So sánh hiệu quả phương pháp nhuộm hematoxylin eosin khi thay thế dung dịch có hợp chất hoạt động bề mặt sodium linear alkylbenzene sulfonate

Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ Y TẾ - TRẦN THỊ KHUÊ NỮ SO SÁNH HIỆU QUẢ PHƯƠNG PHÁP NHUỘM HEMATOXYLIN EOSIN KHI THAY THẾ DUNG DỊCH CÓ HỢP CHẤT HOẠT ĐỘNG BỀ MẶT SODIUM LINEAR ALKYLBENZENE SULFONATE LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2019 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ Y TẾ - TRẦN THỊ KHUÊ NỮ SO SÁNH HIỆU QUẢ PHƯƠNG PHÁP NHUỘM HEMATOXYLIN EOSIN KHI THAY THẾ DUNG DỊCH CÓ HỢP CHẤT HOẠT ĐỘNG BỀ MẶT SODIUM LINEAR ALKYLBENZENE SULFONATE Ngành: Kỹ thuật xét nghiệm y học Mã số : 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN VĂN THẮNG PGS.TS TRẦN ANH TUẤN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2019 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan tài liệu trích dẫn, số liệu, kết nêu luận văn hoàn toàn trung thực, thực khoảng thời gian từ tháng 05 năm 2018 đến tháng 06 năm 2019 hướng dẫn khoa học PGS.TS Nguyễn Văn Thắng PGS.TS Trần Anh Tuấn Đề tài nghiên cứu chưa công bố nghiên cứu Tác giả luận văn Trần Thị Khuê Nữ Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC BIỂU ĐỒ iv DANH MỤC SƠ ĐỒ v DANH MỤC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vài nét lịch sử phát triển kỹ thuật hiển vi học 1.2 Các bước tiến hành kỹ thuật mô học 1.3 Hóa chất thay clear-rite 29 1.4 Dung dịch có thành phần LAS nồng độ 1,7% 32 1.5 Các nghiên cứu nước 33 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Đối tượng nghiên cứu 37 2.2 Phương pháp nghiên cứu 38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 50 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 50 3.2 Chất lượng nhuộm nhân tế bào chất phương pháp nhuộm 54 3.3 Độ trong, tương phản đồng phương pháp nhuộm HE 55 3.4 Hiệu nhuộm HE thường quy nhuộm HE cải tiến 62 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 68 4.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 68 4.2 Chất lượng nhuộm nhân nhuộm tế bào chất 68 4.3 Độ trong, tương phản đồng phương pháp nhuộm HE 72 4.4 Hiệu nhuộm HE thường quy nhuộm HE cải tiến 77 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh KẾT LUẬN 82 KIẾN NGHỊ 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH TIẾNG VIỆT TIẾNG ANH Bảng liệu an tồn hóa chất Material Safety Data Sheet Chất liệu di truyền Deoxyribonucleic Axit Cơ quan Quản lý An toàn Occupational Safety and Sức khỏe Nghề nghiệp Health Administration Dung dịch rửa chén (bát) Dish washing liquid Điểm số nhuộm nhân The parameter of nuclear stain Độ đồng Uniformity of stainning Độ rõ Clarity of stainning Độ tương phản, sắc nét Crispness of stainning Hệ thống hài hoà toàn cầu Globally Harmonized System of phân loại ghi nhãn hố chất Classification and Labeling of Chemicals Khối mơ đúc parafin Block Nhuộm tế bào chất Cytoplasmaic stainning Thông tin di truyền Ribonucleic Axit Tế bào hình đài Goblet cell Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TÊN VIẾT TẮT TÊN ĐẦY ĐỦ BV Bệnh viện DNA Deoxyribonucleic Axit GHS Hệ thống hài hoà tồn cầu phân loại ghi nhãn hóa chất GPB Giải phẫu bệnh HE Heamatoxylin-Eosin LAS Chất hoạt động bề mặt Sodium Linear Alkybenzene Sulfonate MSDS Bảng liệu an tồn hóa chất OSHA Cơ quan Quản lý An toàn Sức khỏe Nghề nghiệp RNA Ribonucleic Axit Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Quy trình nhuộm HE với dung dịch Toluen/ Xylen 14 Bảng 1.2: Phân tích kết nhuộm HE 23 Bảng 1.3: Màu sắc thành phần tế bào nhuộm HE 24 Bảng 1.4: Những lỗi thường gặp phương pháp nhuộm HE 28 Bảng 1.5: Tóm tắt cỡ mẫu nghiên cứu nhuộm HE với LAS 36 Bảng 2.1: Quy trình nhuộm HE thường quy 43 Bảng 2.2: Quy trình nhuộm HE cải tiến 44 Bảng 2.3: Hóa chất sử dụng cho phương pháp nhuộm HE cải tiến 49 Bảng 3.1: Thời gian cố định (giờ) 52 Bảng 3.2: Độ rõ tiêu phương pháp nhuộm 55 Bảng 3.3: Tỉ lệ độ đồng 56 Bảng 3.4: Điểm số tiêu phương pháp nhuộm 62 Bảng 3.5: Thời gian nhuộm 64 Bảng 3.6: Cơ cấu giá tiêu 64 Bảng 3.7: So sánh ưu khuyết điểm clear-rite LAS 1,7% 65 Bảng 3.8: So sánh hiệu nhuộm HE thường quy HE cải tiến 66 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh iv DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 1.1: So sánh kết nhuộm HE với xylen HE LAS 1,7% 35 Biểu đồ 3.1: Phân bố người bệnh theo tuổi 50 Biểu đồ 3.2: Tỉ lệ loại bệnh phẩm 51 Biểu đồ 3.3: Bệnh phẩm cố định 52 Biểu đồ 3.4: Bệnh phẩm xử lý 53 Biểu đồ 3.5: Tỉ lệ tiêu tẩy parafin 53 Biểu đồ 3.6: Tỉ lệ nhuộm nhân 54 Biểu đồ 3.7: Tỉ lệ nhuộm tế bào chất 54 Biểu đồ 3.8: Tỉ lệ độ tương phản 55 Biểu đồ 3.9: Tổng hợp tỉ lệ nhuộm 56 Biểu đồ 3.10: Tỉ lệ tiêu nhuộm HE thường quy HE cải tiến 63 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh v DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1: Các bước tiến hành nghiên cứu 40 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 18 Falkeholm Lars, Grant Crawford A, Magnusson Anders, et al (2001), "Xylene-free method for histological preparation: a multicentre evaluation", Laboratory investigation, 81 (9), 1213 19 Fawcett Don Wayne, Bloom William, Raviola Elio (1986), "A textbook of histology", Philadelphia: Saunders, pp 20 Fox Cecil H, Johnson Frank B, Whiting John, et al (1985), "Formaldehyde fixation", Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 33 (8), 845-853 21 Gayathri G Snegha A 2, Teleflo B (2016), "Substitutes for xylene in histopathology " 22 Hazard Communication (2016), " Hazard Classification Guidance for Manufacturers, Importers, and Employers", Publisher U.S Department of Labor, pp 135-139, 149-151, 210-215, 233-236, 294-296 23 Histotechnology National Society for, Guidelines for Hematoxylin & Eosin staining, 2011 24 Indu Sudip, Ramesh V, Indu Priyanka Chakravarty, et al (2014), "Comparative efficacy of cedarwood oil and xylene in hematoxylin and eosin staining procedures: An experimental study", Journal of natural science, biology, and medicine, (2), 284 25 Information National Center for Biotechnology, Ethanol, 2018 26 Information National Center for Biotechnology, Tetrasodium Ethylenediamin tetraacetic acid (Tetrasodium EDTH) 2018 27 K Chan J (2014), "The wonderful colors of the hematoxylin-eosin stain in diagnostic surgical pathology", International journal of surgical pathology, 22 (1), 12-32 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 28 Kiernan John Alan (2008), "Anionic counterstains", Cold Spring Harbor Protocols, 2008 (7), pdb top51 29 Kumar George L, Kiernan John A, Dako AS (2010), "Education GuideSpecial Stains and H & E: Pathology", Dako North America, pp.29-36, 118-129, 177-183 30 Lanigan RS, Yamarik TA (2002), "Final report on the safety assessment of EDTA, calcium disodium EDTA, diammonium EDTA, dipotassium EDTA, disodium EDTA, TEA-EDTA, tetrasodium EDTA, tripotassium EDTA, trisodium EDTA, HEDTA, and trisodium HEDTA", Int J Toxicol, 21, 95-142 31 Lee Arthur Bolles (1921), "The Microtomist's Vade-mecum (BollesLee): A Handbook of the Methods of Animal and Plant Microscopic Anatomy", J & A Churchill Limited, pp 57, 67, 84-85 32 Lyon Hans (1991), "Theory and Strategy in Histochemistry: a Guide to the Selection and Understanding of Techniques", Springer Berlin Heidelberg, pp 34, 69, 81-84, 95, 105,160,173, 216, 283, 513, 466 33 Mescher Anthony L (2013), "Junqueira's basic histology: text and atlas", LANGE Series, McGraw-Hill Medical, pp 84-85 34 Mohan Harsh (2012), "Pathology practical book", Jayee Brothers Medical Publishers (P) Ltd, pp 3-6 35 Negi Amita, Puri Abhiney, Gupta Rakhi, et al (2013), "Biosafe alternative to xylene: A comparative study", Journal of oral and maxillofacial pathology: JOMFP, 17 (3), 363 36 Pandey Pinki, Dixit Alok, Tanwar Aparna, et al (2014), "A comparative study to evaluate liquid dish washing soap as an alternative to xylene and Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh alcohol in deparaffinization and hematoxylin and eosin staining", Journal of laboratory physicians, (2), 84 37 R Kandyala, Sumanth Phani Raghavendra, Saraswathi Thiruvenkatasamyt (2010), "Xylene: An overview of its health hazards and preventive measures", 14 38 Rai Radhika, Yadav Roma, Bhardwaj Amit (2016), "Biosafe substitutes to xylene: A Review" 39 Ramulu Surekha, Koneru Anila, Ravikumar Shamala, et al (2012), "Liquid dish washing soap: An excellent substitute for xylene and alcohol in hematoxylin and eosin staining procedure", Journal of Orofacial Sciences, (1), 37 40 Rolls G (2008), "101 steps to better histology", Melbourne: Leica Microsystems, 41 Sabnis Ram Wasudeo (2010), "Handbook of biological dyes and stains: synthesis and industrial applications", John Wiley & Sons, pp 28, 99, 173-174 42 Sadashiv Roshni, Deshpande SK, Chougule Manisha, et al (2015), "Haematoxylin and eosin staining technique using liquid dish washing soap as a dewaxing agent replacing xylene-A biocompatible technique to demonstrate histoarchitecture of tissue in teaching laboratories", Medica Innovatica, 4, 50-9 43 Scientific Thermo Fisher (2015), "Clear rite safety data sheet Mercedes Medical", Access Year: 2019, Available https://www.msdsexplorer.com/PDFsFiles/10491.pdf Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn from: Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 44 Secretariat United Nations Economic Commission for Europe (2005), "Globally harmonized system of classification and labelling of chemicals (GHS)", United Nations Publications, pp 17-25, 67-68 45 Sravya T., Rao G V., Kumari M G., et al (2018), "Evaluation of biosafe alternatives as xylene substitutes in hematoxylin and eosin staining procedure: A comparative pilot study", Journal of oral and maxillofacial pathology: JOMFP, 22 (1), 148 46 Subramanian Ramaswamy Anikode, Dayasagar Panati (2017), "A Study of Xylene Free Hematoxylin and Eosin Staining Procedure", 1, A16A21 47 Suvarna Kim S, Layton Christopher, Bancroft John D (2018), "Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques E-Book", Elsevier Health Sciences, pp 10,12-15,40-47,126-150 48 Tadrous Paul J (2011), "Diagnostic criteria handbook in histopathology: a surgical pathology vade mecum", John Wiley & Sons, pp 49 Thermo Scientific (2013), "Allan Scientific Signature Series Clear-Rite Instructions for Use", Access Year: 2019, Available from: http://unitylabservices.net/ Signature-Series-Clear-Rite-3.pdf Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: PHIẾU THU THẬP DỮ LIỆU Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 2: TIÊU CHUẨN ĐÁNH GIÁ ĐIỂM SỐ STT Đặc điểm Điểm số Nhuộm nhân Đầy đủ: điểm Không đầy đủ: điểm Nhuộm tế bào chất Đầy đủ: điểm Không đầy đủ: điểm Độ sáng Có: điểm Khơng: điểm Độ đồng Có: điểm Khơng: điểm Độ sắc nét, tương phản Có: điểm Khơng: điểm Khơng đủ yếu tố chẩn đốn tiêu Đủ yếu tố chẩn đoán tiêu 3- điểm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn