SO SáNH CHấT LƯợNG TIÊU bản NHUộM HEMATOXYLIN EOSIN GIữA gắn BAUME KHÔ và gắn BAUME TRONG XYLENE

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ GIANG SO S¸NH CHấT LƯợNG TIÊU BảN NHUộM HEMATOXYLIN-EOSIN GIữA GắN BAUME KHÔ Và GắN BAUME TRONG XYLENE KHểA LUN TT NGHIP C NHÂN Y KHOA KHÓA 2014-2018 HÀ NỘI – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ BÙI THỊ GIANG SO S¸NH CHÊT LƯợNG TIÊU BảN NHUộM HEMATOXYLIN-EOSIN GIữA GắN BAUME KHÔ Và G¾N BAUME TRONG XYLENE KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2014-2018 Người hướng dẫn khoa học: ThS Ngyễn Hữu Quốc TS Hoàng Trung Kiên HÀ NỘI – 2018 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng đào tạo Đại học, Bộ mơn Giải phẫu bệnh Phòng, Ban chức - Trường Đại học Y Hà Nội, giúp đỡ tạo điều kiện cho em suốt trình học tập, rèn luyện tu dưỡng trường Với tất lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn ThS Nguyễn Hữu Quốc người thầy tận tình hướng dẫn, bảo đóng góp ý kiến quý báu suốt q trình học tập để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Hoàng Trung Kiên, Ban Tổ chức Trung ương Đảng, thầy bảo tận tình, hướng dẫn tạo thuận lợi để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô anh chị Bộ môn Giải phẫu bệnh Khoa Kỹ thuật Y học - Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho em suốt trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, xin hết lòng biết ơn cha mẹ, người thân gia đình tạo điều kiện vật chất tinh thần cho Cảm ơn người bạn bên cạnh, ủng hộ, động viên giúp đỡ suốt trình học tập BÙI THỊ GIANG LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các kết nghiên cứu trình bày khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khoa học, khóa luận hay tài liệu tham khảo Hà Nội, ngày……tháng……năm 2018 Sinh viên BÙI THỊ GIANG MỤC LỤC Trang DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ Tên biểu đồ Trang DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ Tên sơ đồ Trang DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình ảnh Tên hình ảnh Trang 10 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, xét nghiệm giải phẫu bệnh đóng vai trò quan trọng khơng thể thiếu lĩnh vực cận lâm sàng Giải phẫu bệnh học khoa học nghiên cứu tổn thương, phân tích bệnh tật mặt hình thái, mặt chế [1] Để giúp nhà Giải phẫu bệnh việc chẩn đốn, tiên lượng bệnh xét nghiệm mơ bệnh học có vai trò quan trọng, cho phép quan sát đặc điểm chi tiết tế bào, cấu trúc mơ bệnh hay mơ lành Vì vậy, u cầu kỹ thuật nhiệm vụ đặt xét nghiệm mô bệnh học Một xét nghiệm mô bệnh học tiến hành theo chuỗi công đoạn liên tiếp nhau, cơng đoạn đòi hỏi u cầu kỹ thuật riêng bao gồm từ việc lấy bệnh phẩm, cắt lọc, cố định bệnh phẩm, gửi xét nghiệm, vùi bệnh phẩm, cắt dán mảnh, nhuộm, gắn lamen lên lam kính chứa bệnh phẩm sau đọc, trả kết lưu trữ Mỗi công đoạn giữ vai trò định, đó, nhuộm gắn lamen giai đoạn cuối định đến chất lượng tiêu Hiện tại, có số nơi thực nhuộm gắn lamen máy, hầu hết nhiều nơi nhuộm gắn lamen tay Nhiều sở Giải phẫu bệnh tiến hành gắn lamen Baume xylene (hay gọi gắn Baume ướt) Tuy nhiên, xylene dung môi hữu không tan nước dễ bay hít vào, gây ảnh hưởng trực tiếp đến hệ thống hô hấp đặc biệt gây ảnh hưởng đến phổi [2] Nhân viên thực gắn Baume qua xylene dễ tiếp xúc trực tiếp qua da, dễ hít vào phổi gây ảnh hưởng xấu đến sức khỏe Để bảo vệ cho thân mình, găng tay trang thiết bị thiết yếu, găng tay lại tan xylene nên hạn chế 36 Hình ảnh 3.8: Tiêu H&E đạt (mất mơ) Hình ảnh 3.9: Tiêu H&E chưa đạt (gấp, cặn, màu sắc chưa đạt) 37 Hình ảnh 3.10: Tiêu H&E chưa đạt Hình ảnh 3.11: Tiêu H&E chưa đạt (cặn, mô, tương phản) 38 Hình ảnh 3.12: Tiêu H&E chưa đạt (mất mơ, bẩn, tương phản) 39 Hình ảnh 3.13: Tiêu H&E gắn Baume khơ Hình ảnh 3.14: Tiêu H&E gắn Baume ướt (bọt Baume) 40 Hình ảnh 3.15: Tiêu H&E gắn Baume ướt Hình ảnh 3.16: Tiêu H&E gắn Baume khô (bọt Baume) 41 CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Kết thực hành chuyển, đúc, cắt, nhuộm, gắn Baume Qua trình nghiên cứu, nhận thấy, tỷ lệ tiêu đẹp tăng dần qua tháng từ tháng 20% lên 53,33% tháng Tỷ lệ tiêu chưa đạt giảm rõ rệt (từ 46,67% tháng đến tháng 3,33%) Ở tháng thứ nhất, kỹ thuật thực chưa thành thạo, kỹ chưa vững nên tỷ lệ số lượng tiêu đẹp hạn chế (20%), tỷ lệ số lượng tiêu đạt không nhiều (33,33%) tỷ lệ tiêu không đạt chiếm đa số (46,67%) Các lỗi thường gặp tháng tiêu bị gấp, xước, rách, mô, diện cắt không đều, nhuộm nhạt, đậm, màu sắc nhân bào tương tương phản, gắn Baume thường xuyên bị ám nước, bị bọt nước, bọt Baume, tiêu bẩn Tiêu bẩn nguyên nhân thường bệnh phẩm cắt bị nát vụn bám lên lam kính lamen kính bị nấm mốc, gắn Baume chưa tốt, làm Baume dính lên mặt tiêu cặn thuốc nhuộm gây ra, quan sát kính hiển vi thấy đám cặn màu xanh tím hay màu đỏ hồng Tuy tiêu bẩn ảnh hưởng tới kết chẩn đoán gây thẩm mỹ gây cảm giác không thoải mái cho bác sĩ đọc tiêu Các tiêu bị ám nước tháng bắt gặp nhiều Nguyên nhân khử nước không tốt, hay bể xylene có nước tiêu cho vào bể xylene để chuẩn bị gắn Baume tiêu bị ám nước (nước khơng tan xylene nên quan sát thấy hạt nước bám tiêu bản) tiêu lấy từ bể xylene III để gắn Baume để lâu ngày khơng khí ẩm cao, xylene bay hơi, nước bám vào lam kính thực gắn Baume làm tiêu bị ám nước, soi kính hiển vi thấy hạt nước 42 thấy mờ ảo có sương mỏng, tiêu khô quan sát thấy màu Eosin phai Để khắc phục lỗi ám nước cần làm tốt khâu khử nước sau nhuộm cồn tuyệt đối, đảm bảo xylene khơng có nước, đặc biệt ngày thời tiết có độ ẩm khơng khí cao cần thao tác nhanh gọn xác, hạn chế thời gian tiếp xúc với khơng khí Tiêu bị bọt khí gặp hơn, nguyên nhân gắn Baume khơng tốt,vẫn để bọt khí gắn lamen Tiêu bắt màu không đều, màu sắc tương phản Ngun nhân gặp bệnh phẩm khơng nhúng hồn tồn phẩm nhuộm nên có phần bệnh phẩm không bắt màu phẩm nhuộm, nhuộm nhân bào tương nhạt hay đậm làm cho màu sắc nhân - bào tương tương phản [14] Khắc phục lỗi cần đảm bảo bệnh phẩm nhúng ngập phẩm nhuộm, phẩm nhuộm đạt yêu cầu thời gian ngâm bệnh phẩm hợp lý nên nhuộm thử ngày để xác định thời gian cho bể cách hợp lý Sự thành thạo thao tác, đặc biệt máy cắt mảnh để làm viêc này, yếu tố “con người” quan trọng [15] Qua thao tác thực kỹ thuật, phát lỗi hay gặp tiêu bị gấp, xước, rách, mô, độ dày mỏng không Tiêu bị gấp nguyên nhân dao cùn, nhiệt độ block cao hay trình tãi bệnh phẩm chưa tốt Các tiêu bị xước đa phần dao cắt gây dao cùn, dao xước, có bụi mảnh vụn, sợi bơng, sợi liên kết dính bề mặt dao ngồi cóthể paraffin bẩn, paraffin có sạn, bệnh phẩm có chứa dị vật khâu, tinh thể hay tính chất bệnh phẩm Khắc phục lỗi kỹ thuật trên, cần lau lưỡi dao vải mịn tẩm xylene thay dao cần thiết, đảm bảo paraffin khơng có cặn bẩn cách lọc paraffin trước chuyển, đúc hay phải khử lại calci, loại bỏ vật thể mô đúc lại Tiêu bị mơ q trình đúc hay q trình cắt phá khơng bộc lộ hết mặt bệnh phẩm, bệnh phẩm cứng khó cắt mảnh bệnh phẩm hay q trình tãi bệnh phẩm vơ tình chạm đầu que tãi vào làm bệnh phẩm Lỗi kỹ thuật hay gặp phải kể tới 43 tiêu dày - mỏng không đều, lỗi hay gặp phải tiêu khơng đạt u cầu Ngun nhân kể tới tháng thứ kỹ thuật chưa tốt, kỹ thuật cắt tiêu chưa hoàn thiện, tay quay chưa đều… Khi quan sát kính hiển vi thấy hình ảnh bệnh phẩm chỗ bắt đậm màu hơn, chỗ bắt nhạt màu Qua tháng này, đánh giá lỗi thường gặp xảy nhiều q trình cắt mảnh bệnh phẩm có ảnh hưởng tới chất lượng tiêu bản, lỗi lại có ảnh hưởng Đúc rút kinh nghiệm cải thiện mặt hạn chế tháng thứ nhất, sang tháng thứ hai tháng thứ ba, tỷ lệ tiêu đẹp tăng lên cách rõ rệt từ 30% đến 43,33%, song tồn tiêu chưa đạt yêu cầu Tỷ lệ tiêu đẹp tăng lên tiêu chưa đạt yêu cầu có xu hướng giảm thực kỹ thuật tốt hơn, nắm vững khâu, bước, hiểu tầm quan trọng công đoạn thực biết cách “xử lý” công đoạn ngày tốt Mặt hạn chế tiêu không đạt yêu cầu mức cao, lỗi kỹ thuật thường gặp tiêu gấp, xước, rách, mô, dày mỏng không đều, màu sắc tương phản, nhuộm nhạt đậm nhân hay bào tương, tiêu bẩn, bị ám nước, có bọt Baume… giảm song bắt gặp mức độ Trong hai tháng này, nhờ vào nắm vững công đoạn kỹ thuật, cắt nhiều tiêu hơn, khắc phục số lỗi cắt Điều cho thấy tiến thành thạo thao tác kỹ thuật thực ngày hoàn Kết tháng thứ tư cho thấy tiến rõ ràng số lượng tiêu đẹp đạt chiếm tỷ lệ cao (52,5% 43,75%), tiêu chưa đạt có tỷ lệ thấp (3,75%) Các tiêu chưa đạt yêu cầu bắt gặp bệnh phẩm cứng khó thao tác cắt mảnh bệnh phẩm sống, bệnh phẩm chứa nhiều canxi,… Ở tháng này, để có lô tiêu đẹp, đạt yêu cầu (chỉ khoảng 1h) so với tháng thứ (phải tới 4h) thời gian hồn thành ngắn nhiều Lý thuyết kỹ thuật nắm vững, tay nghề thực 44 hành nắm thao tác tốt, khắc phục gần toàn lỗi liên quan tới cắt mảnh nhuộm 4.2 So sánh chất lượng tiêu hai phương pháp gắn Baume khô gắn Baume ướt Các cặp tiêu H&E chúng tơi ngồi gắn Baume hai phương pháp khác đúc thành cassette đợt, lựa chọn ngẫu nhiên để cắt lần cắt nhuộm giỏ nhuộm với thời gian, hóa chất yếu tố người Có thể nói ngồi yếu tố gắn Baume khác điều kiện khác hồn tồn tương tự Điều giúp chúng tơi hạn chế sai số so sánh chất lượng tiêu hai phương pháp gắn Baume Từ kết nhận sau nghiên cứu hai phương pháp gắn Baume, tỷ lệ tiêu đạt yêu cầu trở lên (các tiêu đạt đẹp) chiếm đa số Bằng chứng với phương pháp gắn Baume khơ tỷ lệ chiếm tới 93,75% gắn Baume ướt chiếm 96,25% số tiêu Số lượng tiêu chưa đạt chiếm tỷ lệ nhỏ, với phương pháp gắn khô tỉ lệ chưa đạt chiếm 6,25%, tỷ lệ chưa đạt phương pháp gắn ướt 3,75% Chúng nhận thấy, tỷ lệ phân bố tiêu “Đẹp - Đạt Chưa đạt” hai phương pháp gắn chênh lệch khơng nhiều có đơi chút khác biệt Với phương pháp gắn Baume ướt, tỷ lệ số lượng tiêu đẹp nhiều (50% với 46,25%) tiêu chưa đạt (3,75% với 6,25%) so với phương pháp gắn Baume khơ Qua q trình nghiên cứu, chúng tơi quan sát thấy khác biệt lớn hai phương pháp gắn Baume tiêu H&E lỗi tiêu bị bọt Baume (bọt nhỏ li ti tròn) gặp nhiều tiêu gắn Baume khơ Bên cạnh đó, màu sắc tiêu gắn Baume xylene có phần trong, sắc nét so với gắn Baume khô Tuy nhiên, chất lượng màu sắc 45 tương phản thành phần tiêu gắn Baume khô tiêu gắn Baume ướt hồn tồn Điều lý giải tỷ lệ tiêu đẹp gắn ướt nhiều gắn khô (50% 46,25%) chênh lệch khơng nhiều (3,75%) Qua q trình xem xét đánh giá, ghi nhận 3/80 trường hợp (chiếm 3,25%) tiêu gắn Baume ướt chưa đạt liên quan tới lỗi bọt Baume quan sát tiêu gắn Baume khô tương ứng điều xảy Trong số 5/80 tiêu (chiếm 6,25%) tiêu gắn Baume khô chưa đạt, lỗi bị bọt Baume lỗi khác biệt hai phương pháp gắn Nguyên nhân dẫn tới lỗi khâu gắn Baume lên lam kính chứa bệnh phẩm chưa tốt, điều kỹ thuật gắn hồn cảnh sử dụng Baume Trong đó, có tỷ lệ nhỏ (cụ thể 2/80) tiêu gắn Baume khơ chưa thực tốt dẫn đến có nhiều bọt tròn nhỏ li ti phân bố khắp bệnh phẩm che khuất số phần mô mà bác sỹ cần quan sát để đọc tiêu Từ đây, chúng tơi hồn tồn có sở nhận định phương pháp gắn Baume khơ khơng có nhiều tiêu đẹp chênh lệch thấp (3 tiêu bản), có số tiêu khơng đạt cao không đáng kể (2 tiêu bản) so sánh với phương pháp gắn Baume xylene Ngoải ra, qua q trình nghiên cứu này, chúng tơi nhận thấy, phương pháp gắn Baume ướt phải thời gian chờ sau gắn khoảng - 15 phút để tủ hút hút mùi xylene Như vậy, thời gian gắn Baume khô/1 tiêu dài so với gắn Baume ướt 1-2 giây trước gắn Baume khơ phải để tủ ấm 3-5 phút tổng thời gian để hoàn thành tiêu đến tay bác sỹ đọc so với gắn Baume xylene xấp xỉ Hơn nữa, gắn Baume khô tránh gây ảnh hưởng sức khỏe cho nhân viên kỹ thuật gắn mà tránh gây ảnh hưởng sức khỏe cho người dán dãn bác sỹ đọc kết (có trường hợp gắn Baume qua xylene mà tủ hút mùi không đủ thời gian xử lý hút mùi xylene) 46 Vì vậy, so với lợi ích mà gắn Baume khơ mang lại, phương pháp ứng dụng giai đoạn gắn lamen xét nghiệm mô bệnh học Bảng 4.1 So sánh ưu điểm, nhược điểm hai phương pháp gắn Gắn Baume khô - Gắn nhiều nơi, nhiều người - Không cần trang bị tủ hút mùi gắn - Tránh tiếp xúc với xylene Ưu điểm nhiều, bảo vệ sức khỏe - Tiết kiệm xylene (xylene đỡ bị tạp nhiễm cồn găng tay) - Sử dụng găng tay khơng lo bị tan, an tồn cho nhân viên - Tiêu mắc lỗi bọt Baume nhiều - Thường tốn lượng Baume/1 tiêu - Thao tác kỹ thuật gắn Baume khơ lúc đầu có phần khó khăn Nhược hơn, cần phải rèn luyện nhiều điểm muốn đạt tốc độ gắn ngang với gắn Baume ướt Gắn Baume ướt - Tiêu có phần trong, sắc nét - Tiêu bị lỗi bọt nước gặp - Thường cần lượng Baume - Thao tác kỹ thuật gắn Baume xylene dễ dàng - Nơi gắn số người gắn bị hạn chế phụ thuộc vào sở có nhiều tủ hút mùi hay không - Tiếp xúc nhiều với xylene ảnh hưởng không tốt đến sức khỏe - Sử dụng găng tay để bảo vệ tránh tiếp xúc trực tiếp với xylene, găng tay tan xylene gây bẩn xylene III, tốn xylene, tăng chi phí 47 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu, rút số kết luận sau đây: Thực hành kỹ thuật chuyển, đúc, cắt, nhuộm Sau tháng làm nghiên cứu có tiến rõ rệt kỹ thuật thực hành, chứng tỷ lệ số tiêu đẹp ngày tăng qua tháng từ 20% (tháng 1) đến 53,33% (tháng 4) Tỷ lệ số tiêu chưa đạt giảm nhiều (tháng 3,33%) So sánh chất lượng tiêu - Chất lượng tiêu nhuộm H&E phương pháp gắn Baume khơ gắn Baume xylene khơng có nhiều khác biệt - Lỗi bị bọt Baume thường gặp tiêu H&E với phương pháp gắn khô gắn ướt, nhiên tỷ lệ không đáng kể - Phương pháp gắn khô cho kết tốt, đặc biệt không ảnh hưởng đến sức khỏe đảm bảo chất lượng xét nghiệm mô bệnh học 48 KIẾN NGHỊ Từ kết nghiên cứu, xin đề xuất số kiến nghị sau: Các labo Giải phẫu bệnh hồn tồn áp dụng kỹ thuật gắn Baume khô (sử dụng tủ ấm) đòi hỏi người làm cần nắm vững kỹ thuật, điều kiện an toàn Nghiên cứu lượng Baume/1 tiêu kỹ phương pháp gắn Baume khơ để lượng Baume mà khơng ảnh hưởng tới chất lượng tiêu Nghiên cứu tiêu nhuộm nhiều phương pháp khác PAS, PAP, Giemsa, hóa mơ miễn dịch để xem chất lượng tiêu gắn Baume khơ có thực tốt với phương pháp nhuộm TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn Giải phẫu bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội (2007), “Giải phẫu bệnh học”, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y tế (2007), “Hóa đại cương”, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội Bộ môn Giải phẫu bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội (2013), “Giải phẫu bệnh vi thể”, Nhà xuất Y học, tr 12-66 Lê Hoàng Anh (2009), “Một số yếu tố ảnh hưởng dung dịch cố định tới chất lượng nhuộm tiêu HE PAS”, Khóa luận Cử nhân Kỹ thuật y học, Trường Đại học Y Hà Nội Bộ Y tế (2013), “Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Giải phẫu bệnh - Tế bào học”, Hà Nội “Kỹ thuật kính hiển vi thông thường” (1976), Nhà xuất Y học, Hà Nội Cook HC (1997), “Origins of tinctorial methods in histology”, J Clin Pathol, 50(9), tr 716-720 Nguyễn Văn Thỉnh (2016), “So sánh chất lượng tiêu Hematoxylin&Eosin hóa mơ miễn dịch qua phương pháp chuyển máy chuyển nhanh tác động nhiệt độ” Khóa luận Cử nhân Kỹ thuật y học, Trường Đại học Y Hà Nội Enda B.Prophet, Bob Mills, Jacquelyn B.Arrington, Leslie H.Sobin, M.D: Laboratory Methods in Histotechnogy 10 Lương Thị Thủy (2015), “Nghiên cứu áp dụng kỹ thuật chuyển đúc nhanh phương pháp thủ công bệnh phẩm sinh thiết”, Khóa luận Cử nhân Kỹ thuật y học, Trường Đại học Y Hà Nội 11 Đoàn Thị Ngọc Thúy (2014), “Kỹ thuật nhuộm Hóa mơ miễn dịch chẩn đốn Mơ bệnh học”, Khóa luận Cử nhân Kỹ thuật y học, Trường Đại học Y Hà Nội 12 John A Kiernan, MB, ChB, et al (2010), “Special stains and H&E”, Dako, tr 29-35 13 Nguyễn Mạnh Tuấn (2013), “Thực hành kỹ thuật nhuộm Masson’s mô bệnh học bệnh nhân xơ gan tìm hiểu số yếu tố liên quan”, Khóa luận Cử nhân Kỹ thuật y học, Trường Đại học Y Hà Nội 14 Gary W Gill, CT (ASCP) (2010), “H&E Staining: Oversight and Insights”, Connection, 14, tr 104-109 15 Nguyễn Văn Minh (2011) “Đánh giá chất lượng kỹ thuật vi thể tiêu nhuộm Hematoxylin-Eosin số sở giải phẫu bệnh địa bàn Hà Nội” Khóa luận Cử nhân Kỹ thuật y học, Trường Đại học Y Hà Nội ... Kết chất lượng tiêu nhuộm Hematoxylin&Eosin gắn Baume khô Gắn Baume xylene (gắn Baume ướt) Bảng 3.5 Kết chất lượng tiêu nhuộm H&E Gắn Baume khô Gắn Baume ướt Nội dung Số lượng Tỷ lệ (%) Số lượng. .. So sánh chất lượng tiêu nhuộm Hematoxylin&Eosin gắn Baume khô gắn Baume xylene với mục tiêu: Thực tốt kỹ thuật chuyển, đúc, cắt nhuộm tiêu Hematoxylin&Eosin (H&E) So sánh chất lượng tiêu nhuộm. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ BÙI THỊ GIANG SO S¸NH CHấT LƯợNG TIÊU BảN NHUộM HEMATOXYLIN-EOSIN GIữA GắN BAUME KHÔ Và GắN BAUME TRONG XYLENE KHểA LUN TT NGHIP