đánh giá hiệu quả sàng lọc virus hbv, hcv, hiv của máu và chế phẩm máu bảng kỹ thuật nat (nucleic acid testing)

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHĨ HỊ CHÍ MINH LUẬN ÁN BÁC SỸ CHUYÊN KHOA II ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ SÀNG LỌC VIRUS HBV, HCV, HIV CỦA MÁU VÀ CHẾ PHẨM MÁU BẢNG KỸ THUẬT NAT (NUCLEIC ACID TESTING) Chuyên ngành : HUYÊT HỌC Mã số : CK 62 72 25 01 Hướng dẫn: TS Phan Nguyễn Thanh Vân Thực hiện: BS Hoàng Thị Như Mai LỜI CAM ĐOAN Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2016 Tơi xin cam đoan công trinh nghiên cứu riêng Các số liệu, két quà nghiên cứu trình bày luận văn trung thực chưa lừng công bố cơng trình nghiên cứu Tác giả luận văn Bs Hoàng Thị Như Mai MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TÁT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH, SƠ ĐỒ ĐẠT VẮN ĐÈ TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỨ VIẾT TẢT AIDS : Acquirred Immune Deficiency Symdrome (Hội chứng suy giâm miễn dịch mắc phải) Anti HBs : Anti Hepatitis B surface (Kháng thể kháng kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B) Anti HBc : Anti Hepatitis B core (Kháng kháng kháng nguyên lõi virus viêm gan B) Anti Hbe : Anti Hepatitis B e (Kháng thể kháng kháng nguyên e virus viêm gan B) Au : Australia (Nước úc) BN : Bệnh nhân BV.TMHH : Bệnh viện Truyền máu Huyết học CMIA : Chemiluminescense immuno assay (Kỹ thuật hoá phát quang) DNA : Desoxyribonucleic Acid ELISA : Enzyme Linked Immunosorben Assay (Kỳ thuật miễn dịch gắn enzym) ECLTA : Electrochemiluminescense immunoassay (Kỳ thuật diện hoá phát quang) EIA : Enzyme Immunoassay (Kỹ thuật miễn dịch enzym) FDA : Food and Drug Administration (Cục quản lý Thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ) HBcAg : Hepatitis B core Antigen (Kháng nguyên lõi virus viêm gan B) HBsAg : Hepatitis B surface Antigen (Kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B) HBeAg : Hepatitis B e Antigen (Kháng nguyên E virus viêm gan B) HBV : Hepatitis B virus (Virus viêm gan B) HCV : Hepatitis V virus (Virus viêm gan C) IDNAT : Individual NAT KN Kháng nguyên KT Kháng thể MP NAT Mini Pool N/\T NAT NRL Nucleic Acid Testing National Reference Laboratory PCR Polymerase Chain Reaction (Phàn ứng khuếch dại chuỏi) RNA Acid Ribonucleic TMA Transcription Mediated Amplification TMP Trans Membrance Protein VHHTMTW Viện Huyết học truyền máu Trung ương WHO World Health Organization XN Xét nghiệm DANH MỤC BẢNG, BIẺU Trang DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ Trang ĐẶT VẮN ĐÊ Mồi năm thơng qua vận dộng tồn dân hiến máu, lượng máu tiếp nhận từ dối tượng hiến máu tình nguyện ngày tăng cao vấn dề dặt hàng triệu dơn vị máu dó cỏ thực an tồn khơng? Chính Ví vậy, việc dâm bão dơn vị máu an toàn cho diều trị việc làm cần thiết An toàn truyền máu nội dung xuyên suốt ơong chiến lược truyền máu cùa mỏi quốc gia, dó sảng lọc tác nhân lây truyền qua dường máu dược xem mục tiêu quan trọng nhằm giảm thiểu mức thấp nguy lây nhiễm qua dường máu sử dụng chế phẩm máu với mục đích diều trị Sàng lọc tác nhân lây truyền qua truyền máu túi máu hiến ưong chiến lược cùa ngân hàng máu Tồ chức y tế giới (WHO) dâ khuyến cáo việc sàng lọc HBV, HCV HTV bắt buộc cho tất cà dơn vị máu [181- Theo ước tính WHO nhu cầu sử dụng máu diều trị hãng năm quốc gia tính theo dơn vị % dân số Ờ Việt Nam, với dân số 90 ưiệu người, mỏi năm cần khoảng 1800 000 dơn vị tương dương 450 000 lít máu dể dáp ứng nhu cầu diều trị, cấp cứu dề phịng thảm họa Cơng tác sàng lọc tác nhân lây truyền qua dường máu dâ dược áp dụng từ năm 1971 với xét nghiệm tìm kháng nguyên bề mặt virus gây viêm gan B (HBsAg), từ năm 1985 với xét nghiệm sàng lọc virus suy giâm miễn dịch người (HIV) từ năm 1990 với xét nghiệm sàng lọc virus viêm gan c (HCV) Tử dó, kỳ thuật sàng lọc ngày phát triển Hiện nay, nhũng ngân hàng máu lớn Việt Nam, việc sàng lọc tất cà mẩu máu hiến bắt buộc nhiễm trùng sau sử dụng dấu ấn sau: • HIV-1 HĨV-2 sàng lọc dối với kết hợp kháng nguyên kháng thề HTV hay kháng thể kháng HĩV • Viêm gan virus B: sàng lọc kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B (HBsAg) • Viêm gan virus C: sàng lọc kết hợp kháng nguyên kháng thể HCV hay kháng thề kháng HCV • Syphilis (Treponema pallidum): sàng lọc kháng thể treponema dạc hiệu Tuy nhiên giai đoạn cừa sổ, xét nghiệm huyết học dâ phát triển mạnh dộ nhạy vã độ dặc hiệu, chưa thực dâm bão việc phát virus lây qua dường truyền máu Cùng với phát triên kỳ thuật sinh học phân tử, kỳ thuật NAT (Nucleic Acid Testing) dã dược nhiều nước giới áp dụng sàng lọc máu, góp phần giúp giâm nguy lây nhicm qua dường truyền máu cho người nhận Kỳ thuật dã dược sử dụng nước phát triển vào cuối thập niên 1990 dầu nhừng nãm 2000 Hiện dà có khoảng 33 quốc gia ơên giới sử dụng kỹ thuật NAT cho phát HTV khoảng 27 quốc gia sử dụng kỳ thuật cho phát HBV [19] Kỳ thuật NAT có dộ nhạy vã dộ dặc hiệu cao cho phép phát nhân bàn dặc hiệu theo hàm mũ trình tự đích tác nhân gây bệnh từ lượng nhỏ virus, dỏ, cho phép phát sớm xác tác nhân gây bệnh Hơn the nữa, NAT sử dụng dể phát dồng thời HTV, HBV, HCV thông qua xét nghiệm thời gian 4-5 giờ, dâm bảo an toàn cho dơn vị máu truyền Tại Việt Nam kỳ thuật NAT dược triên khai thường quy Hà Nội, thành phố Hồ Chí Minh Huế năm 2015, Viện Truyền máu Huyết học cần Thơ triền khai NAT năm 2016 Tại Ngân Hảng Máu bệnh viện Truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí Minh, kỹ thuật NAT sàng lọc HBV, HCV, HTV dà thực từ tháng 02/2014 [71Với thời gian năm thực kỳ thuật NAT ưong sàng lọc máu tiến hành nghiên cửu, đảnh giá hiệu quã sàng lọc virus HBV, HCV, HĨV máu chế phẩm máu kỳ thuật NAT nhằm hướng tới công tác xét nghiệm sàng lọc sớm tác nhân lây qua dường truyền máu cách xác, dảm bào an tồn, chất lượng cho máu chế phẩm sử dụng diều trị Mục tiêu tổng quát: Đánh giá hiệu quà việc sử dụng xét nghiệm sàng lọc huyết học kỳ thuật NAT dể phát virus HBV, HCV, HTV người cho máu Ngân hàng máu Bệnh viện Truyền mãu Huyết học Mục tiêu chuyên biệt: Xác dịnh ti lệ dương tính HBV, HCV, HTV bang xét nghiệm sàng lọc huyết học Xác dịnh ti lệ dương tính HBV, HCV, HTV kỳ thuật NAT Đánh giá hiệu quà hai phương pháp kỳ thuật xét nghiệm huyết học kỳ thuật NAT CHƯƠNG I TỊNG QUAN Y VẪN 1.1 Tinh hình truyền máu 1.1.1 Trên giói Năm 1628, William Harvery - người Anh dà phát máy tuần hoàn Sự khám phá dã mờ kỷ nguyên ưong truyền máu [201 Năm 1665, Richard Lower - người Mỳ dã thảnh công ưong việc truyền máu dộng vật với nhau: giừa chó với chó khác cách mỏi lần rút máu từ chó nhỏ lại bù máu từ hai chó lớn Với tổng lượng máu rút tương dương với trọng lượng chó nhỏ sống hoạt dộng bình thưởng sau thí nghiệm Năm 1667, áp dụng thí nghiệm cùa L Lower, J Denis - Giáo sư triết học toán học Paris, cố vấn thầy thuốc cùa vua Louis XĨV dà truyền máu cũa bê cho bệnh nhân rối loạn hành vi, lần thử không thấy biều thí nghiệm dược tiến hành lần thứ hai phản ứng truyền máu xảy Hai tháng sau, bệnh nhân lại phát bệnh Denis dã thực lại liệu pháp này, hôm sau bệnh nhân tử vong Từ dó Giáo Hồng sắc lệnh cấm truyền máu Sau dó lâu, thí nghiệm tương tự khơng dược thực thời gian dài Năm 1818, J Blundell thực truyền máu cho phụ nử máu sau sinh với người cho chồng bệnh nhân Máu dược truyền syringe dụng cụ chứa dặt ưên cao, khơng kiểm sốt dược lượng máu truyền máu bị dông nên phàn ứng tan máu máu nhiều nguyên nhân gây chết người cho người nhận Ông lại tiến hành truyền máu cho 10 bệnh nhân bệnh nhân thành cơng, ngẫu nhiên phù hợp nhóm máu Từ dó, việc truyền máu ơở nên thơng dụng nhiều tai biến Phương pháp truyền máu thời kỳ truyền trực tiếp, nối thông giừa tĩnh mạch người cho tĩnh mạch bệnh nhân Sau dó J Blundell dã sử dụng biện pháp dùng bơm tiêm lấy máu người cho truyền cho bệnh nhân, việc truyền máu dờ phiền phức Năm 1869, Braxton Hicks truyền máu có dùng chống dơng dung dịch phosphat cho số bệnh nhân chày máu sân khoa hầu hết dều từ vong Năm 1901, Karl Landsteiner phát hệ nhóm máu ABO dó có nhóm máu A, B, o ngưng kết tố tương ứng, sau dó học trị ơng Decasstilo Sturli phát nhóm máu AB Đây bước ngoặc mờ thời kỳ ưong truyền máu Năm 1913, Reuben Ottenberg nêu vấn dề hịa hợp nhóm máu ữong truyền máu dưa sơ dồ truyền máu mang tên ông Từ dó việc truyền máu dược thực dựa ưên lựa chọn nhóm máu ABO hịa hợp người cho người nhận nên khắc phục dược tình ưạng tử vong tan máu truyền nhầm nhóm máu Năm 1914, Albert Hustin, L Agote, R Lewisohn, R Weil dã tim chất chống dông Natri Citrate việc bảo quản máu diều kiện lạnh dời Phương pháp dâ làm thay dổi quan niệm truyền máu trước người bệnh phải chở máu, máu dà chờ người bệnh Máu từ vùng chuyền sang vùng khác, từ hậu phương tuyền tuyển cấp cứu hàng loạt thương binh máu kịp thời Phương pháp dược sữ dụng ưong suốt chiến tranh giới thứ ĩ, thay cho phương pháp truyền máu trực tiếp Năm 1936 - 1939, Fantus dã xây dựng ngàn hàng máu dầu tiên Chicago Levin Stetson (năm 1939), Landsteiner Weiner (năm 1940) phát hệ nhóm máu Rh, với nhóm ABO dã cỏ ỷ nghĩa định làm giám rủi ro ưong truyền máu Năm 1943, J Loutit vã p Mollison chinh lý dung dịch chống dông ACD, dà tạo diều kiện bào quàn lâu dài máu 4°c, kéơ dài thời gian bào quàn máu - tuần Từ dó, việc truyền máu trờ nên rộng rãi cung cấp máu kịp thời thuận tiện hầu Hàng triệu lít máu dà dược thu gom phục vụ diều trị cho thương bệnh, binh Nãm 1952, Walter Murphy mô tã kỳ thuật lấy máu kín túi polyvinyl, sau dó, Gibson cộng phát triển hệ thống lấy máu túi dèo thay the chai thủy tinh làm cho quy trình lấy máu dược thực ưong hệ thống kín, dâm bào vơ trùng Năm 1957, ơng cộng dã tìm chất cống dông Ciưate - Phosphate - Dextrose (CPD), sau dó CPD có thêm Adenin (CPD-A) Những dung dịch CPD CPD-A hằn ACD trì chức hô hấp cùa hồng cầu, bào vệ màng hồng cầu trì áp lực thẩm thấu nên truyền máu, dặc biệt truyền máu khối lượng lớn an toàn thời gian lưu trừ làu dài kháng the HCV dề sàng lọc cho người hiến máu khả nhiễm HCV qua đường truyền máu giai đoạn cửa sổ khó tránh khỏi Điều khẳng định vai trò cùa xét nghiệm NAT việc góp phần nâng cao tính an tồn cùa chế phẩm máu sau dược sàng lọc kỳ thuật sàng lọc huyết học [18,32] AMPUUEK 3.3 RpQQrt Simple Rtwlt DgQII Order 05* NUmts* Patien t Pc4*r« D Pjhirt 04-1027^70 y 12/2016 1001 16 AM 03**1 tff S^D DỉưlHd DíKtír HOỈ0M OdeOxrứ Test I Workflow Tmeitamp 5/122016 RMUl! HÍVRHBVN 3.10:34 PM kame UPX2 ự AnQiPrtQ KPX2 ựĩaqMki AepllkẩrtOí* UPX2 ^CTU|M2965> g|rcc 013-06 57120016 31020 FM 3S81E7607F ự TaqkW? Option u®x? ^CTM|ÍKI2965> g »13-13 5rt2*2OW31O34FM ISftli: 76O7P CM2 Tđryol CH3 Target Crt< osnc Ro agent KzU pH System o ktorua' PositẾen TíMiUmp M20O16 12.02 2? P14S81E 760* Precede Sl»p» ựPnrr-yvPvettna n g »13-13 CypeP • Cyoo Cycáei 36.6 Ggnrilg StKMíhỉ 7471 6TKy201T A 00000 B oooo C; O.OOX 235203 Detail FUgs TWO STEP CORR-2 TWO STEP CORR-3 TW2 SPK CORR TW2 SPK CORR-3 ĨMU SPK C0RR4 TM71 CURVE Fn_FAJL3TTPUDkV1 TM72 COkFOENCEjNTERVAL-< TMT3 UNEAR_MOOEL_STEPMOU.1 Kct xét nghiệm MP- Cobas TaqScreen MPX PCR Bảng 4.4 So sánh tỷ lệ HIV-RNA dương tính với tác giả khác SỐ mẫu nghiên Tỷ lệ % HTVTác già, năm nghiên cứu cứu RNA Kết quà nghiên cứu BVTMHH TPHCM 6/2015-7/2016 233.849 0,0026 79.545 0,003 141.875 486.676 0,002 Kết quà nghiên cửu BVTMHH TPHC.M 2015 [71 Kết quã nghiên cửu Viện HH-TMTW (2014-2015) [ 141 Soisaang p (Thái lan 2009) [461 So sánh với sổ kết quã nghiên cứu cùa tác già khác, thấy kết quà cùa chúng tôi, tương dương với báo cáo BVTNíHH năm 2014: 0,003%, cao kết quà nghiên cửu cùa viện HHTMTW 2014-2015 Hiện nước giới dã áp dụng kỳ thuật NAT ưong sàng lọc máu ché phẩm máu, nhờ dỏ tỷ lệ lầy nhiẻm sau truyền máu dà giảm dáng kể Tại Pháp từ 2001-2003 với việc sử dụng kỹ thuật NAT ti lệ giâm từ 1/1.700.000 1/3.150.000 với HIV; 1/1.560.000 1/10.000.000 dối với HCV [441 Nhờ việc sử dụng XN này, vài nước Châu Âu dà làm giảm nguy lây nhiễm từ 1/400.000 xuống 1/2.5.000.000 dối với HIV 1/760.000 xuống 1/1,5.000.000 dối với HCV [451 4.33 Kết quà kiểm tra túi huyết tương Trong số 236 mẫu máu dương tính với NAT, chúng tơi tiến hành thữ lại túi huyết tương, kết quã 64,83% dương tinh; 35,17% túi huyết tương lại cho kết quã âm tinh Trong dó túi HCV cho kết q dương tính, túi HTV dều cho kết quà dương tính, 228 mẫu dương tính HBV kiểm tra lại ơên túi chi có 145 túi dương tính với HBV Như 83 túi cịn lại dương tính già Ngun nhân xuat ngoại nhiễm vào mẫu dược khuếch dại nhiễm chéo trình xừ lý mầu tay Đe hạn chế tượng ngoại nhiễm, dã khắc phục cách tất mẩu dền dược nhận bào quản dàm bão an toàn mặt sinh học, tuyệt dối vô trùng trình làm xét nghiệm 4.3.4 Kết quà NAT định tính định lưọng Ờ kết quà bâng 3.7 số 228 trường hợp phát HBV-DNA dương tính, chủng tơi dã tiến hành định lượng HBV-DNA, có 21/22B mầu cho kết dương tính 207 mẫu cho kết âm tính Điều dược giãi thích kỳ thuật NAT với kit MPX test v2.0 phát trường hợp HBV-DNA có kết định lượng 2,3 lU/ml (tương dương 13 copies/ml) dó ngưõng phát HBV-DNA cùa phịng lab mà gửi làm định lượng 300 copies/mL Do vậy, 207 mẫu ngường phát cho kết âm tính hồn tồn hợp lý Điều 13 Thơng tư 26.,,2OI3?TT-BYT đà chi rõ Thực xét nghiệm sàng lọc tác nhân lây truyền qua dường máu cho dơn vị máu, thành phần máu phải bào dảm yêu cầu sau: Thực xét nghiệm theo phương cách bảo đàm dộ nhạy, phịng ngừa nguy âm tính giả dược lành dạo dơn vị phê duyệt Kết quã xét nghiệm sàng lọc tác nhân lây truyền qua dường máu cho dơn vị máu, thành phần máu chi dược dùng de kiểm sốt an tồn cho dơn vị máu, thành phần máu nhằm phòng ngừa lây nhiễm tác nhân lây truyền qua đường máu vả không dược sử dụng dề trà lởi, tư vấn cho người hiến máu Vì với kết quà xét nghiệm kỳ thuật NAT ữong việc sàng lọc dơn vị máu hiến , chủng tơi hồn tồn tin tướng vào chất lượng xét nghiệm yên tâm vào dơn vị máu “ “ dã cấp cho bệnh nhân Virus viêm gan c virus có giai đoạn cửa sổ dài khoảng sau 80-100 ngày sau bị nhiêm kháng thể HCV xuất có thề phát dược phương pháp ELISA Tuy nhiên gặp trường hợp người hiến máu có HCV-RNA (+) mà thời gian chuyền dổi huyết kéo dài Tại Mỳ, từ năm 1999 den năm 2005, Hội chừ thập dó dà sàng lọc 48 ơiệu dơn vị máu kỹ thuật NAT phát 196 mẩu có HCV-RNA(+) mà dã dược XN kỹ thuật ELTSA âm tính, ưong có trường hợp người hiến máu có thời gian miễn dịch ẩn kéo dài năm mà khơng có chuyền dổi huyết thanh, khơng có kháng thể HCV dược phát Kết bàng 3.7 cho thấy có trường hợp nhiễm HCV phát thêm kỹ thuật NAT, chì có trường hợp cho kết định lượng HCV-RNA dương tính (với ngưởng phát 1.000 copies/ml huyết thanh) Tuy nhiên chưa khẳng định mẫu máu cịn lại khơng bị nhiễm virus Rắt mẫu có nồng dộ virus 500 copies/ml nên chưa phát dược bời ngưởng phát xét nghiệm NAT với kit MPX v2.0 dành cho HCV-RNA 6,8 TU/ml (tương dương 39 copies/ml) AMPULW* Pgtei! Order 00-10274?» Oder DataTT-na SW2O16 37 47 PM OdemJby US Sarnie o 10274229 Diuod No Oocfr *«4C4lat OdCcnứ Pa Wot Pai*cM c» Patent Na-ne TH! I LPX2 Mr^NR.M8WXWR Worfcflow P'9« nuo STEP_CORR nuo STEPZCOW ĨM42 SPK^CORR-2 ĨM42 SPKJXMCR ĨM4? SPK_GORR4 ĨM71 CURVtrrT.FAL.STEPMOM TM7? CO*FO€NC£JVTFRvAL-4 UNLAR_MOO£L_STtPMOM-1 CH? Target 326 CM3 trrgH Cycle# CH4 OSÕC SyttamD AeCAP 1394564) cnipMMS) A crv(j$rt%5) PM4I0R ma TWwtlamp no Cicd rua S3A1EBA31 F ISAItBAMF (J »15-24 5*2010 1Q.» PM g tcc 015 -24 5*201003454 PM fl 0015-24 5*2016 »11 PM CydoW Cyda# Reader* K*H Cjt,ic»Q So^ N3DỈÌSÌÍ1LKẲ ULSumfctt ti33d«2ữữXír catxator A 000008 Kct xét nghiệm ID - Cobas TaqScreen MPX PCJR SSA1EBA31 F 4.3.5 Kiềm ưa chất lượng quy trình kỹ thuật NAT Trong thời gian nghiên cứu dược thực từ 6/2015 dển 7/2016, quy trình xét nghiệm NAT sử dụng kit MPX test version hệ thống máy Cobas s201 Hệ thống dược thực kiểm fra chất lượng dinh kỳ mỏi năm lần tồ chức One World Accuracy (NRL, úc) Thời gian dợt ngoại kiểm BV.TNÍHH tham gia thời gian tiến hành nghiên cứu vào 24/06/2015, 30/09/2015 16/03/2016 Tất dợt ngoại kiềm BV.TMHH tham gia cho thấy mẫu dưong tính HBV, HCV, HTV dều dược hệ thống sàng lọc NAT bệnh viện phát Kể từ lúc hệ thống NAT Cobas s201 dưa vào hoạt dộng thức xét nghiệm cho ngân hảng máu, phòng xét nghiệm dạt tiêu chuẩn cho xét nghiệm sàng lọc NAT tổ chức ngoại kiểm NRL dánh giá ngân hảng máu BV.TMHH Trong dạt ngoại kiềm 24/06/2015 30/09/2015 tổ chức NRL dã chuẩn bị mẫu có nồng dộ HBV DNA 0,4 UĨ/mL HCV RNA I UT/mL Đây nồng độ gần thấp giới hạn phát (LoD limit of detection) thuốc thừ dược sử dụng phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm Các mẫu nồng dộ thấp không dược NRL đánh giá Kết quà sàng lọc BV.TMHH phát dược tất cà mảu HBV-DNA có nồng dộ 0,4 ĨƯ/ml chi phát dược mẫu HCVRNA có nồng dộ I ĨU/ml Như vậy, xét nghiệm sàng lọc HBV kỳ thuật NAT Bệnh Viện có dộ nhạy cao với HBV Tuy nhiên, nghiên cửu cho thấy phương pháp NAT phù hợp với hai loại virus HCV HTV Đối với việc xét nghiệm dựa kháng nguyên p24 dỏng vai trò quan trọng Với sở pháp lý dã có áp dụng dối với kỹ thuật NAT, tổ chức FDA dã khuyến cáo dể ngừng việc xét nghiệm kháng nguyên p24 dối với HTV-1 dựa trôn sỡ phương pháp sàng lọc RNA dối với HIV-1 phương pháp tối ưu hơn, bệnh nhân chi nhiễm thời gian ngắn dồng thời, kết quà xét nghiệm kháng nguyền p24 dương tính dồng nghía với kết xét nghiệm RNA dương tính Kỳ thuật sàng lọc NAT dặc biệt phát huy tốt ưu điểm thời gian dầu bệnh nhân vừa nhiễm HIV, lượng virus thấp nen lượng kháng thể IgM ĩgG chưa dược sàn xuất dù để dược phát nhừng phương pháp huyết thơng thường Bên cạnh dó, phương pháp NAT giúp phần biệt giũa bệnh nhân bị nhiễm HĨV thật nhùng bệnh nhân chi có triệu chứng tương tự Đồng thời, việc sử dụng kỳ thuật sàng lọc HCV RNA có thê phát dược nhân lên virus giúp chuân doán HCV với dộ nhạy dộ dặc hiệu cao so với xét nghiệm enzyme gan [511Qua kết quã nghiên cứu bàn luận với việc tham khảo tài liệu cho thấy kỳ thuật NAT kỳ thuật có dộ nhạy độ dặc hiệu cao Việc dưa kỳ thuật NAT vào sàng lọc thường quy cho người hiến máu góp phần rút ngắn giai doạn cừa sồ cùa nhiễm HĨV, HBV, HCV nâng cao chất lượng an toàn truyền máu với nhu cầu máu hàng triệu dơn vị máu năm Kỹ thuật NAT bồ khuyết kết quà huyết chưa phát dược ưong giai doạn cửa số trường hợp có biến thề virus Vì vậy, hai kỳ thuật NAT ELISA nên bồ sung cho 4.4 Đánh giá hiệu quà hai phương pháp kỹ thuật xét nghiêm huyết học kỹ thuật NAT 4.4.1 Nghiên cứu hiệu sử dụng kỹ thuật NAT việc nâng cao tính an toàn sinh học chế phẩm máu Kỳ thuật NAT kỳ thuật sinh học phân tữ có dộ nhạy tốt so với kỳ thuật ELĨSA Trong số 215.256 dơn vị máu dược sàng lọc âm tính với HBsAg, KT-HCV, KN-KT HĨV dược xét nghiệm vòng kỳ thuật sinh học phân từ NAT, dã phát loại bị thềm 228 dơn vị máu có kết q HBV-DNA dương tính (0,105%), dơn vị máu có kết quà HCV-RNA dương tính (0,0009%) dơn vị máu có kết q HTV-RNA dương tính (0,003%) Kỹ thuật NAT phát dược trường hợp HCV (+) chí < 500copies/ml Ọua kết quã nghiên cửu bàn luận với việc tham khảo tài liệu cho thấy kỹ thuật NAT kỳ thuật có dộ nhạy dộ dặc hiệu cao Các xét nghiệm sàng lọc máu dựa ưén nguyên tắc xét nghiệm miễn dịch enzyme phát kháng the gây virus kháng nguyên virus Hơn hai tỳ người trẽn toàn giới bị nhiễm HBV, dây lả nguyên nhàn hàng dầu gây bệnh gan Trong số này, 350 triệu người mac bệnh mạn tính, có nguy ung thư gan xơ gan Các công nghệ sàng lọc cớ dược thiết kế dể phát kháng thề lõi kháng nguyên bề mặt Tuy nhiên, chi số nhiễm trùng không xuất cho den tám tuần sau nhiễm trùng Ngoài ra, ưên toàn giới có 170 triệu người bị nhiễm HCV 40 triệu người nhiễm HTV Đầy mối quan tâm toàn cầu nghiêm ơọng Máu dược xử lý thành thành phần máu dể cho phép nhiều bệnh nhân dược hường lợi từ người hiến Do dó dơn vị máu thu thập dược từ người hiến giai đoạn cừa sổ bị nhiêm có thề dược truyền vào tối da bốn người nhận có thẻ dược thêm vào bể chửa 1.000 dơn vị để sàn xuất sản phẩm có chứa máu Mối dc dọa lớn dối với an toàn việc cung cấp máu việc hiến máu nhùng người hiến "huyết thanh” Ưong thời kỳ’ "cửa sổ" nhiễm trùng ban dầu dão ngược huyết phát dược Mầu thời kỳ cừa sổ có tải lượng virus thấp Việc phát mẫu tài lượng virus thấp đòi hỏi xét nghiệm nhạy Việc dưa kỳ thuật NAT vào sàng lọc thường quy cho người hiến máu góp phần rút ngắn giai doạn cửa sổ nhiễm HTV, HBV, HCV nâng cao chất lượng an toàn truyền máu với nhu cầu máu hàng triệu dơn vi máu năm Do dó, sức mạnh NAT nam khả nãng phát acid nucleic virus thay có mặt cùa kháng the Kỳ thuật NAT bổ khuyết nhùng kết quà huyết chưa phát dược ưong giai doạn cữa sổ, giai đoạn nhiễm “cầm“ trường hợp có biến thể cùa virus NAT dược sử dụng thêm vào xét nghiệm kháng thẻ số người theo lý thuyết, lượng virus rơi xuống mức giới hạn phát kháng thể có thề phát dược Hoặc số trường họp nhiễm trùng mãn tính virus, kỹ thuật khơng phát dược [ 10], Kỳ thuật NAT kỳ thuật sinh học phân từ có dộ nhạy tốt so với kỳ thuật ELISA 4.4.2 Đánh giá hiệu quà hai phưoug pháp kỹ thuật xét nghiệm huyết học kỹ thuật NAT Mặc dù NAT phát dược virus giai doạn cửa số dâ chửng minh ưên cịn nguy ầm tính giả nồng dộ virus máu thấp HBV chép chậm so với HĨV HCV thời gian tăng lên gấp dơi HBV ước tính khoảng 2,56 ngày Đổ phát nhiễm HBV thể ẩn, dàm bảo an tồn cho dơn vị máu truyền MP NAT dược sử dụng dế làm giảm giá thành xét nghiệm nước dang phát triền Tuy nhiên nước có vùng dịch tễ nhiễm HBV cao MP NAT cho nhiều kết pool ban dầu phản ứng sau dó nhiều chế phẩm dề lại chờ kết xét nghiệm ID NAT cho dến tìm mẫu phản ứng Do dó tiến hành sàng lọc ID NAT tốt sàng lọc MP NAT vùng dịch tẻ cao Mỗi quốc gia phải có chiến lược xét nghiêm sàng lọc cho dựa ơên quần thể nhiễm HBV, phương pháp sàng lọc khác giá thành hiệu quã Bền cạnh kỹ thuật sừ dụng hóa chất chiếu xạ thích hợp bất hoạt virus dược nhiều trung tâm truyền máu sử dụng việc sữ dụng vaccin HBV, HCV quần thể dóng vai trị quan trọng ưong việc giâm thiều nguy lây nhiềm Và việc tuyên truyền nâng cao nhận thức với người hiến máu dóng vai trị vơ quan trọng, dã có yếu tố nguy lây nhiễm khơng nên hiến máu Vì vậy, hai kỳ thuật NAT ELIS A nên bổ sung cho nhau, kỳ thuật NAT không thề thay kỳ thuật ELĨSA sàng lọc máu 4.43 Hạn chế cùa nghiên cứu • Số lượng mẫu dành cho nghiên cửu chưa dù lớn, cờ mảu nhò so với nước khu vực, từ dó hạn chế trình dưa dánh giá hiệu cùa việc áp dụng kỳ thuật NAT ơong ưình thực sàng lọc túi máu chế phẩm máu • Trong thời gian thực dề tài, phòng xét nghiệm NAT chưa ngăn tách biệt với khu vực khác gây nhiễu kết quà số mẩu Hiện tình trạng dă dược khắc phục • Kỹ thuật N/\T có dộ nhạy cao nơn có tý lệ mảu cho kết quà dương tính giã, dó cần kỹ thuật có dộ dặc hiệu cao xác nhận lại trước tư vấn kết quà xác cho người hiến máu KÉT LUẬN Qua kết quà nghiên cứu bàn luận trên, xin dưa số kế luận sau Xét nghiệm sàng lọc kháng nguyên kháng thể kỳ thuật xét nghiệm huyết học với tỷ lệ HBsAg 1,94%; anti HCV 0,16 %; HTV AgAb 0,12% Kỹ thuật xét nghiệm NAT có tỷ lệ HBV 0,097% ; HCV 0,0008%, HĨV 0,0026% Kỹ thuật NAT dà phát thêm 228 mẫu dương tính HBV DNA, mẫu dương tính HCV-RNA mẫu dương tính HĨV- RNA Kỳ thuật NAT kết hợp với kỳ thuật huyết học rút ngắn giai đoạn cửa sỗ cho kết quà xác, nhanh hơn, tránh trường hợp âm tính giả góp phần bão dàm an tồn truyền máu phịng lây nhiẻm HTV, HCV, HBV cho người bệnh dược truyền máu KIÉN NGHỊ Qua kết bàn luận xin dưa số kiến nghị sau: Thực kỳ thuật NAT sàng lọc máu chế phẩm máu bổ ượ cho kỳ thuật mien dịch kháng nguyên kháng thể nhằm giúp giâm nguy lây nhiễm bệnh lây qua dường truyền máu dặc biệt ưong giai doạn cửa số Thúc dẩy tiến trình tập trung hóa ngân hàng máu xây dựng phòng xét nghiệm dù tiêu chuẩn tạo dộ ngũ bác sỹ, kỳ thuật viên có trình dộ cao nhằm nâng cao chất lượng an tồn truyền máu TÀI LIẸU THAM KHẢO TIẾNG VTẸT Bạch Khánh Hòa, Phạm Tuấn Dương, Trần Vân Chi, Trần Thúy Lan , Trần Ọuang Nhật , Hoàng Văn Phương (2012), “Ket quà xét nghiệm sàng lọc HBsAg, kháng thể HCV, Kháng nguyên kháng thể HĨV, Kháng thể giang mai người hiến máu Viện Huyết học Truyền máu TW“, Tạp chí Y học - Chuyên dề Hội nghị khoa học huyết học Truyền máu toàn quổc 20 ỉ2, tr 441-445 Bộ y tế, cục phòng chống HTV/ AIDS, ước tính dự háo nhiễm HĨV/AỈDS Việt Nam nám 2007-2012 (2009) Bộ y tế (2015), Ke hoạch phồng chổng bệnh viêm gan virus giai đoạn 2015-2019 kèm theo định số 739/QĐ-BYT việc han hành kế hoạch phòng chống bệnh viêm gan virus giai đoạn 2015-2019, Hà Nội Bùi Thị Mai An, Nguyền Thị Y Lăng, Đổ Thung Phấn cộng (2002), “Tình hình nhiễm HĨV HBV, HCV bệnh nhân bị bệnh máu Viện Huyết học Truyền máu Bệnh viện Bạch Mai năm 1998-1999, Công trinh nghiên cứu khoa học Bệnh viện Bạch Mai 2001-2002, NXB Y học, tr 321-328 Đào Đinh Đức, Lê Đãng Hà (1997), “Dịch tễ học viêm gan virus B Việt Nam”, Tạp chiy học thực hành Việt Nam, (9), 1-3 Đỏ Thị Vinh An (2003), Bước đầu áp dụng ky thuật sinh học phân từ Polymerase Chian Reaction (PCR) chấn đoán sớm HCVvà HCV, Luận văn thạc sỳ, tr 4045 Đỏ Trung Phấn (2000), An toàn truyền máu, Nhà xuất bàn khoa học kỳ thuật tr.46154 Đỏ Trung Phấn, Nguyễn Chí Tuyển, Thái Ọuý, Phạm Tuấn Dương, Đồ Mạnh Tuấn ( 1999), “Hiệu quà vận dộng hiến máu sàn xuất chể phẩm máu", Y học Việt nam (232), 1-18 Hoàng Văn Phóng (2014), Nghiên cứu thực trạng vâ hiệu sổ giòi pháp nâng cao chất lượng máu, chế phẩm máu trung tâm truyền máu Hài Phòng, luận án tiến sĩ y học 10 Lê Thị Hương, Trương Quý Dương (2012), “Kết quã sàng lọc kháng thể HTV, kháng thề HCV, HBsAg, giang mai, sốt rét người hiến máu tình nguyện bệnh viện da khoa tinh Hịa Bình (3/2007 - 3/2012)“, Tạp chí Y học Việt Nam Chuyền dề Hội nghị khoa học Huyết học Truyền máu toàn quốc 20 Ị2 ",tr 286 291 11 Nguyễn Anh Trí, Bạch Khánh Hịa, Chừ Thị Thu Hường, Trần Vân Chi (2010), “Tình hình sàng lọc bệnh lây truyền qua dường máu Việt Nam, thực trạng giải pháp", Nhà xuất hãn y học: Một sổ chuyên dề huyết học- Truyền máu, tập 12 Phan Nguyễn Thanh Vân, Hoàng Thị Tuệ Ngọc, Nguyễn Châu Tnrờng, Nguyễn Thị Như Nguyện, Phù Chí Dùng (2015), “Bước dầu triền khai kỳ thuật khuếch dại acid nucleic (KT N/\T) sàng lọc máu dề phát HIV, HCV HBV Bệnh viện Truyền máu Huyết học", Hội nghị truyền máu huyết học phía Nam lần 3, 19(4):373-376 13 Trần Văn Bé (2003), “Thực hành Huyết học - Truyền máu Kỳ thuật Lâm sàng", Nhà xuất bàn Y học, (10), tr.287-303 14 Viện Huyết học - Truyền máu TW (2014), Báo cáo tổng kết nám 2014, kế hoạch hoạt động năm 2015, Hà Nội 15 Vũ Thủy An, Phạm Ngọc A, Trần Văn Bào, Nguyễn Trường Sơn (2012), “Tình hình sàng lọc bệnh nhiễm trùng qua dường máu người hiến máu tình ngun khu vực Đơng Nam Bộ trung tâm truyền máu chợ Rẩy tù 2009-2011 “Tạp chiy học, chuyên dề: Hội nghi Khoa học toàn quốc 2012 ”, tr 272-279 16 Vò Văn Huy (2000), ứng dụng kỹ thuật PCR dề phát virus viêm gan B huyết người cho máu, Luận án Thạc sỹ y học, tr.45-49 TIẾNG ANH 17 Alter HJ (1991), “Descartes before the horse: I clone, therefore I am: the hepatitis c virus in current perspective", Ann Intern Med., !5(8):644-649 18 Arthur Bird, Anthon Heyns (2006), “Blood Safety - TTD Nucleic Acid Amplification Technology (NAT)", Vox Sanguinis, 91(3), pp,75-90 19 Barbaba R, Michclina N, (2005), ‘Immunology of Hepatitis B virus and Hepatits c virus infection", Nat Immunol, 5: 215-229 20 Belay Tessema (2003-2007) “Blood banking in KIEV Municipal Blood center Blood supply system, blood screening and sero - epidemiology of HBv/HCV in fection", Vox Sanguinnis, 68,pp.15-18 21 Bukh J.,Purcell RH., Miller RH (1992), ‘Importance of primer selection for the detection of hepatitis c virus ARN with the polymerase chain reaction assay” Proa Nat Acad Sci USA, 89: 187-191 22 Bukh J, Miller RH, Purcell RH (1995), “Genetic heterogeneity of hepatitis c virus: quasispecies and genotypes", Seminars in liver disease 23 Busch MP, Glynn SA, Stramer SL, et al (2005), “A new strategy for estimating risks of transfusion-transmitted viral infections based on rates of detection of recently infected donors", Transfusion 45:254-264 24 Busch MP, Lee LL, Satten GA, et al (1995), “Time course of detection of viral and serologic markers preceding human immunodeficiency type seroconversion: implications for screening blood and tissue donors”, Transfusion, 35:91-97 25 Centers for Disease Control and Prevention (www.cdc.gov) Fact Sheet Human Immunodeficiency Virus Type October 1998 26 Choo QL., Richman KH, Han JH (1991), “Genetic organization and diversty of the hepatitis c virus”, Proc Natl Acad Set USA ,88 : 2451-2455 27 Choo Ọ-L, Weiner AJ, Overby LR, et al (1990), “Hepatitis c virus: the major causative agent of viral non-A, non-B hepatitis", Br Med Bull, 46(2):423-441 28 Chisari FV, Ferrari c Viral Hepatitis In: Nathanson N et al.(1997), “Viral Pathogenesis", Philadelphia, Lippincott-Raven: 745-748 29 Courouce AM, Le Marrec N, Girault A, Ducamp s, Simon N (1994), “Anti hepatitis c virus (anti-HCV) seroconversion in patien undergoing hemodiallysis: comparison of second-and third generration anti-HCV assay", Transfusion, 34, pp.790-795 30 Dong Hee Seo, et all (2015) “Occull hepatitis B virus infection and blood transfusion", World Journal of Hepatology, (3): 600 - 606 31 D Joe Chaffin MD (2011), Transfusion-transmitted diseases Part 1, (www: bbguy.org 32 Fabrizi F, Poordad FF, Martin p (2002), “Hepatitis c infection and the patient with endstage renal disease", Hepatology, 36, pp,3-10 33 Guidotti LG., Chisari FV (2006), “Immunology and Pathogenesis of Viral Hepatitis", Annul Rev Pathol 1:23-61 34 History of blood transfution and blood transfution medicine., http://www.bloodbook conV ơans-history.html 35 Hitzler WE, Runkel s (2001), "Routine HCV PCR screening of blood donations to identify early HCV infection in blood donors lacking antibodies to HCV”, Transfusion, 41:333-337 36 Hu Y, Shahidi A., Park s., Guifoyle D„ Irvin Hirshfield 1.(2003), “Detection of extrahepatic Hepatitis c virus replication by a novel, highly sensitive, single-tube nested polymerase chain reaction", Am J Clin Pathol, 119 : 95-100 37 Hwang SJ., Lee SD (1996), “Hepatitis c in Southeast Asia", Medical Progress, 23: 98-201 38 Kahn JO, Walker BD (1998), “Current Concepts: acute human immunodeficiency virus type infection”, N Engl J Med., 339:33-39 39 Kao JH, Chen PJ, Lai MY, Chen DS (2002), “Genotypes and Clinical Phenotypes of Hepatitis B virus in patients with Chronic Hepatitis D virus Infection", Clin Microbiol,'40: 1207 -1209 40 Kato N (2001), “Molecular vinology of hepatitis c virus", Acta Medica Okayama, 55: 33-159 41 Khalili M (2006), “Coinfetion with hepatitis viruses and HIV", HIV Insite Knowledge Base Chapter, www.hi.vinsite.ucsf.edu 42 Krekulova L., Rehak V., Riley LW (2006), “Structure and function of hepatitis c virus protein 15 years after", 51: 665-680 43 Kuan-Tsou Lin, et al (2013), “Detection and identification of occult HBV in blood donor in Taiwan using a commecial, multiplex, multi-dye nucleic acid amplifiaction technology screening test”, Vox Sangunis, 106,103-11 44 Jan G Wilson (1997), "Minireview: Inhibition and Facilitation of Nucleic Acid Amplification”, Applied and Environmental microbiology, vol 63, no 10 45 Locamini s, MD, (2004), “Molecular virology of Hepatitis B virus 44, Seminars in liver disease, 24:3-10 46 Mahoney FJ (1999) “Update on Diagnosis , Management, and Prevetion of Hepatitis B virus infection44, Clin Microbiol Rev, 12: 351-36 47 McCutchan FE.(2006), “Global Epidemiology of HIV ”, Journal of Medical Virology, 78:S7-SI2 48 McFalan w., Mvere D., Shandera w., Reinngold A (1997), “Epidemiology and prevention of ttansfution Assciated Human Immunodeficiency Virus transmission in Sub - Sahara Africa”, Vox Sanguinis, 72, pp.85-92 49 McCoy R, Watson K, Kosky M (1999), “Aguidc dianogsis”, Physician, 28, pp, 1923 50 Mollison P.L., Engilfriet c.p, Contteras (1997), “Infectious agent transmitted by transfusion", Blood transfusion in clinical medicine, 17, pp 176-192 51 Murthy KK Henrard DR Eichberg JW, et al (1999), “Redefining the HIVinfectious window period in the chimpanzee model: evidence to suggest that viral nucleic acid testing can prevent blood-bome transmission”, Transfusion, 39:688693 52 Neurath AR, Kent SB, Strick N, et al.(!986), ‘identification and chemical synthetis of a host cell receptor binding site in hepatitis B virus” 53 Proffitt MR et al (1993), “Laborator}' diagnosis of human immunodeficiencyvirus infection “, HIV AIDS, pp.203-219 54 Raymonnd D., Swan T (2004), “Hepatitis c virus (HCV) and HTV/HCV coinfection A critical review' of research and ữeatment”, Treament Action Croup, New York 16: 266-288 55 Reeves JD and Dorns WR (2002), “Human Immunodeficiency Virus Type 2”, Journal of General Virology, 83:1253-1265 56 Rckha Hans and Neelam Marwaha (2014), “Nucleic acid testing - benefits and constraints**, A.tian J Transfus Sci., (l):2-3 57 Roth WK, Weber M, Petersen D, et al (2002), “NAT for HBV and anti-HBc testing increase blood safety”, Transfusion, 42:869-875 58 S.Laperrche (2005), ‘impact of NAT on seroological testing in blood screening", Surveillance and Screening of Blood Borne Pathogen, pp 59 Screening Donated Blood for Transfusion - Recommendations World Health Organization 2010 Transmissible Infections: 60 Silvano Wendcl et al (2007), “Primary screening of blood donor nucleic acid testing ( NAT ) for the detection of hepatits B infection by studying diluted NAT yield samples" Blood transfusion, 13(2): 227 -232 61 Soisaang Phikulsod (2009), “One year experience of nucleic acid technology testing for human immunodeficiency virus Type 1, hepatitis c virus, and hepatitis B virus in Thai blood donations", Blood donor and blood collection, p:l 126- 1135 62 Stramer SL, Glynn SA, Kleinman SH, et al (2004), “Detection of HIV-1 and HCV infections among antibody-negative blood donors by nucleic acid-amplification testing*’, IV Engl J Nied., 351:760-768 63 SzmunessW, Stevens CE, Harley EJ, et al (1980), “Hepatitis c vaccinedemonsữation of efficacy in a controlled clinical ưial in a high-risk population in the United Stated" 64 Weber B (2002), "The isolated anti - HBc reativity: New developments Journal of Microbiology", 40, pp, 451 - 458 65 World Health Organization (2002), Hepatitis B Department of Communicable Disease Surveilance and Response 66 World Health Organization Introduction of Hepatitis B Vaccine into Childhood Immunization Services Geneva, WHO, 2001 (unpublished document WHO/V&B/01.31 available on request from Department of Vaccines and Biologicals, World Health Organization, 1211 Geneva 27, Switzerland) ... năm thực kỳ thuật NAT ưong sàng lọc máu tiến hành nghiên cửu, đảnh giá hiệu quã sàng lọc virus HBV, HCV, HĨV máu chế phẩm máu kỳ thuật NAT nhằm hướng tới công tác xét nghiệm sàng lọc sớm tác... huyết học dược sàng lọc NAT Do dó quỵ trình sàng lọc HBV, HCV HTV kết hợp sàng lọc huyết với sàng lọc NAT sau - Mầu máu hiến tình nguyện sau nhận trước hết dược sàng lọc bang kỳ thuật huyết với... riêng lè, dặc biệt phù hợp cho xét nghiệm sàng lọc máu với số lượng lớn 1.4.2.5 Vai trò kỹ thuật NAT sàng lọc HBV, HCV HĨV NAT (Nucleic Acid Testing) thuật ngừ chung dể chi nhiều công nghệ khác