Bước đầu đánh giá độ ổn định và xây dựng

Phần 1: Tổng quan. Phần 2: Phương pháp nghiên cứu. Phần 3: Kết quả và bàn luận. Phần 4: Kết luận và kiến nghị.

Bộ Quốc Phòng Học viện Quân Y

Nguyễn Đức Cường

BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH VÀ XÂY DỰNG

TIÊU CHUẨN CƠ SỞ THUỐC MỠ EUPOLIN.

(Khoá luận tốt nghiệp dược sĩ đại học khoá 1999- 2005)

Cán bộ hướng dẫn : TS NGUYỄN MINH CHÍNH.

Ph n ầ trỡnh bày túm t t khắ oỏ lu n g m cậ ồ ú ặt vấn đềĐ

Phần 1: Tổng quan.

Phần 2: Phương pháp nghiên cứu Phần 3: Kết qu và bàn luận.ả

Phần 4: Kết luận và kiến nghị  

ĐẶT VẤN ĐỀ.

Cỏ Lào là một loại cây có tác dụng kháng khuẩn đã được phát hiện từ lâu Theo các công trình nghiên cứu đã được công bố có Lào có tác dụng: kháng khuản, chống viêm, cầm máu Trên cơ sở đó đã có nhiều chế phẩm từ cỏ Lào ­đ ợc ứng dụng trong lâm sàng Tại TT NC ƯD SX thuốc HVQY đang tiến hành nghiên cứu thuốc mỡ EUPOLIN dùng trong điều trị vết bỏng và vết thương phần mềm.Theo quy định một loại thuốc muốn sx và sử dụng rộng thì cần thiết phải xây dựng TCCS và đánh giá độ ổn định của thuốc Xuất phát từ những vẫn đề trên chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài “Bước đầu đánh giá độ ổn định và xây dựng tiêu chuẩn cơ sở thuốc mỡ EUPOLIN” nhằm mục tiêu:

• Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho cao cỏ Lào dùng làm

nguyên liệu sản xuất thuốc mỡ EUPOLIN.

• Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở thuốc mỡ EUPOLIN.

• Đánh giá độ ổn định thuốc mỡ EUPOLIN bằng phương

pháp lão hoá cấp tốc, từ đó dự đoán tuổi thọ của thuốc.

PhÇn 1 : Tæng quan

1.1Cây cỏ Lào

Cây Cỏ Lào có nguồn gốc từ đ o Antilles ở Trung Mỹ, rồi từ đó lan ảsang các nước ông Nam Đ á và Việt Nam n m 1930 ă

Tên khoa học Eupatorium odoratum Linn Họ Asteraceae

Tên khác : Chromolaena odorata L.R.M Kinh H.Robison

Cỏ Lào

Eupatoriun odoratum Asteraceae

 

Thµnh phÇn ho¸ häc : Nhãm tinh dÇu Nhãm flavonoid Nhãm saponin Nhãm alcaloid Nhãm tanin

1.2 Thuốc mỡ

Thuốc mỡ (TM) là dạng thuốc có thể chất mềm dùng bôi lên da hay

niêm mạc, nhằm b o vệ da hoặc đưa thuốc thấm qua da ả

Tiêu chuẩn thuốc mỡ.

Theo quy định của Dược điển Việt Nam III ( D VN III) thuốc mỡ Đph i đạt các tiêu chuẩn :ả

1 Ph i là nh ng hỗn hợp hoàn toàn đồng nhất gi a dược chất và tá dưả ữ ữợc, dược chất ph i đạt độ phân tán cao ả

2 Ph i có thể chất mềm mịn màng, không ch y ở nhiệt độ thường, dễ ả ảbám thành lớp mỏng khi bôi lên da hoặc niêm mạc.

3 Không gây kích ứng da và niêm mạc

4 Bền v ng ( lý, hoá, vi sinh) trong quá trinh b o qu n.ữ ả ả5 Đố ới v i thu c m ố ỡ bụi v t thế ương ph i vả ụ khu nẩ

Sơ đồ qui trinh s n xuất:ả

Cỏ LàoCao lỏng Cao đặc TMEUPOLIN 

Kỹ thuật và phương pháp bào chế : Thuốc mỡ Eupolin được s n xuất theo phương pháp trộn đều nhũ hoá.ả

óng trong tuýp nhôm loại 20gĐ

1.3 Độ ổn định của thuốc:

Độ ổn định của thuốc là kh n ng của thuốc ả ă(nguyên liệu hoặc thành phẩm) b o qu n trong ảảđiều kiện xác định gi được nh ng đặc tính vốn có ữữvề vật lý, hoá học, vi sinh, tác dụng dược lý và độc trong giới hạn qui định tiêu chuẩn chất lượng thuốc

ộ ổn định thuốc phụ thuộc vào: Các yếu tố môi Đtrường, các yếu tố liên quan đến thuốc

Các kiểu thử nghiệm dùng trong nghiên cứu độ ổn định của thuốc

Kiểu thử nghiệm nhanh Kiểu thử nghiệm ngắn hạn Kiểu thử nghiệm từng phần.

Kiểu thử nghiệm đầy đủ: thử nghiệm dài hạn, thử nghiệm lão hoá cấp tốc, thử nghiệm khắc nghiệt

Thử nghiệm cấp tốc

Theo quy định, tiến hành nghiên cứu độ ổn định của thuốc bằng phương pháp lão hoá cấp tốc ph i đ m b o ả ả ảtrong điều kiện: nhiệt độ :40oC ± 5oC, độ ẩm :70% ± 5% RH, Thời gian: 6 tháng

Tuổi thọ của thuốc của thuốc có thể dự đoán theo công thức:

C = kìCtn+C0.

PhÇn 2 :

2.1 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở Cao cỏ Lào

- C m quan: Quan sát màu sắc, thể chất của 3 mẫu rồi rút ra kết luận.ả - Mùi vị: Dùng vị giác và khứu giác đánh giá.

- Hàm ẩm : Tiến hành theo PL 5.16 D VN III.Đ

- Độ nhiễm khuẩn: Theo chuyên luận tại PL10.7 D VN III.Đ - ịnh tính:Đ

+ Bằng phương pháp hoá học: Tiến hành các ph n ứng định tính cây ảcỏ Lào gồm ph n ứng định tính: tanin, saponin, flavonoid.ả

+ Bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng:Làm theo D VN III PL4.4Đ Dung dịch thử: Chiết từ cao cỏ Lào

Dung dịch đối chiếu: Chiết từ lá cỏ Lào tươi.

- ịnh lượng: nh lĐĐịượng Tanin b ng phằương phỏp Lowenthan

%

2.2 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở thuốc mỡ

- Hỡnh thức thể chất: Lấy một tuýp thuốc mỡ, bóp nhẹ, quan sát ể hai Đtuýp thuốc đã mở trong tủ ấm ở nhiệt độ 370C Rút ra kết luận

- ộ mịnĐ : Bóp lấy kho ng 1g thuốc mỡ đặt lên mặt kính phẳng dùng ảđầu ngón tay miết cho thuốc dàn thành một lớp mỏng

- ộ đồng nhất: Tiến hành Theo D VN III PL 1.10.ĐĐ- Kho ng ch y: Thử theo D VNIII - PL5.19.ảảĐ

- Độ đồng đều khối lượng : Theo phương pháp D VN III PL 8.3Đ- Độ nhi m khu n: Theo PL 10.7 D VN III.ễẩĐ

- ịnh tính: phương pháp hoá học và phương pháp sắc ký lớp mỏng.Đ

Phương pháp hoá học: Tiến hành theo các ph n ứng định tính cây ảcỏ Lào Gồm có ph n ứng định tính : tanin, saponin, flavonoid.ả

Phương pháp sắc ký lớp mỏng: Tiến hành theo D VN III.Đ

Dung dịch thử: chiết từ các mẫu thuốc mỡ Dung dịch đối chiếu: Chiếttừ lá cỏ Lào tươi.

- ịnh lượng: nh lĐĐịượng tanin b ng phằương phỏp LOWENTHAN

%

2.3 Phương pháp nghiên cứu độ ổn định của thuốc.

Mẫu nghiên cứu. Chọn ba mấu ở ba lô s n xuất khác nhauả

Điều kiện nghiên cứu Trong buồng vi khí hậu: Nhiệt độ : 40o± 1oC ộ Đẩm: 70±5%.Tránh ánh sáng

Cách đánh giá:

Thuốc được bảo quản trong buồng vi khí hậu, định kỳ 23- 30 ngày lại được kiểm tra một lần Các tiêu chí để đánh giá được cân nhắc kỹ cả về chất lượng và phương pháp để có thể cho kết quả chính xác, và so sánh được với tiêu chuẩn đề ra Các tiêu chí được dùng để đánh giá gồm: hỡnh thức thể chất, độ mịn, độ đồng nhất, độ nhiễm khuẩn, định tính, định lượng Các tiêu chí này được so sánh với tiêu chuẩn cơ sở xây dựng ở trên

Phương pháp xác định các tiêu chí: Theo phương pháp phần 2.2

Sau khi xác định được thời gian thuốc vẫn giữ được các yêu cầu theo tiêu chuẩn đề ra, chúng tôi sử dụng công thức phần 1.3 đoán tuổi thọ của thuốc.

PhÇn 3 :

3.1 Kết qu nghiên cứu xây dựng Ảtiêu chuẩn cao Cỏ Lào

C m quan, mùi vảị

B ng 1: ảKết qu nghiên cứu c m quan mùi vị cao cỏ ảảLào.

Mềm, dẻo, dính Hơi chát

Thơm Màu đen

Mẫu 3

Mềm, dẻo, dính Hơi chát

Thơm Màu đen

Mẫu 2

Mềm, dẻo, dính Hơi chát

Thơm Màu đen

Mẫu 1

Thể chất Vị

Mùi Màu sắc

Chỉ tiêuM uẫ

C m quan mùi vị, tiêu chuẩn cao cỏ Lào ph i đạt là: ảảcó màu đen, thể chất mềm dẻo, có mùi thơm đặc trưng của cỏ Lào, vị hơi chát

Mẫu 3

Mẫu 2

Mẫu 1

Hàm ẩm(a-b)(g)

(c) Kl trước(g)

(b) Kl trước(g)

(a) KL cõn

Mẫu

Tiªu chÝMÉu

ịnh tính

Kết qu định tính bằng phương pháp hoá học:ả

Ph n ứng cyanidinả

dd NaOH 10 %

TT FeCl3Flavonoid

Vanillin 1%

Ph n ứng tạo bọtảSaponin

TT Pb(CH3COOH)2

Gelatin 2%

TT FeCl3Tanin

Mẫu 3Mẫu 2

Mẫu 1

MẫuThuốc thử

(+) Ph n ứng dương tính.ả

Kết qu định tính bằng phương pháp sắc ký lớp ảmỏng:

B n mộtả: iểm B1 chấm dung dịch thử chiết từ cao Cỏ ĐLào mẫu 1, điểm A là dịch đối chiếu chiết từ cây cỏ Lào

B ng 5: ảKết qu chạy SKLM mẫu 1ả

Chất đối chiếu

Chất thửChất đối

chiếu Chất

thử

Màu sắcRfì100

Số thứ tự vết

B n haiả: iểm B2 chấm dung dịch thử chiết từ cao Cỏ ĐLào mẫu 2, điểm A là dịch đối chiếu chiết từ cây cỏ Lào B ng 6: ảKết qu chạy SKLM mẫu 2ả

 28 76

 27 1

Chất đối chiếu

Chất thửChất đối

chiếu Chất

thử

Màu sắcRfì100

Số thứ tự vết

B n baả : iểm B3 chấm dung dịch thử chiết từ cao Cỏ Lào mẫu 3, Đđiểm A là dịch đối chiếu chiết từ cây cỏ Lào

B ng 7ả : Kết qu chạy SKLM ảmẫu 3

 23 74

 24 1

Chất đối chiếu

Chất thửChất đối

chiếu Chất

thử

Màu sắcRfì100

Số thứ tự vết

Từ nh ng nghiên cứu trên ta thấy các chất có trong cao cỏ Lào cũng tưữơng tự như trong cây cỏ Lào, vỡ vậy tiêu chuẩn về định tính mà cao cỏ Lào ph i đạt được là: ả cho các ph n ứng định tính của cỏ Lào.ả

ịnh lươn

Kết qu định lượng tanin được thể hiện trong b ng 8 ảả

B ng 8: ảKết qu định lượng tanin trong cao cỏ Lào.ả

Mẫu 3

10,6%

10,8%

10,8%

10,9%

10,4% 10,6%

Mẫu 1

Trung bỡnh Lần 3

Lần 2 Lần 1

Kết quả Mẫu

C n cứ vào kết qu trên, và để đ m b o chất lượng, tiêu chuẩn khi ă ả ả ảđịnh lượng tanin trong chế phẩm ph i đạt là ả không được phép dưới 10%.

3.2 Kết qu nghiên cứu xây dựng tiêu Ảchuẩn của thuốc mỡ

Kết qu nghiên cứu ảhỡnh thức, thể chất, độ mịn, độ đồng nhất

- Hỡnh thức: Quan sát c ba mẫu thấy màu nâu sẫm, thể chất ảmềm Khi để ở 370C trong 24 giờ không ch y lỏng.ả

- ộ mịn: các mẫu đều trơn tay, mịn đều không gây c m Đảgiác gợn cộm.

- ộ đồng nhất : ộ phân tán cao, trong c bốn tiêu b n ĐĐảảđều không phát hiện thấy tiểu phân, màu sắc đồng đều.

Chính vỡ vậy tiêu chuẩn về thể chất, độ mịn, độ đồng nhất thuốc mỡ EUPOLIN là: Đạt nh ư trờn

Kết qu nghiên cứu kho ng ch y ảảả

Kết qu nghiên cứu kho ng ch y được ả ả ả trỡnh bày ở b ng 9 ả

B ng 9:ả Kết qu ả nghiên cứu kho ng ch y của TM UPOLINảả

Mẫu 3

Mẫu 2

Mẫu 1

Trung bỡnh(oC)

Lần 1(oC)

Lần 1 (oC)

t0 ch yảMẫu

Nhiệt độ ch y trung ảbỡnh của ba mẫu là: 44,6oC, SD = 0,6

Từ kết qu trên để ảđảm b o chất lượng thuốc khi dùng theo ảquy định của D VN chúng tôi lấy kho ng ch y của thuốc Đảảlà

từ 42 oC- 46 oC,

ộ đồng đều khối lượng.Đ

Kết qu được ảtrỡnh bày tại b ng 10 ả

B ng 10ả: Kết qu nghiên cứu độ đồng đều khối lưảợng của TM EUPOLIN.

Mẫu 3

20,12 19,4

Mẫu 2

Mẫu 1

Trung bỡnh (g)

Tiêu chuẩn độ đồng đều khối lượng chúng tôi lấy theo D VN III, tuýp thuốc ph i đạt Đảtừ 18g- 22g.

+ Mẫu 3

+ Mẫu 2

+ Mẫu 1

ộ nhiễm khuẩnĐ

Tiêu chíMẫu

(+): ạt giới hạn mức 1 Theo tiêu chuẩn PL 10.7 D VN IIIĐĐ Dựa vào quy định D VN và kết qu nghiên cứu chúng tôi Đảquy định tiêu chuẩn về độ nhiễm khuẩn của thuốc là: Đạt giới

hạn mức 1 theo tiêu chuẩn PL 10.7 D VN IIIĐ

ộ nhiễm khuẩn.Đ

Kết qu được thể hiện trong b ng 11.ảả

B ng 11 : Kết qu đánh giá độ nhiễm khuẩnảả

ịnh tính

Kết qu định tính bằng phương pháp hoá học.ả

+Ph n ứng cyanidinả

+dd NaOH 10 %

+TT FeCl3

+Vanillin 1%

+Ph n ứng tạo bọtả

+TT Pb(CH3COOH)2

+Gelatin 2%

+TT FeCl3

Mẫu 3Mẫu 2

Mẫu 1 Mẫu

Thuốc thử

(+) Ph n ứng dương tính.ả

Cỏc mẫu đều (+) với phản định tớnh của : Saponin, flavonoid, tanin.

Phương pháp sắc ký lớp mỏng

B n mộtả: iểm C1 chấm dung dịch thử chiết từ ĐThuốc mỡ EUPOLIN mẫu 1, điểm A là dịch đối chiếu chiết từ cây cỏ Lào

B ng 13: ảKết qu SKLM mẫu1 TM ả

 19 71

 18 1

Chất đối chiếu Chất thử

Chất đối chiếu Chất thử

Màu sắcRfì100

Số thứ tự vết

4623 72

4523 1

Chất đối chiếu

Chất thửChất đối

chiếu Chất

thử

Màu sắcRfì100

Số thứ tự vết

B n haiả: iểm C2 chấm dung dịch thử chiết từ Thuốc Đmỡ EUPOLIN mẫu 2, điểm A là dịch đối chiếu chiết từ cây cỏ Lào

B ng 14:ả Kết qu SKLM mẫu 2 TMả

B n baả : iểm C2 chấm dung dịch thử chiết từ thuốc mỡ EUPOLIN Đmẫu 3, điểm A là dịch đối chiếu

B ng 15ả : Kết qu SKLM mẫu 3 TMả

4623 72

4523 1

Chất đối chiếu

Chất thửChất đối

chiếu Chất

thử

Màu sắcRfì100

Số thứ tự vết

ở c ba b n sắc ký, vết chấm chất thử và vết chấm chất đối chiếu đều ả ảcho nh ng vết màu giống nhau với Rf x100 gần bằng nhau Có thể khẳng ữđịnh các chất trong thuốc mỡ tương tự với các chất có trong cỏ Lào.

Vậy trong định tính, thuốc mỡ EUPOLIN ph i cho các ả phản ứng định tính cây cỏ Lào.

ịnh lươn

Kết qu định lượng tanin được thể hiện trong ả B ngả 16

B ng 16: ả Kết qu định lượng tanin trong TM EUPOLINả .

Mẫu 3

2,2%2,1%

2,1%

2,2% 2,2%

2,4%

Mẫu 1

Trung bỡnh Lần 3

Lần 2 Lần 1

Kết quả

Từ kết qu trên để đ m b o chất lượng thuốc giới hạn hàm lượng ả ả ảtanin trong thuốc mỡ EUPOLIN là không dưới 2%

3.3 Kết quả nghiên cứu độ ổn định:

B ng 17: ảDiễn biến chất lượng của mẫu 1 theo thời gian b o qu nảả

TCCSộ vô khuẩn

TCCSịnh lượng

ịnh tínhĐ

TCCSộ đồng nhất

TCCSộ mịn

TCCSHinh thức, thể chất

Thời gian b o qu n(ngày)ảảYC

TC đ G

B ng 18: ả Diễn biến chất lượng của mẫu 2 theo thời gian b o ảqu n.ả

TCCSộ vô khuẩn

TCCSịnh lượng

ịnh tínhĐ

TCCSộ đồng nhất

TCCSộ mịn

TCCSHinh thức, thể chất

Thời gian b o qu n(ngày)ảảYC

TC đ G

B ng 19: ảDiễn biến chất lượng của mẫu 3 theo thời gian b o qu n.ảả

TCCSộ vô khuẩn

TCCSịnh lượng

ịnh tínhĐ

TCCSộ đồng nhất

TCCSộ mịn

TCCSHinh thức, thể chất

Thời gian b o qu n(ngày)ảảYC

TC đ G

B ng 20: ả Sự biến đổi hàm lượng tanin theo thời gian bảo quản trong điều kiện lão hoá cấp tốc.

Tỷ lệ % so với hàm lượng ban đầu

Mẫu1

Hàm lượng ban đầu(%)

TC đ G

Kết qu trên cho thấy : Trong điều kiện b o qu n của ảảảnghiên cứu, sau 190 ngày hàm lượng tanin vẫn đạt trên 2%, các chỉ tiêu về định tính, độ mịn, độ nhiễm khuẩn, vẫn đạt theo tiêu chuẩn cơ sở Sau 175 ngày ở c ba mẫu ảbắt đầu xuất hiện các tub không đạt về màu sắc và mùi vị, tỷ lệ này là 2,5%, tiếp tục t ng lên 5% ở ngày 190 ăThời điểm kết thúc nghiên cứu của ba mẫu này là 175 ngày.

Tuổi thọ của thuốc khi b o qu n ở nhiệt độ 20ảả 0C được dự đoán dựa vào kết qu trên theo công thức: ả

C = kìCtn+C0.

ở đây ttn = 400C còn ttb = 200C nên có k = 4

B ng 21: ảKÕt quả dù ®o¸n tuæi thä cña thuèc

760Trung binh

175MÉu 3

175MÉu 1

Tuæi thä cña thuèc(ngµy) Co

CtnTªn mÉu

VËy tuæi thä dù kiÕn cña thuèc mì EUPOLIN lµ 760 ngµy, tøc lµ 2 n m 1 th¸ng.ă

PhÇn 4 :

KÕt luËn vµ kiÕn nghÞ

4.1 Kết luận.

Tiêu chuẩn cao cỏ Lào.

+ C m quan : Cao cỏ Lào có màu đen nhánh, thể chất ảmềm và dẻo, dính, đồng nhất.

+ Mùi vị : Có vị chát và mùi thơm đặc trưng của cỏ Lào.+ ộ ẩm: Không quá 20% Đ

+ ộ nhiễm khuẩn: ạt giới hạn mức 1, theo tiêu chuẩn ĐĐPL 10.7 D VN III Đ

+ ịnh tính: Ph i thể hiện các ph n ứng định tính của Cỏ ĐảảLào.

+ ịnh lượng: Hàm lượng tanin ph i đạt từ 10 % trở lên.Đả

Tiêu chuẩn cơ sở TM EUPOLIN.

+ Hỡnh thức thể chất : Thuốc mỡ màu nâu sẫm, đồng nhất, mùi thơm nhẹ, thể chất mềm, không ch y ở nhiệt độ 37ả oC.

+ ộ nhiễm khuẩn: Đ ạt giới hạn mức 1, theo tiêu chuẩn PL 10.7 ĐD VN III.Đ

ộ ổn định của thuốc mỡ EUPOLIN

độ ổn định khá cao, bước đầu chúng tôi dự đoán tuổi thọ của thuốc là 25tháng Với độ ổn định này thuốc mỡ EUPOLIN có thể đáp ứng được các yêu cầu khi đưa vào sử dụng

4.2 Kiến nghị.

Tiếp tục nghiên cứu độ ổn định của thuốc trong điều kiện b o ảqu n thực để xác định tuổi thọ chính xác của thuốc.ả