BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THU NHẬN ANTHOCYANIN TỪ PHẾ PHẨM GẠO ĐEN VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA Ngành: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN LỆ HÀ Sinh viên thực MSSV: 1151110362 : LÊ ANH TOÀN Lớp: 11DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CAM ĐOAN Là sinh viên năm năm cuối Trƣờng Đại học Công nghệ TP Hồ Chí Minh, đƣợc vinh dự làm đồ án tốt nghiệp để hồn tất chƣơng trình học Tôi cam đoan nghiên cứu tiến hành phòng thí nghiệm Khoa Cơng nghê Sinh học-Thực phẩm-Mơi trƣờng, Trƣờng Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh Những số liệu, hình ảnh hồn tồn trung thực chƣa có cơng bố Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2015 Sinh viên thực Lê Anh Tồn LỜI CẢM ƠN Tận đáy lòng xin gửi vạn lời cảm ơn đến cha mẹ, cha mẹ gian lao nuôi dạy thành ngƣời ngƣời thầy đầu đời Cha mẹ chỗ dựa vững con, ngƣời giúp đứng vững sau lần vấp ngã, nguồn động viên, động lực để tiếp tục phấn đấu sống Với lòng biết ơn sâu sắc Em xin chân thành cảm ơn toàn thể quý Thầy Cô Khoa Công nghệ sinh học-Thực phẩm-Môi trƣờng, tồn thể Thầy Cơ Trƣờng Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh nhiệt tình giảng dạy truyền đạt cho em kiến thức quý báo sở ngành nhƣ chuyên ngành t ngày em bƣớc chân vào giảng đƣờng đại học Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn TS.Nguyễn Lệ Hà, ngƣời thầy đáng kính, ln tận tình dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành phần thực nghiệm đồ án Em xin chân thành cảm ơn thầy Huỳnh Văn Thành thầy Nguyễn Trung Dũng tạo điều kiện thuận lợi cho em thực đồ án phòng thí nghiệm Khoa Cơng nghệ sinh học-Thực phẩm-Môi trƣờng, Trƣờng Đại học Công nghệ TP Hồ Chí Minh Cảm ơn tất bạn lớp 11DSH01 ln khích lệ, động viên giúp đỡ suốt trình học tập trƣờng trình làm đồ án tốt nghiệp Xin chân thành c ảm ơn! TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2015 SVTH: Lê Anh Toàn ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC HÌNH ẢNH v DANH MỤC BẢNG vii MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Gạo đen .5 1.1.1 Giới thiệu gạo đen 1.1.2 Thành phần dinh dƣỡng 1.1.3 Những lợi cho sức khỏe .7 1.2 ANTHOCYANIN .9 1.2.1 Giới thiệu 1.2.2 Phân loại anthocyanin .9 1.2.3 Cấu trúc hóa học anthocyanin 10 1.2.4 Đặc điểm, tính chất anthocyanin 12 1.2.5 Đặc tính quang phổ anthocyanin 13 1.2.6 Sự phân bố anthocyanin 13 1.2.7 Sự chuyển đổi cấu trúc anthocyanin môi trƣờng lỏng .15 1.2.8 Một số yếu tố ảnh hƣởng đến độ màu Anthocyanin (tính khơng bền)(Chunhui Ma cộng sự, 2012); (Mazza Minitiati, 1993); (Francis, 1989) 17 1.2.9 Khả ứng dụng nguồn anthocyanin 24 1.2.10 Vai trò hợp chất anthocyanin 25 1.3 Phƣơng pháp trích ly .29 i ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 1.3.1 Trích ly lỏng – lỏng 29 1.3.2 Trích ly rắn – lỏng 31 1.3.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến q trình trích ly 32 1.4 Những nghiên cứu nƣớc giới 33 1.4.1 Trong nƣớc .33 1.4.2 Trên giới .34 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Thời gian địa điểm .37 2.2 Vật liệu – Hóa chất – Dụng cụ thiết bị 37 2.2.1 Nguyên Liệu .37 2.2.2 Dụng cụ .37 2.2.3 Thiết bị 37 2.2.4 Hóa chất 38 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 38 Bố trí thí nghiệm .40 2.3.1 Thí nghiệm 1: Xác định độ ẩm nguyên liệu 40 2.3.2 t Thí nghiệ 40 2.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến khả trích ly màu anthocyanin 41 2.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ xử lý nguyên liệu sơ đến khả trích ly màu anthocyanin 43 2.3.5 Thí nghiệm 5: Tối ƣu hóa tỷ lệ Ethanol:HCl (1%) làm dung mơi trích ly anthocyanin 45 2.3.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả trích ly anthocyanin 47 ii ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 2.3.7 Thí nghiệm 7: khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến khả trích ly anthocyanin 49 2.3.8 ƣơ DPPH 50 2.3.9 Thí nghiệm 9: Khảo sát ảnh hƣởng thời gian cô - quay đến hoạt tính oxy hóa anthocyanin 51 2.4 Các phƣơ dụng nghiên c u 52 2.5 Các phƣơng pháp thống kê xử lý số liệu 52 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 53 3.1 Độ ẩm nguyên liệu 53 3.2 Bƣớc sóng hấp thu cực đại Anthocyanin 53 3.3 Ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến khả trích ly 54 3.4 Ảnh hƣởng nhiệt độ xử lí nguyên liệu sơ 56 3.5 Khảo sát tối ƣu hóa tỷ lệ Ethanol HCl(1%) làm dung mơi trích ly .57 3.6 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả trích ly 59 3.7 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến khả trích ly 61 3.8 ƣơng DPPH 63 3.9 Thí nghiệm 9: Khảo sát ảnh hƣởng thời gian quay đến hoạt tính oxy hóa anthocyanin 64 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 4.1 Kết luận 69 4.2 KIẾN NGHỊ 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 iii ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) IC50 (Effective concentration of 50%) EtOH (Ethanol) MeOH (Methanol) iv ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1Gạo đen Hình 1.2Thành phần dinh dƣỡng có 100 gram gạo đen .6 Hình 1.3Sự chuyển hóa cấu trúc phân tử Anthocyanin mơi trƣờng lỏng 16 Hình 1.4Cấu trúc chuyển hóa anthocyanin nƣớc 17 Hình 1.5Ảnh hƣởng pH lên tốc độ thủy phân dâu đƣợc đun nóng 45 0C trƣờng hợp có Oxygen ho ặc Nitrogen 19 Hình 1.6Sự biến tính anthocyanin 3,5-di Glucoside pH 3,7 20 Hình 1.7Sự biến tính anthocyanin với phản ứng oxy hóa catechol 21 Hình 1.8Phản ứng ngƣng tụ 22 Hình 1.9Sơ đồ Jurd phản ứng thuận nghịch SO2 anthocyanin 23 Hình 1.10Sự chuyển hóa malvin malvone H2O2 tạo thành từ oxy hóa vitamin C 24 Hình 1.11Sơ đồ trích ly theo đoạn 30 Hình 1.12Sơ đồ trích ly theo nhiều đoạn giao dòng 30 Hình 1.13Sơ đồ trích ly liên tục nhiều đoạn nghịch dòng 31 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình tóm tắt nội dung thí nghiệm 39 Hình 2.3Quy trình trích l y Anthocyanin .40 ảo sát kích thƣớc nguyên liệu đến khả 42 ảo sát xử lí nhiệt độ nguyên liệu đến khả 44 ối ƣu hóa tỷ lệ Ethanol:HCl (1%) làm dung mơiđến khả .46 ảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả 48 ảo sát ảnh hƣởng thời gian đến khả 50 Hình 3.1Bƣớc sóng hấp thu cực đại anthocyanin đo quang 53 Hình 3.2Ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến khả trích ly .55 Hình 3.3Đồ thị biển diễn hàm lƣợng anthocyanin trích ly đƣợc xử lý nhiệt sơ .56 Hình 3.4Đồ thị hàm lƣợng anthocyanin trích ly với tỷ lên dung mơi Ethnol:HCl (1%) khác 58 Hình 3.5Đồ thị hàm lƣợng anthocyanin với nhiệt độ trính ly khác 59 Hình 3.6Biểu đồ thể hàm lƣợng anthocyanin trích ly với thời gian khác 62 Hình 3.7 Mối tƣơng quan tuyến tính % gốc tự DPPH bị ức chế với LogCo (Co nồng độ anthocyanin mg/ml) .63 Hình 3.8Mối tƣơng quan % gốc tự DPPH bị ức chế với Log(Ascorbic acid, µg/ml) 63 Hình 3.9.Sự thay đổi nồng độ anthocyanin dịch chiết bán thành phẩm theo thời gian cô quay .64 v ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Hình 3.10Hiệu suất thu hồi anthocyanin q trình quay dịch trích ly theo thời gian .65 Hình 3.11Sự thay đổi khối lƣợng dịch chiết bán thành phẩm theothời gian cô quay .65 Hình 3.12Sự thay đổi thể tích dịch chiết bán thành phẩm theo thời gian cô quay .66 Hình 3.13.Ảnh hƣởng thời gian cô quay đến khả bắt gốc tự DPPH dịch trích ly anthocyanin từ gạo đen 66 Hình 4.1.Sơ đồ quy trình trích ly anthocyanin t gạo đen 69 Hình 4.2.Dịch chiết anthocyanin trƣớc cô quay .71 Hình 4.3.Dịch chiết sau đặc 71 vi ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1Thành phần dinh dƣỡng loại gạo .6 Bảng 1.2Một số loại Anthocyanin phổ biến Bảng 1.3Cấu trúc hóa học số loại Anthocyanidin 11 Bảng 1.4Sự phân bố Anthocyanin 14 Bảng 2.1Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến khả trích ly .41 Bảng 2.2Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng xử lý nhiệt độ nguyên liệu đến khả trích ly 43 Bảng 2.3Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ dung mơi Ethanol:HCl (1%) đến khả trích ly .45 Bảng 2.4Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả trích ly 47 Bảng 2.5Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến khả trích ly 49 Bảng 3.1Kết đo độ ẩm nguyên liệu 53 Bảng 3.2Kết khảo sát ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến khả trích ly .54 Bảng 3.3Kết khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ xử lý nguyên liệu sơ đến khả trích ly .56 Bảng 3.4Kết tối ƣu hóa tỷ lệ dung môi Ethanol:HCl(1%) 57 Bảng 3.5Kết khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả trích ly 59 Bảng 3.6Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian đến khả trích ly 61 Bảng 3.8.1So sánh giá trị IC50 Ascorbic acid anthocyanin 63 Bảng 3.9.1 Kết khả kháng DPPH anthocyanin theo thời gian cô quay 67 Bảng 4.1.Đánh giá sơ cảm quan dịch chiết anthocynin 71 vii ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 0.075 0.072 0.074 0.073 0.071 0.128 0.130 0.0098 inches 0.127 0.129 0.133 0.128 0.130 0.089 0.087 0,394 inches 0.090 0.086 0.091 0.085 0.088 0.092 0.087 0.023 0.029 0.021 0.025 0.028 0.048 0.048 0.049 0.050 0.046 0.049 0.048 0.015 0.017 0.019 0.016 0.018 0.020 0.019 0.017 0.014 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count NguyenHat 0,394 inches 0,0098 inches 0.049 0.045 0.052 0.047 0.045 0.073 0.074 0.070 0.069 0.076 0.072 0.073 0.062 0.065 0.073 0.071 0.067 0.066 0.069 0.068 0.072 0.024 0.031 0.024 0.025 0.022 0.035 0.035 0.037 0.035 0.032 0.037 0.036 0.023 0.029 0.032 0.025 0.031 0.028 0.027 0.029 0.030 Mean 4.08222 5.21411 7.32371 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.027 0.029 0.025 0.026 0.020 0.042 0.043 0.045 0.045 0.043 0.044 0.045 0.035 0.034 0.030 0.024 0.037 0.027 0.027 0.036 0.031 4,509 4,843 4,175 4,342 3,340 7,014 7,181 7,514 7,514 7,181 7,348 7,514 5,845 5,678 5,010 4,008 6,179 4,509 4,509 6,012 5,177 7,323 ±0,20 5,214 ±0,76 Homogeneous Groups X X X 4: Xác định ảnh hƣởng xử lý nhiệt sơ ngun liệu đến q trình trích ly Bảng số liệu OD thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ xử lý hạt nguyên liệu đến hiệu trích ly anthocyanin từ gạo đen pH1 535mn 0.082 700n m 0.019 pH45 535n m 0.071 700n m 0.033 10 0.0098 inches 0.082 0.020 0.070 0.032 10 80 oC/5p 0.084 0.020 0.072 0.033 10 11 A 0.02 0.02 0.02 a (mg/L) 4,175 4,008 4,175 TB (mg/L) 3,653 ±0,476 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 0.080 0.022 0.069 0.030 10 0.085 0.021 0.073 0.031 10 0.079 0.024 0.070 0.033 10 0.083 0.019 0.075 0.034 10 0.082 0.023 0.069 0.029 10 0.056 0.011 0.042 0.017 10 0.0098 inches 0.057 0.011 0.041 0.017 10 90 oC/5p 0.055 0.012 0.042 0.018 10 0.054 0.013 0.040 0.016 10 0.057 0.010 0.043 0.019 10 0.053 0.009 0.039 0.015 10 0.058 0.012 0.044 0.018 10 0.060 0.014 0.040 0.015 10 0.128 0.048 0.073 0.035 10 0.130 0.048 0.074 0.035 10 0.127 0.049 0.070 0.037 10 0.129 0.050 0.069 0.035 10 0.133 0.046 0.076 0.032 10 0.128 0.049 0.072 0.037 10 0.130 0.048 0.073 0.036 10 0.0098 inches 12 0.01 0.02 0.01 0.02 0.01 0.02 0.02 0.01 0.01 0.02 0.02 0.02 0.02 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 3,173 3,674 3,006 3,841 3,173 3,340 3,382 ±0,306 3,674 3,173 2,839 3,841 3,340 3,340 3,507 7,014 7,181 7,514 7,514 7,181 7,348 7,514 7,324 ±0,202 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count o 90 C/5p o 80 C/5p Nhiet phong Mean 3.38175 3.65313 7.32371 Homogeneous Groups X X X 5: Xác định ảnh hƣởng tỷ lệ EtOH HCl 1% pha dung môi đến hiệu trích ly Bảng 5.giá trị OD cùa thí nghiệm tối ƣu hóa tỉ lệ dung mơi EtOH:HCl 1% việc trích ly anthocyanin từ gạo đen TLDM pH1 V:v 535mn 80:20 0.270 0.260 0.263 0.267 0.265 0.269 0.268 85:15 0.313 0.309 0.301 0.307 0.312 0.311 0.308 0.306 90:10 0.302 0.276 0.318 0.311 0.315 0.305 95:5 0.432 0.433 0.439 0.434 0.438 0.430 pH45 700nm 535nm 0.081 0.490 0.077 0.481 0.078 0.485 0.080 0.487 0.076 0.488 0.081 0.489 0.082 0.486 0.121 0.488 0.134 0.479 0.133 0.480 0.124 0.481 0.130 0.487 0.128 0.485 0.132 0.482 0.125 0.486 0.124 0.456 0.110 0.464 0.136 0.487 0.133 0.458 0.130 0.483 0.121 0.462 0.234 0.464 0.238 0.458 0.261 0.458 0.250 0.462 0.249 0.457 0.241 0.461 700nm 0.321 0.318 0.319 0.320 0.317 0.319 0.318 0.335 0.340 0.351 0.342 0.350 0.349 0.350 0.338 0.325 0.346 0.349 0.329 0.344 0.326 0.345 0.349 0.357 0.346 0.355 0.348 13 n A a (mg/L) TB (mg/L) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.020 0.020 0.019 0.020 0.018 0.018 0.018 0.039 0.036 0.039 0.044 0.045 0.047 0.044 0.033 0.047 0.048 0.044 0.049 0.046 0.048 0.079 0.086 0.077 0.068 0.087 0.076 3,340 3,340 3,173 3,340 3,006 3,006 3,006 6,513 6,012 6,513 7,348 7,514 7,848 7,348 5,511 7,848 8,015 7,348 8,182 7,681 8,015 13,192 14,361 12,858 11,355 14,528 12,691 3.173 ± 0.167 6.826 ±0.815 7.848 ±0.298 12.92 ±1.256 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 98:2 99:1 0.435 0.437 0.272 0.276 0.288 0.279 0.280 0.285 0.283 0.273 0.213 0.209 0.215 0.211 0.215 0.208 0.212 0.214 0.257 0.245 0.124 0.119 0.116 0.122 0.117 0.121 0.118 0.120 0.121 0.134 0.113 0.130 0.129 0.131 0.118 0.128 0.465 0.456 0.256 0.264 0.277 0.259 0.271 0.261 0.274 0.263 0.208 0.199 0.218 0.204 0.214 0.201 0.217 0.211 0.353 0.344 0.125 0.126 0.121 0.123 0.127 0.124 0.121 0.119 0.129 0.140 0.130 0.133 0.139 0.134 0.138 0.137 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.066 0.080 0.017 0.019 0.016 0.021 0.019 0.027 0.012 0.009 0.013 0.016 0.014 0.010 0.011 0.010 0.015 0.012 11,021 13,359 2,839 3,173 2,672 3,507 3,173 4,509 2,004 1,503 2,171 2,672 2,338 1,670 1,837 1,670 2,505 2,004 2.923 ±0.919 2.108 ±0.378 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count 99:1 98:2 80:20 85:15 90:10 95:5 Mean 2.10838 2.9225 3.173 6.82587 7.84817 12.9206 Homogeneous Groups X X X X X X 6: Xác định nhiệt độ thích hợp để trích ly anthocyanin Bảng giá trị OD thí nghiệm tối ƣu hóa nhiệt độ trích ly anthocyanin từ gạo đen (oC) 50 pH1 535m n 0.065 0.069 0.074 700n m 0.029 0.029 0.030 pH45 535n m 0.041 0.045 0.048 700n m 0.035 0.039 0.038 14 A 10 10 10 0.03 0.03 0.03 a (mg/L) 5.010 5.628 5.678 TB (mg/L) 5.543 ±0.676 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 0.072 0.025 0.042 0.034 10 0.067 0.027 0.047 0.039 10 0.073 0.065 0.071 0.070 55 0.133 0.129 0.028 0.024 0.031 0.046 0.048 0.040 0.046 0.050 0.041 0.071 0.070 0.033 0.037 0.031 0.040 0.035 0.037 10 10 10 10 10 10 0.131 0.044 0.069 0.031 10 0.134 0.045 0.072 0.036 10 0.128 0.046 0.068 0.033 10 0.132 0.050 0.067 0.035 10 0.129 0.133 0.130 60 0.030 0.121 0.125 0.123 0.045 0.042 0.041 0.045 0.049 0.047 0.073 0.067 0.069 0.069 0.070 0.067 0.038 0.030 0.032 0.039 0.038 0.036 10 10 10 10 10 10 0.120 0.046 0.071 0.035 10 0.124 0.044 0.068 0.037 10 0.127 0.050 0.065 0.040 15 10 0.03 0.03 0.03 0.02 0.02 0.03 0.05 0.04 0.04 0.05 0.04 0.05 0.04 0.05 0.05 0.04 0.04 0.04 0.03 0.04 0.05 6.513 5.344 6.012 4.676 4.676 6.346 8.516 8.405 ±0.391 8.015 8.182 8.850 7.848 8.349 8.182 9.017 8.683 7.681 7.348 7.514 6.346 8.182 8.683 7.310 ±0.866 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 0.119 0.126 0.121 65 0.087 0.088 0.090 0.086 0.083 0.043 0.051 0.018 0.020 0.021 0.019 0.021 0.072 0.069 0.070 0.059 0.064 0.069 0.063 0.067 0.038 0.031 0.038 0.019 0.024 0.026 0.020 0.025 10 10 10 10 10 10 10 10 0.087 0.016 0.066 0.019 10 0.089 0.022 0.059 0.022 10 0.085 70 0.048 0.069 0.070 0.072 0.071 0.067 0.073 0.069 0.072 0.018 0.025 0.023 0.029 0.027 0.022 0.030 0.024 0.031 0.068 0.049 0.051 0.046 0.047 0.050 0.045 0.048 0.051 0.023 0.030 0.028 0.029 0.031 0.027 0.033 0.034 0.028 Bảng Multiple Range Tests 16 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0.03 0.04 0.03 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.03 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.03 0.03 0.01 6.179 7.514 6.346 4.843 4.237 ±0.585 4.676 4.342 4.008 3.340 4.008 5.010 3.674 4.175 4.008 4.342 4.676 3.674 5.177 5.177 3.006 4.279 ±0.741 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Method: 95.0 percent LSD Count NhietDoTrichLy_65 NhietDoTrichLy_70 NhietDoTrichLy_50 NhietDoTrichLy_60 NhietDoTrichLy_55 Mean 4.23762 4.27937 5.54256 7.31033 8.40467 Homogeneous Groups X X X X X 7: Xác định thời gian thích hợp trích ly anthocyanin từ gạo đen Bảng giá trị OD thí nghiệm tối ƣu hóa thời gian trích ly anthocyanin từ gạo đen ) 50 pH1 535m 700n n m 0.075 0.031 pH45 535n 700n m m 0.042 0.035 10 0.069 0.028 0.039 0.028 10 0.061 0.030 0.036 0.037 10 0.071 0.027 0.041 0.029 10 0.068 0.029 0.037 0.031 10 0.063 0.031 0.042 0.033 10 0.069 0.033 0.036 0.036 10 0.073 0.025 0.038 0.028 10 0.065 0.030 0.042 0.032 10 55 0.131 0.050 0.076 0.039 10 0.127 0.050 0.069 0.035 10 0.135 0.052 0.072 0.038 10 0.129 0.051 0.073 0.034 10 17 A a (mg/L) TB (mg/L) 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.02 0.03 0.03 0.02 0.04 0.04 0.04 0.03 6.179 5.307 ±0.859 5.010 5.344 5.344 5.511 3.841 6.012 6.346 4.175 7.348 7.181 8.182 6.513 7.570 ±0.783 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 0.132 0.048 0.078 0.037 10 0.128 0.053 0.071 0.040 10 0.130 0.049 0.075 0.036 10 0.134 0.052 0.073 0.041 10 0.136 0.047 0.069 0.034 10 60 0.135 0.040 0.055 0.035 10 0.136 0.039 0.051 0.036 10 0.139 0.043 0.056 0.036 10 0.138 0.039 0.052 0.034 10 0.131 0.042 0.055 0.037 10 0.140 0.037 0.049 0.033 10 0.137 0.035 0.053 0.040 10 0.136 0.040 0.050 0.039 10 0.133 0.038 0.057 0.034 10 65 0.095 0.020 0.060 0.021 10 0.090 0.018 0.063 0.031 10 0.090 0.023 0.070 0.036 10 0.091 0.019 0.062 0.022 10 0.093 0.021 0.065 0.029 10 0.096 0.017 0.069 0.033 10 0.092 0.022 0.061 0.026 10 0.095 0.019 0.063 0.030 10 18 0.04 0.04 0.04 0.05 0.05 0.07 0.08 0.07 0.08 0.07 0.08 0.08 0.08 0.07 0.03 0.04 0.03 0.03 0.03 0.04 0.03 0.04 7.181 7.348 7.014 8.349 9.017 12.524 13.322 ±1.097 13.693 12.691 13.526 11.856 14.528 14.862 14.194 12.023 6.012 6.680 5.511 5.344 6.012 7.181 5.845 7.181 6.030 ±0.877 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 0.097 0.023 0.071 0.024 10 70 0.063 0.022 0.044 0.026 10 0.071 0.021 0.050 0.029 10 0.065 0.027 0.041 0.031 10 0.069 0.023 0.046 0.027 10 0.064 0.026 0.049 0.032 10 0.070 0.022 0.042 0.024 10 0.067 0.020 0.045 0.028 10 0.072 0.025 0.043 0.030 10 0.065 0.019 0.051 0.029 10 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.03 0.03 0.03 0.02 4.509 3.841 4.56 ±0.678 4.843 4.676 4.509 3.507 5.010 5.010 5.678 4.008 Bảng 10 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count TgianTLy_70 TgianTLy_50 TgianTLy_65 TgianTLy_55 TgianTLy_60 Mean 4.56467 5.30689 6.03056 7.57033 13.3219 Homogeneous Groups X XX X X X Thí nghiệm 8: Xác định hoạt tính kháng oxy hóa c anthocyanin Bảng 12.OD xác định hàm lƣợng anthocyanin để xác định giá trị IC50 mẫu pH1 535nm 0.649 0.647 0.652 pH4,5 700nm 535nm 0.331 0.969 0.330 0.972 0.333 0.970 DF A a (mg/mL) a TB (mg/mL) 700nm 0.678 100 0.027 45.087 0.683 100 0.028 46.757 0.679 100 0.028 46.757 19 46.200 ±0,964 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Bảng 13.giá trị OD λ=516nm xác định hoạt tính kháng DPPH anthocyanin Blank Vitamine C Co DF 4.62 0.1000 Lần 2.153 0.068 A1 A2 0.083 0.082 Lần 2.142 0.067 A3 Q1 0.085 99.231 3.08 0.0667 0.127 0.133 0.138 97.116 1.54 0.0333 0.312 0.321 0.329 88.225 1.026 0.0222 0.77 0.0167 0.825 0.830 0.827 63.569 0.996 1.001 1.006 55.351 0.513 0.0111 1.335 1.315 1.325 39.058 0.385 0.0083 1.535 1.533 1.531 29.446 0.308 0.0067 1.624 1.608 1.615 25.168 0.256 0.0056 0.154 0.0033 1.702 1.701 1.698 21.419 1.872 1.863 1.871 13.249 0.102 0.0022 67 2.053 2.045 2.049 4.550 Q2 99.27 96.82 87.79 63.32 55.11 40.01 29.54 25.93 21.46 13.68 4.934 2.148 0.066 Q3 99.13 96.58 87.39 63.47 54.87 39.53 29.63 25.60 21.61 13.29 4.742 Trung bình 2.148 0.067 Qtb logCo 99.21 0.664 96.84 0.488 87.80 0.187 63.45 0.011 55.11 -0.114 39.53 -0.29 29.54 -0.415 25.56 -0.511 21.50 -0.591 13.40 -0.812 4.742 -0.989 Phần trăm bắt gốc tự DPPH chất nghiên cứu đƣợc tính theo cơng thức sau: Trong đó: A độ hấp thu dung dịch chứa mẫu thử A0 độ hấp thu DPPH khơng có mẫu thử Ac độ hấp thu dung dịch chứa chất đối chiếu Q % gốc tự bị ức chế 20 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Bảng 14.giá trị OD xác định hoạt tính kháng DPPH Ascorbic acid Lần Blank 1.642 Co (µg/ml) A1 100.000 0.064 50.000 0.080 10.000 1.272 5.000 1.434 1.000 1.467 0.500 1.483 0.100 1.512 0.050 1.573 A2 0.070 0.078 1.271 1.474 1.432 1.497 1.650 1.577 Lần 1.657 A3 0.070 0.077 1.254 1.433 1.467 1.432 1.548 1.550 Q1 96.079 95.099 22.075 12.150 10.129 9.148 7.372 3.635 1.598 Q2 95.712 95.222 22.136 9.700 12.273 8.291 -1.082 3.390 Q3 95.712 95.283 23.177 12.212 10.129 12.273 5.166 5.044 Trung bình 1.632 Qtb logCo 95.834 2.000 95.201 1.699 22.463 1.000 11.354 0.699 10.843 0.000 9.904 -0.301 3.819 -1.000 4.023 -1.301 Thí nghiệm 9: Xác định thơng số cho q trình cơ-quay thu nhận dịch chiết anthocyanin Bảng15.Khối lƣợng thể tích dịch trƣớc sau quay m mo m3 m6 m9 m12 m15 m18 Khối lƣợng cốc dịch cô quay (g) Khối lƣợng dịch lại (g) Thể tích dịch lại (ml) 114.012 195.883 81.871 100.00 179.103 65.091 79.50 165.001 50.989 62.28 157.697 43.685 53.36 146.864 32.853 40.13 131.440 17.429 21.29 124.727 10.715 13.09 Bảng 16.giá trị OD hàm lƣợng anthocyanin dịch trƣớc sau cô quay Thời gian phút pH1 pH4,5 Hệ DF A số 535n 700nm 535n 700nm pha m m loãng 0.649 0.331 0.969 0.678 1.00 10 0.02 0.647 0.330 0.972 0.683 1.00 10 0.02 0.652 0.333 0.970 0.679 1.00 10 0.02 21 a (mg/m L) a TB 4.509 4.620 ±0.096 4.676 4.676 (mg/mL) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP phút phút phút 12 phút 15 phút 18 phút 0.648 0.329 0.969 0.679 1.26 10 0.647 0.329 0.970 0.678 1.26 10 0.649 0.330 0.972 0.680 1.26 10 0.642 0.325 0.964 0.673 1.61 10 0.643 0.329 0.962 0.676 1.61 10 0.643 0.328 0.968 0.678 1.61 10 0.639 0.325 0.965 0.677 1.87 10 0.641 0.328 0.967 0.681 1.87 10 0.639 0.327 0.966 0.679 1.87 10 0.637 0.323 0.961 0.670 2.49 10 0.639 0.321 0.967 0.675 2.49 10 0.638 0.326 0.963 0.676 2.49 10 0.635 0.316 0.949 0.656 4.70 10 0.634 0.315 0.956 0.660 4.70 10 0.636 0.319 0.952 0.659 4.70 10 0.635 0.637 0.638 0.316 0.313 0.317 0.949 0.947 0.949 0.650 0.645 0.649 7.64 7.64 7.64 10 10 10 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.020 0.022 0.021 6.092 5.742 ±0.321 5.462 5.672 6.973 7.062 ±0.409 7.509 6.705 8.136 8.136 ±0.313 8.449 7.823 9.571 10.265 ±0.636 10.820 10.403 20.393 19.086 ±1.198 18.040 18.824 25.519 28.071 26.795 26.795 ±1.276 Bảng 17 OD hiệu suất thu hồi anthocyanin dịch trích ly sau cô quay Thời gian phút pH1 534n 700n m m pH4,5 534n 700n m m D F 0.64 0.96 10 0.027 0.33 0.67 22 A a (mg/mL) a TB (mg/mL ) 4.509 4.620 Hiệu suấtt hu hồi % 100 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 0.64 0.65 phút 0.64 0.64 0.64 phút 0.64 0.64 0.64 phút 0.63 0.64 0.63 12 phút 0.63 0.63 0.63 15 phút 0.63 0.63 0.63 18 phút 0.63 0.63 0.63 0.33 0.33 0.32 0.32 0.33 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.31 0.31 0.31 0.31 0.31 0.31 0.97 0.97 0.96 0.97 0.97 0.96 0.96 0.96 0.96 0.96 0.96 0.96 0.96 0.96 0.94 0.95 0.95 0.94 0.94 0.94 0.68 0.67 0.67 0.67 0.68 0.67 0.67 0.67 0.67 0.68 0.67 0.67 0.67 0.67 0.65 0.66 0.65 0.65 0.64 0.64 ±0.096 10 0.028 4.676 10 0.028 4.676 10 0.029 4.843 10 0.026 4.342 10 0.027 4.509 10 0.026 4.342 10 0.028 4.676 10 0.025 4.175 10 0.026 4.342 10 0.027 4.509 10 0.025 4.175 10 0.023 3.841 10 0.026 4.342 10 0.025 4.175 10 0.026 4.342 10 0.023 3.841 10 0.024 4.008 10 0.020 3.340 10 0.022 3.674 10 0.021 3.507 23 4.564 ±0.255 99 4.397 ± 0.255 95 4.342 ±0.167 94 4.119 ± 0.255 89 4.063 0.255 88 3.507 ± 0.167 76 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Bảng 18.Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean phút 4.62033 phút 5.742 phút 7.06233 phút 8.136 12 phút 10.2647 15 phút 19.0857 18 phút 32.7497 Homogeneous Groups X X X X X X X Bảng 19 OD khảo sát khả kháng DPPHcủa dịch trích ly anthocyanin từ gạo đen trƣớc sau cô quay Blank Vitamine C Thời gian cô Co (mg/ml) quay (p) phút 4.620±0.096 phút 4.564±0.255 phút 4.397±0.255 phút 4.342±0.167 12 phút 4.119±0.255 15 phút 3.618±0.420 18 phút 3.340±0.167 Lần 0.612 0.118 Lần 0.633 0.12 0.626 0.066 Trung bình 0.624 0.122 A1 A2 A3 %Q1 %Q2 %Q3 Qtb (%)±SD 0.373 0.374 0.375 0.379 0.385 0.398 0.425 0.378 0.378 0.377 0.378 0.381 0.387 0.429 0.374 0.376 0.374 0.376 0.383 0.397 0.428 49.967 49.801 49.602 48.805 47.610 45.020 39.641 48.970 49.004 49.203 49.004 48.406 47.211 38.845 49.767 49.402 49.801 49.402 48.008 45.219 39.044 49.568±0.527 49.402±0.399 49.535±0.305 49.070±0.304 48.008±0.398 45.817±1.212 39.177±0.414 Bảng 20 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count 18 phút 15 phút 12 phút phút phút 3 phút Mean 39.1767 45.8167 48.008 49.0703 49.4023 49.5353 Homogeneous Groups X X X X X X 24 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP phút 49.568 X 25 ... thời nghiên cứu tính chất anthocyanin từ gạo đen Trong đó, nguồn khai thác có khả thu nhận cao, hiệu Vì thế, chúng tơi tiến hành đồ án Nghiên cứu thu nhận Anthocyanin từ phế liệu gạo đen xác định. .. Chống oxy hóa Nhiều nghiên cứu chứng minh gạo đen giúp thể giải độc làm chất độc gan nhờ vào hoạt tính chất chống oxy hóa có gạo đen( Dr.AXE) Một nghiên cứu gần đây, tình trạng chống oxy hóa máu,... trích ly anthocyanin - Xác định hoạt tính kháng oxy hóa c anthocyanin - Xác định thông số cho trình quay thu nhận dịch chiết anthocyanin đặc ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Các kết đạt đƣợc Đã xác định đƣợc