Mục tiêu của nghiên cứu này nhằm khảo sát tác dụng hướng sinh dục nam từ dịch chiết cồn của rễ Bách bệnh (eurycoma longifolia jack) thu hái tại Đồng Nai trên chuột nhắt trắng. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 KHẢO SÁT TÁC DỤNG HƯỚNG SINH DỤC NAM TỪ DỊCH CHIẾT CỒN CỦA RỄ BÁCH BỆNH (EURYCOMA LONGIFOLIA JACK) TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (MUS MUSCULUS) Trần Mỹ Tiên*, Nguyễn Thanh Hồng Vân*, Trần Công Luận*, Nguyễn Thị Thu Hương* TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Cây Bách bệnh (Eurycoma longifolia Jack) thuộc họ Thanh thất (Simaroubaceae) tìm thấy nhiều nước Đông Nam Á như: Malaysia, Mianma tác dụng vượt trội công bố rộng rãi giới khả tăng cường sức khoẻ tình dục cho nam giới Việc nghiên cứu Bách bệnh Việt Nam tín hiệu khả quan cho Đông dược Việt Nam, tác dụng hướng sinh dục nam đáp ứng nhu cầu cần thiết xã hội đại với triển vọng ứng dụng thuốc quý góp phần bảo vệ sức khoẻ tăng cường chất lượng sống Vì mục tiêu nghiên cứu khảo sát tác dụng hướng sinh dục nam từ dịch chiết cồn rễ Bách bệnh (Eurycoma longifolia Jack) thu hái Đồng Nai chuột nhắt trắng Đối tượng-Phương pháp nghiên cứu: Nguyên liệu nghiên cứu: cao chiết cồn 45% chiết ngấm kiệt theo tỉ lệ 1: 10 (dược liệu : dung môi) rễ Bách bệnh lấy từ khu bảo tồn tự nhiên di tích Vĩnh Cửu (Đồng Nai) Súc vật nghiên cứu: Thực nghiệm chuột nhắt trắng bình thường bị giảm sinh dục (cắt bỏ tinh hồn) Thể tích cho uống 10 ml/kg thể trọng chuột Thời gian dùng thuốc 15 ngày Phương pháp nghiên cứu: nghiên cứu tác dụng kiểu nội tiết tố sinh dục nam qua tiêu: định lượng hàm lượng testosteron huyết tương, thay đổi trọng lượng túi tinh - tuyến tiền liệt, tăng trọng lượng nâng hậu môn, khảo sát hàm lượng protein toàn phần huyết tương Ngoài đánh giá thêm thay đổi thể trọng trước sau dùng thuốc Kết quả: Kết nghiên cứu cho thấy địa động vật giảm sinh dục cao rễ Bách bệnh thể tác dụng làm tăng hàm lượng testosteron huyết, tăng trọng lượng quan sinh dục đực tác dụng thể rõ động vật bình thường liều cao Trên hai mơ hình chuột bình thường chuột bị gây giảm sinh dục, hàm lượng protein toàn phần huyết tương tăng có khuynh hướng làm tăng trọng lượng nâng hậu môn, không làm tăng thể trọng thể Kết luận: Rễ Bách bệnh (Eurycoma longifolia Jack) thể tác dụng kiểu androgen chuột đực giảm sinh dục chuột đực bình thường, liều 125 mg/kg có tác dụng rõ nét Trọng lượng thể sau thử nghiệm lô thử không thay đổi so với lô chứng Từ khóa: Giảm sinh dục, androgen, testosteron, protein ABSTRACT STUDY ON THE ANDROGENIC EFFECT OF THE ALCOHOL EXTRACT OF EURYCOMA LONGIFOLIA JACK ‘S ROOTS ON MICE Tran My Tien, Nguyen Thanh Hong Van, Tran Cong Luan, Nguyen Thi Thu Huong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No – 2012: 186 – 191 Objectives: Eurycoma longifolia Jack was found in South East Asia countries such as: Malaysia Myanma and was studied with the ability to increase sexual hormone for men So, the research of these in Viet Nam is the need of the modern society with the desire to protect heath and improve the quality of life The aim of this study is Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM – Viện Dược liệu Tác giả liên lạc: DS Trần Mỹ Tiên ĐT: 0903611626 E.mail: tranmytien96@yahoo.com.vn 186 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học to investigate the androgenic effects of Eurycoma longifolia Jack collected in Dong Nai Methods: The ethanol extract of Eurycoma’s roots was used Experiment was performed in normal mice and castrated mice In addition, body weight was also recorded before and after 15 days of experiment An increase of the plasma testosteron levels and the weight of male sexual organs (testicle, seminal vesicle and prostate gland) were used as indice of androgenic effects On the orther hand, plasma protein concentration, and the weight of levator ani were used as indice of protein anabolism Results: The results revealed that testosteron content, and the weight of male sexual organs increased at both doses in the castrated mice These indice were showed significantly at the high dose (125mg/kg) on the normal mice The quantitive of protein in castrated and normal groups increased and tendency increased the weight of levator ani but did not changed the weight of body Conclusion: Eurycoma’s roots extract increased testosteron levels, the weight of seminal vesicle and prostate gland and levator ani, protein content in castrated mice at both of doses However, the extract did not affect at the lower dose in normal mice The weight of body did not changed after experiment compared to the respective control Key words: Castrated mice, testosteron, protein ĐẶT VẤN ĐỀ Yếu sinh lý hay chứng bất lực phát ngày nhiều quốc gia có cơng nghiệp đại cường độ lao động sinh hoạt xã hội đòi hỏi mức độ cao Cây Bách bệnh (Bá bệnh, Bá bịnh, Tongkat Ali, Eurycoma longifolia Jack) thuộc họ Thanh thất (Simaroubaceae) gỗ nhỏ, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới Đông Nam Á Cây từ lâu biết đến Nhân sâm Malaysia (với tên Tongkat Ali) nhiều nước Đông Nam Á Indonesia, Brunei, Thái lan, Campuchia, Lào…(4) Cây sử dụng lâu đời cộng đồng địa phương để chữa nhiều bệnh khác ăn uống không tiêu, nôn mửa, đầy bụng, tiêu chảy, sốt rét, giải độc uống nhiều rượu, đau lưng, mỏi gối, nhiễm khuẩn đường tiết niệu, ghẻ, lở ngứa, với tác dụng giúp nam giới tăng cường chức sinh lý sức khoẻ tình dục, bổ sung lượng cho thể, giúp giảm stress, mệt mỏi, tăng cường miễn dịch phòng chống lão hố (2, 3) Việc nghiên cứu Bách bệnh Việt Nam tín hiệu khả quan cho Đông dược Việt Nam, tác dụng tăng cường hướng sinh dục nam đáp ứng nhu cầu cần thiết xã hội đại với triển vọng ứng dụng thuốc quý Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền góp phần bảo vệ sức khoẻ tăng cường chất lượng sống Đặc biệt tìm giải pháp hiệu lâu dài giúp nam giới tăng cường sức khỏe sinh lý Xuất phát từ thực tế đề tài nghiên cứu tác dụng kiểu nội tiết tố sinh dục nam số loại thảo mộc nghiên cứu, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Khảo sát tác dụng hướng sinh dục nam từ dịch chiết cồn rễ Bách bệnh (Eurycoma longifolia Jack) chuột nhắt trắng (Mus musculus)” với mục tiêu nghiên cứu đánh giá tác dụng hướng sinh dục nam cao cồn 45% rễ Bách bệnh hai mô hình chuột bình thường chuột bị gây giảm sinh dục ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu nghiên cứu Rễ Bách bệnh (Rễ BB) lấy từ khu bảo tồn tự nhiên di tích Vĩnh Cửu (Đồng Nai) vào tháng năm 2009, thu hái, phơi sấy đến khô xay nhỏ Mẫu định danh Bộ môn Tài nguyên Dược liệu, Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM Cao cồn thu cách chiết ngấm kiệt bột nguyên liệu với cồn 45 % theo tỷ lệ 1: 10 (dược liệu: dung môi) Viên Andriol Testoscaps 187 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 chứa 40 mg testosteron undecanoat (Organon Co.) dùng làm thuốc đối chiếu sinh dục theo mơ hình bố trí thí nghiệm sau: Động vật nghiên cứu Chuột nhắt trắng đực (chủng Swiss albino, trọng lượng trung bình 22 ± g) cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang ni tuần trước thử nghiệm Chuột nuôi đầy đủ thực phẩm viên, giá, đậu, rau xà lách, nước uống Thể tích cho uống 10 ml/kg thể trọng chuột Thời gian dùng thuốc 15 ngày Chuột chia thành lô sau: lô từ 10 – 15 Phương pháp nghiên cứu (3) Những thuốc có tác dụng kiểu nội tiết tố sinh dục nam (tác dụng androgen) xem liệu pháp thay điều kiện sản sinh androgen nội sinh mức sinh lý bình thường Trong liệu pháp này, cần có hoạt tính androgen hoạt tính đồng hóa Chỉ tiêu để xác định hoạt tính androgen định lượng hàm lượng testosteron huyết tương, thay đổi trọng lượng túi tinh - tuyến tiền liệt, tiêu để xác định hoạt tính đồng hóa khảo sát tăng trọng lượng nâng hậu môn, khảo sát hàm lượng protein toàn phần huyết tương Ngoài đánh giá thêm thay đổi thể trọng trước sau dùng thuốc.Việc nghiên cứu hoạt tính androgen xác định địa: động vật bình thường động vật bị giảm sinh dục Gây mơ hình động vật bị giảm sinh dục Chuột nhắt đực gây mê ether, dụng cụ giải phẫu sát trùng cồn Cắt đường dài khoảng 0,5 cm bìu kéo tinh hoàn ngoài, dùng cột phần tinh hoàn cắt bỏ tinh hoàn Khâu vết mổ chỉ, sát trùng vết mổ dung dịch cồn iod (Povidine) Chuột cắt tinh hoàn để nghỉ tuần trước làm thử nghiệm Khảo sát tác dụng mẫu cao chiết Mỗi mẫu cao chiết thực liều, đối tượng chuột nhắt trắng đực bình thường chuột nhắt trắng đực bị giảm 188 Lô chứng: Uống nước cất Lô thử 1: Uống cao liều 62,5 mg/kg Lô thử 2: Uống cao liều 125 mg/kg Lô chứng đối chiếu: Uống dầu olive Lô đối chiếu: Uống Testocaps liều mg/kg Các lơ cho uống với thể tích cho uống 10 ml/kg thể trọng chuột Thời gian cho uống 15 ngày, uống vào buổi sáng trước cho ăn Sau 15 ngày, xác định tiêu sau: Nồng độ testosteron huyết tương xác định phương pháp ELISA (theo quy trình kit cung cấp hãng Human, Đức) Trọng lượng tinh hoàn, túi tinh - tuyến tiền liệt (mg%: mg/100g thể trọng chuột) Trọng lượng nâng hậu môn (mg%: mg/100g thể trọng chuột) mg% = (trọng lượng thực quan / trọng lượng thể) x 100 (Trọng lượng thực quan khác biệt nhiều cá thể trọng tăng giảm lô lô thử nghiệm Để tránh sai số so sánh thống kê, đơn vị mg% chọn để tính trọng lượng tương đối quan 100g trọng lượng thể) Nồng độ protein toàn phần huyết tương xác định phương pháp Biuret (theo quy trình kit cung cấp hãng Human, Đức) Sự thay đổi trọng lượng thể trước sau dùng thuốc thử nghiệm Đánh giá kết Các số liệu biểu thị số trung bình M ± SEM (Standard Error of the Mean – sai số chuẩn giá trị trung bình) xử lý thống kê dựa vào phép kiểm t-Student với độ tin cậy 95% (P < 0,05) so với lô chứng Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Xây dựng đường chuẩn testosteron nồng độ khác Bảng 3: Nồng độ testosteron chuột bình thường chuột gây giảm sinh dục Lô n = 10 Bảng 1: Độ hấp thu theo nồng độ chuẩn testosteron Nồng độ (ng/ml) 0,2 0,5 1,0 2,0 6,0 16,0 Độ hấp thu 3,042 2,698 2,448 2,094 1,623 0,893 0,435 3.2 2.8 Độ hấp thu 2.4 Nghiên cứu Y học Chứng Rễ BB Rễ BB Dầu olive Testocaps Nồng độ Nồng độ Liều testosteron testosteron (mg/kg) chuột bình chuột giảm thường (ng/ml) sinh dục (ng/ml) 0,485 ± 0,048 0,219 ± 0,042# 62,5 0,520 ± 0,035 0,409 ± 0,018* 125 0,677 ± 0,067* 0,630 ± 0,025* 0,567 ± 0,028 0,226 ± 0,019 1,575 ± 0,145* 1,008 ± 0,042* * P < 0,05 so với lơ bình thường; * P < 0,05 so với lơ chứng tương ứng 1.6 1.2 0.8 0.4 0 10 11 12 13 14 15 16 nồng độ (ng/ml) Hình 1: Đồ thị biểu diễn độ hấp thu theo nồng độ Nhận xét: nồng độ testosteron tăng độ hấp thu giảm, dựa vào đường chuẩn ta xác định nồng độ testosteron mẫu thử nghiên cứu Gây mơ hình động vật bị giảm sinh dục Bảng 2: Nồng độ testosteron chuột bình thường chuột cắt tinh hoàn sau 1, 2, 3, tuần Lô chuột thử nghiệm n = 10 Bình thường Cắt tinh Sau tuần hồn Sau tuần Sau tuần Sau tuần Nồng độ Tỉ lệ % so với testosteron chứng bình (ng/ml) thường 0,482 ± 0,035 0,367 ± 0,036* 23,86 0,246 ± 0,013* 48,96 0,133 ± 0,014* 72,41 0,102 ± 0,006* 78,84 Ghi chú: = giảm Nồng độ testosteron lơ chuột bị cắt hai tinh hồn sau 1, 2, tuần thấp lơ chuột bình thường đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% thời điểm chọn thích hợp để khảo sát tác dụng tuần sau chuột bị cắt tinh hồn Khi đó, nồng độ testosteron đo giảm gần phân nửa so với giới hạn bình thường (48,96 %), chưa giảm tới tối thiểu Khảo sát nồng độ testosteron chuột bình thường chuột gây giảm sinh dục Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nhận xét Ở chuột bình thường: Ở liều 125 mg/kg nồng độ testosteron tăng so với lô chứng đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% Ở chuột gây giảm sinh dục: Nồng độ testosteron tăng so với chứng liều thử nghiệm 62,5 mg/kg 125 mg/kg đạt ý nghĩa thống kê độ tin cậy 95% Khảo sát tác dụng rễ Bách bệnh lên quan sinh dục Túi tinh- Tuyến tiền liệt Bảng 4: Trọng lượng túi tinh - tuyến tiền liệt chuột bình thường chuột giảm sinh dục sau 15 ngày thí nghiệm Lơ Thuốc uống Chứng Rễ BB 62,5 mg/kg Rễ BB 125 mg/kg n Túi tinh- Tuyến Túi tinh- Tuyến tiền liệt tiền liệt chuột bình chuột giảm thường sinh dục (g/100g) (g/100g) 10 0,185 ± 0,018 0,042 ± 0,003# 10 0,214 ± 0,015 10 0,327 ± 0,022* 0,072 ± 0,005* 0,055 ± 0,005 Dầu olive 10 0,251 ± 0,024 Testocaps 2mg/kg 0,042 ± 0,005 10 0,370± 0,027* 0,150 ± 0,021* Nhận xét Trọng lượng túi tinh- tuyến tiền liệt tăng đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng liều 125mg/kg chuột bình thường chuột giảm sinh dục 189 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học Tinh hoàn Bảng 5: Trọng lượng tinh hồn sau 15 ngày thí nghiệm Lơ Thuốc uống n Chứng bình thường Rễ BB 62,5 mg/kg Rễ BB 125 mg/kg Dầu olive Testocaps mg/kg 10 10 10 10 10 Trọng lượng tinh hoàn (g/100g thể trọng chuột) 0,522± 0,038 0,412 ± 0,018* 0,438 ± 0,017* 0,487 ± 0,026 0,486 ± 0,025* Nhận xét Trọng lượng tinh hồn lơ chuột thử nghiệm giảm so với lô chứng, đạt ý nghĩa thống kê độ tin cậy 95% Khảo sát trọng lượng nâng hậu mơn chuột bình thường chuột giảm sinh dục Bảng 6: Trọng lượng nâng hậu mơn chuột bình thường chuột giảm sinh dục sau 15 ngày thí nghiệm Lơ Thuốc uống Chứng Rễ BB 62,5 mg/kg Rễ BB 125 mg/kg Dầu olive Testoscap 2mg/kg 190 thường (ng/dl) 5,21 ± 0,2 5,89 ± 0,07* 6,13 ± 0,09* 5,35 ± 0,09 5,42 ± 0,16 sinh dục (ng/dl) 4,17 ± 0,15 5,24 ± 0,08* 5,68 ± 0,06* 3,62 ± 0,09 5,45 ± 0,10* Nhận xét Nồng độ protein toàn phần huyết tương tăng liều thử nghiệm chuột bình thường chuột giảm sinh dục Sự thay đổi trọng lượng thể sau 15 ngày dùng thuốc Bảng 8: Trọng lượng thể chuột trước sau 15 ngày dùng thuốc Lô Chứng Dầu olive Testocap mg/kg Rễ BB liều 62,5 mg/kg Rễ BB liều 125 mg/kg Chuột bị giảm Chuột bình thường sinh dục P trước P trước P sau (g) P sau (g) (g) (g) 27,5 ± 0,8 33,1 ± 0,6 26,3 ± 0,7 33,0 ± 0,4 23,1 ± 0,2 30,3± 0,8 23,0 ± 0,3 30,0 ± 0,6 28,5 ± 0,8 34,9 ± 1,2 28,5 ± 0,5 34,6 ± 0,4 10 10 0,354 ± 0,022 0,220 ± 0,010 10 0,412 ± 0,037 0,240 ± 0,011 BÀN LUẬN VÀ KẾT LUẬN 10 0,365 ± 0,028 0,218 ± 0,020 10 0,489 ± 0,028 0,574 ± 0,056* Nồng độ testosteron chuột giảm sinh dục tăng đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng tương đương với hàm lượng testosteron chuột bình thường Ở liều cao 125 mg/kg hàm lượng testosteron chuột giảm sinh dục tăng ngang với giá trị chuột bình thường chứng tỏ cao rễ Bách Bệnh có tác dụng khả quan địa bị giàm sinh dục giúp thể phục hồi tốt lượng testosteron nội sinh bị thiếu hụt Theo nghiên cứu Malaysia, thành phần eurycomanon, eurycomalacton eurycomanol có rễ Bách bệnh cho thành phần có tác dụng tăng cường sinh dục nam làm tăng nồng độ testosteron máu lên nhiều lần(1) Ngoài ra, trọng lượng quan sinh dục túi tinh- tuyến tiền liệt n Định lượng protein toàn phần huyết tương Bảng 7: Nồng độ protein toàn phần huyết tương chuột bình thường chuột giảm sinh dục sau 15 ngày cho uống thuốc Liều (mg/kg) 62,5 125 Cơ nâng hậu Cơ nâng hậu môn chuột mơn chuột bình thường giảm sinh (g/100g) dục (g/100g) 0,358 ± 0,029 0,216 ± 0,012# Nhận xét Ở liều thử nghiệm 62,5 mg/kg 125mg/kg, trọng lượng nâng hậu mơn có khuynh hướng tăng so với lô chứng chưa đạt ý nghĩa thống kê mơ hình: chuột bình thường chuột giảm sinh dục Lô n= 10 Chứng Rễ BB Rễ BB Dầu olive Testocaps Nồng độ protein Nồng độ protein tồn phần tồn phần chuột bình chuột giảm 30,5 ± 0,8 33,6 ± 0,8 26,6 ± 0,4 33,8 ± 0,6 30,7 ± 0,7 34,3 ± 1,0 28,5 ± 0,543 34,8 ± 0,7 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 có khuynh hướng tăng so với lơ chứng đạt ý nghĩa thống kê liều cao 125 mg/kg cho thấy diện testosteron làm tăng trọng lượng quan Đặc biệt trọng lượng tinh hồn súc vật bình thường giảm liều thử nghiệm Nguyên nhân liều thử nghiệm cao gây chế feed-back Về tác dụng đồng hóa thuốc thử nghiệm, hàm lượng protein tăng liều thử nghiệm có khuynh hướng làm gia tăng trọng lượng nâng hậu mơn cho thấy thuốc thử nghiệm vừa có tác dụng hướng sinh dục vừa có tác dụng đồng hóa So sánh với tác dụng androgen mẫu Bách Bệnh thu hái Tây nguyên(3), cao chiết cổn 45% rễ Bách Bệnh thu hái Đồng Nai có tác dụng tương đồng Sự phân bố rộng rãi Bách Bệnh nước ta Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học vùng miền khác với tác dụng androgen thể rõ nét nguồn dược liệu dồi nước đáp ứng nhu cầu thuốc hướng sinh dục nam góp phần kéo dài tuổi thọ nâng cao chất lượng sống nhịp sống đại ngày TÀI LIỆU THAM KHẢO Ang H H., Cheang H S (2001), Effects of Eurycoma longifolia Jack on levator ani muscle in both uncastrated and testosteron stimulated castrated intact male rats, Arch Pharm Res, 24 (5), pp 437 - 440 Dương Thị Ly Hương, Vi Thị Hoài Phương, Lê Thị Hoa, Nguyễn Trần Giáng Hương (2011), Hoạt tính Androgen giống Bá Bệnh Việt Nam, Tạp chí Dược Liệu, 16(4), tr 217-221 Trần Mỹ Tiên, Hồ Việt Anh, Lê Minh Triết, Nguyễn Thị Thu Hương, Trần Công Luận (2008), Ứng dụng kỹ thuật Elisa định lượng testosteron nghiên cứu tác dụng kiểu nội tiết tố sinh dục nam Gai chống (Tribulus terrestris L Zygophylaceae), Tạp chí Y học Tp HCM, tr 148 - 151 Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr.1139 191 ... dụng hướng sinh dục nam từ dịch chiết cồn rễ Bách bệnh (Eurycoma longifolia Jack) chuột nhắt trắng (Mus musculus) với mục tiêu nghiên cứu đánh giá tác dụng hướng sinh dục nam cao cồn 45% rễ Bách. .. vừa có tác dụng đồng hóa So sánh với tác dụng androgen mẫu Bách Bệnh thu hái Tây nguyên(3), cao chiết cổn 45% rễ Bách Bệnh thu hái Đồng Nai có tác dụng tương đồng Sự phân bố rộng rãi Bách Bệnh. .. chỉ, sát trùng vết mổ dung dịch cồn iod (Povidine) Chuột cắt tinh hoàn để nghỉ tuần trước làm thử nghiệm Khảo sát tác dụng mẫu cao chiết Mỗi mẫu cao chiết thực liều, đối tượng chuột nhắt trắng