TỔNG QUAN kỹ THUẬT PHÁT HIỆN EGFR TRONG UNG THƯ PHỔI BẰNG hóa mô MIỄN DỊCH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ DUYÊN TỔNG QUAN KỸ THUẬT PHÁT HIỆN EGFR TRONG UNG THƯ PHỔI BẰNG HĨA MƠ MIỄN DỊCH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2015 – 2019 HÀ NỘI – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI *** NGUYỄN THỊ DUYÊN TỔNG QUAN KỸ THUẬT PHÁT HIỆN EGFR TRONG UNG THƯ PHỔI BẰNG HĨA MƠ MIỄN DỊCH Ngành đào tạo : Cử nhân Kỹ thuật Y học Mã ngành : 52720332 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2015 – 2019 Người hướng dẫn khoa học: ThS Nguyễn Hữu Quốc CN Tạ Hồng Hải Đăng HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu, Phòng Đào tạo Đại học, Bộ môn Giải phẫu bệnh lâm sàng – Khoa Kỹ thuật Y học, Bộ môn Giải phẫu bệnh – Trường Đại học Y Hà Nội, Khoa Giải phẫu bệnh – bệnh viện Đại học Y Hà Nội phòng ban chứng tạo điều kiện, giúp đỡ em suốt thời gian làm khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy Ths Nguyễn Hữu Quốc, thầy CN Tạ Hồng Hải Đăng, Bộ môn Giải phẫu bệnh lâm sàng – Khoa Kỹ thuật Y học – Trường Đại học Y Hà Nội, người thầy tận tình bảo, hướng dẫn, giúp đỡ em kiến thức chuyên mơn kỹ thực hành để hồn thành tốt khóa luận Thầy người truyền cảm hứng chia sẻ nhiều kinh nghiệm quý báu giúp em thêm yêu thích chuyên ngành xét nghiệm Giải phẫu bệnh Với lịng thành kính, em xin cảm ơn thầy cô, anh chị, cán kỹ thuật Bộ môn Giải phẫu bệnh, khoa Giải phẫu bệnh – bệnh viện Đại học Y Hà Nội giúp đỡ, bảo tận tình tạo điều kiện thuận lợi để em học tập, rèn luyện kỹ hồn thành khóa luận Em xin trân trọng cảm ơn thầy cô Hội đồng chấm luận văn cho em đóng góp quý báu để hoàn thành luận văn Cuối vô biết ơn bố mẹ, người thân ủng hộ bên cạnh Cảm ơn người bạn động viên, giúp đỡ chỗ dựa tinh thần vững giúp vượt qua khó khăn để hồn thành tốt cơng việc học tập Hà Nội, ngày 27 tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thị Duyên LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các nội dung nêu “Kỹ thuật phát EGFR ung thư phổi hóa mơ miễn dịch” trung thực chưa công bố cơng trình khoa học Hà Nội, ngày 27 tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thị Duyên MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG, HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN .3 SƠ LƯỢC VỀ UNG THƯ PHỔI DẤU ẤN EGFR 2.1 Sơ lược dấu ấn EGFR 2.2 Các dạng biến đổi EGFR ung thư 2.3 Ý nghĩa việc phát đột biến gen EGFR 2.4 Các phương pháp phát đột biến gen EGFR 2.4.1 Phương pháp sinh học phân tử 2.4.2 Phương pháp hóa mơ miễn dịch 10 QUY TRÌNH NHUỘM HĨA MÔ MIỄN DỊCH VỚI DẤU ẤN EGFR .18 3.1 Quy trình nhuộm hóa mơ miễn dịch .19 3.2 Quy trình nhuộm HMMD với dấu ấn EGFR tay 24 3.3 Quy trình nhuộm HMMD với dấu ấn EGFR hệ thống máy tự động Bench Mark XT 27 3.4 Kết nhuộm dấu ấn EGFR số tiêu .29 KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG TRONG HĨA MƠ MIỄN DỊCH 32 4.1 Vai trò chứng âm, chứng dương .32 4.1.1 Chứng dương 32 4.1.2 Chứng âm 33 4.2 Một số yếu tố ảnh hưởng tới chất lượng tiêu 33 KẾT LUẬN 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BN BP BV DAB EGFR GPB HMMD IARC KN KT KKT KN – KT UT UTP UTPKTBN UTPTBN UTBMV UTBMT TBS TKI : Bệnh nhân : Bệnh phẩm : Bệnh viện : 3,3-diaminobenziden tetrahydrochlorid : Epidermal Growth Factor Receptor : Giải phẫu bệnh : Hóa mơ miễn dịch (Immunohistochemistry) : International Agency for Research on Cancer : Kháng nguyên : Kháng thể : Kháng kháng thể : Kháng nguyên – Kháng thể : Ung thư : Ung thư phổi : Ung thư phổi không tế bào nhỏ : Ung thư phổi tế bào nhỏ : Ung thư biểu mô vảy : Ung thư biểu mô tuyến : Tris buffer saline : Tyrosine kinase DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Hướng dẫn tính điểm mức độ biểu dấu ấn 29 Bảng 4.1: Một số lỗi thường gặp, nguyên nhân cách khắc phục nhuộm HMMD 34 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 2.1: Mơ hình cấu trúc hoạt động thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô (EGFR) Hình 2.2: Cấu trúc kháng thể IgG .14 Hình 2.3: Kháng thể đơn dòng kháng thể đa dòng 15 Hình 2.4: Phương pháp nhuộm HMMD trực tiếp (C) gián tiếp (D) 16 Hình 2.5: Kỹ thuật Aviddin-Biotin Streptavidin-Biotin 17 Hình 2.6: Kỹ thuật Peroxidase anti peroxidase (PAP) 17 Hình 2.7: Phương pháp dựa polymer 18 Hình 3.1: Các mức độ biểu EGFR ung thư biểu mô tuyến phổi 30 Hình 3.2: Ung thư biểu mơ tuyến phổi với EGFR (độ phóng đại 100) 30 Hình 3.3: Ung thư biểu mơ tuyến phổi với EGFR (dộ phóng đại 200) 31 Hình 3.4: Ung thư biểu mô tế bào vảy phổi với EGFR (độ phóng đại 200) 31 Hình 3.5: Ung thư biểu mơ tế bào vảy phổi với EGFR (độ phóng đại 100) 32 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư phổi u ác tính xuất phát từ biểu mơ phế quản, ti ểu ph ế quản tận, phế nang tuyến phế quản Đây bệnh ác tính th ường gặp nguyên nhân gây tử vong hàng đầu nhiều nước gi ới Năm 2018, Tổ chức ghi nhận ung thư toàn cầu (Globocan) cho thấy m ỗi năm giới có khoảng 2,09 triệu ca mắc 1,76 tri ệu người tử vong ung thư phổi Tại Việt Nam, năm có khoảng 23.667 ca mắc 20.170 ca tử vong bệnh [1] Theo Nguyễn Bá Đức cộng s ự, ghi nh ận ung thư giai đoạn 2008 – 2010 15 tỉnh thành, ung thư phổi phổ bi ến nam giới đứng hàng thứ ba ung thư nữ giới sau ung th vú ung thư dày [2][3] Mặc dù có nhiều tiến ch ẩn đoán, phần lớn bệnh nhân ung thư phổi đến giai đoạn muộn triệu chứng lâm sàng bệnh giai đoạn sớm không đặc hiệu Như v ậy, ung th ph ổi vấn đề lớn y tế tiên lượng bệnh thường dè dặt Theo Tổ chức Y tế gi ới (WHO), ung th ph ổi chia thành hai nhóm ung thư bi ểu mơ khơng tế bào nh ỏ (UTBMKTBN) ung th bi ểu mơ tế bào nhỏ (UTBMTBN), UTBMKTBN chi ếm 80 – 85% V ới t ầm ảnh hưởng lớn UTBMKTBN, nhà y h ọc đ ặt m ột s ự quan tâm đ ặc bi ệt đ ến phương pháp phát loại ung th đ ể ph ần t ầm soát đ ược nguồn gốc đưa phác đồ ều tr ị phù h ợp, c ải thi ện ch ất l ượng s ống cho bệnh nhân Một ti ến b ộ ch ẩn đoán vi ệc phát hi ện đ ột biến EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor – th ụ th ể y ếu t ố tăng tr ưởng biểu mô) với vai trò quan tr ọng ho ạt đ ộng ch ức bi ệt hóa c tế bào EGFR phổ biến loại nh ung th bi ểu mô ến, ung th biểu mô tế bào vảy, thần kinh nội ti ết… Đặc bi ệt, ung th ph ổi tế bào nhỏ, đột biến EGFR tiên l ượng thu ận l ợi đ ể đánh d ấu Đối với lĩnh vực mô bệnh học việc phát hi ện đột bi ến EGFR b ằng hóa mơ miễn dịch có vai trị quan trọng cho phép định hướng ều trị tiên lượng bệnh; điểm quan trọng, địi hỏi xác, tỉ mỉ, chi tiết tất bước thực kỹ thu ật ph ức tạp, ch ịu ảnh hưởng nhiều yếu tố Đặc biệt, vấn đề ki ểm soát chất l ượng nhuộm hóa mơ miễn dịch vơ khó khăn; q trình th ực hi ện, phát sinh số kết không mong đợi dương tính giả, âm tính giả,… địi hỏi phải ý từ khâu xử lý mô bệnh h ọc, c m ỏng, cách b ộc lộ kháng nguyên, chất lượng chứng âm, chứng dương hay pH dung dịch đệm nguyên nhân ảnh hưởng Vậy, q trình nhuộm hóa mơ miễn dịch nói chung, với dấu ấn EGFR nói riêng, kỹ thu ật viên gi ải phẫu bệnh phải ý điều để đảm bảo có tiêu chất lượng đến tay nhà Giải phẫu bệnh, để đưa đánh giá xác tình hình hi ện bệnh nhân Để góp phần tìm hiểu củng cố thêm ki ến th ức nh kỹ đánh giá, xử lý tình nhuộm hóa mơ mi ễn dịch v ới dấu ấn EGFR, xuất phát từ lý thực đề tài: ‘‘Tổng quan kỹ thuật phát EGFR ung thư phổi b ằng hóa mơ miễn dịch’’ Tổng quan với mục tiêu sau: Áp dụng quy trình phát bộc lộ EGFR kỹ thuật hóa mơ miễn dịch mảnh cắt paraffin ung thư phổi 39 Lỗi Nguyên nhân Cách khắc phục - BP không cố định - Cố định mô sớm sau lấy - Dung dịch cố định không thích hợp - Thời gian cố định khơng đủ, dung dịch cố định khơng đủ thể tích Cố định chưa tốt không đủ nồng độ - Cố định mức: thời tốt, vịng 30 phút mơ vừa lấy khỏi thể - Sử dụng dung dịch cố định tốt formol đệm trung tính 10% - Thời gian cố định bệnh phẩm: - 48 gian dài, nhiệt độ - Cắt mẫu u lớn thành cao, nồng độ cao - Đối với khối u lớn, vùng trung tâm u thường không cố định tốt nhiều lát mỏng - 2cm trước cho vào dung dịch cố định dung dịch không Chuyển chưa tốt thấm đến đúc - Hóa chất chuyển khơng - Kiểm tra hạn sử dụng, đảm bảo chất lượng, số lượng hóa chất trước lượng tiến hành chuyển - Thời gian chuyển không - Cài đặt thời gian cho phù hợp với loại bệnh phẩm - Khơng định hướng tốt bệnh phẩm, đúc chìm, block gắn kết khơng chặt chẽ - Quy trình chuyển đúc chưa theo thứ tự bước - Nhiệt độ chuyển đúc loại hóa chất chuyển phù hợp với BP Chú ý, tránh kéo dài việc ngâm BP paraffin nóng làm KN thối hóa - Định hướng mặt BP, đúc ấn cho BP nằm mặt phẳng - Đảm bảo kiểm tra chặt 40 khơng phù hợp chẽ quy trình chuyển bệnh phẩm bước - Giám sát nhiệt độ chuyển không thấp cao tránh BP ngấm khơng tốt hóa chất teo cứng - Tiêu bị - Lỗi dao, bụi - Kiểm tra điều chỉnh gấp, nhăn, xước, rách, dày mỏng không - Tiêu bị bong - Mô bị rạn, tan chảy tính chất bệnh phẩm - Tiêu sau cắt để khô tủ ấm dao phù hợp, lau bụi kiểm tra bệnh phẩm chưa đủ thời gian - Sau cắt mỏng, để sau vớt lát cắt khô lát cắt 12 nhiệt độ phòng lam nhiều nước 75 - Tiêu cắt để - Các tiêu cắt lâu bên chưa nhuộm cần lưu trữ ngăn mát tủ lạnh (8 *Giai đoạn nhuộm Lỗi Ngun nhân Cách khắc phục Bệnh phẩm cịn Khơng loại bỏ hồn tồn Chỉ dùng mơ khử paraffin xylen lấp paraffin, xylen gây paraffin, xylen hoàn toàn che kháng nguyên Nhuộm - Còn nhiều peroxidase - Khử enzyme peroxidase nội sinh nội sinh H2O2 - Còn nhiều biotin nội - Ức chế biotin 41 sinh avidin - Sử dụng KT đậm - Pha loãng KT theo tỷ lệ đặc phù hợp - Bước phủ KT để môi - Khi phủ KT nên đặt trường khô - Nhuộm không đặc hiệu KT kết hợp với khay có nước để tạo độ ẩm KN không đặc hiệu - Thời gian ủ KT - Ủ KT đủ thời gian phù ngắn không cho phản hợp với loại mô - Kiểm tra hạn sử dụng ứng xảy - KT hạn sử dụng KT trước phủ - KT bị hỏng bảo quản - Phủ đều, tràn kín mặt không kỹ bệnh phẩm L ượ ng KT Bộc lộ KN với nhiệt độ, Cả lam bệnh - Các vị trí tiếp xúc thời gian độ pH phù lam chứng KN không bộc lộ hợp âm (âm giả) tốt - KN bị phá hủy trình cố định - pH dung dịch đệm không Chất tạo màu bị hỏng Nhiệt độ thấp Mô nhuộm bị đậm - Phủ lượng KT vừa đủ Lượng KT nhiều với thời gian thích hợp Thời gian ủ KT lâu với loại BP Khử không hết men - Khử men peroxidase nội peroxidase nội sinh tính vị - Phủ DAB lâu sinh H2O2 Phản ứng dương tính giả (dương trí khác thường, nhuộm màu đậm) vòng 15 phút - Phủ DAB với thời gian khoảng phút (đến tiêu xuất màu nâu) 42 43 *Giai đoạn sau nhuộm Lỗi - Thừa thiếu bơm - Tiêu có bọt khí - Dán nhãn nhầm tên dấu ấn - Dán nhãn nhầm mã bệnh phẩm Cách khắc phục - Nhỏ thêm bôm cho tiêu qua xylen, gắn lại - Dùng tay đẩy bọt khí khỏi tiêu - Kiểm tra đối chiếu lại định, mã block bệnh nhân HMMD xét nghiệm có độ nhạy, phụ thuộc nhi ều y ếu tố xung quanh Từ hóa chất, sinh phẩm, kỹ thuật viên đòi h ỏi s ự trọn vẹn Trong trình nhuộm, kỹ thuật viên phải đảm bảo ki ểm soát tất bước nhuộm, nhỏ dung dịch cần nhỏ, để th ời gian quy định, quan trọng đảm bảo nắm vững kiến thức nhuộm HMMD 44 KẾT LUẬN Hóa mơ miễn dịch cơng cụ sàng lọc hữu ích đầu tay nhà lâm sàng việc xác định đột biến gen EGFR định hướng cho vi ệc lựa ch ọn li ệu pháp điều trị trúng đích BN UTPKTBN Hiện nay, kỹ thu ật gi ải trình t ự gen áp dụng phổ biến việc xác định đột biến gen EGFR b ởi vừa tầm sốt loại đột biến cơng bố, v ừa có th ể phát hi ện loại đột biến Mặc dù vậy, không th ể phủ nhận vai trò HMMD với ưu điểm dễ thực hiện, thao tác đơn gi ản, giá thành h ợp lý, thực với mẫu sinh thiết nhỏ áp dụng h ầu h ết phịng xét nghiệm giải phẫu bệnh Có thể nhuộm HMMD dấu ấn EGFR tay máy Tuy nhiên, cần ý đến v ấn đ ề đ ảm b ảo ch ất lượng; phòng xét nghiệm cần xây dựng quy trình chu ẩn, đầy đủ hóa chất trang thiết bị cần thiết; nhuộm tay người kỹ thuật viên ph ải đào tạo tốt; lần nhuộm phải sử dụng mẫu mơ chứng kèm theo để kiểm sốt chất lượng TÀI LIỆU THAM KHẢO Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries Nguyễn Bá Đức, Bùi Diệu, Trần Văn Thuấn, Nguyễn Thị Hoài Nga c ộng (2010), “Tình hình mắc ung thư Việt Nam qua số li ệu vùng ghi nhận giai đoạn 2004-2008”, Tạp chí ung thư học Việt Nam, 1, Hội phòng chống ung thư Việt Nam, 75 – 77 Trần Hoàng Thành, Vũ Nguyệt Minh (2007), Nhận xét hội chứng cận ung thư bệnh nhân ung thư phổi từ 2003 – 2005 khoa hô hấp bệnh viện Bạch Mai, Tạp chí nghiên cứu y học, 5, 52 – 56 Mark E Deffebach, MD Linda Humphrey, MD Section Editors (2009), Screening for lung cancer American Cancer Society (2011), Cancer facts and figures, Atlanta Bùi Quang Huy (2008), Đánh giá hiệu điều trị ung thư phổi không tế bào nhỏ giai đoạn IIIb, IV phác đồ Gemicitabin Cisplatin t ại b ệnh viện K, Luận văn thạc sĩ y học , Trường Đại học Y Hà Nội Nguyễn Thị Minh Hương, Đánh giá kết điều trị ung thư phổi tế bào nhỏ giai đoạn II, IIIA phẫu thuật ph ối hợp x tr ị h ậu phẫu, Luận văn thạc sỹ chuyên ngành ung thư, Trường Đại học Y Hà Nội Bùi Cơng Tồn, Trần Văn Thuấn (2007), Ung thư phổi, Chẩn đoán điều trị bệnh ung thư, Nhà xuất y học, Hà Nội, trang 176 – 187 Paez JG, Janne PA, Lee JC (2004), EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy, 304, 1497 – 5000 10 Gu D, Scaringe WA, Li K (2007), Database of somatic mutations in EGFR with analyses reveaning indel hotspots but no smoking-associated signature, Hum Mutat, 28, 760 11 Shu Fang, Zhehai Wang (2014), EGFR mutations as a prognostic and predictive marker in non-small-cell lung cancer 12 Shigematsu H, Lin L, Takahashi T (2005), Clinical and biological features associated with epidermal growth factor receptor gene mutation in lung cancers, J Natl Cancer Inst, 947 - 957 13 Pallis AG, Voutsina A, Kalikaki A (2007), Classical but not other mutations of EGFR kinases domain are associated with clinical outcome in gefitinibtreated patients with non-small cell lung cancer, Br J Cancer 14 Kato Y, Peled N, Wynes MW (2010), Novel epidermal growth factor receptor mutation-specific antibodies for non-small cell lung cancer: immunohisochemistry as a possible screening method for epidermal growth factor mutations, 1551 – 1558 15 Zhou C, Ni J, Zhao Y (2006), Rapid detection of epidermal growth factor receptor mutations in non-small cell lung cancer using real-time polymerase chain reaction with Taqman-MGB probes, Cancer J, 33 – 39 16 Kimura H, Fujiwara Y, Sone T (2006), High sensitivity detection of epidermal growth factor receptor mutations in the pleural effusion of nonsmall cell lung cancer patients, Cancer Sci, 642 – 648 17 Ninh Văn Quyết (2017), Phát gián tiếp đột biến gen EGFR ung thư biểu mô tuyến phổi kỹ thuật hóa mơ miễn d ịch, Lu ận văn thạc sĩ công nghệ nano sinh học, Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội 18 Simonetti S, Molina MA, Queralt C (2010), Detection of EGFR mutations with mutation-specific antibodies in stage IV non-small-cell lung cancer, 135 19 Nguyễn Minh Hà, Trần Vân Khánh, Phạm Huy Tân, Nguyễn Tuyết Mai, Phạm Lê Anh Tuấn, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn (2013), Ứng dụng kỹ thuật giải trình tự xác định đột biến gen EGFR mẫu mô ung th ph ổi khơng tế bào nhỏ, Tạp chí y học Việt Nam, Tháng số 1, tập 407, 129 – 134 20 Jiang GY, Fan CF, Zhang XP (2013), Ascertaining an appropriate diagnostic algorithm using EGFR mutation-specific antibodies to detect EGFR status in non-small-cell lung cancer 21 S Kim Suvarna, Christopher Layton John D Bancroft (2012) Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques, 7, 381 – 426 22 Hứa Thị Ngọc Hà Huỳnh Ngọc Linh (2002), Ứng dụng kỹ thuật hóa mơ miễn dịch chẩn đốn giải phẫu bệnh, 143 – 154 23 Phạm Nguyên Cường (2014), Nghiên cứu phân loại mô bệnh học ung thư biểu mơ phổi theo WHO 2004 IASLC/ATS/ERS 2011 có s d ụng d ấu ấn hóa mơ miễn dịch, Luận văn tiến sĩ y học, Trường đại học Y Hà Nội, Hà Nội 24 Nguyễn Kim Bình, Trương Nam Chi, Nguyễn Phúc Cương cộng (2001), Báo cáo khoa học kết thử nghiệm nhuộm hóa mơ miễn dịch bệnh viện Việt Đức từ tháng 10/2000 – 4/2001 25 Bộ Y tế (2011), Sinh lý bệnh miễn dịch (Phần miễn dịch học) , Nhà xuất Y học 26 Jun Kurai, Hiroki Chikumi, Kiyoshi Hashimoto (2007), Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Mediated by Cetuximab against Lung cancer cell lines 27 Bondgaard AL, Høgdall E, Mellemgaard A, Skov BG (2014), High specificity but low sensitivity of mutation-specific antibodies against EGFR mutations in non-small-cell lung cancer 28 Wen YH, Brogi E, Hasanovic A, et al (2013), Immunohistochemical staining with EGFR mutation-specific antibodies: high specificity as a diagnostic marker for lung adenocarcinoma 29 Xiong Y, Bai Y, Leong N, et al (2013), Immunohistochemical detection of mutations in the epidermal growth factor receptor gene in lung adenocarcinomas using mutation-specific antibodies, Diagn Pathol 30 Ngô Quý Châu (2008), Ung thư phổi, Nhà xuất y học, – 36 31 Nguyễn Bá Đức cộng (2010), Báo cáo sợ kết thực dự án quốc gia phòng chống ung thư giai đoạn 2008-2010, Tạp chí ung thư học Việt Nam, 1/2010, Hội phòng chống ung thư Việt Nam, 24 – 25 32 Đoàn Thị Ngọc Thúy (2014), Kỹ thuật nhuộm Hóa mơ miễn dịch chuẩn đốn mô bệnh học, Trường Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 33 Nguyễn Văn Duy (2014), Quy trình sản xuất kháng thể đơn dòng, ưu nhược điểm, Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên 34 Nguyễn Minh Hà, Trần Vân Khánh, Nguyễn Tuyết Mai, Đỗ Đình Hồ, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn (2012); Hiệu điều trị trúng đích b ệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ có khơng có đột bi ến gen EGFR; Tạp chí nghiên cứu y học, tập 80, số 4, 13 - 21 35 Hứa Thị Ngọc Hà (2014), Hóa mơ miễn dịch chẩn đốn tiên lượng điều trị bệnh, Nhà xuất Y học, Tp Hồ Chí Minh 36 Hồng Đình Chân, Đồng Khắc Hưng, Tơ Kiều Dung (1993), Ung thư phổi khơng biệt hóa tế bào nhỏ qua trường hợp khoa Ngoại viện Lao Bệnh phổi từ 1/1991 đến 6/1993, Tạp chí Nội khoa, 4, 10 - 16 37 Tô Kiều Dung, Đồng Khắc Hưng, Nguyễn Việt Cồ (1993), Tình hình ung thư phổi phế quản qua 108 trường hợp chẩn đốn mơ tế bào khoa ngoại Viện Lao Bệnh phổi, Tạp chí Y học thực hành, 7, 173, 85 - 89 38 Đỗ Thị Tường Oanh, Nguyện Thị Bích Y ến (1997), B ước đ ầu áp d ụng định lượng số dấu ấn U chẩn đoán ung th ph ổi, Tạp chí nghiên cứu khoa học, 4, 22 - 27 39 Vũ Thị Thanh Tâm, Hoàng Hồng Thái, Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, c ận lâm sàng bệnh nhân ung th ph ổi ều tr ị t ại khoa Hô h ấp b ệnh vi ện Bạch Mai từ 1/2008 đến 12/2008 , Luận văn Bác sĩ Y khoa, Tr ường Đ ại học Y Hà Nội, Hà Nội 40 Nguyễn Tuyết Mai, Trần Vân Khánh (2013), Mối liên quan đột bi ến gen EGFR đáp ứng thuốc điều trị đích bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ, Tạp chí y học Việt Nam, tháng số 1, tập 406, 46 – 49 41 Trần Vân Khánh, Tạ Minh Hiếu, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn (2011), Đột biến gen EGFR, KRAS ung thư li ệu pháp ều tr ị đích, Tạp chí nghiên cứu y học, tập 76, số 5, 138 – 148 42 Nguyễn Minh Hải, Đồng Khắc Hưng, Nghiên cứu giá trị CEA, TPS, P53, EGFR định hướng chẩn đốn tiên lượng ung thư phổi khơng t ế bào nhỏ; Luận văn Tiến sĩ y học, Nội – Hô hấp, Trường Đại học Y Hà N ội, Hà Nội 43 Nguyễn Ngọc Tú, Nguyễn Văn Hưng, Nghiên cứu bộc lộ dấu ấn EGFR mối liên quan với ung thư biểu mô tuyến phổi , Luận văn Bác sĩ y khoa, Trường Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 44 Nguyễn Minh Hà, Trần Vân Khánh, Tạ Thành Văn (2014), Ứng dụng kỹ thuật PCR RFLP xác định đột biến gen EGFR KRAS mẫu mô ung th phổi không tế bào nhỏ, Tạp chí y học Việt Nam, số tập 421, 45 – 48 45 Trần Nguyên Phú (2005), “Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng phân loại ung thư phế quản không tế bào nhỏ bệnh viện Bạch Mai ”, Luận văn tốt nghiệp bác sĩ chuyên khoa cấp II, Trường Đại học Y Hà Nội 46 Ngô Quý Châu (2004), Ung thư phổi, Bài giảng bệnh học nội khoa, Nhà xuất y học, 64 – 73 47 Hồng Văn Thịnh, Nguyễn Bùi Ngọc Diệp, Phạm Quang Thơng (2017), Khảo sát đặc điểm giải phẫu bệnh đột biến EGFR 726 tr ường hợp ung thư phổi không tế bào nhỏ; Hội nghị KHKT BV Chợ Rẫy, Y học TP.HCM, phụ 21, số 4/2017, 448 – 452 48 Nguyễn Thiện Nhân, Nguyễn Huy Dũng, Trần Đình Thanh (2015), Nhân trường hợp ung thư phổi KTBN giai đoạn tiến xa có đột biến gen EGFR gặp đáp ứng ngoạn mục với điều trị ERLOTINB b ệnh vi ện Phạm Ngọc Thạch Tp HCM, Tạp chí lao bệnh phổi, Tháng số 20, 81 – 83 49 Lovly, C, L Horn, W Pao (2015), EGFR in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) 50 Elizabeth H Baldini, MPH Section Editor, Peter J Barnes (2009), Women and lung cancer 51 Boyle P, Ferlay J (2004), Cancer incidence and mortality in Europe, Ann Oncol; 16, 481 – 488 52 Wu JY, Yu CJ, Yang CH (2008), First or second-line therapy with gefitinib produces equal survival in non-small cell lung cancer, Am J Respir Crit Care Med, 847 – 853 53 P K Nakane G B Pierce, Jr (1966) Enzyme-labeled antibodies: preparation and application for the localization of antigens J Histochem Cytochem, 14, 929 – 931 54 De Matos LL, Trufelli DC, de Matos MGL, et al (2010) Immunohistochemistry as an Important Tool in Biomarkers Detection and Clinical Practice, 5, 9-20 55 L A Sternberger, P H Hardy, Jr, J J Cuculis, et al (1970), The unlabeled antibody enzyme method of immunohistochemistry: preparation and properties of soluble antigen-antibody complex (horseradish peroxidaseantihorseradish peroxidase) and its use in identification of spirochetes, J Histochem Cytochem, 18, 315 – 333 56 D Y Mason R Sammons (1978), Alkaline phosphatase and peroxidase for double immunoenzymatic labelling of cellular constituents, J Clin Pathol, 31, 454 – 460 57 R C Graham, Jr M J Karnovsky (1966), The early stages of absorption of injected horseradish peroxidase in the proximal tubules of mouse kidney: ultrastructural cytochemistry by a new technique, J Histochem Cytochem, 14, 291 – 302 58 J A Ramos-Vara (2005), Technical aspects of immunohistochemistry, Vet Pathol, 42, 405 – 426 59 Simonetti S, Molina MA, Queralt C (2010), Detection of EGFR mutations with mutation-specific antibodies in stage IV non-small-cell lung cancer, 135 60 Akihiko Kawahara, Chizuko Yamamoto, et al (2010), Molecular Diagnosis of Activating EGFR Mutations in Non–Small Cell Lung Cancer Using MutationSpecific Antibodies for Immunohistochemical Analysis ... pháp phát đột biến gen EGFR Hiện nay, đột biến gen EGFR ung thư phổi thư? ??ng phát phương pháp hóa mô miễn dịch kỹ thuật sinh học phân tử, độ nhạy kỹ thuật phụ thuộc vào mật độ tế bào ung thư mẫu mô. .. trình phát bộc lộ EGFR kỹ thuật hóa mơ miễn dịch mảnh cắt paraffin ung thư phổi 3 TỔNG QUAN SƠ LƯỢC VỀ UNG THƯ PHỔI Ung thư phổi (UTP) bệnh ác tính hay g ặp nh ất th ế gi ới, với số ca mắc trung... ến th ức nh kỹ đánh giá, xử lý tình nhuộm hóa mơ mi ễn dịch v ới dấu ấn EGFR, xuất phát từ lý thực đề tài: ‘? ?Tổng quan kỹ thuật phát EGFR ung thư phổi b ằng hóa mơ miễn dịch? ??’ Tổng quan với mục