Nghiên cứu được thực hiện nhằm đánh giá tác dụng phục hồi trí nhớ và học tập của Cereneed-caps trên chuột nhắt trắng gây suy giảm trí nhớ bằng scopolamin trên 2 mô hình mê lộ nước Morris và mê lộ nhiều chữ T. Chuột nhắt trắng chủng Swiss được uống Cereneed - caps liều 669,6 mg và 2008,8 mg cao khô dược liệu/kg/ngày trong 6 ngày nghiên cứu (mê lộ nước Morris) và 8 ngày nghiên cứu (mê lộ nhiều chữ T) Kết quả thấy Cereneed - caps làm giảm thời gian và quãng đường tìm thấy chân đế, làm tăng phần trăm thời gian bơi của chuột trong 1/4 bể có chân đế (mê lộ nước Morris), làm giảm thời gian và quãng đường tìm thấy khoang đích, làm giảm số lần quyết định sai (mê lộ nhiều chữ T), tác dụng giữa 2 liều là tương đương nhau.
TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC TÁC DỤNG PHỤC HỒI TRÍ NHỚ VÀ HỌC TẬP CỦA CERENEED-CAPS TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG ĐƯỢC GÂY SUY GIẢM TRÍ NHỚ BẰNG SCOPOLAMIN Đinh Thị Tuyết Lan1, Trần Thanh Tùng2 Trường Đại học Y Dược Thái Bình; 2Trường Đại học Y Hà Nội Nghiên cứu thực nhằm đánh giá tác dụng phục hồi trí nhớ học tập Cereneed-caps chuột nhắt trắng gây suy giảm trí nhớ scopolamin mơ hình mê lộ nước Morris mê lộ nhiều chữ T Chuột nhắt trắng chủng Swiss uống Cereneed - caps liều 669,6 mg 2008,8 mg cao khô dược liệu/kg/ngày ngày nghiên cứu (mê lộ nước Morris) ngày nghiên cứu (mê lộ nhiều chữ T) Kết thấy Cereneed - caps làm giảm thời gian quãng đường tìm thấy chân đế, làm tăng phần trăm thời gian bơi chuột 1/4 bể có chân đế (mê lộ nước Morris), làm giảm thời gian qng đường tìm thấy khoang đích, làm giảm số lần định sai (mê lộ nhiều chữ T), tác dụng liều tương đương Từ khóa: phục hồi trí nhớ, học tập, scopolamin, mê lộ nước Morris, mê lộ nhiều chữ T I ĐẶT VẤN ĐỀ Hội chứng sa sút trí tuệ nói chung thức ảnh hưởng đến trí nhớ, khả nhận bệnh Alzheimer nói riêng biết, ngơn ngữ, óc phán đốn q mối quan tâm hàng đầu nhà lão trình tư khác Tuy nhiên, giá thành tương khoa toàn Thế giới nước ta, đối cao có nhiều tác dụng khơng mong tuổi thọ trung bình ngày cao, số muốn Bên cạnh phương pháp cải người mắc bệnh ngày nhiều Đây thiện trí nhớ y học đại, phương nguyên nhân dẫn đến pháp điều trị dùng chế phẩm có nguồn gốc từ tình trạng phụ thuộc người cao tuổi Bệnh dược liệu hướng nghiên cứu gây suy giảm trí nhớ nhiều lĩnh vực nhận nhiều nhà khoa học thức khác nhau, kèm theo với rối loạn Viên nang cứng Cereneed-caps chế hành vi gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến phẩm có thành phần gồm 10 vị dược liệu khả hoạt động hàng ngày chất lượng gồm: Hồng hoa (Flos Carthami tinctorii), Xích sống bệnh nhân [1] Các thuốc điều thược (Radix Paeoniae), Đương quy (Radix trị chủ yếu gồm thuốc kháng acetylcholi- Angelicae sinensis), Xuyên khung (Rhizoma nesterase, thuốc kháng thụ thể N - methyl - D Ligustici - Aspartat, thuốc tăng cường hoạt tính sero- Rehmanniae), Chỉ xác (Fructus Aurantii), Sài tonin Đây thuốc tân dược sử hồ dụng để điều trị triệu chứng liên quan đến nhận Achyranthis bidentatae), Cam thảo (Radix wallichii), (Radix Glycyrrhizae), Địa liên hệ: Trần Thanh Tùng, Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y Hà Nội Email: tranthanhtung@hmu.edu.vn Sinh Bubleuri), Bạch địa Ngưu (Rhizoma tất (Ginkgo (Radix biloba extract) Trong số vị dược liệu Bạch quả, Đương quy, Ngưu tất Ngày nhận: 26/5/2016 chứng minh có tác dụng cải thiện trí nhớ Ngày chấp thuận: 08/12/2016 thực nghiệm bệnh nhân sa sút trí tuệ TCNCYH 102 (4) - 2016 111 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC [2; 3; 4] Tuy nhiên, chưa có (đường kính 1,2m, cao 50cm) chia nghiên cứu hiệu trí nhớ thành phần nhau, thành phần tư (1/4) có dán hình ảnh khác nhau, phối hợp 10 vị dược liệu với Để có thêm chứng khoa học, nghiên cứu tiến hành với mục tiêu: chân đế (đường kính 10cm, cao 25 cm) đặt cố định 1/4 bể Đánh giá tác dụng phục hồi trí nhớ học tập + Mê lộ nhiều chữ T ghép nhiều Cereneed-caps chuột nhắt trắng hình chữ T, có đường rộng 8cm, khoang gây suy giảm trí nhớ scopolamin xuất phát buồng tối, khoang đích chứa mơ hình mê lộ nước Morris mê lộ thức ăn nhiều chữ T + Máy ảnh Canon Zoom Lens 8X II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP + Phần mềm ANY-maze (US Biotech, Hoa Kỳ) Chất liệu nghiên cứu đối tượng - Thuốc nghiên cứu: Cereneed-caps viên nang cứng Công ty cổ phần Dược Vật tư Y tế Hải Dương sản xuất đạt tiêu chuẩn sở + Mỗi viên chứa: 15 mg cao khô bạch 450mg cao khô hỗn hợp tương đương với 9g dược liệu bao gồm: Hồng hoa (0,76g), Xích thược (1g), Đương quy (1g), Xuyên khung (1g), Sinh địa (2g), Chỉ xác (0,6g), Sài hồ (0,6g), Ngưu tất (1,3g), Cam thảo (0,74g) + Cách bào chế: Nghiền mịn loại cao, rây lấy bột, trộn bột cao với tinh bột, avicel, calci carbonat thành hỗn hợp bột kép, thêm ethanol 96% nước tinh khiết để tạo khối ẩm, xát hạt, sấy sửa hạt, bao trơn (trộn với tá dược gồm bột talc, magnesi stearat) sau đóng nang đạt chuẩn - Thuốc dùng nghiên cứu + Chất gây suy giảm trí nhớ: Scopolamin hydrobromid lọ 1g (Sigma Aldrich, Hoa Kỳ) Đối tượng Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, trọng lượng 23 ± 2g, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp Chuột nuôi - ngày trước suốt thời gian nghiên cứu điều kiện phòng thí nghiệm với đầy đủ thức ăn nước uống Bộ môn Dược lý Trường Đại học Y Hà Nội Phương pháp Để đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ Cereneed – caps, chúng tơi triển khai mơ mình: mê lộ nước Morris, mê lộ nhiều chữ T, trục quay Rotarod máy né tránh chủ động, khuôn khổ báo chúng tơi trình bày nghiên cứu mê lộ nước Morris mê lộ nhiều chữ T Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 2.1 Mê lộ nước Morris + Thuốc chứng dương: Donepezil hydrochlorid viên nén 5mg, tên biệt dược: Aricept (Pfizer) Theo phương pháp Lee cộng (2011) [5], chuột nhắt trắng tiêm uống thuốc ngày liên tiếp, với cách + Nước muối 0,9% chai 500ml (B.Braun, Việt Nam) - Thiết bị: Mê lộ nước Morris bể tơn tròn 112 thức liều bảng Thử nghiệm gồm giai đoạn Giai đoạn học hỏi: kéo dài ngày gồm tập: Bài tập nhìn thấy chân đế: TCNCYH 102 (4) - 2016 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC chân đế cao mực nước cm Ngày 1, hành ngày 1, chân đế đặt sau tiêm scopolamin 30 phút, chuột mực nước 1cm Chỉ số đánh giá: thời gian huấn luyện tìm chân đế lần, xuất phát từ chiều dài qng đường tìm thấy chân đế Giai góc 1/4 bể khác không chứa chân đế, đoạn đánh giá thức: thực vào ngày lần cách 20 phút Thời gian huấn 6: bỏ chân đế khỏi bể, chuột thả vào luyện tối đa phút, khơng tìm thấy chân vị trí đối diện với 1/4 trước chứa chân đế đế, chuột hướng dẫn tìm chân đế và bơi lần phút Chỉ số đặt lên chân đế 15 giây Bài tập đánh giá: phần trăm thời gian phút khơng nhìn thấy chân đế: Ngày 2, 3, 4, tiến chuột bơi 1/4 bể trước đặt chân đế Bảng Cách thức, liều tiêm uống thuốc lô Lô Tiêm/uống thuốc Liều lượng chuột nhắt trắng TMB nước muối 0,1ml/10g TMB scopolamin 1mg/kg Uống donepezil Sau 30 phút TMB scopolamin Uống Cereneed-caps Sau 30 phút TMB scopolamin 669,6mg CKDL/kg/ngày(liều tương đương lâm sàng,hệ số ngoại suy 12) Uống Cereneed-caps Sau 30 phút TMB scopolamin 2008,8mg CKDL/kg/ngày (liều gấp lần lô 4) 2,4mg/kg *: TMB: tiêm màng bụng, CKDL: cao khô dược liệu 2.2 Mê lộ nhiều chữ T Theo phương pháp Falsafi cộng (2012) [6] Chuột nhắt trắng tiêm uống thuốc ngày liên tiếp, với cách thức liều bảng Chuột bị bỏ đói 16 tiếng trước thí nghiệm, sau tiêm scopolamin 30 phút chuột đặt khoang xuất phát (buồng tối) 10 giây, sau mở buồng tối cho chuột Khi tới khoang đích, chuột nhận phần thưởng viên cám nhỏ, sau trả lồng cũ cho ăn Kết thúc thử nghiệm, toàn mê cung lau dung dịch cồn 70% Thử nghiệm gồm giai đoạn Giai đoạn học hỏi: Trước thử nghiệm chuột khám TCNCYH 102 (4) - 2016 phá mê cung vào ngày (chưa tiêm uống thuốc), chuột tìm đến khoang đích phút tiếp tục đưa vào thử nghiệm Sau chuột học hỏi ngày liên tiếp tính từ ngày cho chuột tiêm uống thuốc, lần/ngày Giai đoạn đánh giá thức: Vào ngày chuột đưa vào mê cung lần tương tự Chỉ số đánh giá: thời gian chuột tìm khoang đích, quãng đường chuột để tới khoang đích số lần định sai Phân tích xử lý số liệu Các số liệu xử lý thống kê phần mềm Microsoft Excel 2007 Kiểm định giá trị trung bình test T-Student 113 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC III KẾT QUẢ Mê lộ nước Morris: Kết nghiên cứu thể biểu đồ 1, Biểu đồ Ảnh hưởng Cereneed - caps đến thời gian tìm thấy chân đế Từ kết cho thấy, lô thời gian dài lô tất ngày (p < 0,001); lô 3, lô lô ngắn lô ngày nghiên cứu (p < 0,05, p < 0,01 p < 0,001); lô lô tương đương tương đương với lô thời điểm nghiên cứu (p > 0,05) Biểu đồ Ảnh hưởng Cereneed - caps đến quãng đường tìm thấy chân đế Từ kết cho thấy, quãng đường lô dài lô tất ngày (p < 0,001); lô 3, lô lô ngắn lô ngày nghiên cứu (p < 0,01 p < 0,001); lô lô tương đương tương đương với lô thời điểm nghiên cứu (p > 0,05) 114 TCNCYH 102 (4) - 2016 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Biểu đồ Ảnh hưởng Cereneed - caps đến tỉ lệ phần trăm thời gian chuột bơi 1/4 bể trước đặt chân đế Từ kết cho thấy, lô phần trăm thời gian bơi chuột 1/4 bể trước đặt chân đế giảm so với lô (p < 0,01); lô 3, lô lô tăng so với lô (p < 0,01); lô lô tương đương tương đương với lô (p > 0,05) Mê lộ nhiều chữ T: kết nghiên cứu thể biểu đồ 4; Biểu đồ Ảnh hưởng Cereneed - caps đến thời gian tìm thấy khoang đích Từ kết cho thấy, thời gian lô dài lô tất ngày (p < 0,001); lô 3, lô lô ngắn lô ngày nghiên cứu (p < 0,01 p < 0,001); lô lô tương đương tương đương với lô thời điểm nghiên cứu (p > 0,05) TCNCYH 102 (4) - 2016 115 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Biểu đồ Ảnh hưởng Cereneed-caps đến qng đường tìm thấy khoang đích Từ kết cho thấy, quãng đường lô dài lô tất ngày (p < 0,001); lô 3, lô lô ngắn lô ngày nghiên cứu (p < 0,01 p < 0,001); lô lô tương đương tương đương với lô thời điểm nghiên cứu (p > 0,05) Biểu đồ Ảnh hưởng Cereneed-caps đến số lần quyêt định sai Từ kết cho thấy, số lần định sai lô nhiều lô tất ngày (p < 0,05, p < 0,01 p < 0,001); lô 3, lô lơ lơ ngày nghiên cứu (p < 0,05 p < 0,01); lô lô tương đương tương đương với lô thời điểm nghiên cứu (p > 0,05) IV BÀN LUẬN trước nơi sản xuất nhiều acetylcholin - Alzheimer bệnh lý tổn thương thối chất dẫn truyền thần kinh đóng vai trò quan hóa tế bào thần kinh Ở bệnh nhân Alzheimer trọng q trình học tập trí nhớ [1; 7; có synap lan tỏa vùng vỏ 8] Như vậy, bệnh nhân Alzheimer có não, có nhân xám não giảm sút lượng acetylcholin thần kinh 116 TCNCYH 102 (4) - 2016 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC trung ương, nguyên nhớ, nhân làm ảnh hưởng đến khả học hỏi Trong có số vị dược liệu như: Bạch quả, trí nhớ bệnh nhân Scopolamin chất Đương quy, Ngưu tất chứng minh có chứng minh gây tác dụng cải thiện trí nhớ Với mục đích kế biến đổi hoạt động thần kinh (nhận thức, thừa phát huy y học cổ truyền dân tộc, điện não đồ…) giống bệnh nhân tiến hành đánh giá tác dụng cải thiện Alzheimer [9; 10; 11] Cơ chế tác dụng khả học hỏi trí nhớ chế phẩm scopolamin đối kháng cạnh tranh với Kết nghiên cứu cho thấy thuốc thử acetylcholin receptor M hệ Muscarinic, Cereneed-caps liều 669,6mg 2008,8mg vào thể scopolamin nhanh chóng cao khô dược liệu/kg/ngày chuột nhắt phân phối nhiều vào não, chất làm trắng làm giảm thời gian quãng đường tác dụng acetylcholin hệ thần tìm thấy chân đế, làm tăng phần trăm thời kinh trung ương gây suy giảm trí gian bơi chuột 1/4 bể có chân đế nhớ đặc biệt với liều cao [12] Chính vậy, (mê lộ nước Morris), làm giảm thời gian nhiều nghiên cứu sử dụng scopolamin để qng đường tìm thấy khoang đích, làm giảm gây mơ hình suy giảm khả học hỏi trí số lần định sai so với lơ mơ hình (mê lộ nhớ động vật thực nghiệm [9; 13] Trong nhiều chữ T) Như vậy, Cereneed - caps liều nghiên cứu này, chuột nhắt trắng tiêm tương đương gấp lần liều lâm sàng có màng bụng scopolamin với liều 1mg/kg cho tác dụng phục hồi trí nhớ học tập thấy thuốc gây suy giảm khả học tập chuột nhắt trắng, tác dụng liều tương trí nhớ mơ hình mê lộ nước Morris đương tương đương với donepezil mê lộ nhiều chữ T liều 2,4mg/kg Hiện nay, để điều trị bệnh Alzheimer lâm sàng, nhóm thuốc giúp làm chậm tiến triển giảm triệu chứng hiệu nhóm thuốc ức chế enzym thiểu tuần hoàn não [14; 15] V KẾT LUẬN Cereneed - caps liều 669,6mg acetylcholi- 2008,8mg cao khơ dược liệu/kg/ngày có tác nesterase – enzym thủy phân acetylcholin [1; dụng phục hồi trí nhớ học tập chuột 12] Donepezil thuốc nhắt trắng chủng Swiss bị gây suy giảm trí FDA cấp phép để điều trị chứng sa sút trí tuệ nhớ scopolamin: Dựa chế tác dụng thực tế lâm sàng thuốc dùng phổ biến, lựa chọn donepezil làm thuốc chứng dương Kết nghiên cứu cho thấy, chuột nhắt trắng uống donepezil với liều Trên mê lộ nước Morris: Cereneed - caps làm giảm thời gian quãng đường tìm thấy chân đế, làm tăng phần trăm thời gian bơi chuột 1/4 bể có chân đế 2,4mg/kg (tương đương liều lâm sàng Trên mê lộ nhiều chữ T: Cereneed - caps người) có tác dụng phục hồi trí nhớ học tập làm giảm thời gian qng đường tìm thấy mơ hình khoang đích, làm giảm số lần định sai Viên nang Cereneed - caps xuất xứ từ Tác dụng liều Cereneed - caps thuốc cổ phương “Huyết phủ trục ứ thang” có tương đương tương đương với done- gia giảm, thường dùng để điều trị suy giảm trí pezil liều 2,4mg/kg TCNCYH 102 (4) - 2016 117 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Lời cảm ơn Nhóm tác giả xin trân trọng cảm ơn Công ty cổ phần Dược phẩm Trung ương tài trợ nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Thắng (2010) Bệnh Alzheimer thể sa sút trí tuệ khác, Nhà xuất Y Paul T F., Michael S., Gordon K W (1999) The cholinergic hypothesis of Alzheimer’s disease: a review of progress J Neurol Neurosurg Psychiatry, 66(2), 137 - 147 Michael E H (2006) The Role of Acetylcholine in Learning and Memory Curr Opin Neurobiol, 16(6), 710 - 715 Bajo R., López M.E., Canuet L et al học, 6-8, 157 - 181 Cheng L L., Chen X N., Wang Y et al (2015) Scopolamine effects on functional brain connectivity: a pharmacological model of (2011) Z-ligustilide isolated from Radix Angelicae sinensis ameliorates the memory impairment induced by scopolamine in mice Alzheimer's disease Scientific Reports, 5, 9748, doi: 10.1038/srep09748 Fitoterapia, 82(7), 1128 - 1132 Wang Y., Xu Y., Pan Y et al (2013) Radix Achyranthis Bidentatae improves learning and memory capabilities in ovariectomized 10 Jeong J (2004) EEG dynamics in patients with Alzheimer’s disease Clin Neurophysiol, 115, 1490 – 1505 11 Ebert U., Kirch W (1998) Scopolamine model of dementia: electroencephalo- rats Neural Regen Res, 8(18), 1644 - 1654 gram findings and cognitive performance Eur Gauthier S and Schlaefke S (2014) Efficacy and tolerability of Ginkgo biloba J Clin Invest, 28, 944 - 949 extract EGb 761(R) in dementia: a systematic review and meta-analysis of randomized placebo-controlled trials Clin Interv Aging, 9, 2065 - 2077 Lee B., Shim I., Lee H et al (2011) Rehmannia glutinosa ameliorates scopolamine-induced learning and memory impair- 12 Katzung B G (2012) Basic Clinical Pharmacology 12th Edition, McGraw - Hill Publishing Company, New York, 115 - 125, 197 - 111 13 Hans G V (2008) Drug Effects on Learning and Memory Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays, Springer, Berlin Heidelberg, 877 - 942 ment in rats J Microbiol Biotechnol, 21(8), 874 - 883 14 Đỗ Tất Lợi (2004) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học, 55- Falsafi S K., Deli A., Hoger H et al (2012) Scopolamine administration modulates muscarinic, nicotinic and NMDA receptor sys- 59, 774 - 775 tems PLoS One, 7(2), 75 - 82 học Nhà xuất Y học, Hà Nội, 136 - 146 15 Nguyễn Nhược Kim (2009) Bài thuốc lý huyết - Huyết phủ trục ứ thang Phương tễ Summary EFFECTS OF CERENEED-CAPS ON LEARNING AND MEMORY IMPROVEMENT IN SCOPOLAMINE - TREATED MICE Cereneed-caps was used to evaluate the learning and the memory improvement effects on scopolamine-induced memory impairment in mice on models: Morris water maze and multiple T maze Cereneed-caps was used in Swiss mice at doses of 669,6mg and 2008,8mg/kg/day for 118 TCNCYH 102 (4) - 2016 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC days (Morris water maze), and for days (multiple T maze) The result showed that Cereneedcaps reduced the latency and the path length to reach the platform, increased the percentage of time spent in platform’s quadrant (Morris water maze), reduced the latency and the path length to reach the goal box, reduced the number of incorrect decisions (multiple T maze), the effects were similar in both treatment groups Keywords: memory improvement, learning, scopolamine, Morris water maze, multiple T maze TCNCYH 102 (4) - 2016 119 ... nhắt trắng tiêm tương đương gấp lần liều lâm sàng có màng bụng scopolamin với liều 1mg/kg cho tác dụng phục hồi trí nhớ học tập thấy thuốc gây suy giảm khả học tập chuột nhắt trắng, tác dụng. .. học, nghiên cứu tiến hành với mục tiêu: chân đế (đường kính 10cm, cao 25 cm) đặt cố định 1/4 bể Đánh giá tác dụng phục hồi trí nhớ học tập + Mê lộ nhiều chữ T ghép nhiều Cereneed -caps chuột nhắt. .. Cereneed - caps liều 669,6mg acetylcholi- 2008,8mg cao khơ dược liệu/kg/ngày có tác nesterase – enzym thủy phân acetylcholin [1; dụng phục hồi trí nhớ học tập chuột 12] Donepezil thuốc nhắt trắng