Nghiên Cứu Thu Nhận Anthocyanin Từ Phế Liệu Gạo Đen Và Xác Định Hoạt Tính Kháng Oxy Hóa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THU NHẬN ANTHOCYANIN TỪ PHẾ LIỆU GẠO ĐEN VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA Ngành: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN LỆ HÀ Sinh viên thực MSSV: 1151110478 : LÊ TRÍ KIỂNG Lớp: 11DSH05 TP Hồ Chí Minh, 2015 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Là sinh viên năm năm cuối Trường Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh, vinh dự làm đồ án tốt nghiệp để hoàn tất chương trình học Tơi cam đoan nghiên cứu tơi tiến hành phòng thí nghiệm Khoa Công nghê Sinh học-Thực phẩm-Môi trường, Trường Đại học Công nghệ TP Hồ Chí Minh Những số liệu hồn tồn trung thực chưa có cơng bố Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2015 Sinh viên thực Lê Trí Kiểng Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Tận đáy lòng xin gửi vạn lời cảm ơn đến cha mẹ, cha mẹ gian lao nuôi dạy thành người người thầy đầu đời Cha mẹ chỗ dựa vững con, người giúp đứng vững sau lần vấp ngã, nguồn động viên, động lực để tiếp tục phấn đấu sống Với lòng biết ơn sâu sắc Em xin chân thành cảm ơn tồn thể q Thầy Cơ Khoa Cơng nghệ sinh học-Thực phẩm-Mơi trường, tồn thể Thầy Cơ Trường Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh nhiệt tình giảng dạy truyền đạt cho em kiến thức quý báo sở ngành chuyên ngành từ ngày em bước chân vào giảng đường đại học Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn TS.Nguyễn Lệ Hà, người thầy đáng kính, ln tận tình dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành phần thực nghiệm đồ án Em xin chân thành cảm ơn thầy Huỳnh Văn Thành thầy Nguyễn Trung Dũng tạo điều kiện thuận lợi cho em thực đồ án phòng thí nghiệm Khoa Công nghệ sinh học-Thực phẩm-Môi trường, Trường Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh Cảm ơn tất bạn lớp 11DSH05 ln khích lệ, động viên giúp đỡ suốt trình học tập trường trình làm đồ án tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn! TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2015 SVTH: Lê Trí Kiểng Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG _vi DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH _ vii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Gạo đen. _ 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Thành phần hóa học 1.2 Anthocyanin _ 1.2.1 Giới thiệu chung _ 1.2.2 Cấu trúc phân tử _ 1.2.3 Tính chất, đặc điểm _ 12 1.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến màu sắc độ bền anthocyanin 13 1.2.4.1 Cấu trúc _ 13 a) Cấu trúc chuyển hóa mơi trường lỏng _ 13 b) Cấu trúc hóa học 15 1.2.4.2 pH _ 17 1.2.4.3 Nhiệt độ 18 1.2.4.4 Oxy 19 1.2.4.5 Enzyme _ 20 1.2.4.6 Ánh sáng 21 1.2.4.7 Đường sản phẩm biến tính chúng _ 21 1.2.4.8 Các ion kim loại 22 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.4.9 Sulfurdioxide (SO2) 23 1.2.4.10 Acid ascorbic 24 1.2.5 Sự phân bố anthocyanin 25 1.2.6 Các anthocyanin thương mại hóa 27 1.2.7 Ứng dụng anthocyanin _ 27 1.3 Các thành tựu đạt 28 1.3.1 Phương pháp tách chiết anthocyanin _ 28 1.3.2 Phương pháp tách chiết anthocyanin từ dâu Hội An _ 28 1.3.3 Phương pháp tách chiết anthocyanin từ bắp cải tím _ 29 1.3.4 Phương pháp tách chiết anthocyanin từ gạo đen _ 30 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 31 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu. 31 2.1.1 Thời gian _ 31 2.1.2 Địa điểm _ 31 2.2 Nguyên liệu– thiết bị - hoá chất _ 31 2.2.1 Nguồn gạo đen _ 31 2.2.2 Một số hóa chất sử dụng nghiên cứu _ 31 2.2.3 Một số dụng cụ thiết bị chủ yếu dùng nghiên cứu 32 2.2.3.1 Dụng cụ. _ 32 2.2.3.2 Thiết bị _ 32 2.3 Phương pháp nghiên cứu 33 2.3.1 Thí nghiệm 1: Xác định độ ẩm ban đầu nguyên liệu _ 34 2.3.2 Thí nghiệm 2: Xác định bước sóng hấp thu cực đại anthocyanin từ mẫu gạo đen _ 34 ii Đồ án tốt nghiệp 2.3.3 Thí nghiệm 3: Xác định ảnh hưởng kích thước hạt đến hiệu trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 35 2.3.4 Thí nghiệm 4: Xác định ảnh hưởng xử lý nhiệt sơ cho nguyên liệu đến q trình trích ly anthocyanin từ gạo đen 37 2.3.5 Thí nghiệm 5: Xác định tỷ lệ HCl pha chế dung mơi để trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 39 2.3.6 Thí nghiệm 6: Xác định nhiệt độ thích hợp để trích ly anthocyanin từ gạo đen 41 2.3.7 Thí nghiệm 7: Xác định thời gian thích hợp trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 43 2.3.8 Thí nghiệm 8: Xác định hoạt tính kháng oxy anthocyanin 45 2.3.9 Thí nghiệm 9: Xác định thơng số cho q trình quay thu nhận dịch chiết anthocyanin đặc 46 2.4 Các phương pháp phân tích sử dụng nghiên cứu 47 2.5 Các phương pháp thống kê xử lý số liệu _ 47 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN _ 48 3.1 Thí nghiệm 1: Xác định độ ẩm ban đầu nguyên liệu 48 3.2 Thí nghiệm 2: Xác định bước sóng hấp thu cực đại anthocyanin từ mẫu gạo đen 48 3.3 Thí nghiệm 3: Xác định ảnh hưởng kích thước hạt đến hiệu trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 49 3.4 Thí nghiệm 4: Xác định ảnh hưởng chế độ xử lý nhiệt sơ cho ngun liệu đến q trình trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 50 3.5 Thí nghiệm 5: Xác định tỷ lệ HCl pha chế dung mơi để trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 52 3.6 Thí nghiệm 6: Xác định nhiệt độ thích hợp để trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 53 3.7 Thí nghiệm 7: Xác định thời gian thích hợp trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 55 iii Đồ án tốt nghiệp 3.8 Thí nghiệm 8: Xác định hoạt tính kháng oxy anthocyanin 56 3.9 Thí nghiệm 9: Xác định thơng số cho q trình quay thu nhận dịch chiết anthocyanin cô đặc 58 KẾT LUẬN- KIẾN NGHỊ _ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 PHỤ LỤC A PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CƯU _ PHỤ LỤC B SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM _ 11 iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) EtOH (Ethanol) IC50 (Effective concentration of 50%) MeOH (Methanol) v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học gạo đen Bảng 1.2 Các nhóm anthocyanin có tự nhiên 10 Bảng 1.3 Một số anthocyanin phổ biến 11 Bảng 1.4 Bảng anthocyanin có nguồn gốc thực vật 26 Bảng 3.1 Xác định độ ẩm nguyên liệu 48 Bảng 3.2 So sánh giá trị IC50 Ascorbic acid anthocyanin 57 Bảng 3.3 Kết khả kháng DPPH anthocyanin theo thời gian cô quay 61 Bảng 3.4 Đánh giá sơ cảm quan dịch chiết anthocynin 67 vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH Hình 1.1 Gạo đen Hình 1.2 Cation Flavylium (R1 R2 OH, H OCH3, R3 glucosyl H, R4 OH glucosyl) Hình 1.3 Sự đổi màu anthocyanin pH khác .12 Hình 1.4 Sơ đồ cấu trúc anthocyanin chuyển hóa nước 14 Hình 1.5 Sơ đồ biến tính anthocyanin 3,5-diglucoside pH 3,7 .18 Hình 1.6 Sự biến tính anthocyanin với phản ứng oxy hóa catechol 20 Hình 1.7 Phản ứng ngưng tụ A: Cyanidin furural; B: Cyanidin ketobase furural 22 Hình 1.8 Sơ đồ Jurd phản ứng thuận nghịch SO2 anthocyanin 23 Hình 1.9 Sự chuyển hóa malvin thành malvone H2O2 tạo thành từ oxy hóa Ascorbic acid 24 Hình 1.10 Fla-2-ene tạo thành từ phản ứng Ascorbic acid anthocyanin 25 Hình 1.11 Quy trình tách chiết anthocyanin từ bắp cải tím 30 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình tóm tắt nội dung thí nghiệm 33 Hình 2.2 Quy trình trích ly anthocyanin dự kiến 34 Hình 2.3 Bố trí thí nghiệm xác định kích thước ngun liệu cho q trình trích ly anthocyanin từ gạo đen 36 Hình 2.4 Bố trí thí nghiệm xác định chế độ xử lý nhiệt sơ cho ngun liệu 38 Hình 2.5 Bố trí thí nghiệm xác định tỷ lệ HCl pha chế dung mơi để trích ly anthocyanin từ gạo đen 40 Hình 2.6 Bố trí thí nghiệm xác định nhiệt độ thích hợp để trích ly anthocyanin từ gạo đen 42 Hình 2.7 Bố trí thí nghiệm xác định thời gian trích ly anthocyanin từ gạo đen 44 Hình 3.1 Quét quang phổ mẫu anthocyanin từ bước sóng 400-700nm dung mơi EtOH:0,1N HCl (85:15, v:v) 48 vii Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM Thí nghiệm 1: Hình Quang phổ mẫu anthocyanin từ bước sóng 400-700nm dung mơi EtOH:0,1N HCl (85:15, v:v) Thí nghiệm 2: Bảng số liệu OD đo từ thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng kích thước hạt đến hiệu trích ly anthocyanin từ gạo đen Dạng mẫu Nguyên hạt Kích thước hạt 0.0098 inches pH1 535mn 0.073 0.073 0.072 0.077 0.075 0.072 0.074 0.073 0.071 0.128 0.130 0.127 0.129 0.133 700nm 0.028 0.026 0.027 0.025 0.023 0.029 0.021 0.025 0.028 0.048 0.048 0.049 0.050 0.046 pH45 535nm 0.050 0.050 0.051 0.048 0.049 0.045 0.052 0.047 0.045 0.073 0.074 0.070 0.069 0.076 11 700nm 0.026 0.027 0.028 0.022 0.024 0.031 0.024 0.025 0.022 0.035 0.035 0.037 0.035 0.032 Hệ số pha loãng 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 A 0.021 0.024 0.022 0.026 0.027 0.029 0.025 0.026 0.020 0.042 0.043 0.045 0.045 0.043 a (mg/L) 3,507 4,008 3,674 4,342 4,509 4,843 4,175 4,342 3,340 7,014 7,181 7,514 7,514 7,181 TB (mg/L) 4,082 ±0,494 7,323 ±0,202 Đồ án tốt nghiệp 0.128 0.130 0.089 0.087 0.090 0.086 0.091 0.085 0.088 0.092 0.087 Kích thước hạt 0,394 inches 0.049 0.048 0.015 0.017 0.019 0.016 0.018 0.020 0.019 0.017 0.014 0.072 0.073 0.062 0.065 0.073 0.071 0.067 0.066 0.069 0.068 0.072 0.037 0.036 0.023 0.029 0.032 0.025 0.031 0.028 0.027 0.029 0.030 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.044 0.045 0.035 0.034 0.030 0.024 0.037 0.027 0.027 0.036 0.031 7,348 7,514 5,845 5,678 5,010 4,008 6,179 4,509 4,509 6,012 5,177 5,214 ±0,764 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Nguyen Hat 0,394 inches 0,0098 inches Count 9 Mean 4.08222 5.21411 7.32371 Homogeneous Groups X X X Thí nghiệm Bảng số liệu OD thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ xử lý hạt nguyên liệu đến hiệu trích ly anthocyanin từ gạo đen Dạng mẫu pH1 535mn Hệ số 700nm pha loãng A 0.082 0.082 0.084 0.080 0.085 0.079 0.083 0.082 700n m 0.019 0.020 0.020 0.022 0.021 0.024 0.019 0.023 pH45 535n m 0.071 0.070 0.072 0.069 0.073 0.070 0.075 0.069 Hạt 0.0098 inches nấu 80oC/5p 0.033 0.032 0.033 0.030 0.031 0.033 0.034 0.029 10 10 10 10 10 10 10 10 Hạt 0.0098 inches nấu 90oC/5p 0.056 0.057 0.055 0.054 0.057 0.053 0.058 0.060 0.011 0.011 0.012 0.013 0.010 0.009 0.012 0.014 0.042 0.041 0.042 0.040 0.043 0.039 0.044 0.040 0.017 0.017 0.018 0.016 0.019 0.015 0.018 0.015 10 10 10 10 10 10 10 10 12 0.025 0.024 0.025 0.019 0.022 0.018 0.023 0.019 a (mg/L) 4,175 4,008 4,175 3,173 3,674 3,006 3,841 3,173 TB (mg/L) 3,653 ±0,476 0.020 0.022 0.019 0.017 0.023 0.020 0.020 0.021 3,340 3,674 3,173 2,839 3,841 3,340 3,340 3,507 3,382 ±0,306 Đồ án tốt nghiệp Hạt 0.0098 inches Giữ nhiệt đợ phòng 0.128 0.130 0.127 0.129 0.133 0.128 0.130 0.048 0.048 0.049 0.050 0.046 0.049 0.048 0.073 0.074 0.070 0.069 0.076 0.072 0.073 0.035 0.035 0.037 0.035 0.032 0.037 0.036 10 10 10 10 10 10 10 0.042 0.043 0.045 0.045 0.043 0.044 0.045 7,014 7,181 7,514 7,514 7,181 7,348 7,514 7,324 ±0,202 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD o 90 C/5p 80oC/5p Nhiet phong Count 8 Mean 3.38175 3.65313 7.32371 Homogeneous Groups X X X Thí nghiệm Bảng giá trị OD cùa thí nghiệm tối ưu hóa tỉ lệ dung mơi EtOH:HCl 1% việc trích ly anthocyanin từ gạo đen TLDM pH1 V:v 535mn 80:20 0.270 0.260 0.263 0.267 0.265 0.269 0.268 85:15 0.313 0.309 0.301 0.307 0.312 0.311 0.308 pH45 700nm 535nm 0.081 0.490 0.077 0.481 0.078 0.485 0.080 0.487 0.076 0.488 0.081 0.489 0.082 0.486 0.121 0.488 0.134 0.479 0.133 0.480 0.124 0.481 0.130 0.487 0.128 0.485 0.132 0.482 700nm 0.321 0.318 0.319 0.320 0.317 0.319 0.318 0.335 0.340 0.351 0.342 0.350 0.349 0.350 13 n A a (mg/L) TB (mg/L) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.020 0.020 0.019 0.020 0.018 0.018 0.018 0.039 0.036 0.039 0.044 0.045 0.047 0.044 3,340 3,340 3,173 3,340 3,006 3,006 3,006 6,513 6,012 6,513 7,348 7,514 7,848 7,348 3.173 ± 0.167 6.826 ± 0.815 Đồ án tốt nghiệp 90:10 95:5 98:2 99:1 0.306 0.302 0.276 0.318 0.311 0.315 0.305 0.432 0.433 0.439 0.434 0.438 0.430 0.435 0.437 0.272 0.276 0.288 0.279 0.280 0.285 0.283 0.273 0.213 0.209 0.215 0.211 0.215 0.208 0.212 0.214 0.125 0.124 0.110 0.136 0.133 0.130 0.121 0.234 0.238 0.261 0.250 0.249 0.241 0.257 0.245 0.124 0.119 0.116 0.122 0.117 0.121 0.118 0.120 0.121 0.134 0.113 0.130 0.129 0.131 0.118 0.128 0.486 0.456 0.464 0.487 0.458 0.483 0.462 0.464 0.458 0.458 0.462 0.457 0.461 0.465 0.456 0.256 0.264 0.277 0.259 0.271 0.261 0.274 0.263 0.208 0.199 0.218 0.204 0.214 0.201 0.217 0.211 0.338 0.325 0.346 0.349 0.329 0.344 0.326 0.345 0.349 0.357 0.346 0.355 0.348 0.353 0.344 0.125 0.126 0.121 0.123 0.127 0.124 0.121 0.119 0.129 0.140 0.130 0.133 0.139 0.134 0.138 0.137 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 14 0.033 0.047 0.048 0.044 0.049 0.046 0.048 0.079 0.086 0.077 0.068 0.087 0.076 0.066 0.080 0.017 0.019 0.016 0.021 0.019 0.027 0.012 0.009 0.013 0.016 0.014 0.010 0.011 0.010 0.015 0.012 5,511 7,848 8,015 7,348 8,182 7,681 8,015 13,192 14,361 12,858 11,355 14,528 12,691 11,021 13,359 2,839 3,173 2,672 3,507 3,173 4,509 2,004 1,503 2,171 2,672 2,338 1,670 1,837 1,670 2,505 2,004 7.848 ± 0.298 12.92 ± 1.256 2.923 ± 0.919 2.108 ± 0.378 Đồ án tốt nghiệp Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count 8 8 99:1 98:2 80:20 85:15 90:10 95:5 Mean 2.10838 2.9225 3.173 6.82587 7.84817 12.9206 Homogeneous Groups X X X X X X Thí nghiệm Bảng giá trị OD thí nghiệm tối ưu hóa nhiệt độ trích ly anthocyanin từ gạo đen Nhiệt đợ trích ly (oC) 50 55 pH1 535m n 0.065 700n m 0.029 pH45 535n m 0.041 700n m 0.035 Hệ số pha loãng 10 0.069 0.029 0.045 0.039 10 0.074 0.030 0.048 0.038 10 0.072 0.025 0.042 0.034 10 0.067 0.027 0.047 0.039 10 0.073 0.030 0.040 0.033 10 0.065 0.028 0.046 0.037 10 0.071 0.024 0.050 0.031 10 0.070 0.031 0.041 0.040 10 0.133 0.046 0.071 0.035 10 0.129 0.048 0.070 0.037 10 0.131 0.044 0.069 0.031 10 0.134 0.045 0.072 0.036 10 0.128 0.046 0.068 0.033 10 15 A 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.02 0.02 0.03 0.05 0.04 0.04 0.05 0.04 a (mg/L) 5.010 TB (mg/L) 5.543 ±0.676 5.628 5.678 6.513 5.344 6.012 4.676 4.676 6.346 8.516 8.015 8.182 8.850 7.848 8.405 ±0.391 Đồ án tốt nghiệp 60 0.132 0.050 0.067 0.035 10 0.129 0.045 0.073 0.038 10 0.133 0.042 0.067 0.030 10 0.130 0.041 0.069 0.032 10 0.121 0.045 0.069 0.039 10 0.125 0.049 0.070 0.038 10 0.123 0.047 0.067 0.036 10 0.120 0.046 0.071 0.035 10 0.124 0.044 0.068 0.037 10 0.127 0.050 0.065 0.040 10 0.119 0.126 0.121 65 0.087 0.088 0.090 0.086 0.083 0.087 0.089 0.085 70 0.069 0.070 0.048 0.043 0.051 0.018 0.020 0.021 0.019 0.021 0.016 0.022 0.018 0.025 0.023 0.072 0.069 0.070 0.059 0.064 0.069 0.063 0.067 0.066 0.059 0.068 0.049 0.051 0.038 0.031 0.038 0.019 0.024 0.026 0.020 0.025 0.019 0.022 0.023 0.030 0.028 16 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.05 0.04 0.05 0.05 0.04 0.04 0.04 0.03 0.04 0.05 0.03 0.04 0.03 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.03 0.02 0.02 0.02 8.349 8.182 9.017 8.683 7.681 7.310 ±0.866 7.348 7.514 6.346 8.182 8.683 6.179 7.514 6.346 4.843 4.237 ±0.585 4.676 4.342 4.008 3.340 4.008 5.010 3.674 4.175 4.008 4.279 ±0.741 Đồ án tốt nghiệp 0.072 0.029 0.046 0.029 10 0.071 0.027 0.047 0.031 10 0.067 0.022 0.050 0.027 10 0.073 0.030 0.045 0.033 10 0.069 0.024 0.048 0.034 10 0.072 0.031 0.051 0.028 10 0.02 0.02 0.02 0.03 0.03 0.01 4.342 4.676 3.674 5.177 5.177 3.006 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD NhietDoTrichLy_65 NhietDoTrichLy_70 NhietDoTrichLy_50 NhietDoTrichLy_60 NhietDoTrichLy_55 Count 8 9 Mean 4.23762 4.27937 5.54256 7.31033 8.40467 Homogeneous Groups X X X X X Thí nghiệm Bảng giá trị OD thí nghiệm tối ưu hóa thời gian trích ly anthocyanin từ gạo đen Thời gian trích ly (phút) 50 pH1 535m n 0.075 700n m 0.031 pH45 535n m 0.042 700n m 0.035 Hệ số pha loãng 10 0.069 0.028 0.039 0.028 10 0.061 0.030 0.036 0.037 10 0.071 0.027 0.041 0.029 10 17 A a (mg/L) TB (mg/L) 0.03 0.03 0.03 0.03 6.179 5.307 ±0.859 5.010 5.344 5.344 Đồ án tốt nghiệp 55 60 0.068 0.029 0.037 0.031 10 0.063 0.031 0.042 0.033 10 0.069 0.033 0.036 0.036 10 0.073 0.025 0.038 0.028 10 0.065 0.030 0.042 0.032 10 0.131 0.050 0.076 0.039 10 0.127 0.050 0.069 0.035 10 0.135 0.052 0.072 0.038 10 0.129 0.051 0.073 0.034 10 0.132 0.048 0.078 0.037 10 0.128 0.053 0.071 0.040 10 0.130 0.049 0.075 0.036 10 0.134 0.052 0.073 0.041 10 0.136 0.047 0.069 0.034 10 0.135 0.040 0.055 0.035 10 0.136 0.039 0.051 0.036 10 0.139 0.043 0.056 0.036 10 0.138 0.039 0.052 0.034 10 0.131 0.042 0.055 0.037 10 0.140 0.037 0.049 0.033 10 0.137 0.035 0.053 0.040 10 0.136 0.040 0.050 0.039 10 0.133 0.038 0.057 0.034 10 18 0.03 0.02 0.03 0.03 0.02 0.04 0.04 0.04 0.03 0.04 0.04 0.04 0.05 0.05 0.07 0.08 0.07 0.08 0.07 0.08 0.08 0.08 0.07 5.511 3.841 6.012 6.346 4.175 7.348 7.570 ±0.783 7.181 8.182 6.513 7.181 7.348 7.014 8.349 9.017 12.524 13.693 12.691 13.526 11.856 14.528 14.862 14.194 12.023 13.322 ±1.097 Đồ án tốt nghiệp 65 70 0.095 0.020 0.060 0.021 10 0.090 0.018 0.063 0.031 10 0.090 0.023 0.070 0.036 10 0.091 0.019 0.062 0.022 10 0.093 0.021 0.065 0.029 10 0.096 0.017 0.069 0.033 10 0.092 0.022 0.061 0.026 10 0.095 0.019 0.063 0.030 10 0.097 0.023 0.071 0.024 10 0.063 0.022 0.044 0.026 10 0.071 0.021 0.050 0.029 10 0.065 0.027 0.041 0.031 10 0.069 0.023 0.046 0.027 10 0.064 0.026 0.049 0.032 10 0.070 0.022 0.042 0.024 10 0.067 0.020 0.045 0.028 10 0.072 0.025 0.043 0.030 10 0.065 0.019 0.051 0.029 10 19 0.03 0.04 0.03 0.03 0.03 0.04 0.03 0.04 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.03 0.03 0.03 0.02 6.012 6.030 ±0.877 6.680 5.511 5.344 6.012 7.181 5.845 7.181 4.509 3.841 4.843 4.676 4.509 3.507 5.010 5.010 5.678 4.008 4.56 ±0.678 Đồ án tốt nghiệp Bảng 10 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count 9 9 TgianTLy_70 TgianTLy_50 TgianTLy_65 TgianTLy_55 TgianTLy_60 Mean 4.56467 5.30689 6.03056 7.57033 13.3219 Homogeneous Groups X XX X X X Thí nghiệm Bảng 11 giá trị khối lượng nguyên liệu trước sau sấy đên khối lượng không đổi Coc Coc Coc Mo 23.3413 22.5903 22.3819 M1 28.345 27.5935 27.3835 M2 27.838 27.089 26.876 W(%) 11.27 11.21 11.29 Wtb(%) 11.26 ±0.04 Thí nghiệm Bảng 12 OD xác định hàm lượng anthocyanin để xác định giá trị IC50 mẫu pH1 535nm 0.649 0.647 0.652 pH4,5 700nm 535nm 0.331 0.969 0.330 0.972 0.333 0.970 DF A a (mg/mL) a TB (mg/mL) 700nm 0.678 100 0.027 45.087 0.683 100 0.028 46.757 0.679 100 0.028 46.757 46.200 ±0,964 Bảng 13 giá trị OD λ=516nm xác định hoạt tính kháng DPPH anthocyanin Blank Vitamine C Co DF 4.62 0.1000 3.08 0.0667 1.54 0.0333 1.026 0.0222 0.77 0.0167 0.513 0.0111 Lần 2.153 0.068 A1 0.083 0.127 0.312 0.825 A2 0.082 0.133 0.321 0.830 0.996 1.335 1.001 1.315 A3 0.085 0.138 0.329 0.827 Lần 2.142 0.067 Q1 99.231 97.116 88.225 63.569 1.006 1.325 55.351 39.058 20 Q2 99.279 96.828 87.792 63.329 Lần 2.148 0.066 Q3 99.135 96.588 87.393 63.473 Trung bình 2.148 0.067 Qtb logCo 99.215 0.6646 96.844 0.4886 87.804 0.1875 63.457 0.0114 55.111 40.019 54.870 39.539 55.111 39.539 -0.114 -0.29 Đồ án tốt nghiệp 0.385 0.308 0.256 0.154 0.102 67 0.0083 0.0067 0.0056 1.535 1.624 1.702 1.533 1.608 1.701 1.531 1.615 1.698 29.446 25.168 21.419 29.542 25.937 21.467 29.638 25.601 21.612 29.542 25.569 21.500 -0.415 -0.511 -0.591 0.0033 0.0022 1.872 2.053 1.863 2.045 1.871 2.049 13.249 4.550 13.682 4.934 13.297 4.742 13.409 4.742 -0.812 -0.989 Phần trăm bắt gốc tự DPPH chất nghiên cứu tính theo công thức sau: Q(%) = [1 − (A − Ac) ] x100 (A0 − Ac) Trong đó: A độ hấp thu dung dịch chứa mẫu thử A0 độ hấp thu DPPH khơng có mẫu thử Ac độ hấp thu dung dịch chứa chất đối chiếu Q % gốc tự bị ức chế Bảng 14 giá trị OD xác định hoạt tính kháng DPPH Ascorbic acid Lần Blank 1.642 Co (µg/ml) A1 100.000 0.064 50.000 0.080 10.000 1.272 5.000 1.434 1.000 1.467 0.500 1.483 0.100 1.512 0.050 1.573 A2 0.070 0.078 1.271 1.474 1.432 1.497 1.650 1.577 Lần 1.657 A3 0.070 0.077 1.254 1.433 1.467 1.432 1.548 1.550 Q1 96.079 95.099 22.075 12.150 10.129 9.148 7.372 3.635 21 Lần 1.598 Q2 95.712 95.222 22.136 9.700 12.273 8.291 -1.082 3.390 Q3 95.712 95.283 23.177 12.212 10.129 12.273 5.166 5.044 Trung bình 1.632 Qtb logCo 95.834 2.000 95.201 1.699 22.463 1.000 11.354 0.699 10.843 0.000 9.904 -0.301 3.819 -1.000 4.023 -1.301 Đồ án tốt nghiệp Thí nghiệm Bảng15 khối lượng thể tích dịch trước sau quay m mo m3 m6 m9 m12 m15 m18 Khối lượng cốc dịch cô quay (g) Khối lượng dịch lại (g) Thể tích dịch lại (ml) 114.012 195.883 81.871 100.00 179.103 65.091 79.50 165.001 50.989 62.28 157.697 43.685 53.36 146.864 32.853 40.13 131.440 17.429 21.29 124.727 10.715 13.09 22 Đồ án tốt nghiệp Bảng 16 giá trị OD hàm lượng anthocyanin dịch trước sau cô quay Thời gian pH1 pH4,5 535nm 700nm 535nm 700nm phút 0.649 0.647 0.652 phút 0.648 0.647 0.649 phút 0.642 0.643 0.643 phút 0.639 0.641 0.639 12 phút 0.637 0.639 0.638 15 phút 0.635 0.634 0.636 18 phút 0.635 0.637 0.638 0.331 0.330 0.333 0.329 0.329 0.330 0.325 0.329 0.328 0.325 0.328 0.327 0.323 0.321 0.326 0.316 0.315 0.319 0.316 0.313 0.317 0.969 0.972 0.970 0.969 0.970 0.972 0.964 0.962 0.968 0.965 0.967 0.966 0.961 0.967 0.963 0.949 0.956 0.952 0.678 0.683 0.679 0.679 0.678 0.680 0.673 0.676 0.678 0.677 0.681 0.679 0.670 0.675 0.676 0.656 0.660 0.659 0.949 0.947 0.949 0.650 0.645 0.649 Hệ số pha loãng 1.00 1.00 1.00 1.26 1.26 1.26 1.61 1.61 1.61 1.87 1.87 1.87 2.49 2.49 2.49 4.70 4.70 4.70 7.64 7.64 7.64 DF A a (mg/mL) a TB (mg/mL) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.027 0.028 0.028 0.029 0.026 0.027 0.026 0.028 0.025 0.026 0.027 0.025 0.023 0.026 0.025 0.026 0.023 0.024 4.509 4.676 4.676 6.092 5.462 5.672 6.973 7.509 6.705 8.136 8.449 7.823 9.571 10.820 10.403 20.393 18.040 18.824 4.620±0.096 0.020 0.022 0.021 25.519 28.071 26.795 26.795±1.276 5.742±0.321 7.062±0.409 8.136±0.313 10.265±0.636 19.086±1.198 Bảng 17 OD hiệu suất thu hồi anthocyanin dịch trích ly sau quay Thời gian pH1 534n m pH4,5 534n 700n m m D F A a (mg/mL) 700n m a TB (mg/mL) phút 0.649 0.647 0.652 0.648 0.647 0.649 0.642 0.643 0.331 0.330 0.333 0.329 0.329 0.330 0.325 0.329 0.969 0.972 0.970 0.969 0.970 0.972 0.964 0.962 10 10 10 10 10 10 10 10 0.027 0.028 0.028 0.029 0.026 0.027 0.026 0.028 4.509 4.676 4.676 4.843 4.342 4.509 4.342 4.676 4.620 ±0.096 phút phút 0.678 0.683 0.679 0.679 0.678 0.680 0.673 0.676 23 Hiệu suất thu hồi % 100 4.564 ±0.255 99 4.397 ± 0.255 95 Đồ án tốt nghiệp phút 12 phút 15 phút 18 phút 0.643 0.639 0.641 0.639 0.637 0.639 0.638 0.635 0.634 0.636 0.635 0.637 0.638 0.328 0.325 0.328 0.327 0.323 0.321 0.326 0.316 0.315 0.319 0.316 0.313 0.317 0.968 0.965 0.967 0.966 0.961 0.967 0.963 0.949 0.956 0.952 0.949 0.947 0.949 0.678 0.677 0.681 0.679 0.670 0.675 0.676 0.656 0.660 0.659 0.650 0.645 0.649 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.025 0.026 0.027 0.025 0.023 0.026 0.025 0.026 0.023 0.024 0.020 0.022 0.021 4.175 4.342 4.509 4.175 3.841 4.342 4.175 4.342 3.841 4.008 3.340 3.674 3.507 4.342 ±0.167 94 4.119 ± 0.255 89 4.063 0.255 88 3.507 ± 0.167 76 Bảng 18 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count phút 3 phút phút phút 12 phút 15 phút 18 phút Mean 4.62033 5.742 7.06233 8.136 10.2647 19.0857 32.7497 Homogeneous Groups X X X X X X X Bảng 19 OD khảo sát khả kháng DPPH dịch trích ly anthocyanin từ gạo đen trước sau quay Blank Vitamine C Thời gian cô quay (p) phút phút phút phút Lần 0.612 0.118 Lần 0.633 0.12 Lần 0.626 0.066 Trung bình 0.624 0.122 Co (mg/ml) A1 A2 A3 %Q1 %Q2 %Q3 Qtb (%)±SD 4.620±0.096 4.564±0.255 4.397±0.255 4.342±0.167 0.373 0.374 0.375 0.379 0.378 0.378 0.377 0.378 0.374 0.376 0.374 0.376 49.967 49.801 49.602 48.805 48.970 49.004 49.203 49.004 49.767 49.402 49.801 49.402 49.568±0.527 49.402±0.399 49.535±0.305 49.070±0.304 24 Đồ án tốt nghiệp 12 phút 15 phút 18 phút 4.119±0.255 0.385 0.381 0.383 3.618±0.420 0.398 0.387 0.397 3.340±0.167 0.425 0.429 0.428 47.610 45.020 39.641 48.406 47.211 38.845 Bảng 20 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD 18 phút 15 phút 12 phút phút phút phút phút Count 3 3 3 Mean 39.1767 45.8167 48.008 49.0703 49.4023 49.5353 49.568 Homogeneous Groups X X X X X X X 25 48.008 45.219 39.044 48.008±0.398 45.817±1.212 39.177±0.414 ... giới nghiên cứu khai thác chất màu từ thiên nhiên sử dụng thực phẩm, chúng có tính an tồn cao cho người sử dụng Vì đề tài nghiên cứu thu nhận anthocyanin từ phế liệu gạo đen hoạt tính chống oxy hóa. .. hợp để trích ly anthocyanin từ gạo đen 41 2.3.7 Thí nghiệm 7: Xác định thời gian thích hợp trích ly anthocyanin từ gạo đen _ 43 2.3.8 Thí nghiệm 8: Xác định hoạt tính kháng oxy anthocyanin ... trích ly anthocyanin - Xác định hoạt tính kháng oxy hóa anthocyanin - Xác định thơng số cho q trình quay thu nhận dịch chiết anthocyanin cô đặc Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp thu thập thông