ứng dụng các phương pháp này đế định lượng amoxicillin và acid clavulanic trong một số lố của chế phẩm VIGENTIN của công ty cổ phần dược phẩm trung ương i — pharbaco

Bộ Y TÉ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THỊ HƯƠNG ĐINH LƯƠNG ĐỒNG m ■ THỜI AMOXICILIN VÀ ACID CLAVULANIC TRONG VIÊN NÉN DÀI BAO PHIM VIGENTIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỎ TỬ NGOẠI (Khóa luận tốt nghiệp Dược sỹ đại học khóa 2004 - 2009) Người hưởng dẫn: TS vũ ĐẶNG HOÀNG Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích & Độc chất Trường Đại học Dược Hà Nội Thời gian thực hiện:Tháng 11/2008 đến tháng 04/2009 Hà Nội - 05/2009 LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS vũ ĐẶNG HOÀNG người trực tiếp hướng đẫn tận tình giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn DS Hà Thanh Hoa - công ty cồ phần dược phầm Trung ương I - Pharbaco giúp đỡ em hoàn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn quan tâm, giúp đỡ thầy cô, anh chị kỹ thuật viên môn hóa phân tích trường Đại học Dược Hà Nội suốt thời gian làm thực nghiệm môn Em xin cảm ơn quan tâm Ban giám hiệu nhà trường, phòng Đào Tạo tạo cho em điều kiện tốt để hoàn thành trình học tập trường Cuối em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè đẫ liíôn giúp đỡ động viên, khích lệ em trình học tập Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 05 nãm 2008 Sinh viên Yũ Thị Hương MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC CHỮ VIÉT TẮT 1.2.2 ứng dụng phương pháp quang phổ nêu phương pháp HPLC định lượng đong thời Amoxicilin Acid Clavulanic chê 1.2.3 1.2.4 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1.2.5 DANH MỤC CÁC CHỮ VIÉT TẢT 1.2.6 AMO: Amoxicilin CLA; Acid Clavulanic Hshq: hệ số hồi quy PĐH: Phổ đạo hàm PĐHTĐ: Phổ đạo hàm tỷ đối PTĐ: Phổ tỷ đối 1.2.7 HPLC: High Performance Liquid Chromatoraphy 1.2.8 STT: Số thứ tự 1.2.9 TLTK: Tài liệu tham khả 1.2.10 oĐẶT VẤN ĐÈ * 1.2.11 Các bệnh nhiễm khuẩn nguyên nhân gây tử vong nước phát triển việt Nam Việc sử dụng kháng sinh dỏng vai trò quan trọng điều trị, dự phòng nhiễm khuẩn Tuy nhiên tình hình kháng kháng sinh ngày gia tăng gây nhiều khó khàn điều trị nhiễm khuẩn Một nguyên nhân quan trọng gây nên tình trạng đỏ kháng thuốc tự nhiên chủng vi khuẩn gây bệnh Ví dụ điển hình nhóm beta lactam, sinh men beta lactamase số chủng vi khuẩn (staphylococcus aureus, Haemolphilus enfluenzae, vi khuẩn họ Eterobateriaceae) làm hiệu lực số kháng sinh [3], Việc kết hợp kháng sinh với chất ức chế men beta lactamase giúp chọ kháng sinh không bị phá hủy men beta lactamase đồng thời mở rộng thêm kháng khuẩn cách hiệu nhiều vi khuẩn thông thường kháng lại penicillin cephalosporin 1.2.12 Ke từ 20 năm nay, việc phối hợp Amoxicilin Acid Clavulârĩic đỏng vai trò quan trọng điều trị bệnh nhiễm khuẩn đặc biệt nhiễm khuẩn đường hô hấp toàn thể giới Hiện nay, thị trường dược phẩm Việt Nam có nhiều biệt dược dạng kết hợp dạng viên bao, thuổc bột uống, thuốc tiêm Trong viên nén dài bao phim VIGENTĨN công ty cổ phần dược phấm Trung ương I — Pharbaco sản xuất sử dụng phổ biến Trong công tác kiểm nghiệm thuốc tai cổng ty, phương pháp sắc kỷ lỏng hỉệu cao sù dụng đề định lượng đồng thời Amoxicillin Acid Clavulanic chế phẩm [19] Tuy nhiên phương pháp sử dụng dung môi độc hại, đắt tiển tiêu tốn thời gian số lượng mẫu nhiều dễ dẫn đến tinh trạng tải máy móc, chi phí lớn 1.2.13 Với mong muốn đề xuất phương phốp định lượng đồng thời hỗn hợp hai thành phần có khả ứng dụng công tác kiểm nghiệm thuốc, chủng tiến hành đề tàỉ “Định lượng đồng thời Amoxicillỉn Acid Clavulanic viên nén dài bao phim VIGENTIN phương pháp quang phồ tử ngoại” với hai mục tiêu sau: Xây dựng phép định lượng đồng thời hồn hợp hai thảnh phần Amoxicillin Acid Clạvụlanic phựựng pháp quang phồ tử ngoại lấy phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao làm phương pháp đối chiếu, 1.2.14 ứng dụng phương pháp đế định lượng Amoxicillin Acid Clavulanic số lố chế phẩm VIGENTIN công ty cổ phần dược phẩm Trung Ương I — Pharbaco 2.18 1.2.15 1.2.16 .PHÀN TỒNG QUAN PHƯƠNG PHÁP QUANG PHÔ HÁP THỤ TỬ NGOẠI KHẢ KIÉN (UVV1S) 1.1 Định luật Lambert-Becr [5Ị - Độ truyền qua: T= —X 100(%) 1.2.17 *0 - Độ hấp thụ: A“ lg—= -IgT = lg — Khi cho xạ đơn sắc qua dưng dịch có chửa chất hấp thụ độ hấp thụ cùa xạ tỷ Ịệ với nồng độ chất hấp thụ bề dày dung dịch Mối quan hệ tuân theo định luật Lambert-Beer: 1.2.19 A = D = lg — = KCL I 1.2.20 Trong đó: 1.2.21 A: độ hấp thụ hay D: mật độ quang 1.2.22 1.2.23 lo I cường độ ánh sáng đơn sắc tới sau truyền qua dung dịch K hệ số hấp thụ phụ thuộc bước sóng ảnh sáng đơn sắc ( Ả )* thay đồi theo cách biểu thị nồng độ, đặc trưng cho chất chất tan dung địch 1.2.24 L chiều dày lớp dung dịch (cm), c nồng độ chất tan dung dịch - Nếu c = ỉ mol/l, L = cm A = £ ( hệ so hấp thụ phân tử) - Nếu c = 1%, L = cm A = E|9/o]gm ( so hấp thự riêng ) • Điều kiện áp dụng định luật Lambert- Beer: - Chùm tia sáng phải đơn sắc - Dung dịch phải nằm khoảng nồng độ thích hợp 6 - Dung dịch phải suốt - Chất thử phải bền dung dịch bền tác dụng tỉa UV-VIS 1.2 Định Iwyng dung dịch nhiều thành phần quang phổ UV-VIS 1.2.1.Đo quang hổn họrp nhiều bước song (5) 1.2.25 Giả sử có phẳ hấp thu cùa dung dich hai thảnh phần? goi A|, A2 độ hấp thu dung dịch haí bước sóng Xi độ hấp thụ có tính chất cộng tính nên 1.2.26 Tại A] = E ? C Ỉ + E ị C 1.2.27 Ằ : A = E ^ , C l + E ỷ C Trong :C|, Cỉ nong độ hai chất đung dịch 1.2.28 E í*1, E ị độ hấp thu riêng cùa hai chất bước sóng X| 1.2.29 E Ị1, E độ hấp thu riêng hai chất bước sóng l2 Giải hệ phưcmg trình trẽn ta Cl, C2 1.2.30 c _ A1XE£J-AÎX_E? 1.2.31 BỊ X- £■, * 1.2.32 1.2.33 1.2.34 _ Â2X - Ẩ, X v r/k _ rh V F, Ẩ-Jẩ I ^ í-d I ắu* 1.2.2.Phương pháp đạo hàm Ị5,1] • Cơ sở phưoiig pháp đạo hảm 1.2.35 1.2.36 Theo đinh luật Lambert-Beer ta có Độ hấp thụ: A=Elcm1 chất n 1.2 51 «) 1.2.52 1.2.5 1.2 55 *1 |L dl\ 1.2.54 il 1.2.57 jf 1.2.5 1.2.60 1.2.59 % 1.2.61 200 400 600 800 200 300 62 WAVELENGTH /nm 1.2.63 Hình 1.1 Pho hấp thụ (a), phũ đạo hàm bậc (b) bậc (c) (dảiphổ nẻt châm có vị trí cường độ nhtrng có đậ rộng gẩp đôi); phô hấp thụ trans-stiỉbene cycỉữhexane (d) phổ đạo hàm bậc (e'), bậc (f) tượng img [13] 1.2.64 Hình 1.1 minh hoạ cho chuyển dạng từ phả hấp thụ ƯV-VIS sang PĐH cho thấy phồ tương tự dạng phổ hấp thụ lại khác khỉ dạng PĐH số cực trị tăng khỉ số bậc PĐH tăng Việc tăng độ phức tạp PĐH có the ứng dụng phân tích định 9 tính 1.2.65 PĐH có tính chất đặc biệt điểm cực trị đưàmg cong hảp thụ đạo hàm bậc điềm uốn đạo hàm bậc bàng 10 10 1.2.765 1.2.770 1.2.775 1.2.780 1.2.785 1.2.790 RSD (%) 1.2.800 A FTB 1.2.803 R s 1.2.766 ,09 1.2.771 ,09 1.2.776 ,089 1.2.781 ,09 1.2.786 ,088 1.2.791 ,089 1.2.796 ,095 1.2.801 1.2.767 547 1.2.772 561 1.2.777 544 1.2.782 547 1.2.787 544 1.2.792 547,5 1.2.797 ,091 1,14 1.2.804 1.2.768 ,437 1.2.773 ,433 1.2.778 ,434 1.2.783 ,438 1.2.788 ,431 1.2.793 ,434 1.2.798 ,109 1.2.802 1.2.769 1,4 1.2.774 1,2 1.2.779 1,6 1.2.784 1,4 1.2.789 1,1 1.2.794 1,27 1.2.799 ,409 0,84 6 6 6 6,27 1.2.805 1.2.806 Nhận xét; Độ lệch chuẩn tương đối diện tích pĩc thời gian lưu thấp vả nằm giớỉ hạn cho phép (2) Như hệ thống sắc kí mà lựa chọn phủ hợp đảm bảo tính thích hợp phép định lượng hỗn hợp AMO CLA 2.2.4 Độ lặp phương pháp 1.2.807 Độ íặp phương pháp xác định dựa kết phép thử song song mẫu điều kiện (bảng 2.8) 1.2.18 Bảng 2.8 Độ lặp 1.2.810 phương pháp Diệnđịnh tích pic lượng AMO, CLA oi 1.2.812 1.2.813 Acid Amoxicili Clavulanic 1.2.814 1.2.815 1.2.816 L 7656 1.2.817 1.2.818 1.2.819 L 7618 1,6 1.2.820 1.2.821 1.2.822 L 7643 2,1 1.2.823 1.2.824 1.2.825 L 7637 1,6 1.2.826 1.2.827 1.2.828 L 7633 1,7 1.2.829 1.2.830 1.2.831 .1.2.832 L 7640 1,6 1.2.834 1.2.835 y 7636 1,77 S 1.2.837 1.2.838 D 12,27 ,23 1.2.839 1.2.840 1.2.841 R 0,16 ,36 1.2.809 6 6 6 0 1.2.842 2.2.5 Độ đủng phương phảp 1.2.843 Được xác định thông qua % tìm lại mẫu tự tạo (bảng 2.9) 1.2.844 1.2.845 S TT 1.2.853 1.2.858 1.2.863 1.2.868 1.2.873 1.2.878 1.2.883 Tr ung bình 1.2.888 R SD 1.2.893 1.2.846 Diện tích 1.2.849 pic 1.2.85 AMO CL 1.2.854 1.2.85 7622 61, 1.2.859 1.2.86 7607 62, 1.2.864 1.2.86 7591 61, 1.2.869 1.2.87 7587 61, 1.2.874 1.2.87 7596 61, 1.2.879 1.2.88 7625 61, 1.2.884 1.2.88 1.2.889 7605 61, 1.2.89 0,21 0,3 Bảng 2.9 Kết định lượng hỗn hợp mẫu tự tạo HPLC 1.2.847 1.2.85 1.2.85A 1.2.861 1.2.861 1.2.87 1.2.871 1.2.881 1.2.881 1.2.89 10 ,21 % tim iại 1.2.85 1.2.85 CL 10 1,20 1.2.86 10 1.2.86 10 1.2.87 10 1.2.87 10 1.2.88 10 1.2.88 10 1.2.89 0,3 1.2.894 2.2,6 Giới hạn định lượng Giới hạn định lượng xác định bàng cách pha loãng dần đung dỊch chuần đến nồng độ thấp mà tín hiệu máy cho đáp ứng gấp 10 lần (LOQ) so với nhiễu đường nền, 1.2.895 1.2.896 Kết cho thấy phương pháp HPLC với AMO: LOQ: ỉ ,3 mg/L Hình 2.9 Sắc ký đồ chếphắm Vigentin 1.2.897 1.2.898 0 1 2 CLA: LOQ: 0,42 mg/L Hàm lương %1.2.19 so với nhẫn (trung bình ± SD) 1.2.901 AJ 1.2.902 vto 1.2.905 1.2.906 1.2.907 1.2.908 Đạo ĐHTĐ Đo Tỷ ỉệ độ hàm qua hâp 1.2.913 1.2.916 1.2.919 1.2.922 99,21± 100,14*1,4 99,89±1 100,42^1 1,32 ,55 ,17 1.2.929 1.2.930 1.2.933 1.2.934 98,83±1 98,49±1 99,10*1,50 97,84*1, ,66 ,37 69 1.2.931 t= t= 1.2.946 1.2.949 1.2.943 1.2.952 99,52±1,39 99,82±1 99,67=1 99,98±1, ,45 =1,3 49 1.2.947 1.2.899 1.2.904 HPLC 1.2.912 99,68±0,7 1.2.928 97,56±0t87 1.2.942 99,86±0,7 1.2.956 1.2.20 Bảng 2.11 Kết quầ định lượng CLA 1.2.957 Hảm lượng %C1 so với nhãn (trung LA bình ± SD) 1.2.959 1.2.960 46 46 1.2.962 HPLC 1.2.963 Đạo hàm 1.2.964 ĐHTĐ 1.2.965 Đo quang nhiều 1.2.966 Tỷ lệ độ hấp thụ 1.2.909 Bủ trừ 1.2.925 99,45±0,85 t=Ó,53 F1.2.937 97,43±0,57 1.2.938 1.2.955 100,29±0,8 t=0,937 F=l,319 1.2.967 Bù trừ 1.2.970 99,28±0,8 1.2.971 99,72±1,64 1.2.988 99,54±0,3 1.2.972 1.2.989 100,03±0,7 1.2.1001 100,17*1,5 1.2.1000 99,72*0,0 1.2.1015 1.2.974 99,93*1,39 1.2.975 t-0,965 1.2.992 100,22±0,6 1.2.1004 99,80±1,30 1.2.1005 t=0,098 1.2.977 99,56*1,9 1.2.995 99309± 0,81 1.2.1007 t= 99,84±1,4 1.2.980 98,75±1,68 1.2.983 99,Q5±0,54 1.2.981 1.2.996 99,87±0,74 t=0,972 1.2.1010 F=3,792 100,10± 1,53 1.2.1011 1.2.984 1.2.997 99,22±0,55 t= 1.173 1.2.1013 100,07±0,54 t=0,5 62 > Chế phẩm định lượng lần > Viên nén Vigentin có chứa 500mg Amoxicilin vả 125 mg Acid Clavulanic > Với p = 0,95, F(5,5)(0,05)=5,05 n=6, t,0(0,05)=2,228 3, BÀN LUẬN 1.2.1016 Các phương pháp khảo sát cho phép định ỉượng đồng thời trực tiếp Amoxicilin Aciđ Clavulanic chế phẩm Phương pháp quang phổ tử ngoại đơn giản vả dễ tiến hành, kết định lượng đáng tin cậy - Với phương pháp đo quang nhiều bước sóng, nguyên tắc phương pháp dựa tính chất cộng tính cùa độ hấp thụ nện bước sóng lựa chọn để định lượng bước sóng cò trùng phổ phổ hấp thụ hỗn hợp AMO CLA phổ cộng AMO CLA 251 nm 255 nm, giúp hạn chế tối thiểu sai số cho phép đo - Đối với phương pháp PĐH PĐHTĐ yếu tố ảnh hưởng đến kết lồ bước sóng định lượng thông số cùa phép lấy đạo hàm, phép làm trơn phổ đồ cản theo ổn định giá trị PĐH, PĐHTĐ tuyến tính nồng độ với giá trị Qua khảo sát bước sóng 244,9 rưn 272,0 nm ỉần lượt lựa chọn cho phép định lượng MA, CLA (PĐH), bước sóng 283,3 nm; 287,9 nm để định lượng AMO CLA (PĐHTĐ) 47 47 Các thông số phép toán lựa chọn là: Đạo hàm (order: 5, No of Coefficients; 9); Smooth: order; 3, No of Coefficients: 125 1.2.1017 Ngoải ra, PĐHTĐ việc chọn nồng độ chất chuẩn để lấy tỳ đối kiểm tra nguyên tắc, với số bị chia nồng độ nhỏ giá trị PĐHTĐ tãng, giúp giảm sai số tảng độ nhạy phương pháp Qua khảo sát nồng độ MA 60,0 mg/L CLA 10,0 mg/L lựa chọn - Với phương pháp tỷ lệ độ hấp thụ, bước sóng cực đại AMO (274,0 nm) CLA (280,1 lìm) lựa chộn nhằm hạn chế sai số chờ phép đo 48 48 1.2.1018 Với phương pháp bù trử: Khi biết hàm lượng chế phẩm nằm khoảng định việc xác định nồng độ dãy phồ chuẩn đơn chất dễ đàng Lựa chọn cặp bước sóng định lượng chất 245,7 nm 255 nm (AMO), 251,4 nm 255 nm (CLA) cặp bước sóng giá trị tỷ số Đi Í D X ồn định nhất.KÉT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT * Dựa vào kêt nghiên cứu đề tồi, chừng rứt số nhận xét sau: - Xây dựng phép định lượng đồng thời AMO CLA Ưong hỗn hợp cách trực tiếp không qua trình tách chiết phương pháp: đo quang nhiều bước sóng, PĐH, PĐHTĐ, tỳ lệ độ hấp thụ, bù trừ với độ lặp độ cao Sự khác biệt vẽ độ xác kêt thu từ phương pháp nẽu phương pháp HPLC không cỏ ý nghĩa thống kê với mức tin cậy 95% - Các phương pháp quang phồ đâ nêu có yêu cầu kỹ thuật đơn giản, tiết kiệm thời gian sử dụng dung môi, hoá chất thông thường nên có khả ứng dụng vào công tác kiềm nghiệm thuốc - Không có sai khác đáng kề hàm lượng thực tế mẫu thuốc kiểm nghiệm so với hàm lượng ghi nhãn, * Trên sở kết đạt cố số đề nghị sau: 1.2.1019 » Tiếp tục nghiên cứu ứng dụng phương pháp quang phổ đạo hàm đạo hàm tỷ đổi vảo kiểm nghiệm dạng báo chế đa thành phần có chửa kháng sinh khác lưu hành tiên thị trường nói riêng dạng bào che đa thành phần cỏ khả hấp thụ UV- VIS nòi chung - ứng dụng chọn lọc phương pháp quang nêu vầo công tác kiểm nghiệm viên nén dải bao phim VIGENTIN xí nghiệp dược phẩm Trung Ương ỉ - Pharbaco 49 1.2.1021 1.2.1020 Tài Liệu Tham Khảo Tiếng Việt: Trần Tử An (2007), Kiểm nghiêm dượcphám, NXB Y học, trang 68-79 Dương Thị Thúy Àn (2008), Định ỉượng đồng thời Paracetamoỉ Cỡdeinphosphate dạng bào chế phương pháp quang phổ từ ngoạỉ, Khóa luận tốt nghiệp dược sỹ đại học khóa 58 năm 2008 Bộ môn dược lý (2006), Dược lý học tập //, Trường Đại học Dược Hà Nội, trang 125 126, ữang 133, Bộ môn hoả dược (2006), Hoá dược, tập 2,Trường Đại học Dược Hà Nội, trang 97 - 98, trang 116 Bộ môn hoá phân tích (2006), Hoá phân tích //, Trường Đại học Dược Hà Nội, trang 41-62, trang 125 - 147, trang 173 - 209 Bộ Y tế (2002), Dược đỉển Việt Nam ///, trang 19 Bộ Y tế, Viện Kiểm Nghiệm, Phân Viện Kiểm Nghiệm (1998), Tài liệu tập huấn kỹ thuật kiểm nghiệm thuốc, trang 1-15 Lê Hồng Dũng (1997), Nghiên cứu phương pháp định lượng Cardenal ParacetamoỊ viên nén Pacenal quang phổ đạo hàm, Khóa luận tốt nghiệp dược sỹ đại học khoá 47 năm 1997 Đại học quốc gia Hà Nội, Trường đại học KHTN (2007), Hoá học phân tíchr phân Các phương pháp phân tích công cụ, NXB Khoa học kỹ thuật, trang 26 - 46 10 Lưu Thị Gẩm (2006), Nghiên cứu định lượng đồng tkời Amoxicilỉn Cloxacỉỉin viên nang Lamox phương pháp sắc ký lỏng hiệu nãng caoy Khóa luận tốt nghiệp dược sỹ đại học khoá 2001 — 2006, 11 50 Đào Hữu Hồ(2007), xảc suất thong kê, NXB Đại học Quốc Gia Hả Nội 1.2.1022 Nguyễn Tiến Khanh (1995), Thông kê ứng dụng công tác dược học, Tủ sách sau đại học, Trường đại học dược Hà Nội,Tiếng Anh: 12 Antonov Liudmil and Nedeltcheva Daniela Resolution of overlapping ƯV-Vis absorption bands and quantitative analysis Chem SùC Rev., 2000, 29,217-227 1.2.1023 M.Altuii M, Levent, Erk Nevin, The rapid quantitative analysis of phenprobamate and acetaminophen by RP - LC and compensation technique, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 25 (2001) 85 - 92 15 Chatteijee P.Kj Jain C.L and Sethi P.D, Simultaneous determination of chlorzoxazone and acetaminophen in combined dợsage forms by an absorbance ratio technique and diference spectrophotometry, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Vol.7, No.6, pp.693-698, 1989 16 Ewa Bobrowska-Grzesikj Determinaotion of Amoxicillin and Clavulanic Acid in Some Pharmaceutical Preparation by Dervative Spectrophotometry, Mikrochim.Acta 136, 31-34 (2001), 17 Murillo J.A., Lemus J.L, Grarcia L.F, Resolution of binary mixtúrese of cephalothin and clavulamc acid by using first derivative spectrophotometry, Fresenius J Anoal Chem 349: 761 — 767 (1994) 18 Murillo J.A., Lemus JX, Grarcia L.F, Ảpỉication of the Ratio spectra derivative spectrophotometry to the analysis of cephadine and cỉavuỉanỉc acid in binary mixtures, Fresenius J Anoal Chem 347: 114-118 (1993) 19 The British pharmacopoeia (2008), Volume II, p 1777 - 1778, Volume III, p,2417 2420, p.2562 - 2563 20 The Japanese Pharmacopoeia XIV (2001), p.244-245, 380, 21 The United States pharmacopoeia 31, Volume II, p 1408 - 1413, p 1791 - 1793 1.2.21 1.2.22 Hình 1.2 Sự phân tách sắc kí với độ phân giải khác [5] 1.2.1024 1.2.1024 1.2.1025 1.2.1026 g Độ phân giải cột Rs 1.2.1027 Độ phân giả đánh giá khả tách hai chất sắc ký đồ cho hai pic liền kề 1.2.1028 *[('*)„ -('JJ 1.2.1029 Rs= 1.2.1030 R U8x [{/„)„ 1.2.1031 -JN a-\ kữ 1.2.1032. Rs=—— X X —— 1.2.1033 ữ \ + k, 1.2.1034 RS=L,50 hai pic tách gần hoàn toàn, xen phủ 0,3% Rs= 1,00 hai pic tách tương đối, xen phủ 0,4% Rs=0,75 hai pic tách không tốt, xen phủ nhiều.ứng dụng phương pháp quang phổ nêu phưomg pháp HPLC định lượng đồng thời Arttoxicilin Acid Clavulanic chếphắm VỈGENTIN - Tiến hành định lượng đồng thời AMO C1A mẫu phương pháp: 1.2.1035 + Quang phồ từ ngoại UV- VIs (Đo quang nhiều bước sóng, phổ đạo hàm, phổ đạọ hàm tỷ dổi, tỷ lệ độ hấp thụ, bù trừ) 1.2.1036 + Sắc kĩ lỏng hiệu cao - Thu thập số liệu, xử lý thống kê, so sánh kết phương pháp rút kết luận 1.2.2 Xử lý kết thực nghiệm [ỉ Ị] 1.2.1037 Sự phụ thuộc tuyến tính nồng độ với giá trị mật độ quang, PĐH PĐHTĐ thiết lập phương pháp bình phương tối thiểu với hệ số tương quan đường chuẩn > 0>990 1.2.1038 So sánh độ xác phương pháp test F so sánh giá trị trung bình test t với khoảng tin cậy 95% 1.2.1039 1.2.1040 Giá trị trung bình: 1.2.1041 n 1.2.1042 Độ lệch chuẩn 1.2.1043 1.2.1044 1.2.1045 1.2.1046 1.2.1047 1.2.1048 55 55 Phương sa n s2 =-^ 1.2.1049 i 1.2.1050 1.2.1051 Độ lệch chuẩn tương đối 56 56 1.2.1052 Pha động: Dung dịch đệm phosphat pH 4,4 — methanol (95 : 5) 1.2.1053 Tiêm riêng biệt 20 Ịil dung dịch thử dung dịch chuẩn, tiến hành sác ký ghi lại sắc đồ 1.2.1054 *> Khảo sát độ tuyến tính phương pháp 1.2.1055 Độ tuyến tính phương pháp đánh giá dựa phụ thuộc nồng độ chất cần định lượng với diện tích píc cùa chất thể bẳng phượng trình hồi quy hệ sá tương quan hồi quy (r) (bảng 2.6) 1.2.1056 Bảng 2.6 Kết khảo sát khoảng tuyến tính diện tích pic với nồng độ AMO CLA 1.2.10 57 H oạt 1.2.10 63 A 1.2.10 68 C 1.2.1073 1.2.105 1.2.1060.Khoả Bướ 1.2.106 220 c 1.2.106 220 ng tuyên tính 1.2.1065.100(mg/L) 400 1.2.1070.25100 1.2.1061 Phương trình hồi quy 1.2.1062 1.2.1066 Y=28>307x+5,115 1.2.1071 Y=l,ộ28x-8,5481 Hệ sô hồi 1.2.1067 quy 0.998 1.2.1072 0.999 2.2.3 Khảo sát tỉnh thích hợp hệ thống 1.2.1074 Việc khảo sát tính thích họrp hệ thống sắc ký tiến hành qua việc tiêm lặp lại lẩn dung dịch hỗn hợp chuẩn có nồng độ AMO 500 mg/L, CLA 125 mg/L điều kiện sắc ký Kết luận tính thích hợp hệ thống sắc ký dựa trẽn giá trị độ lệch chuẩn tương đối thời gian lưu (tr), diện tích pic (S), hệ số bất đối pic 57 57 (AF), độ phân giải hai pic (Rs) (bảng 2.7) 58 58 [...]... đúng của phương pháp - Xác định gi i hạn định lượng của phương pháp b) Phương pháp HPLC > Lựa chọn i u kiện sắc ký > Đánh giá phương pháp - Xác định tính thích hợp của hệ thống sắc ký, - Xác định khoảng tuyến tính giữa diện tích pic và nồng độ chất phân tích - Xác định độ lặp ỉ i của phương pháp 1.2.295 Xác định độ đúng của phương pháp 1.2.2 ứng dụng các phương pháp quang pho đã nêu và phưomg pháp. .. bằng cách lấy hàm lượng phần 1.2.2 23 [ 4,6] trăm của penicillin toàn phần trừ i hàm lượng phần 1.2 22 4 2 trăm của sản phẩm phân hùy 1.2.225 moxicilin A 1.2.226 * Phương pháp đo ỉod: Sau khi thủy phân Amoxicilin băng kiềm, sản phẩm phân hủy của 1.2.2 27 [ 6] Amoxicilin tác dụng v i iod Định lượng iod dư bàng Natri thiosulfat 0,0IN, chỉ thị hồ tinh bột cho vào th i i m gần kết thúc định lượng, tiến... tinh, phễu lọc, giấy lọc băng xanh 1.2 Phương pháp thực nghiệm 1.2.1 Xảy dụng phưomg phảp định lượng đông th i AMO và CLA băng cảc phương pháp quang phổ ƯV-VIS và sắc kỉ lỏng hiệu nãng cao a) Các phương pháp quang phổ - Chọn bước sóng định lượng thích hợp - Chọn khoảng nồng độ cỏ sự phụ thuộc tuyển tính giữa nồng độ và các giá trị mật độ quang, PĐH và PĐHTĐ - Kiểm tra độ lặp l i của phương pháp - Kiểm... HPLC định lượng đồng th i Ảmoxicìlin và Acỉd Clavuỉanỉc trong chê phẩm VỈGENTIN - Tiến hành định lượng đồng th i AMO và C1A trong cùng một mẫu bằng các phương pháp: 1.2.296 + Quang phổ tử ngo i UV- VIS (Đo quang t i nhiều bước sóng, phổ đạo hàm, phồ đạo hàm tỷ đ i, tỷ lệ độ hấp thụ, bù trừ) 1.2.297 -+- Sắc kí lòng hiệu năng cao - Thu thập số liệu, xử lý thống kẽ, so sánh kết quả của các phương pháp. .. PĐH bậc nhất trong nước t i 236,75 nm (CLA) 1.2.2 72 [ 1.2.273 23 23 1.2.274 PHẢN 2 THỰC NGHIỆM VÀ KÉT QUẢ I NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THỤ’C NGHIỆM 1.1 Nguyên vật liệu 1.2.275 1.2.276 ỈA ỉ Đ i tượng nghiên cừu Đ i tượng nghiên cứu là viên nén bao phim VIGENTÍN của công ty cồ phần dược phẩm Trung ương I - Pharbaco - SDK: VD-55Ữ5-08 - Số 10: 010908; 020907;011008 1.2.277 Công thức cho 1 viên:500mg 1.2.278... 1.2.279 Amoxicilin Acid Clavulanic 1.2.280 24 1.2.4 1.2.281 Tá dược vừa đủ (cellulose vi tinh thề, magnesi stearat, Eudragit El00, poviđon K30, talc, titan đioxyd, tri ethyl citrate, isopropanol) 1.2.282 Ỉ A 2 , Nguyên liệu và thiết bị - Nguyên liệu: 1.2.283 + Chất chuẩn: 1.2.284 1.2.285 1.2.286 - Thiết bị: Amoxicilin trihydrat; hàm lượng: 98,40% Acỉd Clavulanic: hàm lưạng: 84,0% + Dung m i: Nước cất... ấ t đ ổ i A F 1.2.173 Hệ số bất đ i AF để đánh giá tính bất đ i xứng của pic * 1.2.174 -p b a Trong đỏ: 1.2.175 b: Là chiều rộng phía sau của pic đo ở 1 \10 chiều cao của pic a: Là chiều rộng phía trước của pic đo ở 1\10 chiều cao của pic Giá trị AF càng gần t i I, pic càng đ i xứng Thường chấp nhận AF=Q,SH-1?1 Sở đĩa lý thuyết N Chiều cao của đĩa H 1.2.176 Cột sắc ký có thể phân ra thành nhiều lớp... tan trong cloroíbrm, ether và các dầu béo Tan ethanol 96%, rất khó tan trong trong các dung dịch acid loãng và aceton -pH=5,5 -5 - 8,0 dung dịch hydroxyd kiềm loãng 1.2.215 1.2.3 Bảng 1.2.1.2.217 Các phương H pháp định lượng Araoxicilin, 1.2.218 Aeid Nguyên Clavưlanic, tăc 1.2 oạt chât 20 20 1.2.219 T 1.2 22 0 1 1.2.221 moxỉcilin A 1.2.222 * Phương pháp đo thê: Hàm lượng phân trăm cùa Amoxicilin được... phép khi Co đã biết thì có thể xác định được X căn cứ vào giá trị đạo hàm đo được t i một bước sóng được chọn thích hợp (ph i cỏ giá trị khác 0) 1.2.97 11 11 1.2.4 Phương pháp tỷ lệ đậ hấp thụ [15] 1.2.99 Giả sử có phồ hấp thụ ƯV-VIS của một dãy các dung dịch hỗn hợp 2 chất X và Y, nồng độ m i chất thay đ i nhưng tổng nồng độ không đ i T i bước sóng Ăị các phổ 1.2.100 này giao nhau t i một i m i m đó... tĩnh dược xác định b i hộ số phân bố K 1.2.151 K =— 1.2.152 1.2.153 cu Trong đỏ:Cs:nồngđộ molchất tan trong pha tĩnh 1.2.154 CM: nồng độ moi của chất tan trong pha dộng K càng lớn sự di chuyển của chất tan qua pha tĩnh càng chậm 15 15 1.2.155 ■ b* Th i gian lưu ÍJỊ Thờỉ gian lưu (tR) là khoảng th i gian từ 1.2.156 ■ lúc tiêmmẫu vảo cột đến khi xuat hiệ i đỉnh của pic Th i gian chết (tM) là th i gian ... đ i chiếu, 1.2.14 ứng dụng phương pháp đế định lượng Amoxicillin Acid Clavulanic số lố chế phẩm VIGENTIN công ty cổ phần dược phẩm Trung Ương I — Pharbaco 2.18 1.2.15 1.2.16 .PHÀN TỒNG QUAN PHƯƠNG... đồng th i hỗn hợp hai thành phần có khả ứng dụng công tác kiểm nghiệm thuốc, chủng tiến hành đề tàỉ Định lượng đồng th i Amoxicillỉn Acid Clavulanic viên nén d i bao phim VIGENTIN phương pháp quang... ương I — Pharbaco sản xuất sử dụng phổ biến Trong công tác kiểm nghiệm thuốc tai cổng ty, phương pháp sắc kỷ lỏng hỉệu cao sù dụng đề định lượng đồng th i Amoxicillin Acid Clavulanic chế phẩm [19]