Nghiên cứu này nhằm i) xác định tác nhân gây bệnh thối cổ rễ lạc tại Bắc Ninh trong vụ lạc xuân 2016 và 2017 dựa trên đặc điểm hình thái và phân tử và ii) nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc.
Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 3/2018 0,09 mm, sải cánh 1,89 ± 0,09 mm; trưởng thành đực có chiều dài thể 0,84 ± 0,07 mm, sải cánh 1,58 ± 0,12 mm o Ở điều kiện nhiệt độ trung bình 28,5 C ẩm độ trung bình 75,5% với thức ăn giống dưa lưới Taki vòng đời bọ phấn trắng dao động từ 16 đến 22 ngày trung bình 18,86 ± 1,58 ngày Tỉ lệ trứng nở 88% Tuổi thọ trưởng thành đực trung bình 19,76 ± 2,2 ngày trưởng thành trung bình 24,46 ± 2,83 ngày Trung bình trưởng thành đẻ 79 ± 32,7 trứng TÀI LIỆU THAM KHẢO Đàm Ngọc Hân, 2012 Nghiên cứu thành phần bọ phấn hại trồng; đặc điểm sinh học, sinh thái loài Bemisia tabaci (Gennadius) hại đậu tương hướng phòng trừ vùng Hà Nội, Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, 142 trang Fekrat L and P Shishehbor, 2007, Some Biologycal Features of Cotton Whitefly, Bemisia tabaci (Homoptera: Aleyrodidae) on Various Host Plants”, Pakistan Journal of Biological Sciences 18: 31803184.2 Lê Thị Tuyết Nhung, 2014 Nghiên cứu thành phần loài họ bọ phấn Aleyrodidae (Homoptera) đặc điểm sinh học, sinh thái, biện pháp phòng trừ bọ phấn thuốc Bemisia tabaci (Gennadius) hại họ cà vùng Hà Nội, Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, 157 trang Ronald F.L, Mau and Jayma L Martin Kessing, 1992, Bemisia tabaci biological characteristics as biology control agents, Department of Entomology, Honolulu, Hawaii Viện Bảo vệ thực vật, 2000, Phương pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật tập 3, Nhà xuất Nông nghiệp Tr 16-20 Phản biện: TS Nguyễn Thị Thủy ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, SINH HỌC VÀ PHÂN TỬ CỦA NẤM Fusarium solani GÂY BỆNH THỐI CỔ RỄ LẠC Morphological, Biological and Molecular Characteristics of Fusarium solani Causing Collar Rot of Groundnut Nguyễn Đức Huy * Nguyễn Thị Mai Anh Ngày nhận bài: 25.05.2018 Ngày chấp nhận: 22.06.2018 Abstract During a field survey in spring season of 2016 and 2017, 15 samples of collar rot were collected from groundnut in Luong Tai, Thuan Thanh and Gia Binh districts of Bac Ninh province The samples were then single isolated using a technic of glass needle DNA was extracted from fungal mycelium after seven days of culture on PDA The result of rDNA-ITS sequences showed that the two isolates were identical and shared highly sequences with the Fusarium solani available in GenBank The fungus produced macroconidia, microconidia, o chlammydospore and pycnidium on PDA and CLA Fuethermore, the fungus grown well at 25-30 C, pH – 7, PDA and PCA, the diameter of fungal mycelium was 90mm after days of culter Based on morphological and molercular characteristis, the fungus was identified as F solani and the first time for detection of F solani causing Bộ môn Bệnh cây, Khoa Nông học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Học viên lớp cao học K24BVTVB, Khoa Nông học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 38 collar rot of groundnut Keywords: F solani causing collar rot of groundnut, Luong Tai, Thuan Thanh and Gia Binh districts of Bac Ninh Kết nghiên cứu khoa học ĐẶT VẤN ĐỀ Cây lạc (Arachis hypogaea L.) có nguồn gốc từ Nam Mỹ, lạc trồng 100 quốc gia thuộc Châu lục Ở Việt Nam, lạc trồng phổ biến nhiều tỉnh với vùng sản xuất lạc lớn Nghệ An, Thanh Hóa, đem lại hiệu kinh tế cao nhờ khả cải tạo, nâng cao độ phì đất tăng suất trồng khác Tuy nhiên, trình sinh trưởng phát triển lạc, số loài nấm gây hại vùng rễ Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani, Aspergillus niger, làm giảm suất cây lạc Trên giới ngồi bệnh nấm có nguồn gốc đất hại lạc phổ biến héo rũ gốc mốc trắng (S rolfsii), lở cỗ rễ (R solani) héo rũ gốc mốc đen (A niger) Bệnh thối nâu rễ lạc nấm Fusarium solani thuộc chi Fusarium phát Argentina (Federico et al., 2007) Chi Fusarium xác định 70 loài phân bố rộng khắp vùng đất canh tác vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới (Leslie and Summerell, 2006) gây thiệt hại có ý nghĩa kinh tế cho ngành sản xuất rau màu hoa giới (Agrios, 2005) Trong chi Fusarium, loài F oxysporum, F solani F moniliforme xem quan trọng phạm vi phân bố rộng mức độ gây thiệt hại cho trồng (Agrios, 2005) Ở Việt Nam, loài ghi nhận, F oxysporum gây bệnh héo vàng cà chua, khoai tây chuối, F moniliforme gây bệnh lúa von lúa, mốc hồng ngô F solani phân bố nhiều nước giới Trong đó, F solani gây bệnh thối thân lạc phát lần Cordoba vào năm 1992, sau xuất phổ biến vùng trồng lạc Argentina (Federico et al., 2007) Bệnh thối thân báo cáo Indonesia, Pakistan, Ai Cập Úc (Widodo and Budiarti, 2009; Zaman and Ahmed, 2012) Hiện nay, Việt Nam nấm hại có nguồn gốc đất đa dạng bệnh héo rũ gốc mốc trắng, lở cổ rễ, héo vàng, héo rũ gốc mốc đen Những nghiên cứu bệnh tập trung vào điều tra tỷ lệ bệnh, phân lập giám định BVTV - Sè 3/2018 nấm gây bệnh thử nghiệm phòng trừ bệnh điều kiện in vitro, in vivo điều kiện đồng ruộng (Đỗ Tấn Dũng, 2006; Trần Thị Thu Hà Phạm Thanh Hòa, 2012; Nguyễn Văn Viên cộng sự, 2012) Tuy nhiên, thối cổ rễ F solani chưa ghi nhận Nghiên cứu nhằm i) xác định tác nhân gây bệnh thối cổ rễ lạc Bắc Ninh vụ lạc xuân 2016 2017 dựa đặc điểm hình thái phân tử ii) nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thu thập mẫu bệnh phân lập nấm gây bệnh Trong nghiên cứu này, 15 mẫu bệnh thối cổ rễ lạc điển hình, mẫu bệnh thu thập từ giống lạc Sen lai huyện Lương Tài, Thuận Thành Gia Bình tỉnh Bắc Ninh Các mẫu bệnh rửa vòi nước, sau lại nước cất khử trùng cồn 95% Nấm gây bệnh phân lập theo phương pháp i) đặt ẩm mẫu bệnh giấy thấm đĩa petri, sau sợi nấm phát triển hình thành bào tử phân sinh sử dụng kỹ thuật cấy đơn bào tử kim thủy tinh với hỗ trợ kính hiển vi quang học ii) cấy trực tiếp mô bệnh vào môi trường WA (water agar), sợi nấm mọc từ mô bệnh, tiến hành cắt đỉnh sinh trưởng cấy chuyển sang môi trường PDA Nguồn nấm sử dụng để kiểm tra lại triệu chứng nguyên nhân gây bệnh theo qui tắc Koch với giống lạc Sen lai 2.2 Nghiên cứu đặc điểm hình thái nấm Nguồn nấm cấy môi trường PDA nuôi cấy tủ định ôn với 12 o sáng/12 tối 25 C Đặc điểm phát triển tản nấm, hình hình kích thước loại bào tử nấm gây bệnh theo dõi quan sát sau ngày nuôi cấy 2.3 Tách chiết DNA, PCR giải trình tự vùng rDNA-ITS Nguồn nấm ni cấy môi o trường PDA nhiệt độ 25 C ngày DNA 39 Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 3/2018 BLAST trực tuyến NCBI (National Centerfor Biotechnology Information) nấm tách chiết theo phương pháp đun sôi CTAB * Phương pháp đun sơi Cạo sợi nấm (kích thước khoảng đầu que diêm) cho vào 0,1 ml nước cất vô trùng ống o 0,5ml, ủ nhiệt độ 65 C 15-20 phút (máy đun nước nhiệt độ ổn định) DNA thu sử dụng làm khuôn cho phản ứng PCR * Phương pháp CTAB (Cetyltrimethylammonium bromide) Doyle & Doyle (1990) DNA nấm chiết đẹm CTAB với Chlorofom isoamyl (24:1) isopropanol Kết tủa DNA rửa lần với cồn 70% Để khơ khơng khí buồng cấy vi sinh vật 30 phút DNA hòa tan 50 µl đệm TE o giữ -20 C làm khuôn cho phản ứng PCR * PCR giải trình tự Phản ứng PCR nhân vùng rDNA-ITS nấm thực với cặp mồi ITS4 (5’TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’) ITS5(5’GGAAGTAAAGTCGTAACAAGG-3’) White et al (1990) Thành phần phản ứng PCR với tổng thể tích 20µl 8,5 µl H2O, 10 µl GoTaq Mix, 0,5 µl mồi ITS4, 0,5 µl mồi ITS5 0,5 µl DNA khuôn Sản phẩm PCR điện di 0,7 % Agarose gel sử dụng đệm TAE thời gian 30 phút DNA tinh từ Agarose gel sử dụng Kit chiết thương mại theo hướng dẫn nhà sản xuất DNA sau tinh từ Agarose gel sử dụng để giải trình tự với mồi ITS5 (5,0 µl mồi 5,0 µl DNA) Phản ứng giải trình tự thực Trường Đại học Shimane, Nhật Bản * Xác định nấm gây bệnh dựa vào trình tự vùng ITS Từ trình tự vùng gene ITS với kích thước 500 bp, rõ nét, chất lượng tốt so sánh tìm kiếm chuỗi tường đồng sử dụng phần mềm 2.4 Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm 2.4.1 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến phát triển nấm gây bệnh Sự phát triển nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc thử nghiệm môi trường PDA, o PCA, PSA WA nhiệt độ nuôi cấy 25 C Mỗi công thức nhắc lại lần Theo dõi phát triển nấm sau ngày nuôi cấy 2.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến phát triển nấm Tương tự, phát triển nấm o o o o thử nghiệm nhiệt độ 15 C, 20 C, 25 C, 30 C pH 4, 5, 6, Mỗi ngưỡng nhiệt độ pH nhắc lại lần Sử dụng HCl NaOH để điều chỉnh pH Sự phát triển nấm gây bệnh nhiệt độ pH khác theo dõi đo đường kính tản nấm ngày ni cấy Trong nghiên cứu này, thí nghiệm phòng hình thái, chiết tách DNA PCR, ảnh hưởng môi trường nuôi cấy, nhiệt độ pH đến phát triển nấm gây bệnh lở cổ rễ lạc tiến hành năm 2016 2017 Bộ môn Bệnh cây, Khoa Nông học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Đặc điểm hình thái nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc Kết điều tra bệnh hại lạc vụ lạc xuân năm 2016-2017, tỷ lệ nhiễm bệnh thối cổ rễ lạc cao từ 15% đến 20% 15 mẫu bệnh thối cổ rễ có triệu chứng điển hình thu thập từ giống lạc Sen lai (bảng 1) Triệu chứng điển hình lạc bị bệnh cổ rễ bị thối mủn (hình 1a) Bảng Kết thu thập mẫu thối cổ rễ lạc Bắc Ninh đặc điểm tản nấm phân lập môi trƣờng PDA Địa điểm Loại đất Bộ phận bị hại Số mẫu thu Lương Tài Đất cát pha cổ rễ Gia Bình Đất cát pha cổ rễ Thuận Thành Đất thịt nhẹ cổ rễ 40 Đặc điểm tản nấm phân lập môi trường PDA Tản nấm màu trắng kem, xốp Đường kính tản nấm sau ngày ni cấy 90 mm Tản nấm màu trắng kem, xốp Đường kính tản nấm sau ngày nuôi cấy 90 mm Tản nấm màu trắng kem, bơng xốp Đường kính tản nấm sau ngày nuôi cấy 90 mm Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 3/2018 Các mẫu bệnh đặt giấy thấm giữ ẩm đĩa petri quan sát sau 5-7 ngày Trên bề mặt vế bệnh xuất lớp nấm trắng a) xốp đơi quan sát nhiều thể mở hình cầu, mầu cam (hình 1b-c) b) c) Hình Triệu chứng thổi cổ rễ lạc huyện Lƣơng Tài, tỉnh Bắc Ninh (a) Sợi nấm trắng, xốp thể mở màu cam hình thành phần cổ rễ đặt ẩm giấy thấm sau 3-5 ngày (b) Quả thể mở mầu cam hình thành bề mặt vết bệnh (c) Quan sát mẫu bệnh kính hiển vi quang học vật kính x10 x40 quan sát bào tử lớn, hình lưỡi liềm, hai đầu nhọn chủ yếu có vách ngăn Bào tử nhỏ thường hình ovan, trứng khơng có vách ngăn có vách ngăn Bọc giả (chuỗi bào tử nhỏ) có cuống dài Căn vào đặc điểm hình thái thu được, nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc Bắc Ninh bước đầu xác định Fusarium solani (F solani) Nấm gây bệnh phân lập đơn bào tử để tạo nguồn nấm Môi trường WA sử dụng để cấy đơn bào tử Sau ngày, đỉnh sinh trưởng sợi nấm mọc cắt cấy truyền sang môi trường PDA để theo dõi đặc điểm hình thái cấu trúc nấm gây bệnh (bảng 2) Nấm phát triển nhanh mơi trường PDA, đường kính tản nấm 90 mm sau ngày nuôi cấy, tản nấm bơng, xốp màu trắng kem (hình 2a) Bảng Đặc điểm hình thái nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc Kích thước ( Chỉ tiêu hình thái ) Đặc điểm Dài Rộng Quả thể 100 - 130 95 - 130 Hình cầu, màu cam, có lỗ mở Túi bào tử 65- 112,5 7,5 - 15,0 Thon dài, chứa bào tử túi Bào tử túi 7,5 – 15,0 7,0 - 12,5 Hình ovan, màu đậm, tế bào Bào tử lớn 25,0 - 37,5 5,0 - 6,3 Bào tử cong hình liềm, hai đầu nhọn, chủ yếu có vách ngăn, không màu Bào tử nhỏ 5,0 - 12,5 3,8 - 5,0 Hình ovan, đơn bào đơi có vách ngăn, không màu Bào tử hậu 9,0 – 10,0 9,0 – 10,0 Hình cầu, vách dày, đậm 41 Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 3/2018 a) b) c) Hình Tản nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc môi trƣờng PDA trắng xốp (a) Bào tử phân sinh lớn hình lưỡi liềm chủ yếu có vách ngăn ngang hình thành môi trường PDA sau 12-15 ngày nuôi cấy (b) Quả thể mở hình cầu, mầu cam hình thành môi trường CLA (Carnation Leaf Agar) (c) Giai đoạn hữu tính nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc quan sát thấy trực tiếp đồng ruộng, đặt ẩm mẫu bệnh giấy thấm, nuôi cấy mơi trường CLA (sinh sản hữu tính đồng tản) Bào tử lớn khơng màu có từ 3-5 vách ngăn chủ yếu vách ngăn, bào tử cong hình lưỡi liềm, bào tử nhỏ có hình ovan, đơn bào tử đơi có vách ngăn Kích thước loại bào tử môt tả chi tiết bảng Khi nuôi cấy nấm gây bệnh nhiệt độ từ 30o 35 C môi trường PDA sau 2-3 tuần có xuất bào tử hậu, bào tử hậu hình cầu có vách dày (bảng 1) Các đặc điểm hình thái đặc trưng so với đặc điểm hình thái nấm F solani (Leslie and Summerell, 2006) 3.2 Đặc điểm phân tử nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc Kỹ thuật giải trình tự gene vùng rDNA-ITS nấm gây bệnh sử dụng để làm xác định xác tên nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc Trọng phạm vi nghiên cứu 02 mẫu Fu1 (Lương Tài) Fu2 (Thuận Thành) sử dụng để giải trình tự vùng rDNA-ITS (bảng 3) DNA tách chiết từ mẫu nấm sau ngày nuôi cấy môi trường PDA nhiệt độ o 25 C thực phản ứng PCR với cặp mồi chung ITS Sản phẩm khuếch đại có kích thước khoảng 600 bp Bảng Kết xác định nấm gây bệnh dựa trình tự vùng rDNA-ITS Ký hiệu trình tự Chất lượng trình tự Đoạn đọc (bp) Loài xác định Mức độ tương đồng (%) Fu1 Tốt ~ 500 Fusarium solani 99,0 Fu2 Tốt ~ 500 Fusarium solani 99,0 Kết giải trình tự gene mẫu Fu1 Fu2 (bảng 3) thu chất lượng trình tự tốt, rõ nét với kích thước đọc 500 bp Tìm kiếm so sánh với chuỗi tương đồng có sẵn ngân hàng gene (Genbank) cho thấy 42 Mẫu đồng trình tự KR812232, JN006816 KR812232, JN006816 nấm gây bệnh thối thân Bắc Ninh F solani với mức đồng trình tự 99,0% Như vậy, nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc Bắc Ninh xác định F solani dựa đặc điểm hình thái học đặc điểm phân tử Các kết Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 3/2018 nghiên cứu trước đây, đa số cho thấy bệnh hại vùng rễ gốc thân lạc nấm Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Aspergillus niger gây Nghiên cứu ghi nhận triệu chứng thối cổ rễ lạc F solani gây mơi trường thuận lợi cho nhiều lồi nấm khác Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii,…phát triển 3.3 Đặc điểm sinh học nấm Fusarium solani Đặc điểm sinh học nấm bao gồm ảnh hưởng môi trường, pH nhiệt độ môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm nghiên cứu (bảng 4, 6) Nghiên cứu nhằm góp phần cải thiện pH đất mơi trường đất góp phần tạo điều kiện không thuận lợi cho nấm gây bệnh phát sinh, phát triển Nấm F solani phát triển môi trường WA, PDA, PCA PSA Tuy nhiên, nấm F solani phát triển tốt môi trường PCA PDA, đường kính tản nấm 90 mm sau ngày nuôi cấy (bảng 4) Kết nghiên cứu phù với với nghiên cứu Leslie and Summerell (2006) nấm F solani phát triển tốt môi trường PDA Đây Hình Tản nấm Fusarium solani nuôi cấy môi trƣờng khác Từ trái qua phải, từ xuống dƣới (PSA, PDA, PCA WA) Bảng Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy đến phát triển nấm Fusarium solani Ngày ni cấy Đường kính tản nấm sau ngày ni cấy (mm) môi trường khác WA PDA PCA PSA b ab a b 12,67 13,50 14.33 12,00 d b a c 27,67 48,67 51,33 40,67 d a b c 53,33 72,33 69,67 62,67 d a b c 75,67 89,00 83,67 78,33 d a a b 83,33 90,00 90,00 86,67 a a a a 90,00 90,00 90,00 90,00 LSD0.5 1,57 1,66 2,18 1,49 2,56 0,00 Bảng Ảnh hƣởng nhiệt độ đến phát triển nấm Fusarium solani môi trƣờng PDA Đường kính tản nấm (mm) sau ngày nuôi cấy o Nhiệt độ ( C) d c 11,33 d d 19,83 25,17 b 35,17 23,33 d 29.67 c 47,83 b 57,83 e e 35,33 41,33 d c 64,83 c 76,83 b 15 6,00 20 9,00 25 18,17 a 55,00 a 76,83 a 81,00 a 90,00 a 90,00 a 90,00 a 30 10,83 b 25,00 b 38,33 b 48,50 b 62,83 b 78,17 b 90,00 a 35 6,33 d 13,67 20,00 d 37,17 d 43,50 d 51,83 LSD0.5 1,47 1,57 c 1,70 28,67 1,00 c 1,11 1,29 c 0,59 43 Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 3/2018 Nhiệt độ yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến phát triển, hình thành khả nảy mầm bào tử nấm F solani Kết khảo sát khả sinh trưởng phát triển ngưỡng nhiệt độ khác cho thấy F o solani phát triển tốt khoảng nhiệt độ 25 C – o 30 C Ở nhiệt độ thấp cao nấm F solani có khả sinh trưởng phát triển tốc độ Cụ thể sau ngày nuôi o o cấy đạt 29,67 mm 15 C, 57,83mm 20 C, o 37,17mm 35 C (bảng 4) Kết phù hợp với kết nghiên cứu trước (Agrios, 2005) Bảng Ảnh hƣởng pH đến phát triển nấm Fusarium solani mơi trƣờng PDA pH Đường kính tản nấm sau ngày nuôi cấy (mm) ngày ngày c 22,33 d 28,67 d 34,83 e 45,17 d 50,00 d 19,33 b 31,50 c 43,00 c 52,30 c 67,33 c 74,33 b d 15,33 c 8,17 8,83 11,33 b 25,00 a 37,33 b 48,83 b 62,83 b 78,83 b 90 12,33 a 25,33 a 40,67 a 53,83 a 70,00 a 85,50 a 90 6,00 e 15,83 c 21,67 d 31,00 d 38,17 d 47,83 d 57,50 LSD0.5 0.64 1,38 1,45 F solani loài nấm gây bệnh có nguồn gốc đất, tồn dạng bào tử phân sinh, bào tử hậu pH đất có ảnh hưởng đến nảy mầm bào tử phát triển nấm Nghiên cứu phát triển nấm F solani mức pH khác điều kiện in vitro bổ sung thêm thông tin nhằm hạn chế phát triển bệnh ngồi đồng ruộng F.solani có khả sinh trưởng, phát triển tốt khoảng pH từ 6-7 với đường kính tản nấm đạt 90mm sau ngày ni cấy Kết phù hợp với kết nghiên cứu Sood (1996) KẾT LUẬN Nấm gây bệnh thổi cổ rễ lạc Lương Tài, Thuận Thành – Bắc Ninh xác định Fusarium solani dựa vào đặc điểm hình thái trình tự vùng rDNA – ITS Nghiên cứu lần đầu phát nấm F solani gây bệnh thối cổ rễ lạc xuất giai đoạn hữu tính điều kiện đồng ruộng Nấm F solani phát triển tốt môi o trường PDA, PCA, nhiệt độ 25 - 30 C pH 6–7 Lời cảm ơn Nhóm tác giả xin chân thành cảm ơn GS.TS Makoto Ueno, Khoa Nông nghiệp, Trường Đại học Shimane, Nhật Bản hỗ trợ giải trình tự gene 02 mẫu nấm Fu1 Fu2 44 ngày 3,46 2,90 3,56 a a c 2,63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Tấn Dũng, 2006 Nghiên cứu bệnh héo rũ gốc mốc trắng (Sclerotium rolfsii Sacc.) hại số trồng cạn vùng Hà Nội phụ cận năm 2005-2006, Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 4: tr 19-24 Nguyễn Văn Viên, Nguyễn Thị Tú Bùi Văn Công, 2012 Nghiên cứu sản xuất sử dụng chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma viride phòng trừ số bệnh nấm hại vùng rễ khoai tây, lạc, đậu tương Tạp chí Khoa học Phát triển, số 1: tr 95 - 102 Trần Thị Thu Hà Phạm Thanh Hòa, 2012 Khả đối kháng nấm Trichoderma với nấm bệnh hại trồng Sclerotium rolfsii Sacc điều kiện in vitro Tạp chí khoa học, Đại học Huế, số 6: tr 75 Agrios G.N , 2005 Plant pathology; Deparment of plant pathology; University of Florida, 5th edition, San Diego, California Elsevier Academic Press, pp 922 Doyle J.J and Doyle J.L , 1990 A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue Phytochem Bull., 19: pp 11–15 Federico G.R., Maria M.R., Marcela F., Sofía N.C and Adriana M.T., 2007 Biological control by Trichoderma species of Fusarium solani causing peanut brown root rot under field conditions Crop Protection, 26(4): pp 549-555 ... gây bệnh thối cổ rễ lạc Bắc Ninh vụ lạc xuân 2016 2017 dựa đặc điểm hình thái phân tử ii) nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thu thập mẫu bệnh. .. bào tử hậu, bào tử hậu hình cầu có vách dày (bảng 1) Các đặc điểm hình thái đặc trưng so với đặc điểm hình thái nấm F solani (Leslie and Summerell, 2006) 3.2 Đặc điểm phân tử nấm gây bệnh thối cổ. .. JN006816 nấm gây bệnh thối thân Bắc Ninh F solani với mức đồng trình tự 99,0% Như vậy, nấm gây bệnh thối cổ rễ lạc Bắc Ninh xác định F solani dựa đặc điểm hình thái học đặc điểm phân tử Các kết