Bệnh thán thư do nấm Colletotrichum spp. gây ra là bệnh phổ biến và gây thiệt hại lớn nhất đối với cây mãng cầu ta. Bệnh hại cả trên lá, ngọn, hoa và quả gây thiệt hại nghiêm trọng đến năng suất, chất lượng của cây mãng cầu ta. Nghiên cứu này nhằm xác định nấm Colletotrichum gây bệnh thán thư trên cây mãng cầu ta tại tỉnh Bình Thuận và tỉnh Tây Ninh ở cấp độ loài dựa trên đặc điểm hình thái, sinh học và phân tử.
Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 2/2019 aggressiveness and host range of Alternaria dauci in a controlled environment Plant Pathology 61(1), 63-75 CAB International., 2007 Crop Protection Compendium CABI International, UK George N.A 1997 Plant pathology Academic press, USA, pp 300 - 302 Hariprasad K., Nagaraja A and Suresh P 2018 Host range of Alternaria tenuisima incitant of Kodo blight J Mycopathol Res 56(2): 153 -155 Karunakara M K., Shenoi M M and Sreenivas S S, 2003 Perpetuation and host range of Alternaria alternata causing brown spot disease of tobacco Indian phytopath 56(2): 138 - 141 Manicom B., Ruggiero C., Ploetz R.C and Goes A.D, 2003 Disease of Passion Fruit In Disease of Tropical Fruit Crops (Ploetz R.C) CABI international, UK, pp 413 - 441 Mary E P and Edwin L C., 1994 Isolation, pathogencity and partial host range of Alternaria limicola, causal agent of Mancha foliar de los Citricos in Mexico Plant disease 78(9): 879 - 883 Rajesh K M., Sharma S S , 2013 Studies on host range and seed transmission nature of Alternaria alternata (Fr.) Keissler causing leaf blight of Isabgol J biopest 6(2): 112 -116 10 Reis A and Boiteux L.S., 2010 Alternaria species infecting brassicaceae in the Brazilian neotropics: geographical distribution, host range and specificity Journal of Plant Pathology 92 (3), 661-668 11 Simmons E.G., 2007 Alternaria: An st identification manual edition American Society Microbiolgy, USA, pp 582 - 587 12 Vakalounakis D.J., 1990 Host range of Alternaria alternata f sp cucurbitae causing leaf spot of cucumber Plant disease 74 (3): 227-230 Phản biện: TS Nguyễn Thị Bích Ngọc ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, SINH HỌC VÀ PHÂN TỬ CỦA NẤM Colletotrichum spp GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN CÂY MÃNG CẦU TA (ANNONA SQUAMOSA L.) TẠI TỈNH BÌNH THUẬN VÀ TÂY NINH Morphological, Biological and Molecular Characteristics of Colletotrichum spp Causing Anthracnose on Custard Apple (Annona squamosa L.) in Binh Thuan and Tay Ninh Provinces Đoàn Thị Lan Anh , Nguyễn Thị Hải Hằng Lê Đình Đơn Ngày nhận bài: 07.1.2019 Ngày chấp nhận: 15.3 2019 Abstract Samples of anthracnose were collected from the diseased custard apple (Annona squamosal L.) in Binh Thuan province (15 samples) and Tay Ninh province (25 samples) in 2016 and 2017 Isolates of Colletotrichum spp were identified based on morphological, biological characteristics and sequence analysis of ITS, ACT, TUB2, CHS, GS and GPDH The results indicated that Colletotrichum gloeosporioides and Colletotrichum capsici (or C truncatun) are the major pathogens of custard apple anthracnose in the studied regions The isolates of the fungus grown well on PDA medium in the range of 25-30oC Conidia produced by C gloeosporioides were colorless, cylindrical with one end round and one end slightly acute or both ends round Conidia produced by Bộ môn Bảo vệ thực vật, Khoa Nông học, Đại học C capsici were colorless and falcate Appressoria formation was observed at 24-hour after the incubation, Nông lâm Thành phố Hồ Chí Minh colorless at the early stage, turned into medium to dark Bộ môn Bảo vệ thực vật, Khoa Nông học, Đại học brown Appressoria were cylindrical, ovoid, obovoid, Nơng lâm Thành phố Hồ Chí Minh clavate or undefined in shape, lobed Bộ môn Công nghệ Sinh học, trường Đại học Nông Keywords: Annona squamosa L., Anthracnose, Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Colletotrichum spp., custard apple, 25 Kết nghiên cứu Khoa học ĐẶT VẤN ĐỀ Cây mãng cầu ta (Annona squamosa L.) ăn có giá trị dinh dưỡng cao, có khả thích nghi rộng, chịu thời tiết khắc nghiệt vùng nhiệt đới nhiệt đới Ngồi ra, mãng cầu ta có độ cao, lại có hương thơm nhẹ nhiều người ưa thích Bình Thuận Tây Ninh hai tỉnh có đặc điểm thuận lợi điều kiện khí hậu đất đai, giá trị mãng cầu ta cơng nhận; đó, năm gần việc trồng mãng cầu ta ngày quan tâm Hiện nay, bệnh thán thư nấm Colletotrichum spp gây bệnh phổ biến gây thiệt hại lớn mãng cầu ta Bệnh hại lá, ngọn, hoa gây thiệt hại nghiêm trọng đến suất, chất lượng mãng cầu ta Nghiên cứu nhằm xác định nấm Colletotrichum gây bệnh thán thư mãng cầu ta tỉnh Bình Thuận tỉnh Tây Ninh cấp độ loài dựa đặc điểm hình thái, sinh học phân tử PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thu thập mẫu bệnh phân lập nấm gây bệnh Trong nghiên cứu này, mẫu mãng cầu ta có triệu chứng bệnh thán thư lấy từ 03 huyện thuộc tỉnh Bình Thuận (huyện Hàm Thuận Bắc, huyện Bắc Bình huyện Lagi) 03 huyện thị thuộc tỉnh Tây Ninh (huyện Tân Châu, huyện Dương Minh Châu thành phố Tây Ninh) Các mẫu bệnh rửa sạch, khử trùng sau đem cấy mơi trường WA (water agar) Các mẫu Colletotrichum spp sau cấy o để 27 C, chế độ 12 sáng 12 tối Khi nấm mọc khoảng – ngày nhận diện vị trí điểm cấy đồng đem cấy chuyền sang môi trường PDA Nguồn nấm sử dụng để nghiên cứu đặc điểm hình thái học, sinh học, xác định tác nhân gây bệnh theo quy tắc Koch kỹ thuật phân tử 2.2 Nghiên cứu đặc điểm hình thái nấm Colletotrichum spp Nguồn nấm nuôi cấy môi o trường PDA, ủ tối 27 C từ 12 - 14 ngày, sau làm tiêu quan sát hình dạng kích thước bào tử kính hiển vi độ phóng đại 400 lần Đặc điểm phát triển tản nấm, màu 26 BVTV - Số 2/2019 sắc cấu trúc sợi nấm; đặc điểm hình thái bào tử giác bám quan sát độ phóng đại 400 lần Dựa vào đặc điểm để phân loại định danh theo khóa phân loại Sutton (1995) 2.3 Lây bệnh nhân tạo Nhỏ dịch bào tử nấm Colletotrichum spp nồng độ 10 bào tử/ml lên mãng cầu ta khơng có dấu hiệu bệnh, khơng có vết thương giới Những mãng cầu ta sử dụng thí nghiệm lau cồn 70% lau lại nước cất vô trùng trước nhỏ dung dịch bào tử nấm - Lây bệnh nhân tạo lá: thí nghiệm bố trí lần lặp lại, lần lặp lại Lá mãng cầu ta gây vết thương gần phần gân chính, sử dụng micropipet nhỏ 10 bào tử/ml dung dịch bào tử lên chỗ gây vết thương Lá mãng cầu ta đối chứng gây vết thương gần phần gân nhỏ nước vơ trùng Các sau lây bệnh đặt hộp giữ ẩm nhiệt độ phòng, điều kiện tối - Lây bệnh lên quả: Thí nghiệm bố trí lần lặp lại, lần lặp lại Quả mãng cầu ta lây bệnh gây vết thương, sử dụng micropipet nhỏ 10 bào tử/ml dung dịch bào tử lên vị trí gây vết thương Quả mãng cầu ta đối chứng gây vết thương nhỏ nước vô trùng Các sau lây bệnh đặt hộp giữ ẩm nhiệt độ phòng, điều kiện tối Quan sát biểu triệu chứng sau lây bệnh Thời gian xuất triệu chứng tính từ lây nhiễm đến có triệu chứng xuất lá, Tính tỷ lệ bệnh sau ngày sau lây bệnh 2.4 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm Colletotrichum spp Mỗi thí nghiệm bố trí theo kiểu hồn toàn ngẫu nhiên, lần lặp lại, lần lặp lại đĩa petri có đường kính cm Nguồn nấm nuôi cấy môi trường PDA (Potato Dextrose Agar), CO, GA (Green bean agar) nhiệt độ phòng để quan sát tiêu đường kính tản nấm, màu sắc, hình thái phân bố tản nấm mơi trường, đường kính tản nấm Sau xác định mơi trường thích hợp cho nấm sinh trưởng phát triển nấm Colletotrichum, lấy khoanh nấm có Kết nghiên cứu Khoa học đường kính mm có thời gian nuôi cấy (lấy từ mép tản nấm ngày tuổi) đặt vào trung tâm đĩa petri dán kín xung quanh đĩa petri paraffin Các đĩa thí nghiệm đặt tủ định ơn (Sanyo MIR 153) mức nhiệt độ: o 15, 20, 25, 30 35 C Quan sát tiêu đường kính tản nấm, màu sắc, hình thái phân bố tản nấm môi trường, đường kính tản nấm Đánh giá khả nảy mầm hình thành giác bám bào tử sau 12, 24, 36, 48 kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần Tính tỷ lệ bào tử nảy mầm bào tử hình thành giác bám 100 bào tử quan sát Mô tả màu sắc tản nấm, cách mọc tản nấm, hình dạng bào tử, kích thước bào tử, hình dạng kích thước giác bám mẫu phân lập BVTV - Số 2/2019 2.5 Xác định loài nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư mãng cầu ta kỹ thuật phân tử DNA tổng số nguồn nấm chiết suất thực phản ứng PCR khuếch đại vùng gen Internal transcribed spacer (ITS), Partial actin (ACT), β – tubulin (TUB2), chitin (CHS - 1), Glutamine synthetase (GS), glyceraldehyde - - phosphate dehydrogenase (GAPDH) với cặp mồi tương ứng: ITS ITS 5, ACT – 512F ACT – 783R, Bt2a Bt2b, CHS – 79F CHS – 345R, GSF1 GSR1, GD92F1 GDR1 (Bảng 1) Các sản phẩm PCR giải trình tự, so sánh với Ngân hàng gen xây dựng phả hệ Bảng Danh sách mồi trình tự Tên vùng gen Internal transcribed spacer (ITS) Partial actin (ACT) β – tubulin (TUB2) Cặp mồi ITS Trình tự (5’ - 3’) GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG ITS TCC TCC GCT TAT TGA TATGC ACT – 512F ACT– 783R Bt2a ATG TGC AAG GCC GGT TTCGC Bt2b chitin (CHS – 1) GAPDH CHS – 79F CHS – 345R GD92F1 GDR1 Tham khảo White ctv, 1990 Carbone Kohn, 1999 TAC GAG TCC TTC TGG CCCAT GGT AAC CAA ATC GGT GCT GCT TTC O’Donnell Cigelnik, 1997 ACC CTC AGT GTA GTG ACC CTT Glass Donaldson, 1995 GGC TGG GGC AAG GAT GCT TGG AAG Carbone Kohn, 1999 AAG TGG AAG AAC CAT CTG TGA GAG TTG GCC GTC AAC GAC CCC TTC ATTGA Peres ctv, 2008 GGG TGG AGT CGT ACT TGA GCATGT KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Đặc điểm hình thái nấm Colletotrichum spp gây bệnh thán thư mãng cầu ta Các mẫu bệnh thán thư thu thập mãng cầu ta tỉnh Bình Thuận tỉnh Tây Ninh có triệu chứng bệnh điển sau: – Trên lá: vết bệnh đốm đen nhỏ, sau vết bệnh mở rộng với hình dạng tròn đến oval Các vết bệnh điển hình có màu nâu nhạt, xung quanh có viền màu nâu đen sẫm, ngồi có quầng màu xanh vàng nhạt Khi ẩm độ khơng khí thấp, vết bệnh khô, màu nâu, rạn nứt thủng – Trên quả: vết bệnh có hình dạng bất định, màu nâu đậm đến màu đen Vết bệnh lúc đầu đốm đen nhỏ, sau lan rộng thành vết 27 Kết nghiên cứu Khoa học bệnh lớn, mơ bệnh khơng có ranh giới rõ rệt với mơ khỏe Trong điều kiện ẩm ướt xuất khối bào tử màu hồng gạch theo vòng đồng tâm mơ bệnh Quả non bị bệnh khô đen rụng, lớn bị khô đen phần, phần vỏ cứng Quan sát hình thái nấm kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần, xác định 02 lồi Colletotrichum gây triệu chứng bệnh thán thư mãng cầu ta C gloeosporioides C capsici (hay C truncatun) Nấm C gloeosporioides có bào tử khơng màu, hình trụ hai đầu tròn đầu tròn đầu nhọn, nảy mầm sau 12 giờ; Giác bám hình thành sau 24 giờ, có dạng tròn, hình chùy, hình BVTV - Số 2/2019 trứng ngược hay hình dạng khơng xác định, có phân thùy; lúc đầu khơng màu chuyển dần sang nâu đến đen Nấm C capsici có bào tử khơng màu, hình lưỡi liềm, nảy mầm sàu 12 giờ; giác bám hình thành sau 24 giờ, ban đầu khơng màu sau có màu nâu đến nâu đen, có dạng hình hình trứng, hình trứng ngược, hình trụ, hình chùy hay hình dạng khơng xác đinh có phân thùy (Hình 3) Đặc điểm tản nấm, kích thước bào tử giác bám nấm Colletotrichum thể Hình 1-2 bảng Kết phù hợp với nghiên cứu nấm Colletotrichum spp Sutton (1995) A1 B1 B2 B3 B4 C1 C2 D1 D2 Hình Các dạng tản nấm Colletotrichum spp phân lập sau ngày nuôi cấy A1-4: mẫu nấm C gloeospoirioides phân lập Bình Thuận B1-4: mẫu nấm C gloeospoirioides phân lập Tây Ninh C1-2, D1-2: mặt trước mặt sau mẫu nấm C capsici phân lập Tây Ninh Sử dụng mẫu phân lập tiến hành lây bệnh lên mãng cầu ta theo quy tắc Koch nhận thấy mẫu sau lây bệnh có triệu chứng điển hình bệnh thán thư mãng cầu ta (Hình 4) Sau ngày lây bệnh, ghi nhận xuất triệu chứng bệnh thán thư mẫu mãng cầu ta Trên lá, vùng gây vết thương biểu bì bắt đầu chuyển sang màu nâu, sau vùng bệnh lan rộng dần 28 bề mặt xuất hệ sợi nấm giọt dầu nhỏ màu cam; vết bệnh xuất có dạng hình tròn, lõm xuống Trên quả, vùng gây vết thương biểu bì bắt đâu chuyển sang màu nâu đen, sau ngày hệ nấm bắt đầu phát triển xuất giọt dầu màu cam chứa bào tử Sợi nấm xâm nhập vào phần thịt mãng cầu làm cho phần thịt cứng lại thâm đen Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 2/2019 Bảng Tỷ lệ bệnh nấm Colletotrichum sp mãng cầu ta ngày sau lây bệnh Địa điểm Bình Thuận Tây Ninh Tỷ lệ bệnh (%) Trên Trên 69,33 100 75,00 71,22 Colletotrichumn sp C gloeosporioides C gloeosporioides C capsici (hay C truncatun) 72,20 66,70 Bảng Đặc điểm hình thái nấm Colletotrichum Lồi Colletotrichu Sợi nấm mn Bình C Sợi nấm mảnh, Thuận gloeosporioides màu trắng đục đến nâu nhạt, đơn bào, suốt phân nhánh, có vách ngăn, tế bào sợi nấm có nhiều hạt dầu; Địa điểm C gloeosporioides Tây Ninh C capsici (hay C truncatun) Đặc điểm hình thái Tản nấm - Tản nấm màu trắng đến trắng xám, mép tròn Trên bề mặt tản nấm xuất giọt dầu màu cam chứa ổ bào tử bên có gai - Mặt sau tản nấm có màu trắng đục cam nhạt, mọc vòng thành đường tròn đồng tâm màu cam xanh đậm, đen - Đường kính tản nấm sau ngày ni cấy 90 mm Sợi nấm mảnh, - Tản nấm màu trắng đến màu trắng, mọc trắng xám, mép tròn bung Trên bề mặt tản nấm xuất giọt dầu màu cam chứa ổ bào tử bên có gai - Mặt sau tản nấm có màu trắng đục, mọc vòng thành đường tròn đồng tâm - Đường kính tản nấm sau ngày nuôi cấy 90 mm Sợi nấm mảnh, - Tản nấm màu trắng, màu trắng lúc xù, sau chuyển sang màu đầu mọc bung vàng nâu Trên bề mặt tản cao sau sát nấm xuất nhiều búi mặt thạch nấm đen mọc thành đường tròn đồng tâm, mép gợn sóng Trên bề mặt tản nấm xuất giọt dầu màu cam chứa ổ bào tử bên có gai - Mặt sau tan nấm có màu vàng nâu đến nâu - Đường kính tản nấm sau ngày nuôi cấy 90 mm Bào tử - Bào tử đơn bào, khơng màu, tế bào có dạng hình trụ, bên có giọt dầu hình tròn khơng màu - Bào tử xuất sau ngày với mật độ thấp - Kích thước trung bình 9,24 – 21,25 x 3,75 – 7,5 µm - Bào tử suốt có dạng hình trụ hai đầu tròn đầu tròn đầu nhọn - Kích thước trung bình 14,01 – 4,29 x 4,97 – 6,68 µm Giác bám - Có dạng hình trứng ngược, hình chùy, tròn hay hình dạng khơng xác định, có phân thùy, lúc đầu khơng màu chuyển dần sang nâu đến đen; - Kích thước trung bình 3,33 – 1,67 x 2,5 – 7,92 µm - Có dạng hình trứng ngược, hình chùy, tròn hay hình dạng khơng xác định, có phân thùy, lúc đầu không màu chuyển dần sang nâu đến đen; - Kích thước trung bình 7,81 – 7,78 x 6,25 – 11,65 µm - Bào tử khơng - Có dạng hình màu, hình lưỡi trứng ngược, hình liềm, nảy mầm chùy, tròn hay sau 12 giờ; hình dạng khơng - Kích thước xác định, có phân trung bình 25,51 - thùy, lúc đầu không 38,55 x 3,65 màu chuyển dần 4,69 µm sang nâu đến đen; - Kích thước trung bình 9.34 - 23.96 x 6.25 - 9.34 µm 29 Kết nghiên cứu Khoa học A1 B1 BVTV - Số 2/2019 A2 A3 B2 B3 Hình Đặc điểm hình thái nấm Colletotrichum gây bệnh thán thư mãng cầu ta A1-3: nấm Colletotrichum gloeosporioides B1-3: nấm Colletotrichum capsici (hay C truncatun) Hình Hình dạng giác bám dòng Colletotrichum spp mơi trường PDA A1-4: mẫu nấm C gloeospoirioides phân lập Bình Thuận B1-4: mẫu nấm C gloeospoirioides phân lập Tây Ninh C1-4: mẫu nấm C capsici phân lập Tây Ninh 30 Kết nghiên cứu Khoa học A1 B1 BVTV - Số 2/2019 A2 A3 B2 B3 Hình Triệu chứng bệnh nấm C gloeospoirioides phân lập Tây Ninh sau ngày mãng cầu ta A1-3: Triệu chứng lá, quả, thịt mẫu có lây bệnh B1-3: Triệu chứng lá, quả, thịt mẫu đối chứng 3.2 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm Colletotrichum spp Quan sát nguồn nấm nuôi cấy môi trường PDA, CO, GA nhiệt độ phòng cho thấy, 03 mơi trường thí nghiệm ni cấy mơi trường PDA tốc độ tăng trưởng mẫu nấm phát triển nhanh mọc dày, phân bố bề mặt thạch, có khác biệt màu sắc rõ ràng, dễ nhận biết xuất búi nấm, giọt dầu màu cam chứa bào tử sau - 12 ngày Trên môi trường CO, sợi nấm mọc yếu, không mọc bung mà mọc sát mặt thạch, khó nhận biết tăng trưởng sợi nấm Trên môi trường GA, sợi nấm phát triển mức trung bình, tản nấm bung nhẹ bề mặt thạch, mọc thưa so với mẫu nuôi cấy mơi trường PDA Như vậy, 03 mơi trường thí nghiệm, PDA môi trường phù hợp cho sinh trưởng phát triển nấm Colletotrichum (hình 5) Kết nghiên cứu cho thấy bào tử bắt đầu nảy mầm sau 12 đạt tỉ lệ cao sau 48 môi trường PDA Các mẫu nấm phân lập nuôi cấy môi trường PDA để đánh o giá ảnh hưởng 05 mức nhiệt độ 15 C, o o o o 20 C, 25 C, 30 C, 35 C đến trình sinh trưởng phát triển mẫu nấm Trong mức nhiệt độ thí nghiệm mẫu phân lập o o sinh trưởng tốt 25 C, tiếp đến 30 C (Bảng 5) Kết phù hợp với nghiên cứu trước ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng phát triển nấm Colletotrichum spp Ngồi ra, q trình thử nghiệm nhận thấy, mức nhiệt độ khác nhau, hình dạng màu sắc tản nấm nhóm phân lập có khác biệt 31 Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 2/2019 Hình Đặc điểm tản nấm dòng Colletotrichum spp sau ngày o môi trường dinh dưỡng nhiệt độ 27 C điều kiện tối A1-3: mẫu nấm C gloeospoirioides phân lập Bình Thuận B1-3: mẫu nấm C gloeospoirioides phân lập Tây Ninh C1-3: mẫu nấm C capsici phân lập Tây Ninh Bảng Đường kính tản nấm Colletotrichum spp phân lập từ mãng cầu ta o môi trường dinh dưỡng 27 C điều kiện tối Colletotrichumn sp Địa điểm Bình Thuận C gloeosporioides - 2NSC 28,19±3,32 26,14±1,89 26,71±0,65 - 4NSC 57,99±2,44 53,04±2,68 53,21±1,58 - 2NSC 33,07±3,02 19,54±1,31 21,63±1,88 - 4NSC 60,13±2,48 44,77±1,31 51,22±3,25 C capsici - 2NSC 22,28±2,19 17,67±0,72 16,28±1,62 (hay C truncatun) - 4NSC 37,56±2,11 35,61±1,68 36,89±0,87 C gloeosporioides Tây Ninh Đường kính tản nấm (mm) PDA CO GA Ngày sau cấy Các giá trị trung bình lần lặp lại ±SD Bảng Đường kính tản nấm dòng nấm Colletotrichum spp phân lập từ mãng cầu ta môi trường PDA mức nhiệt độ khác điều kiện tối Địa điểm Bình Thuận 32 Lồi Colletotrichumn Đường kính tản nấm (mm) Ngày sau cấy o 15 C 20 oC 25 oC 30 oC 35 oC C - 2NSC 11,73±1,04 25,03±1,84 27,63±1,65 28,01±2,47 14,01±1,42 gloeosporioides - 4NSC 22,28±3,35 45,73±3,38 53,19±2,44 57,01±3,33 23,33±2,73 Kết nghiên cứu Khoa học Địa điểm Tây Ninh Lồi Colletotrichumn BVTV - Số 2/2019 Đường kính tản nấm (mm) Ngày sau cấy o 15 C 20 oC 25 oC 30 oC 35 oC C - 2NSC gloeosporioides - 4NSC 18,25±1,31 56,53±3,86 70,97±3,46 69,27±3,64 19,42±1,35 C capsici - 2NSC 3,83±0,81 18,17±2,02 22,33±1,15 19,28±1,86 13,17±2,92 (hay C truncatun) - 4NSC 15,17±3,61 29,00±3,22 38,17±3,68 36,11±2,01 24,50±2,18 3,52±0,52 33,10±1,01 34,57±3,42 35,89±2,08 7,08±1,05 Các giá trị trung bình lần lặp lại ±SD 3.3 Xác định loài nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư mãng cầu ta kỹ thuật sinh học phân tử Ở Bình Thuận, dựa kết định danh sinh học phân tử 05 vùng gen Internal transcribed spacer (ITS), Partial actin (ACT), β – tubulin (TUB2), Glutamine synthetase (GS), Glyceraldehyde – – phosphate dehydrogenase (GAPDH) xác định tồn loài C aenigma, C endophytica, C fructicola, C gloeosporioides, C siamense, C melanocaulon C musae thuộc phức hợp loài Colletotrichumn gloeosporioides Ở Tây Ninh, dựa kết định danh sinh học phân tử 05 vùng gen Internal transcribed spacer (ITS), Partial actin (ACT), β – tubulin (TUB2), chitin (CHS – 1), Glyceraldehyde – – phosphate dehydrogenase (GAPDH) xác định tồn loài C aenigma, C fructicola, C gloeosporioides, C melanocaulon, C siamense, C tropicale C viniferum thuộc phức hợp loài Colletotrichumn gloeosporioides KẾT LUẬN Dựa vào đặc điểm hình thái, sinh học kết sinh học phân tử (trên trình tự vùng gen ITS, ACT, TUB2, GS GPDH) xác định loài Colletotrichum gloeosporioides tác nhân gây bệnh thán thư mãng cầu ta Bình Thuận Dựa vào đặc điểm hình thái, sinh học kết phân tích trình tự vùng gen ITS, ACT, TUB2, CHS – GPDH, xác định loài Colletotrichum gloeosporioides Colletotrichum capsici (hay C truncatun) 02 tác nhân gây bệnh thán thư mãng cầu ta Tây Ninh Cả nấm C gloeosporioides C capsici phát triển tốt môi trường PDA o khoảng nhiệt độ từ 25 đến 30 C TÀI LIỆU THAM KHẢO Ann P J., Chen M F., and Hwang R C.,1997 Effect of Environmental Factors on Disease Incidence of Mango Anthracnose and Bacterial Black Spot In: Proceedings of the Symposium on Climatic Effects on the Occurrence of Plant Disease and Insects, p 29 – 40 Tu C C and C M Yang, Eds Society of Agrometeorology, wufeng, Taichung, Taiwan, R.O.C Cannon PF, Buddie AG, Bridge PD, 2008 The typification of Colletotrichum gloeosporioides Mycotaxon 104: 189 – 204 Chen ZJ, Ribeiro A, Silva MC, Santos P, Guerra – Guimara˜ es L, Gouveia M, Fernandez D, Rodrigues CJ Jr, 2003 Heat shock – induced susceptibility of green coffee leaves and berries to Colletotrichum gloeosporioides and its association to PRs and hsp70 gene expression Physiol Molec Plant Pathol 63: 181 – 189 Du M, Schardl CL, Vaillancourt LJ Using mating – type gene sequences for improved phylogenetic resolution of Colletotrichum species complexes Mycologia, 2005 97 (3): 641 – 658 Sharma M., Kulshrestha S., 1998 Colletotrichum gloeosporioides: An anthracnose causing pathogen of fruits and vegetables Biosci Biotechnol Res Asia 2015; 12 (2) Sutton B.C., 1995 The Coelomycetes fungi Imperrecti with pycnidia Acervuli and Stromaea Principal Mycologist Common wealth Mycologycal Institute, pages 523 – 537 Weir B.S., Johnston P.R., Damm U., 2012 The Colletotrichum gloeosporioides species complex Stud Mycol 73:115–180 Phản biện: TS Trịnh Xuân Hoạt 33 ... KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Đặc điểm hình thái nấm Colletotrichum spp gây bệnh thán thư mãng cầu ta Các mẫu bệnh thán thư thu thập mãng cầu ta tỉnh Bình Thuận tỉnh Tây Ninh có triệu chứng bệnh điển... thư mãng cầu ta tỉnh Bình Thuận tỉnh Tây Ninh cấp độ loài dựa đặc điểm hình thái, sinh học phân tử PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thu thập mẫu bệnh phân lập nấm gây bệnh Trong nghiên cứu này, mẫu mãng. .. giá trị trung bình lần lặp lại ±SD 3.3 Xác định loài nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư mãng cầu ta kỹ thuật sinh học phân tử Ở Bình Thuận, dựa kết định danh sinh học phân tử 05 vùng gen