoàng Anh Thắng MỤC LỤC NỘI DUNG ĐẶT VẤN ĐỀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU Trang 1.1 Sơ lƣợc chất collagen 1.2 Sơ lƣợc vi nấm trình sản sinh enzyme ngoại bào 1.3 Nghiên cứu yếu tố ảnh hƣởng tới phân hủy 12 collagen vi nấm 1.3.1 Quá trình sinh tổng hợp hoạt tính collagenase vi nấm 12 1.3.2 Nghiên cứu sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 13 vi nấm 1.3.3 Nghiên cứu sinh tổng hợp hoạt tính collagenase, 15 protease vi nấm công tác bảo quản lâu dài thi thể ƣớp Chƣơng 1.4 ộ sƣu tập vi nấm phân hủy chất sinh h c Viện 69 16 ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CÚU 18 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 18 2.2 Vật liệu nghiên cứu 18 2.2.1 Dụng cụ, trang b 18 2.2.2 Môi trƣờng nuôi cấy, chất, hóa chất 18 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Phƣơng pháp phục hồi, lựa ch n chủng vi nấm 18 nghiên cứu 2.3.2 Phƣơng pháp kiểm tra mức độ khiết chủng vi 18 nấm sau phục hồi kính hiển vi quang h c 2.3.3 Phƣơng pháp làm mẫu nấm nghiên cứu kính 20 hiển vi điện tử quét (SEM) JSM-5410LV 2.3.4 Tiến hành xác đ nh khả sinh tổng hợp hoạt tính 21 collagenase theo phƣơng pháp Laster Hankin, S.L Anagnistakis 2.3.5 Phƣơng pháp nghiên cứu xác đ nh số điều kiện môi trƣờng ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 21 chủng vi nấm 2.3.5.1 Nghiên cứu xác đ nh giá tr pH ức chế khả 21 sinh tổng hợp hoạt tính collagenase chủng vi nấm 2.3.5.2 Nghiên cứu xác đ nh giá tr nhiệt độ môi trƣờng ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 22 chủng vi nấm 2.3.5.3 Nghiên cứu xác đ nh giá tr hoạt độ nƣớc môi trƣờng nuôi cấy ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính 22 collagenase chủng vi nấm 2.3.5.4 Nghiên cứu xác đ nh giá tr độ ẩm khơng khí ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 23 chủng vi nấm 2.3.5.5 Nghiên cứu xác đ nh tổ hợp điều kiện môi trƣờng ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 24 chủng vi nấm 2.3.6 Phƣơng pháp thống kê, xử lý số liệu Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 25 3.1 Kết phục hồi lựa ch n chủng nấm sợi nghiên cứu 25 3.2 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr pH ức chế khả 42 sinh tổng hợp hoạt tính collagenase chủng vi nấm 3.2.1 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr pH8 42 3.2.2 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr pH8,5 43 3.2.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr pH9 44 3.2.4 Xác đ nh mối tƣơng quan điều kiện pH môi trƣờng nuôi cấy với khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 45 chủng vi nấm nghiên cứu 3.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr nhiệt độ môi trƣờng ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 49 chủng vi nấm 3.3.1 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr nhiệt độ 140C 49 3.3.2 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr nhiệt độ 160C 50 3.3.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr nhiệt độ 180C 51 3.3.4 Xác đ nh mối tƣơng quan ba điều kiện nhiệt độ môi trƣờng nuôi cấy với khả sinh tổng hợp hoạt tính 52 collagenase 15 chủng vi nấm 3.4 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr hoạt độ nƣớc môi trƣờng nuôi cấy ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính 56 collagenase chủng vi nấm 3.4.1 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr hoạt độ nƣớc môi 56 trƣờng 0,6aw 3.4.2 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr hoạt độ nƣớc môi 57 trƣờng 0,65aw 3.4.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr hoạt độ nƣớc môi 58 trƣờng 0,7aw 3.5 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr độ ẩm không khí ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 60 chủng vi nấm 3.5.1 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr độ ẩm môi trƣờng 60% 60 3.5.2 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr độ ẩm môi trƣờng 70% 61 3.5.3 Kết nghiên cứu xác đ nh giá tr độ ẩm môi trƣờng 80% 62 3.5.4 Xác đ nh mối tƣơng quan ba điều kiện độ ẩm mơi trƣờng khơng khí với khả sinh tổng hợp hoạt tính 63 collagenase 15 chủng vi nấm 3.6 Kết nghiên cứu xác đ nh tổ hợp điều kiện môi 65 trƣờng ức chế khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase chủng vi nấm KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ẢNH VI NẤM PHÂN HỦY CƠ CHẤT PHỤ LỤC SỐ LIỆU NGHIÊN CỨU 68 MỤC LỤC HÌNH VÀ BẢNG NỘI DUNG Trang Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo hydroxyproline Hình 1.2 Trình tự xếp acid amỉn phân tử Collagen Hình 1.3 Nghiên cứu hoạt tính collagenase 12 chủng Coccidioides 12 immitis thạch Czapek có 0,5% collagen gân bị type I Hình 3.1 Aspergillus clavato - nanica Batista (T38) 27 Hình 3.2 Aspergillus silvaticus Fennell and Raper (T65) 28 Hình 3.3 Aspergillus asperescens Stolk (T116) 29 Hình 3.4 Aspergillus ustus Thom and Church (D45) 30 Hình 3.5 Acremonium ochraceum Gams (T104) 31 Hình 3.6 Cladosporium cladosporioides(Fres.) de Vries (T44) 32 Hình 3.7 Didymostilbe sp (D132) 33 Hình 3.8 Gloeosporium sp (D160) 34 Hình 3.9 Nectria inventa Pethybridge (D94) 35 Hình 3.10 Penicillium cyaneo - fulvum Biourge (T72) 36 Hình 3.11 Penicillium chrysogenum Thom (T142) 37 Hình 3.12 Penicillium casei Staub (D71) 38 Hình 3.13 Penicillium italicum Wehmer (D100) 39 Hình 3.14 Penicillium citrinum Thom (D148) 40 Hình 3.15 Scopulariopsis chartarum Morton and Smith (D162) 41 Bảng 1.1 Các loại collagen gen cấu trúc Bảng 1.2 So sánh thành phần acid amin collagen loại protein khác Bảng 1.3 Sự phân bố amino acid chuỗi polypeptide Bảng 3.1 Danh sách 15 chủng vi nấm lựa chọn nghiên cứu 26 Bảng 3.2 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 42 collagenase 15 chủng vi nấm pH8 Bảng 3.3 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 43 collagenase 15 chủng vi nấm pH8,5 Bảng 3.4 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 44 collagenase 15 chủng vi nấm pH9 Bảng 3.5 Mối tương quan pH vùng kiềm với khả sinh tổng hợp 45 hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm Bảng 3.6 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 49 collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện 140C Bảng 3.7 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 50 collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện 160C Bảng 3.8 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 51 collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện 180C Bảng 3.9 Mối tương quan ba điều kiện nhiệt độ môi trường nuôi cấy 52 với khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm Bảng 3.10 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 56 collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện hoạt độ nước môi trường 0,6aw Bảng 3.11 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 57 collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện hoạt độ nước môi trường 0,65aw Bảng 3.12 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 58 collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện hoạt độ nước môi trường 0,7aw Bảng 3.13 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt 60 tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường 60% Bảng 3.14 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt 61 tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường 70% Bảng 3.15 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt 62 tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường 80% Bảng 3.16 Mối tương quan ba điều kiện độ ẩm khơng khí mơi trường ni cấy với khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng 63 vi nấm Bảng 3.17 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt 65 tính collagenase 15 chủng vi nấm ĐKTH Bảng 3.18 Giá trị hệ số phân giải collagen 15 chủng vi nấm điều kiện độc lập tương ứng với ĐKTH 66 Phụ lục 10: Khả phát triển 15 chủng vi nấm nhiệt độ 160C TT Tên chủng A asperescens A clavato-nanica Đƣờng kính khuẩn lạc vào ngày thứ tính mm 160C Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc X 6 6 4,7 SD 1,4 7 7 7 6,7 0,7 A silvaticus Acr.ochraceum 6 5 5,2 1,2 8 6 7 6,8 0,8 C cladosporioides A ustus 6 6 5,9 0,6 7 6,2 1,1 Didymostilbe sp Gloeospoium sp 3 3 3 3,0 0,5 8 7,1 1,5 N inventa 10 P cacei 7 7 7 6,9 0,6 8 8 9 8,2 0,7 11 P chrysogenum 12 P citrinum 8 6,9 0,9 5 5 4 4,3 0,7 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 10 10 10 8 8,8 1,1 5 4 5 4,7 0,5 15 S chartarum 6 5 5,3 0,7 Phụ lục 11: Khả phát triển 15 chủng vi nấm nhiệt độ 180C TT Tên chủng A asperescens A clavato-nanica Đƣờng kính khuẩn lạc vào ngày thứ tính mm 180C Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc 9 12 11 10 11 10 10 10 X SD 10,2 1,0 16 10 16 9 13 11 10 11,3 3,0 A silvaticus Acr.ochraceum 10 12 11 10 11 10 10 11 11 10,7 0,7 18 24 19 19 22 22 21 19 20 20,4 1,9 C cladosporioides A ustus 5 5 10 4 10 5,8 2,4 12 10 12 11 11 12 10 11 12 11,2 0,8 Didymostilbe sp Gloeospoium sp 14 18 11 12 15 16 11 14 15 14,0 2,3 22 22 21 21 20 20 20 19 20 20,6 1,0 N inventa 10 P cacei 19 20 22 18 20 21 18 19 18 19,4 1,4 20 18 18 20 19 19 19 19 21 19,2 1,0 11 P chrysogenum 12 P citrinum 15 13 12 15 14 13 15 13 13 13,7 1,1 15 14 12 14 14 13 15 14 13 13,8 1,0 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 17 16 17 16 15 18 14 15 18 16,2 1,4 16 15 15 16 15 15 15 15 15 15,2 0,4 15 S chartarum 9 10 8 8,8 0,7 Phụ lục 12: Khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm giá trị nhiệt độ 140C TT Tên chủng A asperescens A clavato-nanica Đƣờng kính vịng phân hủy vào ngày thứ tính mm 140C Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc X 24 0 10 11 10 11 10 9,4 SD 7,0 14 13 5 12 7,1 4,8 A silvaticus Acr.ochraceum 12 13 11 10 11 11 12 10 11,0 1,2 10 0 20 22 20 19 21 21 14,8 9,1 C cladosporioides A ustus 10 11 9 40 12,3 10,4 6 5 4,3 1,9 Didymostilbe sp Gloeospoium sp 12 0 10 12 11 11 10 11 8,6 4,9 0 0 0 0 0,0 0,0 N inventa 10 P cacei 0 4 4,6 3,0 27 16 23 25 20 19 20 18 18 20,7 3,6 5 5 5 4,9 0,6 24 24 23 23 24 23 21 22 21 22,8 1,2 11 P chrysogenum 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 6 6 5,1 2,0 17 16 21 15 17 16 12 12 11 15,2 3,2 15 S chartarum 11 13 11 10 12 12 10 12 11,1 1,3 Phụ lục 13: Khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm giá trị nhiệt độ 160C TT Tên chủng A asperescens A clavato-nanica Đƣờng kính vịng phân hủy vào ngày thứ tính mm 160C Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc 0 0 0 0 X SD 0,0 0,0 17 20 19 19 18 19 19 17 19 18,6 1,0 A silvaticus Acr.ochraceum 13 16 16 13 15 16 14 14 16 14,8 1,3 14 16 13 15 13 13 14 14 14 14,0 1,0 C cladosporioides A ustus 13 10 11 14 11 11 10 10,7 2,1 9 10 9 8,3 1,1 Didymostilbe sp Gloeospoium sp 7 6 6 6,3 0,9 0 0 0 0 0,0 0,0 N inventa 10 P cacei 12 12 14 13 13 14 13 13 14 13,1 0,8 25 26 24 25 24 27 25 26 23 25,0 1,2 11 P chrysogenum 12 P citrinum 9 10 10 8,8 0,8 0 0 0 0 0,0 0,0 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 20 13 17 19 14 15 20 15 15 16,4 2,7 12 17 11 13 13 13 14 14 13 13,3 1,7 15 S chartarum 0 0 0 0 0,0 0,0 Phụ lục 14: Khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm giá trị nhiệt độ 180C Đƣờng kính vịng phân hủy vào ngày thứ tính mm 180C X Khuẩn Khuẩn TT Tên chủng Khuẩn Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc lạc lạc lạc A asperescens 12 18 15 15 16 15 15 16 15 15,2 A clavato-nanica 18 12 10 19 13 12 18 14 13 14,3 A silvaticus 17 26 19 20 21 20 19 21 21 20,4 SD 1,6 3,2 2,5 Acr.ochraceum 33 41 35 32 40 36 39 34 36 36,2 3,2 C cladosporioides 15 11 12 11 11 9,3 3,7 A ustus 21 20 20 20 20 21 19 21 21 20,3 0,7 Didymostilbe sp 16 19 12 14 17 18 14 18 17 16,1 2,3 Gloeospoium sp 24 24 22 24 23 23 24 23 24 23,4 0,7 N inventa 21 22 25 21 22 25 21 24 22 22,6 1,7 10 P cacei 11 P chrysogenum 47 44 42 46 45 43 45 44 47 44,8 1,7 32 30 29 31 31 30 30 31 30 30,4 0,9 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 27 30 31 28 28 27 30 29 27 28,6 1,5 40 35 36 35 37 39 34 36 38 36,7 2,0 14 P italicum 15 S chartarum 35 31 30 34 31 31 32 32 31 31,9 1,6 0 0 0 0 0,0 0,0 Phụ lục 15: Khả phát triển, khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện 0,6aw Khả phân hủy colagen Theo dõi khả phát triển hoạt độ nƣớc 0,6aw (Đường kính khuẩn lạc tính mm sau … ngày ni cấy) Stt Chủng vi nấm Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 A asperescens A clavato-nanica A silvaticus Acr.ochraceum 0 0 0 0 0 0 0 0 C cladosporioides A ustus 0 0 0 0 0 0 0 Didymostilbe sp 0 0 0 Gloeospoium sp 0 0 N inventa 0 0 10 P cacei 0 11 P chrysogenum 0 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 15 S chartarum ĐK ĐK vòng khuẩn Hệ số I phân hủy lạc 0 _ _ _ _ 0 0 _ _ _ _ 0 0 0 _ _ _ _ 0 0 _ _ 0 0 _ _ 0 0 0 _ _ 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ 0 0 0 0 0 _ _ Phụ lục 16: Khả phát triển, khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện aw = 0,65 Khả phân hủy colagen Theo dõi khả phát triển hoạt độ nƣớc 0,65aw (Đường kính khuẩn lạc tính mm sau … ngày nuôi cấy) Stt Chủng vi nấm Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 A asperescens A clavato-nanica A silvaticus Acr.ochraceum 0 0 0 0 0 0 0 0 C cladosporioides A ustus 0 0 0 0 0 0 0 Didymostilbe sp 0 0 0 Gloeospoium sp 0 0 N inventa 0 0 10 P cacei 0 11 P chrysogenum 0 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 15 S chartarum ĐK ĐK vòng khuẩn Hệ số I phân hủy lạc 0 _ _ _ _ 0 0 _ _ _ _ 0 0 0 _ _ _ _ 0 0 _ _ 0 0 _ _ 0 0 0 _ _ 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ 0 0 0 0 0 _ _ Phụ lục 17: Khả phát triển, khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều aw = 0,7 Khả phân hủy colagen Theo dõi khả phát triển hoạt độ nƣớc 0,7aw (Đường kính khuẩn lạc tính cm sau … ngày nuôi cấy) Stt Chủng vi nấm Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 Lần thí nghiệm sau sau sau 30 ngày 0 0 0 A asperescens A clavato-nanica A silvaticus Acr.ochraceum 0 0 0 0 0 0 0 0 C cladosporioides A ustus 0 0 0 0 0 0 0 Didymostilbe sp 0 0 0 Gloeospoium sp 0 0 N inventa 0 0 10 P cacei 0 11 P chrysogenum 0 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 15 S chartarum ĐK ĐK vòng khuẩn Hệ số I phân hủy lạc 0 _ _ _ _ 0 0 _ _ _ _ 0 0 0 _ _ _ _ 0 0 _ _ 0 0 _ _ 0 0 0 _ _ 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ 0 0 0 0 0 _ _ Phụ lục 18: Khả phát triển 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm mơi trường khơng khí 60% TT Tên chủng Đƣờng kính khuẩn lạc vào ngày thứ tính mm RH60% Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc 10 15 13 12 13 14 12 12 14 X SD 12,8 1,5 A asperescens A clavato-nanica 22 24 24 23 24 22 23 23 22 23,0 0,9 A silvaticus 5 6 7 6,3 1,0 Acr.ochraceum 21 26 25 23 25 25 23 23 25 24,0 1,6 C cladosporioides 12 12 11 12 12 12 12 13 13 12,1 0,6 A ustus 6 8 6,7 1,1 Didymostilbe sp 17 10 10 10 10 11 10 9,9 3,4 Gloeospoium sp 31 31 29 30 31 31 29 31 31 30,4 0,9 N inventa 22 28 15 20 21 21 19 20 20 20,7 3,4 10 P cacei 11 P chrysogenum 7 8 7,8 0,8 12 11 10 11 11 12 11 12 12 11,3 0,7 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 14 14 16 14 16 16 14 14 16 14,9 1,1 12 12 13 12 13 13 12 14 13 12,7 0,7 14 P italicum 15 S chartarum 15 14 13 14 15 15 14 14 15 14,3 0,7 16 16 11 14 15 15 13 14 14 14,2 1,6 Phụ lục 19: Khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm mơi trường khơng khí 60% TT Tên chủng A asperescens A clavato-nanica Đƣờng kính vịng phân hủy vào ngày thứ tính mm RH60% Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc 18 28 17 21 22 23 20 21 Khuẩn lạc 22 X SD 21,3 3,2 44 47 47 46 45 47 46 46 45 45,9 1,1 A silvaticus Acr.ochraceum 12 11 12 12 13 12 14 13 12,0 1,4 50 51 46 48 49 50 48 48 49 48,8 1,5 C cladosporioides A ustus 22 25 23 24 24 25 25 25 26 24,3 1,2 13 11 13 13 15 15 14 15 16 13,9 1,5 Didymostilbe sp Gloeospoium sp 25 10 22 20 21 21 20 22 21 20,2 4,1 41 40 36 39 40 40 38 39 40 39,2 1,5 N inventa 10 P cacei 25 35 18 25 26 26 25 25 25 25,6 4,3 37 28 37 33 34 34 34 35 36 34,2 2,7 11 P chrysogenum 12 P citrinum 45 25 22 29 30 31 30 31 31 30,4 6,3 29 27 30 29 30 30 28 29 30 29,1 1,1 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 38 41 41 39 41 41 40 42 42 40,6 1,3 38 34 35 35 36 37 35 36 36 35,8 1,2 15 S chartarum 24 23 17 20 21 22 20 20 21 20,9 2,0 Phụ lục 20: Khả phát triển 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường không khí = 70% TT Tên chủng A asperescens A clavato-nanica Đƣờng kính khuẩn lạc vào ngày thứ tính mm RH70% Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc 13 11 12 12 13 13 12 12 12 X SD 12,2 0,7 16 16 16 15 16 17 14 15 16 15,7 0,9 A silvaticus Acr.ochraceum 15 15 13 15 15 16 14 14 16 14,8 1,0 19 15 15 17 18 18 17 17 19 17,2 1,5 C cladosporioides A ustus 8 7 7 7,3 0,5 11 12 10 11 10 11 11 10,3 1,2 Didymostilbe sp Gloeospoium sp 18 6 11 11 11 11 12 12 10,9 3,6 21 21 26 22 22 23 20 22 23 22,2 1,7 N inventa 10 P cacei 21 20 21 21 21 21 21 21 22 21,0 0,5 12 10 12 11 11 11 11 12 12 11,3 0,7 11 P chrysogenum 12 P citrinum 11 11 10 12 12 12 12 12 11,2 1,1 19 14 14 14 15 15 13 15 15 14,9 1,7 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 8 8 9 8,3 0,5 10 10 10 10 11 9 11 9,9 0,8 15 S chartarum 10 11 10 11 11 12 11 11 12 11,0 0,7 Phụ lục 21: Khả sinh tổng hợp collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm mơi trường khơng khí 70% TT Tên chủng Đƣờng kính vịng phân hủy vào ngày thứ tính mm RH70% Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc X 25 25 23 25 25 26 25 25 25 24,9 SD A asperescens A clavato-nanica 40 41 38 39 39 40 38 38 39 39,1 1,1 A silvaticus 35 26 33 31 32 32 30 32 33 31,6 2,5 Acr.ochraceum 32 28 26 29 32 33 30 32 33 30,6 2,5 C cladosporioides 25 13 27 20 20 20 21 21 22 21,0 3,9 A ustus 23 24 18 20 21 22 21 22 23 21,6 1,8 Didymostilbe sp 28 18 17 22 22 22 23 24 24 22,2 3,3 Gloeospoium sp 25 26 31 27 28 28 27 29 28 27,7 1,7 N inventa 35 36 36 35 36 36 35 35 36 35,6 0,5 10 P cacei 11 P chrysogenum 42 38 39 39 39 39 40 41 41 39,8 1,3 23 28 32 27 31 32 32 32 32 29,9 3,2 12 P citrinum 13 P cyaneo-fulvum 53 45 45 48 49 50 49 49 50 48,7 2,5 31 26 27 28 30 30 29 31 31 29,2 1,9 14 P italicum 15 S chartarum 25 26 25 25 26 26 24 25 26 25,3 0,7 12 12 12 13 13 13 13 14 14 12,9 0,8 0,8 Phụ lục 22: Khả phát triển 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm mơi trường khơng khí = 80% TT Tên chủng A asperescens A clavato-nanica Đƣờng kính khuẩn lạc vào ngày thứ tính mm RH80% Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc X 16 17 17 16 17 18 16 17 18 16,9 SD 0,8 21 20 21 20 21 21 20 21 22 20,8 0,7 A silvaticus Acr.ochraceum 15 20 12 15 15 15 14 15 16 15,2 2,1 28 24 24 25 24 25 24 24 25 24,8 1,3 C cladosporioides A ustus 12 12 13 13 14 13 13 14 15 13,2 1,0 9 10 9 9 10 10 9,3 0,5 Didymostilbe sp Gloeospoium sp 15 14 15 14 15 16 15 15 16 15,0 0,7 20 30 39 29 29 31 29 29 31 29,7 4,8 N inventa 10 P cacei 28 29 25 27 27 27 26 26 27 26,9 1,2 12 11 12 11 13 12 11 12 13 11,9 0,8 11 P chrysogenum 12 P citrinum 14 13 14 13 13 15 13 13 13 13,4 0,7 18 19 13 16 17 18 16 17 17 16,8 1,7 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 11 12 11 11 11 12 10 11 12 11,2 0,7 18 16 17 16 16 17 16 17 17 16,7 0,7 15 S chartarum 14 17 21 18 18 19 18 18 19 18,0 1,9 Phụ lục 23: Khả sinh tổng hợp collagenase 15 chủng vi nấm điều kiện độ ẩm môi trường khơng khí 80% TT Tên chủng A asperescens A clavato-nanica Đƣờng kính vịng phân hủy vào ngày thứ tính mm RH80% X Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc 41 40 41 41 41 42 40 41 41 40,9 SD 0,6 50 46 48 46 48 48 47 48 48 47,7 1,2 A silvaticus Acr.ochraceum 44 50 47 46 46 46 45 46 46 46,2 1,6 44 47 45 45 45 46 45 46 46 45,4 0,9 C cladosporioides A ustus 37 22 35 32 33 33 34 35 35 32,9 4,3 25 25 27 25 25 26 25 27 27 25,8 1,0 Didymostilbe sp Gloeospoium sp 26 23 25 24 24 26 25 25 26 24,9 1,1 31 39 35 35 36 36 36 37 36 35,7 2,1 N inventa 10 P cacei 42 43 37 41 41 41 41 41 42 41,0 1,7 43 44 42 43 43 44 43 44 44 43,3 0,7 11 P chrysogenum 12 P citrinum 40 42 41 41 42 41 40 40 40 40,8 0,8 43 44 40 43 43 44 43 43 43 42,9 1,2 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 45 42 42 43 43 44 41 42 44 42,9 1,3 46 47 45 46 46 46 45 46 46 45,9 0,6 15 S chartarum 20 21 25 22 23 23 23 24 24 22,8 1,6 Phụ lục 24: Khả sinh tổng hợp hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm ĐKTH (nhiệt độ 160C, RH = 70%; pH 8,5; aw = 0,65) STT Chủng vi nấm Theo dõi khả phát triển tổ hợp điều kiện (nhiệt độ 160C, RH = 70%; pH Khả phân hủy colagen = 8,5; aw = 0,65) (Đường kính khuẩn lạc tính mm sau … ngày ni cấy) ĐK ĐK vịng Lần thí nghiệm Lần thí nghiệm Lần thí nghiệm khuẩn Hệ số I phân hủy sau sau sau 30 sau sau sau 30 sau sau sau 30 lạc ngày ngày ngày 0 0 0 0 0 _ _ 0 0 0 0 0 _ _ A asperescens A clavato-nanica A silvaticus Acr.ochraceum 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ C cladosporioides A ustus 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ Didymostilbe sp Gloeospoium sp 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ N inventa 10 P cacei 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ 11 P chrysogenum 12 P citrinum 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ 13 P cyaneo-fulvum 14 P italicum 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 _ _ _ _ 15 S chartarum 0 0 0 0 0 _ _ ... Anh Thắng NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG TỚI Q TRÌNH SINH TỔNG HỢP VÀ HOẠT TÍNH COLLAGENASE CỦA CÁC CHỦNG VI NẤM ĐÃ PHÂN LẬP ĐƢỢC TỪ KHU VỰC QUẢNG TRƢỜNG BA ĐÌNH Chuyên... lƣợc vi nấm trình sản sinh enzyme ngoại bào 1.3 Nghiên cứu yếu tố ảnh hƣởng tới phân hủy 12 collagen vi nấm 1.3.1 Quá trình sinh tổng hợp hoạt tính collagenase vi nấm 12 1.3.2 Nghiên cứu sinh tổng. .. nghiên cứu 26 Bảng 3.2 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 42 collagenase 15 chủng vi nấm pH8 Bảng 3.3 Kết nghiên cứu xác định khả sinh tổng hợp hoạt tính 43 collagenase 15 chủng vi