Bài viết xây dựng một quy trình hiệu quả cho nhân giống in vitro cây Sung Magic (Ficus carica L.) cũng như khả năng sinh trưởng và phát triển của cây ở giai đoạn vườn ươm. Sự nhân chồi từ đỉnh chồi và đoạn thân mang chồi nách in vitro trên môi trường ½ MS cơ bản có bổ sung 1,5 mg/L BA kết hợp với 10% nước dừa là thích hợp nhất.
Tạp chí Khoa học – Trường Đại học Phú Yên, Số 24 (2020), 1-10 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH IN VITRO CÂY SUNG MAGIC (Ficus carica L.) TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHÚ YÊN Nguyễn Thị Phi Loan, Nguyễn Khánh Hy*, Dương Thị Oanh Trường Đại học Phú Yên Ngày nhận bài: 27/04/2020; ngày nhận đăng: 08/06/2020 Tóm tắt Trong nghiên cứu này, chúng tơi xây dựng quy trình hiệu cho nhân giống in vitro Sung Magic (Ficus carica L.) khả sinh trưởng phát triển giai đoạn vườn ươm Sự nhân chồi từ đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách in vitro mơi trường ½ MS có bổ sung 1,5 mg/L BA kết hợp với 10% nước dừa thích hợp Mơi trường ½ MS có bổ sung mg/l IBA kết hợp với 10% nước dừa tỏ hiệu trình tạo rễ Cây phát triển khỏe mạnh sau tháng vườn ươm trồng chăm sóc giá thể đất cát, xơ dừa phân chuồng hoai phối trộn với tỉ lệ 1,5:1,5:1 (v:v:v), chế độ tưới nước lần/ngày Từ khóa: Ficus carica L., giai đoạn vườn ươm, nhân giống in vitro, tái sinh chồi Đặt vấn đề Sung Magic có tên khoa học Ficus carica Linn thuộc họ Moraceae Sung (Ficus carica L.) địa Tây Nam Á nhân giống trồng quy mô khắp khu vực Địa Trung Hải (Phạm S, 2016) Đây lồi rụng có kích thước nhỏ vừa phải, cao từ 15-30 feet; hình trứng rộng gần hình thoi, phân thùy sâu từ 3-5 thùy, bề mặt thô ráp; mọc nách lá, có nhiều kích thước màu sắc khác (Vikas & Vijay, 2011) Quả chúng có hương vị thơm ngon với giá trị thương mại cao Quả tiêu thụ dạng khô tươi Quả Sung giàu chất xơ, kali, canxi sắt cao nhiều so với chuối, nho, dâu tây, táo cam Ngoài ra, toàn Sung bao gồm quả, lá, rễ, mủ cành cịn có giá trị dược lý dùng để điều trị bệnh liên quan đến thị lực, tiêu hóa chứa đặc tính chống oxy hóa, chống giun sán, chống nấm chống ung thư (Wan nnk., 2018) Cây chịu ngưỡng nhiệt độ từ -100C đến 400C, từ sương giá đến khí hậu nóng nhiệt đới (Phạm S, 2016) Cây trồng nhiều loại đất: cát nhẹ, mùn giàu, đất sét nặng đá vôi (Vikas & Vijay, 2011) Đất cát vừa khô vừa chứa lượng vơi phù hợp mơi trường ưa thích Cây thích ứng với mơi trường có độ mặn vừa phải, đặc điểm tốt cho việc tận dụng nguồn đất cát ven biển làm đất trồng (Phạm S, 2016) Sản xuất Sung thương mại hóa quốc gia ven biển biển Địa Trung Hải quốc gia có khí hậu tương tự California, Úc Nam Mỹ (Vikas & Vijay, 2011) Các quốc gia sản xuất Sung lớn Thổ Nhĩ Kỳ, Ai Cập, Iran, Hy Lạp Algeria (Pasqual & Ferreira, 2007) Cây Sung coi loài hội nhập quốc tế với thị trường tiêu thụ lớn chưa nhiều quốc gia khu vực Đông Nam Á Châu Á trồng quy mô sản * Email: nguyenkhanh237@gmail.com Journal of Science – Phu Yen University, No.24 (2020), 1-10 xuất lớn Cây Sung loại trồng dễ canh tác, bị sâu bệnh, phù hợp cho sản xuất theo tiêu chuẩn có chứng nhận với quy mơ lớn nơng dân doanh nghiệp ưu tiên lựa chọn Cây trồng phù hợp với du lịch canh nông, thúc đẩy du lịch phát triển khai thác vùng đất bỏ hoang ven biển, tạo cảnh quan du lịch nhân tạo hấp dẫn Ficus carica L mang nhiều đặc điểm ưu việt mà ăn khác có, Tiến sĩ Phạm S du nhập nhân giống chúng Việt Nam, lấy tên Sung Magic (Phạm S, 2016) Phú Yên có điều kiện thổ nhưỡng khí hậu ven biển nhiệt đới phù hợp với việc canh tác Sung Magic Việc đầu tư nguồn lực vào nghiên cứu, thử nghiệm, trồng sản xuất loại giống trồng sản phẩm công nghệ cao quyền địa phương trọng, quan tâm, nhằm thúc đẩy phát triển kinh tế địa phương Công nghệ nhân giống vơ tính in vitro tạo hệ số nhân giống từ mẹ lớn, từ vài ngàn đến triệu Để chủ động nguồn giống có chất lượng cao, bệnh phục vụ cho phát triển sản xuất, phục vụ nhu cầu nội tiêu xuất nhiệm vụ nhân giống Sung phương pháp nuôi cấy mô hướng đắn Với định hướng trên, chúng tơi nghiên cứu quy trình nhân giống vơ tính in vitro hiệu Sung Magic Trường Đại học Phú Yên nhằm làm sở cho việc nhân giống quy mơ lớn lồi địa phương Đối tượng phương pháp 2.1 Đối tượng Đối tượng nghiên cứu Sung Magic S (Ficus carica L.) in vitro từ Tiến sĩ Phạm S chuyển giao cho Ban quản lý Khu Công Nghệ Cao tỉnh Phú Yên Mẫu vật sử dụng nghiên cứu chồi đỉnh đoạn thân mang chồi nách từ in vitro tháng tuổi khỏe mạnh 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Môi trường điều kiện nuôi cấy Môi trường dùng để nuôi cấy mơi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng khác tùy theo mục đích thí nghiệm Nguồn carbon saccharose Môi trường làm đặc agar pH môi trường điều chỉnh đến 5,7 Môi trường nuôi cấy khử trùng 1210C (~ atm) 20 phút Mẫu thí nghiệm cấy bình thủy tinh chứa mơi trường đặt phịng ni cấy có nhiệt độ 23 ± 20C, cường độ ánh sáng khoảng 2000 lux, thời gian chiếu sáng 16 giờ/ngày 2.2.2 Nghiên cứu khả nhân chồi từ đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách in vitro Đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách khoảng cm tách từ in vitro cấy lên mơi trường ½ MS chứa 30 g/l saccharose, g/l agar bổ sung BA (0,25 - mg/l) riêng rẻ kết hợp với nước dừa với nồng độ 5-20% tổ hợp nồng độ khác để thăm dò khả nhân chồi Số chồi tái sinh, chiều cao số chồi ghi nhận sau 60 ngày nuôi cấy 2.2.3 Nghiên cứu khả tạo rễ chồi in vitro Các chồi in vitro khoảng 1,5 cm tách cấy lên mơi trường ½ MS chứa 2% saccharose, 0,8% agar bổ sung 1mg/l NAA 1mg/l IBA riêng rẻ kết hợp với 10% nước dừa để thăm dò khả tạo rễ chồi in vitro Khả tạo rễ đánh giá sau 60 ngày nuôi cấy thông qua tiêu số rễ, chiều dài rễ chiều cao chồi Tạp chí Khoa học – Trường Đại học Phú Yên, Số 24 (2020), 1-10 2.2.4 Chuyển in vitro trồng vườn ươm Các in vitro tháng tuổi phát triển rễ đầy đủ, có chiều cao khoảng cm, gồm 4-5 rễ 5-7 lấy khỏi bình ni Các rửa agar bám quanh rễ, đặt lên rổ chứa có lót giấy báo nước Sau trồng vào chậu (12 x 13,5 cm) có chứa giá thể gồm hỗn hợp đất cát, mụn dừa, phân chuồng hoai theo tỷ lệ 1,5:1,5:1 (v:v:v) Các sau trồng vào chậu, tưới đẫm nước đặt nơi tránh ánh nắng trực tiếp vườn ươm Vườn ươm thiết kế thoáng mát, phủ trần với lưới đen Độ che nắng lưới 70% Tiến hành tưới phun sương đặn lần/ngày Theo dõi đánh giá khả sinh trưởng sau trồng 2, 4, tuần Số lượng khảo sát 30 cho lần nhắc lại 2.2.5 Xử lý thống kê Các thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Kết thí nghiệm tính trung bình phân tích ANOVA với Duncan’s test (p < 0,05) phần mềm SPSS 20.0 (IBM) Kết thảo luận 3.1 Khả nhân chồi từ đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách in vitro 3.1.1 Ảnh hưởng BA lên khả tạo chồi in vitro từ đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách in vitro Các chồi in vitro có kích thước khoảng cm cấy mơi trường ½ MS chứa 30 g/l saccharose, g/l agar bổ sung BA nồng độ khác từ 0,25 đến mg/l để thăm dò khả tạo chồi đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách Kết thí nghiệm sau 60 ngày ni cấy trình bày bảng bảng Bảng Ảnh hưởng BA lên khả tạo chồi in vitro từ đỉnh chồi in vitro sau 60 ngày nuôi cấy Công Nồng độ BA Tỷ lệ mẫu tạo Số chồi Chiều cao TB Số TB thức (mg/l) chồi (%) TB/mẫu chồi (cm) chồi e a B0 100 1,00 2,26 4,37a B1 0,25 100 1,89d 1,31b 4,00b B2 0,5 100 2,48c 1.29b 3,93b b c B3 100 3,33 0,81 3,69c B4 1,5 100 3,74a 0,63d 3,38d B5 100 3,22b 0,47e 3,23d Ghi chú: Các chữ khác cột sai khác có mức ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p < 0,05 (Duncan’s test) Với đối tượng đỉnh chồi in vitro, sau 60 ngày nuôi cấy, môi trường có bổ sung - mg/l BA, tỷ lệ tạo chồi đạt 100% Trong đó, mơi trường ½ MS có bổ sung 1,5 mg/l BA môi trường tốt để tạo chồi in vitro từ đỉnh chồi sung Magic in vitro Chồi phát triển tốt với số chồi trung bình 3,74 chồi, chiều cao trung bình chồi 0,63 cm số trung bình 3,38 Thí nghiệm cho thấy số chồi tạo thành tăng nồng độ BA bổ sung vào môi trường tăng từ đến 1,5 mg/l, lại giảm nồng độ BA bổ sung tăng lên mg/l Journal of Science – Phu Yen University, No.24 (2020), 1-10 (Hình 1a) Chiều cao chồi số chồi tạo thành giảm dần theo chiều tăng nồng độ BA bổ sung vào môi trường Tuy nhiên, bổ sung nồng độ cao mg/l BA, số chồi tạo thành giảm mẫu cấy xuất nhiều callus màu vàng nhạt bề mặt vết cắt tiếp xúc với môi trường Bảng Ảnh hưởng BA lên khả tạo chồi in vitro từ đoạn thân mang chồi nách in vitro sau 60 ngày nuôi cấy Công Nồng độ Tỷ lệ mẫu Số chồi Chiều cao TB Số TB thức BA (mg/l) tạo chồi (%) TB/mẫu chồi (cm) chồi B0 100 2,00e 1,94a 4,19a B1 0,25 100 2,89d 1,26b 3,94b B2 0,5 100 3,22cd 1,14c 3,82bc B3 100 3,78b 0,75d 3,66c B4 1,5 100 4,33a 0,48e 3,25d B5 100 3,52bc 0,45e 3,18d Ghi chú: Các chữ khác cột sai khác có mức ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p < 0,05 (Duncan’s test) Với đối tượng đoạn thân mang chồi nách in vitro, kết cho thấy ảnh hưởng môi trường ½ MS có bổ sung 1,5 mg/l BA tốt lên tạo chồi in vitro sau 60 ngày nuôi cấy Ở môi trường này, chồi phát triển tốt với số chồi trung bình 4,33 chồi, chiều cao trung bình 0,48 cm số trung bình 3,25 (Hình 1b) Ở nồng độ bổ sung mg/l BA vào môi trường nuôi cấy bản, bên cạnh giảm khả tạo chồi mà xuất callus bề mặt vết cắt mẫu cấy tiếp xúc với môi trường nhiều mơi trường cịn lại (a) B0 B1 B2 B3 B4 B5 (b) B0 B1 B2 B3 B4 B5 Hình Ảnh hưởng mơi trường bổ sung BA (0-2mg/l) lên tạo chồi chồi sung Magic: (a) đỉnh chồi in vitro (b) đoạn thân mang chồi nách in vitro 3.1.2 Ảnh hưởng nước dừa kết hợp với BA lên khả tạo chồi từ đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách in vitro Để đánh giá ảnh hưởng nước dừa kết hợp với BA lên khả tạo chồi chồi Tạp chí Khoa học – Trường Đại học Phú Yên, Số 24 (2020), 1-10 in vitro, mẫu cấy có kích thước khoảng cm cấy lên mơi trường ½ MS chứa 30 g/l saccharose, g/l agar, bổ sung 1,5 mg/l BA kết hợp với nước dừa nồng độ từ 5-20% Bên cạnh đó, mơi trường ½ MS chứa 30 g/l saccharose, g/l agar có bổ sung mg/l BA kết hợp với 10% nước dừa theo kết nghiên cứu tiến sĩ Phạm S (Phạm S, 2016) tiến hành khảo sát nhằm so sánh hiệu tổ hợp chất điều hòa sinh trưởng đối tượng Sung Magic Kết thí nghiệm thu sau 60 ngày ni cấy trình bày bảng bảng Bảng Ảnh hưởng nước dừa kết hợp với BA lên khả tạo chồi từ đỉnh chồi in vitro sau 60 ngày nuôi cấy Công Nồng độ Nồng độ Tỷ lệ mẫu Số chồi Chiều cao Số TB thức nước dừa BA (mg/l) tạo chồi TB/mẫu TB chồi chồi (%) (%) (cm) BN0 0 100 1,00d 2,16a 4,26a BN1 10 100 3,52c 0,93b 3,78b BN2 1,5 100 3,81bc 0,81bc 3,58c a bc BN3 10 1,5 100 4,41 0,85 3,66bc BN4 15 1,5 100 3,93b 0,75c 3,52c BN5 20 1,5 100 3,78bc 0,73c 3,48c Ghi chú: Các chữ khác cột sai khác có mức ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p < 0,05 (Duncan’s test) Bảng Ảnh hưởng nước dừa kết hợp với BA lên khả tạo chồi từ đoạn thân mang chồi nách in vitro sau 60 ngày nuôi cấy Công Nồng độ Nồng độ Tỷ lệ mẫu Số chồi Chiều cao Số TB thức nước dừa BA tạo chồi TB/mẫu TB chồi chồi (%) (mg/l) (%) (cm) BN0 0 100 2,00e 1,91a 4,13a BN1 10 100 4,26cd 0,82b 3,71b b c BN2 1,5 100 4,70 0,67 3,52c BN3 10 1,5 100 5,19a 0,75bc 3,62bc BN4 15 1,5 100 4,59bc 0,53d 3,36d BN5 20 1,5 100 4,04d 0,51d 3,34d Ghi chú: Các chữ khác cột sai khác có mức ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p < 0,05 (Duncan’s test) Tỷ lệ tạo chồi tất công thức khảo sát đạt 100% Chồi phát triển tốt tạo thêm chồi Các mẫu cấy môi trường bổ sung 10% nước dừa kết hợp 1,5 mg/l BA cho số chồi tốt công thức khảo sát, đạt 4,41 chồi/ đỉnh chồi in vitro 5,19 chồi/ đoạn thân mang chồi nách in vitro Số chồi tạo thành từ đoạn thân mang chồi nách in vitro cao từ đỉnh chồi in vitro Số chồi tạo thành môi trường cao môi trường bổ sung 10% nước dừa kết hợp 1mg/l BA (Hình 2) Khi nồng độ nước dừa bổ sung vào môi trường tăng lên 15% 20%, trình tạo chồi bị hạn chế, số chồi mẫu cấy giảm dần theo độ tăng nồng độ nước dừa Journal of Science – Phu Yen University, No.24 (2020), 1-10 (a) BN0 BN1 BN3 (b) BN0 BN1 BN3 Hình Khả tạo chồi (a) đỉnh chồi in vitro (b) đoạn thân mang chồi nách in vitro sung Magic môi trường bổ sung nước dừa kết hợp với BA 3.2 Khả tạo rễ chồi in vitro Các chồi in vitro khoảng 1,5 cm cấy lên môi trường ½ MS có 2% saccharose, 0,8% agar bổ sung mg/l NAA hoặc1 mg/l IBA riêng rẻ kết hợp với 10% nước dừa để khảo sát ảnh hưởng chất lên khả tạo rễ chồi in vitro Kết nghiên cứu sau 60 ngày ni cấy trình bày bảng Bảng Ảnh hưởng NAA, IBA nước dừa lên khả tạo rễ chồi in vitro sau 60 ngày nuôi cấy Công Nồng độ Nồng độ Nồng độ Tỷ lệ mẫu Số rễ Chiều Chiều cao thức nước dừa NAA IBA tạo rễ TB/chồi dài TB rễ TB chồi (%) (mg/l) (mg/l) (%) (cm) (cm) e e R0 0 100 1,63 1,29 2,43c d d R1 100 2,44 2,54 2,27d R2 0 100 3,07c 2,87c 2,60b R3 10 100 3,85b 3,60b 2,49bc R4 10 100 4,56a 5,13a 3,35a Ghi chú: Các chữ khác cột sai khác có mức ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p < 0,05 (Duncan’s test) Sau 60 ngày nuôi cấy, tỷ lệ tạo rễ mẫu cấy đạt 100% Trên môi trường có bổ sung riêng rẻ mg/l NAA mg/l IBA (Hình 3a), số rễ tạo thành mẫu cấy đạt từ 2-5 rễ Số rễ trung bình mẫu cấy mơi trường có bổ sung mg/l IBA, đạt 3,07 rễ, cao mơi trường có bổ sung mg/l NAA, đạt 2,44 rễ Khi bổ sung kết hợp thêm 10% nước dừa vào mơi trường có chứa mg/l NAA mg/l IBA, số rễ tạo thành tăng lên so với không bổ sung nước dừa đạt 3,85 rễ/chồi 4,56 rễ/chồi Chiều dài rễ chiều cao chồi cải thiện (Hình 3b) Trong môi trường khảo sát, môi trường bổ sung 10% nước dừa kết hợp với mg/l IBA ảnh hưởng tốt đến phát triển chồi khả tạo rễ chồi in vitro Rễ dài, mập mạp, ban đầu có màu trắng, mảnh, sau chuyển màu vàng nâu, mập mạp, Tạp chí Khoa học – Trường Đại học Phú Yên, Số 24 (2020), 1-10 có nhiều rễ phụ với chiều dài trung bình rễ 5,13 cm Chồi phát triển tốt, xanh to, với chiều cao trung bình chồi 3,35 cm Ở mơi trường có bổ sung NAA, mẫu cấy xuất nhiều callus màu vàng nhạt sau hóa nâu bề mặt vết cắt mẫu bề mặt tiếp xúc với môi trường nuôi cấy Sự tạo rễ chậm (rễ nhỏ, mảnh, ngắn rễ phụ hơn) phát triển chồi ( nhỏ, bị xoăn, chồi thấp hơn) so với mơi trường có bổ sung bổ sung IBA (a) R0 R1 R2 (b) R0 R3 R4 Hình Khả tạo rễ chồi in vitro Sung Magic S môi trường bổ sung: (a) NAA IBA riêng rẻ nồng độ mg/l (b) NAA IBA nồng độ mg/l kết hợp với 10% nước dừa 3.3 Chuyển in vitro trồng vườn ươm Cây Sung Magic in vitro tháng tuổi chuyển vườn ươm giá thể đất cát: xơ dừa: phân chuồng hoai theo tỉ lệ 1,5:1,5:1 (v:v:v) có tỷ lệ sống 100% sau 2,4,8 tuần trồng chăm sóc (Hình 4) Các tiêu sinh trưởng trình bày bảng Bảng Khả sinh trưởng in vitro chuyển trồng vườn ươm Thời gian Tỷ lệ sống (%) Chiều cao TB (cm) Số TB/cây d ngày 100% 3,04 5,89c tuần 100% 5,04c 6,15c tuần 100% 10,97b 7,22b tuần 100% 17,74a 8,74a Ghi chú: Các chữ khác cột sai khác có mức ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p < 0,05 (Duncan’s test) Sau tuần trồng chăm sóc, chưa có tăng trưởng nhiều chiều cao số Cây bắt đầu Chiều cao trung bình đạt 5,04 cm số trung bình đạt 6,15 Sau tuần trồng chăm sóc, tăng trưởng mạnh Lá tiếp tục hình thành từ đến lá, xanh tốt Chiều cao trung bình lúc đạt 10,97 cm với số trung bình đạt 7,22 Sau tuần trồng chăm sóc, phát triển xanh tốt Lá hình thành nhiều Journal of Science – Phu Yen University, No.24 (2020), 1-10 bắt đầu phân thùy rõ ràng gia tăng kích thước Cây đạt chiều cao trung bình 17,74 cm, số trung bình 8,74 (a) (b) (c) Hình Cây phát triển giá thể đất cát : xơ dừa : phân chuồng hoai theo tỉ lệ 1,5:1,5:1 (v:v:v) sau trồng: (a) tuần, (b) tuần, (c) tuần Thảo luận Trên hai loại vật liệu nghiên cứu, kết thí nghiệm cho thấy mơi trường ½ MS có bổ sung 1,5 mg/l BA môi trường tốt để tạo chồi in vitro Sung Magic BA tỏ cytokinin hiệu nhân giống in vitro Ficus carica L ảnh hưởng tích cực đến tạo chồi Sung dòng Roxo de Valinhos (Fráguas nnk., 2004) hay dòng khác Aboudi, White Adcy Sultani (Mustafa & Taha, 2012) Ở nồng độ bổ sung mg/l BA vào môi trường nuôi cấy bản, mẫu cấy xuất callus bề mặt vết cắt tiếp xúc với môi trường nhiều mơi trường cịn lại Sự bổ sung BA nồng độ cao dẫn đến hình thành callus hạn chế tạo chồi mẫu cấy Ficus carica L dòng Roxo de Valinhos (Fráguas nnk., 2004) Sự tạo chồi từ đoạn thân mang chồi nách in vitro tốt từ đỉnh chồi in vitro với số chồi, chiều cao số cao (bảng 1, 2, 4) Vật liệu nuôi cấy khác cho hiệu tạo chồi khác Điều xảy đỉnh chồi chồi nách đối tượng Dianthus caryophyllus L (Khatun nnk., 2018) Trong môi trường tạo rễ cho chồi in vitro, IBA bổ sung vào môi trường tỏ hiệu NAA với số rễ chiều dài rễ cao (bảng 5) Trên mơi trường ½ MS có bổ sung mg/l IBA, Ficus carica L tạo rễ hiệu với tỷ lệ 83,34% (Bayoudh nkk., 2015) hay cao 90% với số rễ trung bình rễ, chiều dài rễ trung bình 1,5 cm, sau ni cấy 30 ngày (Yakushiji nnk., 2003) Hiệu có lợi nước dừa quan sát rõ ràng thông số sinh trưởng số chồi tạo thành, chiều dài chồi số lượng ( bảng 3, 5) số rễ chiều dài rễ (bảng 5) Các số cải thiện so với bổ sung BA, NAA hay IBA cách riêng rẻ Tác dụng cải thiện khả tạo chồi nước dừa nuôi cấy in vitro chứng minh kết hợp với BAP Olea europaea L (Peixe nnk., 2007) Dianthus caryophyllus L (Khatun nnk., 2018); hay kết hợp với BAP GA3 Corylus avellana L (Prando nnk., 2014) Nước dừa có chứa chất có lợi cho sinh trưởng phát triển amino acid, loại vitamin, đường chất kích thích sinh trưởng nhóm cytokinin tự nhiên chẳng hạn zeatin N'-diphenyl urea Tạp chí Khoa học – Trường Đại học Phú Yên, Số 24 (2020), 1-10 (Laurain nnk., 1993; George, 2008), chất khống vơ photpho, magiê, kali natri (Raghavan, 1977) Điều có nghĩa việc bổ sung nước dừa vào mơi trường ni cấy có lợi cho tăng trưởng hình thành mơ, khơng nước dừa nguồn khống chất chất dinh dưỡng hữu mà nguồn cung cấp chất điều hòa sinh trưởng tự nhiên cần thiết q trình ni cấy mơ Sung Magic S Tuy nhiên, nghiên cứu nồng độ bổ sung nước dừa chúng tơi cịn cho thấy nồng độ 15% 20%, mẫu cấy có số chồi, chiều cao số giảm dần Điều cho thấy, nồng độ này, nước dừa làm giảm khả tạo chồi tăng trưởng chồi Sung Magic Sự hạn chế xảy tương tự đối tượng Dianthus caryophyllus L, kết hợp 1mg/l BAP với nước dừa nồng độ tương đương (Khatun nnk., 2018) Sau tuần giai đoạn trồng chăm sóc vườn ươm, giá thể khảo sát hỗn hợp đất cát: xơ dừa: phân chuồng hoai (1,5:1,5:1), in vitro cho tỷ lệ sống 100% Cây thích nghi tăng trưởng nhanh chóng mà khơng có triệu chứng bệnh virus hay bất thường hình thái Trong đó, có khoảng 90% Ficus carica L sống phát triển sau tuần trồng chăm sóc giá thể đất thịt (Yakushiji nnk., 2003) hay giá thể than mùn (Bayoudh nkk., 2015) Hỗn hợp giá thể mà khảo sát cho thấy hiệu Sung Magic giai đoạn Kết luận Nghiên cứu đưa quy trình nhân giống vơ tính in vitro hiệu cho Sung Magic (Ficus carica L.) Từ đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách in vitro, mơi trường ½ MS có 3% saccharose, 0,8% agar bổ sung 1,5 mg/l BA kết hợp với 10% nước dừa thích hợp cho nhân chồi sau 60 ngày ni cấy Mơi trường ½ MS có 2% saccharose, 0,8% agar bổ sung mg/l IBA kết hợp với 10% nước dừa mơi trường thích hợp cho rễ in vitro tạo hồn chỉnh sau 60 ngày ni cấy Cây phát triển tốt khỏe mạnh trồng chăm sóc điều kiện vườn ươm, giá thể gồm đất cát: xơ dừa: phân chuồng hoai (1,5:1,5:1) với chế độ tưới nước lần/ngày Nghiên cứu góp phần tạo nguồn giống khỏe mạnh, dồi giúp phát triển loại trồng có giá trị dinh dưỡng thương mại địa phương khu vực TÀI LIỆU THAM KHẢO Fráguas, C.B., Pasqual, M., Dutra, L.F., Cazetta, J.O (2004) Micropropagation of fig (Ficus carica L.) ‘Roxo de Valinhos’ plants In Vitro Cellular & Developmental Biology – Plant, 40, 471-474 DOI: 10.1079/IVP2004562 George, E.F (2008) Plant propagation by tissue culture 3.ed Great Britain: Exegetics, p.479 Khatun, M , Roy, P.K., Razzak, M A (2018) Additive effect of coconut water with various hormoneson in vitro regeneration of carnation (Dianthus caryophyllus L.) The Journal Animal Plant Science, 28(2) Laurain D., Chenieux J., Tremouillaux Guiller C J (1993) Direct embryogenesis from female haploid protoplasts of Ginkgo balboa L., a medicinal woody species Plant Cell Rep., 12, 656-660 Murashige, T., Skoog, F.(1962) A Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures Physiologia Plantarum, 15(3), 473-497 Pasqual, M & Ferreira, E.A (2007) Micropropagation of Fig Tree (Ficus carica L.) Journal of Science – Phu Yen University, No.24 (2020), 1-10 10 Protocols for Micropropagation of Woody Trees and Fruits, 409-416 Peixe, A., Raposo, A, Lourenỗo, R., Cardoso, H., Macedo, E (2007) Coconut water and BAP successfully replaced zeatin in olive (Olea europaea L.) micropropagation Scientia Horticulturae, 113(1), 1-7 Doi: 10.1016/j.scienta.2007.01.011 Phạm S (2016), Tài liệu giới thiệu Sung Magic, quy trình nhân giống in vitro kỹ thuật canh tác Ban quản lý Khu Công Nghệ Cao tỉnh Phú Yên Prando, M.A.S., Chiavazza, P., Faggio, A., Contessa, C (2014) Effect of coconut water and growth regulator supplements on in vitro propagation of Corylus avellana L Scientia Horticulturae, 171 (26), 91-94 DOI: 10.1016/j.scienta.2014.03.052 Raghavan, V (1977) Diets and culture media for plant embryos In: Rechcigl, M.J.(ed.), CRC handbook series in nutrition and food Taylor Francis Publisher, London, 361- 413 Vikas, V.P & Vijay, R.P (2011) Ficus carica Linn.-An Overview Research Journal of Medicinal Plants, 5, 246-253 DOI: 10.3923/rjmp.2011.246.253 Wan, T.L., Fui, C.L.,Wei, Y.L., Subramaniam, S., Bee L.C (2018) Shoot Induction from Axillary Shoot Tip Explants of Fig (Ficus carica) cv Japanese BTM Tropical life sciences research, 29(2), 165–174 DOI: 10.21315/tlsr2018.29.2.11 Yakushiji, H., Mase, N., Sato, Y (2003) Adventitious bud formation and plantlet regeneration from leaves of fig (Ficus carica L.) Journal of Horticultural Science and Biotechnology, 78(6), 874-878 DOI: 10.1080/14620316.2003.11511712 Bayoudh, C., Labidi, R., Majdoub, A., Mars, M (2015) In vitro Propagation of Caprifig and Female Fig Varieties (Ficus carica L.) from Shoot-tips Journal of Agricultural Science and Technology, 17, 1597-1608 Mustafa, N.S., Taha, R.A (2012) Influence of Plant Growth Regulators and Subculturing on In Vitro Multiplication of Some Fig (Ficus Carica) Cultivars Journal of Applied Sciences Research, 8(8), 4038-4044 In vitro propagation of Magic fig (Ficus carica L.) at Phu Yen University Nguyen Thi Phi Loan, Nguyen Khanh Hy*, Duong Thi Oanh Phu Yen University *Email: nguyenkhanh237@gmail.com Received: April 27, 2020; Accepted: June 08, 2020 Abstract This experiment is designed to determine the most suitable conditions and media for in vitro propagation Magic S fig (Ficus carica L.) and growth of in vitro plants in acclimatization For shoot regeneration from in vitro shoot tip and axillary node, the half-strength Murashige and Skoog (MS) medium containing 1,5 mg/l and 10% coconut water were the best, whereas, the half-strength MS medium complemented with 1mg/l IBA and 10% coconut water were better in respect to rooting Rooted plantlets were acclimatized successfully after two months transferred to green-house and grown in a 1,5:1,5:1 (v:v:v) sandy soil, coir andcattle munure mixture with watering times per day Keywords: Ficus carica L., acclimatization, in vitro propagation, shoot regeneration ... nhân giống Sung phương pháp nuôi cấy mô hướng đắn Với định hướng trên, chúng tơi nghiên cứu quy trình nhân giống vơ tính in vitro hiệu Sung Magic Trường Đại học Phú Yên nhằm làm sở cho việc nhân. .. thấy hiệu Sung Magic giai đoạn Kết luận Nghiên cứu đưa quy trình nhân giống vơ tính in vitro hiệu cho Sung Magic (Ficus carica L.) Từ đỉnh chồi đoạn thân mang chồi nách in vitro, mơi trường ½... loại vật liệu nghiên cứu, kết thí nghiệm cho thấy mơi trường ½ MS có bổ sung 1,5 mg/l BA môi trường tốt để tạo chồi in vitro Sung Magic BA tỏ cytokinin hiệu nhân giống in vitro Ficus carica L ảnh