Suy sinh dục nam được định nghĩa là sự suy giảm sản xuất testosteron, tinh trùng hoặc cả hai. Bên cạnh việc điều trị hiệu quả bệnh bằng testosteron tổng hợp thì thuốc cũng có những tác dụng phụ khi dùng kéo dài, đó là: tăng sản lành tính và ung thư tiền liệt tuyến, đa hồng cầu thứ phát. Theo Y học cổ truyền (YHCT), bài thuốc Ngũ tử diễn tông hoàn được dùng điều trị cho những bệnh nhân suy sinh dục nam thuộc bệnh cảnh Thận khí bất cố. Tuy nhiên, cho đến nay chưa có công trình nghiên cứu nào chứng minh tác dụng điều trị của bài thuốc này. Vì vậy, nghiên cứu “Khảo sát tác dụng hướng sinh dục nam của cao chiết từ bài thuốc Ngũ tử diễn tông hoàn trên chuột nhắt trắng” với mục đích góp phần làm sáng tỏ tác dụng của bài thuốc.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 KHẢO SÁT TÁC DỤNG HƯỚNG SINH DỤC NAM CỦA BÀI THUỐC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG Huỳnh Thị Lưu Kim Hường*, Nguyễn Phương Dung* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Suy sinh dục nam định nghĩa suy giảm sản xuất testosteron, tinh trùng hai Bên cạnh việc điều trị hiệu bệnh testosteron tổng hợp thuốc có tác dụng phụ dùng kéo dài, là: tăng sản lành tính ung thư tiền liệt tuyến, đa hồng cầu thứ phát Theo Y học cổ truyền (YHCT), thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn dùng điều trị cho bệnh nhân suy sinh dục nam thuộc bệnh cảnh Thận khí bất cố Tuy nhiên, chưa có cơng trình nghiên cứu chứng minh tác dụng điều trị thuốc Vì vậy, nghiên cứu “Khảo sát tác dụng hướng sinh dục nam cao chiết từ thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn chuột nhắt trắng” với mục đích góp phần làm sáng tỏ tác dụng thuốc Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Cao chiết đặc Ngũ tử diễn tơng hồn (NTDTH) (từ phối hợp dược liệu Câu kỷ tử, Thỏ ty tử, Ngũ vị tử, Xa tiền tử Phúc bồn tử theo tỷ lệ dược liệu thuốc) Mẫu cao tiêu chuẩn hóa theo quy định tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam V Thực chuột nhắt trắng bình thường chuột nhược sinh dục Thời gian uống thuốc 15 ngày, đánh giá tác dụng hướng sinh dục nam qua tiêu: định lượng hàm lượng testosteron huyết tương, thay đổi trọng lượng túi tinh – tuyền liệt tuyến Đánh giá tác dụng đồng hóa theo dõi qua tăng trọng lượng nâng hậu mơn Ngồi ra, đánh giá thêm thay đổi trọng lượng chuột trước sau dùng thuốc Kết quả: Trên chuột nhược sinh dục: cao NTDTH liều 0,32 g/kg chuột làm tăng hàm lượng testosteron trọng lượng nâng hậu môn khơng có ý nghĩa thống kê, làm tăng trọng lượng túi tính – tuyến tiền liệt có ý nghĩa thống kê Ở liều 0,64 g/kg chuột có tác dụng làm tăng hàm lượng testosteron huyết tương, trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt trọng lượng nâng hậu môn đạt ý nghĩa thống kê Trọng lượng chuột trước sau sử dụng thuốc liều 0,32 g/kg chuột liều 0,64 g/kg chuột thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê Trên chuột bình thường: cao NTDTH khơng có tác dụng làm tăng hàm lượng testosteron huyết tương, trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt, trọng lượng nâng hậu môn trọng lượng chuột trước sau dùng thuốc khơng thay đổi có ý nghĩa thống kê Kết luận: Cao NTDTH liều 0,64 g/kg chuột có tác dụng hướng sinh dục nam tác dụng đồng hóa Kết gợi ý cao thuốc NTDTH có triển vọng ứng dụng điều trị suy sinh dục nam Từ khóa: ngũ tử diễn tơng hồn, tác dụng hướng sinh dục nam ABSTRACT INVESTIGATION OF THE ANDROGENIC EFFECT OF THE DECOCTION WU ZI YAN ZONG WAN IN MICE Huynh Thi Luu Kim Huong, Nguyen Phuong Dung * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 128 – 134 Objectives: Male hypogonaldism is defined when it has a deficiency in testosterone level, or quantity of sperms or both Addition to the efficiency of treatment by synthetic testosteone, this therapy still have adverse drug reaction when we use it in long – term, such as: prostatic hypertrophy, cancer, and erythrocytosis,…Wu zi yan zong wan (WZ) was used to treat hypogalnaldism in traditional medicine, in particularly, the clinical * Khoa Y học Cổ truyền – Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: BS Huỳnh Thị Lưu Kim Hường ĐT:0916220790 128 Email:drhuonghuynh2207@ump.edu.vn Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học picture Shen qi bu gu However, the studies in male sexual effects of this decoction have not been assessed yet Thus, this experimental study was carried out to evaluate the efficacy of Wu zi yan zong wan decoction in normal and castrated mice Materials and Methods: Wu zi yan zong wan decoction (extracted from Fructus lycii, Semen cuscutae sinensis, Semen plantaginis, Fructus rubi and Fructus sehizandrae) The decoction was standardised by the instruction of Vietnamese Pharmacopea V The normal mice and mice which were castrated by removing the testicles were nourished stably for 15 days before treated (oral treatment for 15 days) An increase of the plasma testosterone levels as well as the weight of male sexual organs (testicle, seminal vesicle and prostate gland) was used as an index of androgenic effects On the orther hand, the weight of levator ani was used as an index of protein anabolic The weight of body was also reported after experiment Results: The results revealed that testosterone levelin castrated mice was lower than that in normal mice, suggesting for experimental sexual dysfunction In the castrated mice: WZ decoction increased testosterone levels, the weight of seminal vesicle, prostate gland and levator ani at the dose of 0.64 g/kg At the dose of 0.32 g/kg the weight of seminal vesicle and prostate increased significantly but the testosterone levels and the weight of levator ani were insignificant increase as compared with control group The weight of body did not change before treatment and after 15 days treated with decoction in the same group In the normal group: WZ decocotion at the dose 0.32 g/kg and 0.64 g/kg did not increase testosterone levels, the weight of seminal vesicle, prostate gland and levator ani, compared with the control Conclusion: Wu zi yan zong wan decoction at the dose of 0.64 g/kg showed the androgenic effects and the protein anbolic effects in castrated group Wu zi yan zong wan decoction could be useful to replace testosterone in treatment of male hypogonaldism Keywords: male hypogonadism, androgenc effect ĐẶT VẤN ĐỀ Suy sinh dục nam định nghĩa suy giảm sản xuất testosteron, tinh trùng hai(4) Ở Mỹ có khoảng – triệu nam giới bị suy sinh dục(4) Theo Hiệp hội Niệu khoa Châu Âu 2005, tỉ lệ nam giới từ 40 –79 tuổi suy giảm sinh dục 2,1–5,7%(2) Ở Việt Nam chưa có số liệu thống kê cụ thể qua vài số liệu Bệnh viện Bình Dân vào năm 2008 có tới 500 bệnh nhân/tuần đến khám có biểu suy sinh dục nam(6) Cho đến thời điểm tại, điều trị suy sinh dục nam chủ yếu bổ sung testosteron Bên cạnh việc điều trị hiệu testosteron tổng hợp có tác dụng phụ dùng kéo dài(4,5) Trong điều trị suy sinh dục nam, Y học cổ truyền ứng dụng nhiều thuốc cổ phương: Tả quy ẩm, Thận khí hồn, Hữu quy hồn, Ngũ tử diễn tơng hồn(7,10) Trong đó, thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn dùng điều trị cho bệnh nhân suy sinh dục nam thuộc bệnh cảnh Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Thận khí bất cố, thời điểm chưa có cơng trình nghiên cứu chứng minh tác dụng thuốc Do vậy, để góp phần làm sáng tỏ tác dụng thuốc, góp phần làm phong phú thuốc điều trị suy sinh dục nam Y học cổ truyền, tiến hành nghiên cứu đánh giá tác dụng hướng sinh dục nam cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn (NTDTH) chuột nhắt trắng ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Ngun liệu Các dược liệu Câu kỷ tử, Thỏ ty tử, Ngũ vị tử, Xa tiền tử, Phúc bồn tử cung cấp nhà thuốc Tân Nam Xương – Thành phố Hồ Chí Minh Mỗi dược liệu kiểm tra chất lượng thuốc theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam IV Viên Andriol Testoscaps TM 40 mg chứa 40 mg testosteron undecanoat dùng làm thuốc đối chứng (số lô: M044379, VN-20024-16 hạn dùng: 11/09/2019) 129 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Quy trình chiết cao Bài thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn 575 g (tỷ lệ dược liệu theo khối lượng (gam) Thỏ ty tử:Câu kỷ tử:Phúc bồn tử:Xa tiền tử:Ngũ vị tử=8:8:4:2:1) chiết xuất với dung môi nước 1000C lần, 60 phút, tỉ lệ dược liệu:dung môi 1:10 Sau thu dịch chiết tiến hành lọc cô cách thủy để thu 20 g cao đặc Hiệu suất chiết đạt 3,08% Cao đặc NTDTH đạt tiêu chuẩn sở cảm quan, độ ẩm (19,49%), tro tồn phần (11,73%), định tính diện Câu kỷ tử Ngũ vị tử cao chiết phương pháp sắc ký lớp mỏng chuột thành 05 lơ (mỗi lơ 10 con) Thể tích uống 0,2 ml /10 g thể trọng với nồng độ thuốc thử nghiệm khác Theo dõi biểu hành vi vận động chuột vòng 72 đầu sau dùng cao thử Xác định liều LD0 (liều tối đa không gây chết) liều LD100 (liều tối thiểu gây chết 100%) Xác định LD50 theo phương pháp Karber – Behrens (nếu có)(1) Nếu tất liều thử khơng có vật chết, liều lớn thử Dmax chưa liều LD0và liều tương đối an toàn dùng cho thực nghiệm dược lý ban đầu dùng 1/5 Dmax nhỏ hơn(1) Hóa chất Chuột nhắt đực gây mê ether, dụng cụ giải phẫu sát trùng cồn Cắt đường dài khoảng 0,5 cm bìu kéo tinh hồn ngoài, dùng cột phần tinh hoàn cắt bỏ tinh hoàn Khâu vết mổ chỉ, sát trùng vết mổ dung dịch cồn iod (Povidine – Hãng Pharmedic, Việt Nam) Chuột cắt tinh hoàn để nghỉ tuần trước làm thử nghiệm(8) Kit ELISA Testosteron hãng Human (Đức) Bản mỏng tráng sẵn silica gel F254 (Merck, Đức), cỡ hạt 0,015 – 0,04 mm Cloroform, ethyl acetat, acid formic, ether dầu hỏa (30oC đến 60oC), ethyl format, methanol, ethanol 96% Phương tiện Máy xét nghiệm sinh hóa Eos Bravo W (Hospitex diagonosis – Italy), máy rửa Elisa ELx50 BioTek (Mỹ), máy đọc Elisa Elx808 BioTel (Mỹ), máy quay ly tâm Hettich (Đức), máy lắc Minishaker MS1 IKA (Đức), cân phân tích Sartorius CP 224S (Đức), cân sấy ẩm Mettler toledo (Switzerland), lò nung Lenton (Anh), bếp cách thủy Stuart, bếp điện, lồng chuyển hóa ni chuột Động vật thí nghiệm Chuột nhắt trắng đực (chủng Swiss albino, trọng lượng trung bình 25 g ± g) cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang để ổn định tuần trước thực nghiệm Chuột nuôi thực phẩm viên cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang, nước uống đầy đủ, điều kiện độ ẩm nhiệt độ ổn định suốt trình thử nghiệm Thử nghiệm độc tính cấp Trước tiến hành thí nghiệm, cho chuột nhịn đói 12 trước cho uống thuốc Chia 130 Gây mơ hình động vật bị nhược sinh dục Khảo sát tác dụng cao chiết Mẫu cao chiết thực liều (0,32 g/kg 0,64 g/kg), đối tượng chuột nhắt trắng đực bình thường chuột nhắt trắng đực bị nhược sinh dục Lô đối chiếu (uống testocaps) liều 0,002 g/kg Mỗi lô từ cho uống với thể tích 10 ml/kg thể trọng chuột Thời gian cho uống 15 ngày vào buổi sáng trước cho ăn Xác định tiêu: - Nồng độ testosteron huyết tương xác định phương pháp ELISA (theo quy trình kit cung cấp hãng Human, Đức) - Trọng lượng túi tinh - tuyến tiền liệt (mg%: mg/100 g thể trọng chuột) - Trọng lượng nâng hậu môn (mg%: mg/100 g thể trọng chuột) mg% = (trọng lượng thực quan/trọng lượng thể) x 100 (Trọng lượng thực quan khác Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 biệt nhiều cá thể trọng tăng giảm lô lô thử nghiệm Để tránh sai số so sánh thống kê, đơn vị mg% chọn để tính trọng lượng tương đối quan 100 g trọng lượng thể) - Sự thay đổi trọng lượng thể trước sau dùng thuốc thử nghiệm Phương pháp thống kê – xử lý liệu Các liệu trình bày dạng mean ± SD Việc xử lý thống kê đề tài dùng phần mềm Stata phiên 13.0 Phương pháp thống kê sử dụng phép kiểm Student cho dãy số liệu độc lập Sự khác xem có ý nghĩa giá trị p