Nghiên cứu được tiến hành với mục tiêu nhằm định lượng các hợp chất phenolic trong một số chế phẩm từ chè vằng bằng phương pháp so màu. Nghiên cứu tiến hành định lượng các hợp chất phenolic từ chế phẩm được chiết và làm phản ứng tạo màu với thuốc thử folin ciocalteur sau đó định lượng bằng phương pháp so màu tại 750 nm.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học ĐỊNH LƯỢNG CÁC HỢP CHẤT PHENOLIC TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM TỪ CHÈ VẰNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG (JASMINUM SUTRIPLINERVE BLUME.) Nguyễn Thị Thu Phương*, Nguyễn Thị Hồng Hương* TÓM TẮT Mục tiêu: định lượng hợp chất phenolic số chế phẩm từ chè vằng phương pháp so màu Phương pháp: hợp chất phenolic từ chế phẩm chiết làm phản ứng tạo màu với thuốc thử Folin ciocalteur sau định lượng phương pháp so màu 750 nm Kết quả: Xây dựng quy trình định lượng hợp chất phenolic chế phẩm từ chè vằng Kết luận: Phương pháp xây dựng đơn giản, dễ thực hiện, có tương quan tuyến tính nồng độ hợp chất phenolic độ hấp thu mẫu tương ứng (R2 > 0,999), độ độ lặp lại đạt nên áp dụng phương pháp để kiểm sốt chất lượng số chế phẩm chè vằng Từ khóa: Hợp chất phenolic, thuốc thử Folin - ciocalteur, chè vằng, Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae ABSTRACT QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE PHENOLIC COMPOUNDS IN SOME PHARMACEUTICAL PREPARATIONS FROM JASMINUM SUTRIPLINERVE BLUME BY UV –Vis SPECTROPHOTOMETER METHOD Nguyen Thi Thu Phuong, Nguyen Thi Hong Huong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 511 - 514 Objectives: Studying on the method suitable for the determination of total phenolic compounds present in drugs from J subtriplinerve Blume Methods: The colour – spectrophotometric method was developed and validated for the phenolic compounds in some drugs from J subtriplinerve Blume with Folin – ciocalteur reagent at 750 nm Results and conclusions: This method shows good linearity, precision and accuracy within a wide concentration range It is going to be applied for the quantitative control of the phenolic compounds from J subtriplinerve Blume Keywords: phenolic compound, Folin - ciocalteur, Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae áp cao người lớn tuổi Trong ĐẶT VẤN ĐỀ báo trước chúng tơi trình bày kết phân Chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume họ lập xác định cấu trúc số hợp chất Nhài Oleaceae) loài thuốc dân gian phenolic cành chè vằng rutin, dùng làm thuốc trị viêm tắc tuyến sữa, verbascosid, isoquercitrin, astragalin(2) phục hồi sức khỏe cho phụ nữ sau sinh, trị isoverbascosid, isooleoverbascosid, ghẻ lở ngồi da, trị kinh nguyệt khơng Hiện 6’–O– apiosylverbascosid(3), chè vằng dùng loại thức (4) menthiafoloylverbascosid kết định uống chức ổn định đường huyết huyết *Khoa Dược Đại học Y dược TP HCM Tác giả liên lạc: TS Nguyễn Thị Hồng Hương ĐT: 01217432666 Email: nguyenhhuong@yahoo.com Chuyên Đề Dược Khoa 511 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 lượng chúng phương pháp HPLC(5) Phương pháp định lượng HPLC xác khó áp dụng thiếu chất chuẩn đối chiếu giá thành chuẩn đối chiếu cao Với báo chúng tơi trình bày kết định lượng số hợp chất phenolic glycosid vài chế phẩm từ chè vằng phương pháp so màu sau phản ứng với thuốc thử Folin ciocalteur theo DĐVN IV NGUYÊN LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Cao cồn chè vằng (1): bột cành chè vằng chiết cồn 40o theo phương pháp ngấm kiệt ngược dòng Dịch chiết cách thủy thành cao đặc, độ ẩm 23,03% phản ứng màu đặc trưng hợp chất phenolic Định lượng hợp chất phenolic Theo quy trình định lượng hợp chất phenolic tồn phần dược liệu thuốc thử Folin-ciocalteur DĐVN IV(1) Khảo sát quy trình định lượng Xác định số lần chiết kiệt hoạt chất; Khối lượng mẫu cân phù hợp để định lượng Thẩm định quy trình định lượng về: tính tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại Thực định lượng với mẫu với n = – lần điều kiện Xử lý thống kê kết định lượng Cao nước chè vằng (2): Sắc bột thô cành chè vằng nồi sắc thuốc đông dược Nước sắc cô cách thủy thành cao đặc, độ ẩm 23,57% Mẫu thử: cân xác khoảng 0,1 - 0,2 g mẫu thêm vào 20 ml nước cất, siêu âm 15 phút gạn dịch, lặp lại lần bổ sung nước cất vừa đủ 100 ml (bình định mức) Pha lỗng lần lọc Dùng dịch làm phản ứng với thuốc thử Folin- cioclteur để đo quang Cao đặc chè vằng (cơ sở TN- độ ẩm 12,02%, sở H – độ ẩm 8,72%) bán Cam Lộ – Quảng Trị Mẫu chuẩn: cân xác acid gallic chuẩn pha thành dung dịch có nồng độ khoảng 0,05 mg/ml Trà hòa tan (5) cơng ty cổ phần dược vật tư y tế NA; Số lô: 010408 Pha dung dịch đo quang: hút xác ml dung dịch thử (hoặc chuẩn) vào bình định mức 25 ml, thêm vào 1ml thuốc thử phosphomolybdotungstic, thêm 10 ml nước, thêm dung dịch natricacbonat 29% đến vạch, lắc Đo độ hấp thu dung dịch 750 nm Chuẩn bị song song mẫu trắng Trà túi lọc (6) công ty cổ phần dược M; Lô sản xuất: 21307 Bột đông khô chè vằng (7) điều chế tháng 04 2010 độ ẩm 3,57% Hóa chất thiết bị phân tích THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ Chất đối chiếu acid gallic (Sigma) No 159630 có hàm lượng 99% Dung mơi, hố chất: TT Folin-ciocalteur (Merck) Các dung môi dùng chiết xuất, SKLM, đo UV-vis: methanol PA (Trung Quốc), ethenol 96% (Việt Nam), natricarbonat khan PA (Trung quốc), nhôm clorid PA, ete dầu hoả Tất mẫu khảo sát độ ẩm độ tro định tính hợp chất phenolic phản ứng màu đặc trưng trước định lượng Kết mẫu khảo sát cho phản ứng dương tính với số thuốc thử đặc trưng hợp chất phenolic (bảng 1) Máy quang phổ Shimadzu UV Probe 2550; Máy cất nước A400D Bảng Kết định tính hợp chất phenolic mẫu phản ứng hoá học Phương pháp nghiên cứu Định tính hợp chất phenolic phản ứng màu Dùng dịch chiết cồn mẫu làm 512 Mẫu Phát quang với AlCl3 1% Phản ứng tạo phức với FeCl3 1% Tăng màu với NaOH 1% + ++ ++ ++ + + ++ ++ +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ + ++ +++ Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Mẫu Tạo tủa với dung dịch chì ++ + + + ++ acetat Phản ứng với TT +++ ++ +++ +++ ++ diazonium + + + ++ Đánh giá phương pháp phân tích Xây dựng đường tuyến tính nồng độ acid gallic độ hấp thu (A) hỗn hợp sau phản ứng với thuốc thử Folin-ciocalteu Dung dịch chuẩn: pha acid gallic nước cất làm chuẩn đối chiếu với nồng độ mg/ml Nghiên cứu Y học Tiếp tục pha loãng thành dãy dung dịch pha với thuốc thử để có nồng độ acid gallic bảng thực đo quang Kết cho thấy nồng độ acid gallic độ hấp thu (A) có tương quan chặt chẽ thể hệ số tương quan R2 ≥ 0,999 phương trình hồi quy (đạt tính tương thích hệ số phương trình có ý nghĩa qua trắc nghiệm F, trắc nghiệm t) Bảng Kết khảo sát khoảng tuyến tính dung dịch acid gallic chuẩn Nồng độ acid gallic (mg/ml) 0,025 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 A750 0,1258 0,2346 0,4389 0,6364 0,8196 1,0199 Đường tuyến tính acid gallic chuẩn đối chiếu 1.2 y = 3.9471x + 0.036 R2 = 0.9996 0.8 A 0.6 0.4 0.2 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 C( mg) Độ xác: Thực định lượng từ - lần khác mẫu thử nghiệm điều kiện Xử lý thống kê kết định lượng cho thấy mẫu đạt độ lặp với RSD ≤ % (bảng 3) Độ tiến hành phương pháp thêm xác chất chuẩn đối chiếu acid gallic tương ứng với khoảng 80, 100 120% hàm lượng có mẫu thử Xác định tỷ lệ thu hồi nồng độ chung cho mẫu Tỷ lệ thu hồi mẫu đạt 94–105% nằm khoảng cho phép (bảng 4) Bảng kết khảo sát độ lặp lại mẫu thử Mẫu Số liệu xử lý thống kê n = 7; XTB = 71,0136 (mg/g); SD = 2,21%; RSD = 3,11%; μ = 71,0136 ± 2,3144 (mg/g) (P 0,95) n = 7; XTB = 145,6901 (mg/g); SD = 2,94%; RSD= 2,02%; μ = 145,6901 ± 3,0894 (mg/g) (P 0,95) n = 7; XTB = 197,7110 (mg/g); SD = 7,75%; RSD = 3,92%; μ = 197,7110 ± 8,1343 (mg/g) (P 0,95) n = 7; XTB = 215,0928 (mg/g); SD = 5,87%; RSD = 2,73%; μ = 215,0928 ± 6,1582 (mg/g) (P 0,95) n = 7; XTB = 16,5599 (mg/g); SD = 0,51%; RSD = 3,06%; μ = 16,5599 ± 0,5318 (mg/g) (P 0,95) n = 7; XTB = 20,8680 (mg/g); SD = 0,49%; RSD = 2,36%; μ = 20,8680 ± 0,5178 (mg/g) (P 0,95) n = 6, Xtb = 69,8403( mg/g); SD = 0,43; RSD = 0,61%; µ = 69,8403 ± 0,45 (mg/g) (P 0,95) Nhận xét chung: quy trình xây dựng đạt yêu cầu tính tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại nên áp dụng quy trình định lượng hợp chất phenolic mẫu nghiên cứu Chuyên Đề Dược Khoa Bảng Kết khảo sát độ mẫu thử Mẫu Tỷ lệ phục 94,9 94,54 101,3 96,09 94,34 104,0 100,67 4 hồi % 513 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Định lượng KẾT LUẬN: Thực định lượng hợp chất phenolic mẫu thử theo quy trình xây dựng thu kết bảng Qua khảo sát thực nghiệm xây dựng phương pháp định lượng hợp chất phenolic số chế phẩm cùa chè vằng kỹ thuật so màu với thuốc thử Folin ciocalteur Phương pháp xây dựng đơn giản, dễ thực hiện, có tương quan tuyến tính nồng độ hợp chất phenolic độ hấp thu mẫu tương ứng hoàn hảo, độ độ lặp lại đạt Trong điều kiện chưa có chất chuẩn đối chiếu theo thành phần hóa học dược liệu áp dụng phương pháp để kiểm soát chất lượng số chế phẩm chè vằng Bảng Hàm lượng hợp chất phenolic mẫu thử tính theo acid gallic (mg/g) Mẫu Hàm lượng Mẫu Hàm lượng 71,14± 2,314 17,56± 0,54 146,59± 3,09 26,88± 0,518 197, 71± 8,13 213,35± 6,16 69,84± 0,45 Cao cồn chè vằng (1) có hàm lượng hợp chất phenolic tính theo acid gallic thấp cao nước (2) Kết dung mơi chiết (cồn) khác với dung mơi hòa tan thuốc thử (nước) Để phản ứng với thuốc thử Folin, mẫu thử bắt buộc phải hòa lại nước Mẫu (1) hòa lại nước có số hợp chất phenolic tan tốt cồn tan nước bị loại lọc nên hàm lượng hợp chất phenolic mẫu (1) bị giảm Mặt khác, thuốc thử Folinciocalteu cho phản ứng oxi hoá - khử với nhiều hợp chất khử hợp chất phenolic nên khả (2) tồn nhiều hợp chất cho phản ứng với thuốc thử Folin (1) nên có kết lớn 514 TÀI LIỆU THAM KHẢO Hội đồng Dược điển, Dược điển Việt Nam IV (2009) Phụ lục 12.6, trang PL- 234 Nguyễn Thị Hồng Hương, Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ, Trịnh văn Quỳ, Markus Ganzera, Hermann Stuppner (2007) Tạp chí Dược học, 379 tr 29 – 32 Nguyễn Thị Hồng Hương, Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ, Trịnh văn Quỳ, Markus Ganzera, Hermann Stuppner (2008) Tạp chí Dược học, 382 tr 36 – 39 Nguyen Thi Hong Huong, Nguyen Khac Quynh Cu, Trinh van Quy, Christian Zidorn, Markus Ganzera, Hermann Stuppner, JANPR, Vol 10, No.11, November 2008, p 1035 – 1038 Nguyễn Thị Hồng Hương, Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ, Trịnh văn Quỳ (2008) Tạp chí Dược học, 389, tr 16 -19 Chuyên Đề Dược Khoa ... Phụ Số * 2011 Định lượng KẾT LUẬN: Thực định lượng hợp chất phenolic mẫu thử theo quy trình xây dựng thu kết bảng Qua khảo sát thực nghiệm xây dựng phương pháp định lượng hợp chất phenolic số chế. .. lặp lại đạt Trong điều kiện chưa có chất chuẩn đối chiếu theo thành phần hóa học dược liệu áp dụng phương pháp để kiểm soát chất lượng số chế phẩm chè vằng Bảng Hàm lượng hợp chất phenolic mẫu... trình định lượng hợp chất phenolic tồn phần dược liệu thuốc thử Folin-ciocalteur DĐVN IV(1) Khảo sát quy trình định lượng Xác định số lần chiết kiệt hoạt chất; Khối lượng mẫu cân phù hợp để định lượng