TỔNG QUAN kỹ THUẬT cắt LẠNH TRÊN mô BỆNH học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI - - NGUYỄN GIA TIẾN TỔNG QUAN KỸ THUẬT CẮT LẠNH TRÊN MƠ BỆNH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2015 – 2019 HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI - - NGUYỄN GIA TIẾN TỔNG QUAN KỸ THUẬT CẮT LẠNH TRÊN MÔ BỆNH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2015 – 2019 Người hướng dẫn khoa học: ThS Nguyễn Hữu Quốc HÀ NỘI - 2019 ĐẶT VẤN ĐỀ Kỹ thuật cắt lạnh (frozen section) kỹ thuật mô bệnh học nhanh, thường áp dụng định hướng phẫu thuật Với tiêu kỹ thuật cắt lạnh, nhà giải phẫu bệnh nhận biết tế bào bình thường hay bất thường hình thái, cấu trúc hoạt động chúng thông qua phương pháp nhuộm nhanh Đây kỹ thuật phát triển phổ biến hàng đầu giải phẫu bệnh, trợ thủ đắc lực giúp nhà giải phẫu bệnh xác định chất, quy luật phát sinh phát triển tổn thương tế bào mơ góp phần hỗ trợ chẩn đoán, định hướng phẫu thuật nhằm nâng cao hiệu điều trị Theo dòng phát triển y học đại, lĩnh vực Giải phẫu bệnh có nhiều kỹ thuật chẩn đốn mơ bệnh học tế bào học, nhiên nhiều trường hợp, việc thực kỹ thuật cắt lạnh mảnh sinh thiết có ý nghĩa Hiện Việt Nam, vị trí giải phẫu bệnh sàng lọc chẩn đoán ngày quan trọng, sở y tế có khoa ung bướu thiết phải có kỹ thuật cắt lạnh xét nghiệm sinh thiết tức nhằm hỗ trợ phẫu thuật, đáp ứng nhiệm vụ y tế sức khỏe người bệnh Dù gặp số trở ngại sở vật chất nhân lực, việc triển khai kỹ thuật kỹ thuật giải phẫu bệnh khác phát triển Thời gian gần đây, với phát triển mạnh mẽ kỹ thuật siêu âm, CT – scanner, nội soi, phẫu thuật nội soi, sinh thiết qua nội soi hay hướng dẫn siêu âm… mang đến phong phú đa dạng mẫu xét nghiệm mô bệnh học Các kỹ thuật mô bệnh học phát triển mạnh, bên cạnh kỹ thuật thường quy có nhiều kỹ thuật khác hóa mơ, hóa mơ miễn dịch, sinh học phân tử giải phẫu bệnh…Với mục tiêu nâng cao chất lượng chẩn đoán, đáp ứng yêu cầu từ bác sỹ lâm sàng hết quyền lợi người bệnh, kỹ thuật cắt lạnh thường ưu tiên hàng đầu để xét nghiệm sinh thiết tức thì, đồng hành với phương pháp nhuộm nhanh Hematoxylin – Eosin, xanh Toluidine Diff – Quick Với khóa luận tốt nghiệp Cử nhân Kỹ thuật Y học, tiến hành thực đề tài: "Tổng quan kỹ thuật cắt lạnh giải phẫu bệnh" với hai mục tiêu sau: Trình bày vai trị kỹ thuật cắt lạnh giải phẫu bệnh Trình bày cách thức tiến hành, ưu nhược điểm cách khắc phục lỗi tiến hành kỹ thuật cắt lạnh TỔNG QUAN Đại cương xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể Giải phẫu bệnh học khoa học nghiên cứu tổn thương tế bào, mô quan trạng thái bệnh lý khác Từ hình thái học, phải liên hệ đối chiếu với lâm sàng để tìm hiểu chế sinh bệnh, góp phần nâng cao chất lượng chẩn đốn, phòng bệnh điều trị Với kỹ thuật kinh điển giải phẫu bệnh học tế bào bệnh học, trang bị đủ kiến thức chẩn đốn 90% bệnh thường gặp Việt Nam [1] Xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể phận quan trọng giải phẫu bệnh với mục đích phát nghiên cứu tính chất, đặc điểm tổn thương thuộc phạm vi mô tế bào Ở mức độ định, cho phép tìm hiểu ngun nhân gây tổn thương, góp phần giải thích chế bệnh sinh quy luật phát sinh phát triển tổn thương Trong bệnh học, loại xét nghiệm có tính xác cao độ tin cậy lớn kỹ thuật tiến hành quy tắc người đọc có kiến thức kinh nghiệm Đã từ lâu, xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể trở thành trợ thủ đắc lực cho nhà giải phẫu bệnh học, nhà lâm sàng học không thiếu nhà nghiên cứu y học Trên thực tế, đối tượng xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể phong phú, phạm vi áp dụng ngày mở rộng giới Việt Nam, đặc biệt phát chẩn đoán bệnh với trợ giúp kỹ thuật siêu âm, X – quang, CT – scanner, nội soi, sinh thiết qua nội soi hay hướng dẫn siêu âm Ngày nay, kết xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể áp dụng rộng rãi cho cơng tác chẩn đốn, điều trị giảng dạy nghiên cứu khoa học chuyên khoa lâm sàng vả cận lâm sàng, đặc biệt khoa ung bướu Tổng quan kỹ thuật cắt lạnh 2.1 Khái niệm Kỹ thuật cắt lạnh phương pháp xét nghiệm mô bệnh học nhanh, mơ đóng băng, cắt mảnh mơi trường lạnh nhuộm màu tiêu phương pháp nhuộm nhanh Kỹ thuật thường áp dụng định hướng phẫu thuật, ra, mảnh cắt lạnh cịn dùng để nhuộm số kỹ thuật đặc biệt nhuộm hóa mơ miễn dịch miễn dịch huỳnh quang [2], [3] 2.2 Lịch sử phát triển Lịch sử kỹ thuật cắt lạnh thực ngày sở giải phẫu bệnh dựa mô tả bác sĩ Louis B.Wilson vào năm 1905, Wilson phát triển kỹ thuật từ báo cáo trước theo đề nghị bác sĩ phẫu thuật William Mayo, người sáng lập phịng khám Mayo (Minnesota, Hoa Kỳ) Wilson vùi mơ dung dịch dextrin làm đông carbon dioxide, mảnh cắt nhuộm màu xanh methylene mà không qua q trình cố định hay chuyển đúc thơng thường, kỹ thuật giúp rút ngắn thời gian cách đáng kể [4] Với tiêu cắt lạnh ngày phần lớn sở giải phẫu bệnh có thêm bước cố định nhanh trước nhuộm Hematoxylin – Eosin (H&E) gắn vĩnh viễn, kỹ thuật không thay đổi [5] Thật không may, tài liệu tiêu chuẩn bệnh học vào đầu kỉ 20 bác sĩ phẫu thuật chưa tin tưởng vào kỹ thuật mà cho chẩn đoán chất khối u mắt thường dựa kinh nghiệm phẫu thuật Những nỗ lực Hiệp hội Bệnh học lâm sàng Hoa Kỳ ủng hộ tích cực từ tiến sĩ Joseph Bloodgood (bệnh viện Johns Hopkins, Maryland, Hoa Kỳ) việc giới thiệu đưa kỹ thuật cắt lạnh trở thành công cụ chẩn đoán phẫu thuật [5] Các báo cáo trước bệnh viện bác sĩ Thomas S.Cullen liên quan đến kỹ thuật cắt lạnh với mẫu cố định formol bác sĩ giải phẫu bệnh William H.Welch thử nghiệm quy trình Cullen khơng có kết lâm sàng Do đó, Wilson thường ghi nhận người tiên phong kỹ thuật [4], [5], [6] Nhằm đáp ứng yêu cầu mảnh cắt mỏng đảm bảo chất lượng, mô phải đơng lạnh nhanh cắt nhiệt độ lạnh thích hợp, mơ hình máy cắt lạnh mơ tả tài liệu Linderstrøm-Lang Morgensen (1938) [7] Qua nhiều năm nghiên cứu thử nghiệm, mẫu máy cắt lạnh (cryostat) phát triển vào năm 1954 có thiết kế đặt máy cắt mơ làm lạnh hệ thống buồng làm lạnh nhanh với nhiều ưu điểm [2], [7], nhờ mô làm lạnh nhanh cắt mảnh điều kiện nhiệt độ tối ưu nhất, chất lượng mảnh cắt cải thiện rõ rệt Đây bước đột phá giúp nâng cao chất lượng kỹ thuật, nhờ làm tăng hiệu chẩn đoán điều trị Ngày nay, với phát triển giải phẫu bệnh cải tiến quy trình kỹ thuật trang thiết bị, kỹ thuật cắt lạnh trở thành phần quan trọng kỹ thuật giải phẫu bệnh khác ứng dụng rộng rãi sở y tế giới Việt Nam 2.3 Nguyên lý Khi mô làm lạnh, nước mô biến thành băng làm mô đông cứng, nước đá đóng vai trị làm khn cho mơ tế bào để tiến hành cắt mảnh [2] Độ cứng khối mơ đơng lạnh thay đổi theo nhiệt độ làm lạnh mô, giảm nhiệt độ tạo khối cứng giúp mảnh cắt khơng bị rúm ró, ngược lại việc tăng nhiệt độ làm cho khối mô mềm Phần lớn mô thích hợp tiến hành cắt lạnh -15 đến -23°C, mơ có nhiều nước thích hợp nhiệt độ ấm từ -10 đến -15°C để tránh mảnh cắt bị vỡ vụn; trừ mô mỡ cắt nhiệt độ âm sâu từ -25 đến -30°C [8] Nhiệt độ làm lạnh phụ thuộc vào tính chất loại mô kinh nghiệm, trang thiết bị sở giải phẫu bệnh Bảng 1: Lựa chọn nhiệt độ số mô để tiến hành cắt lạnh (°C) (Nhiệt độ đưa bảng dựa kinh nghiệm, nhiên giá trị gần đúng, nhiệt độ điều chỉnh phù hợp với loại mô) [8] Loại mô -10 °C đến -15 °C -15° C đến -25 °C   Tuyến thượng thận   Vú (nhiều mỡ)   Vú (ít mỡ)    Cổ tử cung Mô mỡ  Tim mạch máu  Ruột & trực tràng  Thận  Thanh quản  Gan  Phổi  Cơ vân  Tụy  Buồng trứng  Da nhiều mỡ   Da mỡ Tinh hoàn Tuyến giáp T  Bàng quang Sụn 2.4  Tủy xương Não -25 °C đến -35 °C    ình hình ứng dụng Kỹ thuật cắt lạnh địi hỏi đầu tư sở vật chất, trang thiết bị chất lượng nhân lực, năm trước, kỹ thuật triển khai số sở giải phẫu bệnh hàng đầu Bệnh viện K, Bệnh viện Việt Đức,… Một số sở y tế kể tuyến trung ương phải gửi mẫu sinh thiết tức tới sở khác khu vực, điều ảnh hưởng nhiều đến thời gian chất lượng kỹ thuật Hiện nay, để đáp ứng nhu cầu ngày cao điều trị, nước ta áp dụng kỹ thuật cắt lạnh chẩn đoán, định hướng phẫu thuật hầu hết bệnh viện tuyến trung ương, tuyến tỉnh bệnh viện tư có khoa ung bướu, bên cạnh đầu tư nâng cao trình độ nhân lực trang thiết bị nhằm phổ cập kỹ thuật cắt lạnh tới bệnh viện tuyến 2.5 Vai trò giải phẫu bệnh Với ưu thời gian, quy trình kỹ thuật chất lượng tiêu nhuộm, kỹ thuật cắt lạnh ln có vai trị quan trọng giải phẫu bệnh, đặc biệt đóng vai trị then chốt nhận định cấu trúc vi thể nhằm chẩn đoán sinh thiết tức phẫu thuật Ví dụ phẫu thuật tuyến giáp hay dày, kết đọc tiêu kỹ thuật cắt lạnh giúp bác sĩ phẫu thuật định việc loại bỏ phần hay toàn mơ nhằm hạn chế tối đa tình trạng tái phát tổn thương cho bệnh nhân Một nghiên cứu thăm dò Đại học Bệnh lý học Hoa Kỳ (CAP) đánh giá 9.164 trường hợp với sinh thiết phẫu thuật từ 472 sở định Nghiên cứu cho thấy định phổ biến chẩn đoán để định phẫu thuật (51%), xác định giới hạn cắt phẫu thuật (16%), lên kế hoạch nghiên cứu kiểm tra sức khỏe toàn diện (10%), cho phép bác sĩ phẫu thuật đưa chẩn đoán cho bệnh nhân (8%) lí khác (15%) [5] Kỹ thuật cắt lạnh có độ tin cậy cao ứng dụng rộng rãi giới, nghiên cứu Hoa Kỳ CAP với 1.693.331 ca phẫu thuật, có 90.538 ca định kỹ thuật cắt lạnh (khoảng 5,35%) so sánh kết chẩn đoán kỹ thuật cắt lạnh với kỹ thuật chuyển đúc thường quy loại mô khác nhau, tương đồng chẩn đoán tổng 31 - Tính chất mơ Tiêu bị bong thao tác mạnh tay - Lam không đạt tiêu chuẩn Tiêu khơng - Tính chất mơ - Thao tác nhuộm nhẹ nhàng - Kiểm tra, thay lam - Kiểm tra hoá chất, điều bắt màu bắt - Kỹ thuật nhuộm chưa đạt chỉnh kỹ thuật nhuộm hợp màu khơng chuẩn - Hóa chất Các phương pháp nhuộm liên quan lí Do yêu cầu chẩn đoán quan trọng thời gian ảnh hưởng nhiều đến hiệu điều trị sức khỏe người bệnh, sở giải phẫu bệnh thường sử dụng phương pháp nhuộm nhanh H&E, xanh Toluidine, Diff – Quick cho tiêu từ kỹ thuật cắt lạnh, tùy thuộc vào kinh nghiệm mà sở lựa chọn phương pháp nhuộm nhanh phù hợp 7.1 Phương pháp nhuộm H&E: Nhuộm H&E phương pháp nhuộm tương phản màu liên tiếp thông dụng để đánh giá nhân bào tương thuốc nhuộm hematoxylin (nhuộm nhân) eosin (nhuộm bào tương), phương pháp thông dụng đa số sở, tiêu cắt lạnh nhuộm theo bước sau: • Nhúng nhanh qua cồn tuyệt đối để cố định tiêu bản, để khơ • Nhúng nước • Nhúng bể Hematoxylin Harris phút • Rửa nước 30 giây đến phút • Soi kính • Làm xanh nhân lithium carbonate bão hịa 10 đến 15 giây • Nhúng bể Eosin 10 đến 15 giây • Rửa nước • Khử nước cồn tuyệt đối • Làm xylene • Gắn lamelle baume 32 • Đọc tiêu Kết quả: • Nhân bắt màu xanh đậm đến xanh đen • Bào tương bắt màu hồng đến đỏ • Hồng cầu bắt màu hồng đậm đến đỏ đậm • Sợi tạo keo bắt màu hồng nhạt Hình 7.1: Tiêu nhuộm H&E sinh thiết tức đại tràng (độ phóng đại x100) 33 Hình 7.2: Tiêu nhuộm H&E sinh thiết tức thận (độ phóng đại x100) 7.2 Phương pháp nhuộm Diff – Quick (tại Khoa Giải phẫu bệnh lý bệnh viện TW Quân đội 108) Nhuộm Diff – Quick phương pháp nhuộm nhanh tế bào mô, áp dụng cho nhiều loại bệnh phẩm, từ chọc hút kim nhỏ, phiến đồ tế bào học, tinh dịch đồ kỹ thuât cắt lạnh Phương pháp nhuộm giúp đánh giá chi tiết bào tương tế bào, giọt lipid, hạt chế tiết, chất nhầy, chất ngoại bào chất nhầy, sợi keo Các thành phần vi khuẩn, nấm dễ dàng phát phương pháp nhuộm Đối với tiêu từ kỹ thuật cắt lạnh nhuộm theo quy trình sau: 34 • Nhúng nhanh qua cồn tuyệt đối để cố định tiêu bản, để khơ • Nhúng nước • Nhúng nhanh dung dịch Diff – Quick I từ đến 10 giây • Rửa nước • Nhúng dung dịch Diff – Quick II từ 30 giây đến phút • Rửa nước • Đọc tiêu Kết quả: • Nhân bắt màu xanh tím • Bào tương bắt màu hồng Hình 7.3: Tiêu nhuộm Diff – Quick sinh thiết tức tuyến giáp (độ phóng đại x100) 35 7.3 Phương pháp nhuộm xanh Toluidine (tại Khoa Giải phẫu bệnh bệnh viện K1) Nhuộm xanh Toluidine phương pháp nhuộm màu bản, toluidine có lực cao với thành phần có tính acid mơ độ tương phản cấu trúc nhân bào tương không thời gian nhuộm rút ngắn đáng kể so với nhuộm H&E, tiêu cắt lạnh nhuộm theo bước sau: • Nhúng nhanh qua cồn tuyệt đối để cố định tiêu bản, để khơ • Nhúng nước • Nhúng bể xanh Toluidine từ 10 đến 20 giây • Rửa nước • Đọc tiêu Kết quả: • Tế bào mastocytes màu tím • Sụn màu tím • Chất nhầy màu tím/đỏ • Hạt nhân màu xanh lam 36 Hình 7.4: Tiêu nhuộm xanh Toluidine sinh thiết tức ung thư da khơng phải tế bào hắc tố (độ phóng đại x100) Hình 7.5: Tiêu nhuộm xanh Toluidine sinh thiết tức tuyến giáp (độ phóng đại x100) 37 KẾT LUẬN Với lợi nhanh, hiệu cao hỗ trợ chẩn đốn điều trị, kỹ thuật cắt lạnh ln hỗ trợ đắc lực định hướng phẫu thuật, sàng lọc chẩn đoán lâm sàng, trở thành kỹ thuật quan trọng bên cạnh kỹ thuật mô bệnh học thường quy Ngồi ra, kỹ thuật cắt lạnh cịn ứng dụng hóa mơ miễn dịch miễn dịch huỳnh quang kháng nguyên bị bất hoạt bị phá hủy lúc cố định mơ q trình bộc lộ kháng nguyên nhiệt Cũng kỹ thuật khác, kỹ thuật cắt lạnh bị ảnh hưởng nhiều yếu tố tác động Làm chủ kỹ thuật, nghĩa phải nắm vững nguyên lý, phương pháp yếu tố ảnh hưởng đến kỹ thuật nhiệm vụ quan trọng KTV Việc mở rộng kỹ thuật tới sở giải phẫu bệnh với nâng cao chất lượng nhân lực sở vật chất phục vụ cho công tác y tế ưu tiên phát triển nhằm đắp ứng yêu cầu y tế ngày cao hết sức khỏe người bệnh TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Vượng (2005) Giải phẫu bệnh học Nhà xuất y học, Trường Đại học Y Hà Nội, Kim Suvarna, Christopher Layton, John Bancroft (2012) Bancroft Theory and Practice of Histological Techniques - Microtomy: Paraffin and frozen – 7th edition, 7, 133-146 Stephen R Peters (2010) A Practical Guide to Frozen Section Technique, 5, 97-115 Jerome B Taxy, Aliya N Hussain, Anthony G Montag (2013) Biospy interpretation: The frozen section – 2nd edition, 1, 4-5, 5, 95-120 Jerome B Taxy, Aliya N Hussain, Anthony G Montag (2009) Biospy interpretation: The frozen section, 1, 3-4, 5, 97-115 Gal AA, Cagle PT (2005) "The 100-year anniversary of the description of the frozen section procedure" JAMA, 294 John D Bancroft (1975) Histochemical techniques – 2nd edition, 4, 2047 User Manuals Leica CM1860 IFU 1v6I Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Giải phẫu bệnh- Tế bào học Số: 5199 /QĐ-BYT (2013), Kỹ thuật cắt lạnh mảnh mô, 228-230 10 Nguyễn Văn Hưng (2013) Giải phẫu bệnh vi thể lâm sàng Nhà xuất y học, Trường Đại học Y Hà Nội 11 Journal of histotechnology (2003) The Art of Embedding Tissue for Frozen Section Part I: A System for Precision Face Down Cryoembedding of Tissues Using Freezing Temperature-Embedding Well, Vol 26, No 1, 11-19 12 Ngô Thị Minh Hạnh, Trịnh Tuấn Dũng, Nguyễn Đức Vinh cs (2013) Nghiên cứu Y học Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Giá trị sinh thiết cắt lạnh phẫu thuật – Y Học TP Hồ Chí Minh – Tập 17 – Phụ số 13 Gephardt GN, Zarbo RJ (1996) Interinstitutional comparison of frozen section consultations A college of American Pathologists Q – Probes study of 90,538 cases in 461 institutions – Arch Pathol Lab Med, 120 (9), 804-809 14 Charlotte Winther, Niels Graem (2011) Accuracy of frozen section diagnosis: a retrospective analysis of 4785 cases – APMIS journal, 119 (4-5), 259-262 15 95.11429 RevB CM1860 UV Techical Datasheet – Leica LỜI CẢM ƠN Qua năm học tập rèn luyện mái trường Đại học Y Hà Nội, giúp đỡ tạo điều kiện Ban giám hiệu, phịng Quản lí Đào tạo Đại học, Khoa Kỹ Thuật Y Học, phòng chức năng, môn Giải phẫu bệnh Trường Đại học Y Hà Nội… em có hội học tập, tu dưỡng rèn luyện kỹ chuyên môn trường Cùng với nỗ lực thân, em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Từ kết đạt này, em xin chân thành cảm ơn: - Thầy Nguyễn Hữu Quốc cô Nguyễn Hương Xuân, người hướng dẫn, bảo tận tình giúp đỡ, q trình hồn thành khóa luận - Tồn thể thầy cô giáo, anh chị Bộ môn Giải phẫu bệnh Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ em thời gian học tập nghiên cứu - Cha mẹ, người thân gia đình tạo điều kiện giúp đỡ cho vật chất tinh thần - Bạn bè người thân giúp đỡ, động viên suốt trình học tập thực đề tài Do kiến thức cịn hạn hẹp nên khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong đóng góp ý kiến quý thầy, cô để đạt kết tốt Em xin chân thành cảm ơn! Sinh viên Nguyễn Gia Tiến CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Kính gửi: Phịng Đào tạo Đại học – Trường Đại học Y Hà Nội Hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp Tôi xin cam đoan nghiên cứu riêng tơi, nội dung nêu, hình ảnh thu thập nghiên cứu có thật, thu thập Bộ môn Giải phẫu bệnh – Trường Đại học Y Hà Nội, Bệnh viện K1 Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 Tôi xin chịu trách nhiệm liên quan đến thông tin mà đưa Hà Nội, ngày 17 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Nguyễn Gia Tiến DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viêt tắt KTV IEC UL CAP Tên đầy đủ Kỹ thuật viên International Electrotechnical Commission Underwriters Laboratories Inc The College of American Pathologists DANH MỤC HÌNH Hình 3.1: Tổng quan máy cắt lạnh (CM1860 /CM1860 UV Leica) Hình 3.2: Bảng điều khiển Hình 3.3: Đặt thời gian Hình 3.4: Đặt thời gian rã đơng tự động Hình 3.5: Đặt nhiệt độ buồng lạnh Hình 3.6: Kích hoạt phận Peltier Hình 3.7: Thiết lập độ dày cắt Hình 3.8: Bảng điều khiển Hình 3.9: Làm lạnh mẫu Hình 3.10: Điều chỉnh góc dao cắt Hình 5.1: Cắt dán mảnh mơ cắt lạnh Hình 7.1: Tiêu nhuộm H&E sinh thiết tức đại tràng (độ phóng đại x100) Hình 7.2: Tiêu nhuộm H&E sinh thiết tức thận (độ phóng đại x100) Hình 7.3: Tiêu nhuộm Diff – Quick sinh thiết tức tuyến giáp (độ phóng đại x100) Hình 7.4: Tiêu nhuộm xanh Toluidine sinh thiết tức ung thư da khơng phải tế bào hắc tố (độ phóng đại x100) Hình 7.5: Tiêu nhuộm xanh Toluidine sinh thiết tức tuyến giáp (độ phóng đại x100) MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN Đại cương xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể Tổng quan kỹ thuật cắt lạnh 2.1 Khái niệm 2.2 Lịch sử phát triển 2.3 Nguyên lý 2.4 Tình hình ứng dụng .7 2.5 Vai trò giải phẫu bệnh 2.6 Ưu nhược điểm kỹ thuật 2.7 Các yếu tố ảnh hưởng Sử dụng máy cắt lạnh 12 3.1 Thông số kỹ thuật máy .14 3.2 Vận hành máy cắt lạnh .16 Chuẩn bị tiến hành kỹ thuật cắt lạnh 21 4.1 Người thực 21 4.2 Phương tiện, hoá chất 21 4.3 Bệnh phẩm 21 4.4 Phiếu xét nghiệm 23 Các bước thực kỹ thuật 23 5.1 Quy trình nhận bệnh phẩm 23 5.2 Cắt lọc bệnh phẩm 24 5.3 Tiến hành cắt lạnh nhuộm mô 24 5.4 Kết 25 Những sai sót cách xử lý 26 Các phương pháp nhuộm liên quan 28 7.1 Phương pháp nhuộm H&E: 28 7.2 Phương pháp nhuộm Diff – Quick .31 7.3 Phương pháp nhuộm xanh Toluidine 33 KẾT LUẬN 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO ... điều trị, kỹ thuật cắt lạnh hỗ trợ đắc lực định hướng phẫu thuật, sàng lọc chẩn đoán lâm sàng, trở thành kỹ thuật quan trọng bên cạnh kỹ thuật mơ bệnh học thường quy Ngồi ra, kỹ thuật cắt lạnh cịn... dạng mẫu xét nghiệm mô bệnh học Các kỹ thuật mô bệnh học phát triển mạnh, bên cạnh kỹ thuật thường quy có nhiều kỹ thuật khác hóa mơ, hóa mô miễn dịch, sinh học phân tử giải phẫu bệnh? ??Với mục tiêu... tốt nghiệp Cử nhân Kỹ thuật Y học, tiến hành thực đề tài: "Tổng quan kỹ thuật cắt lạnh giải phẫu bệnh" với hai mục tiêu sau: Trình bày vai trị kỹ thuật cắt lạnh giải phẫu bệnh Trình bày cách