Mục tiêu nghiên cứu của đề tài này nhằm phân tích sự biểu hiện của CD64 trên quần thể neutrophil của nhóm người bình thường và nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng để đánh giá ý nghĩa của dấu ấn này trong việc chẩn đoán nhiễm trùng và nhiễm trùng huyết. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số * 2014 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU SỰ BIỂU HIỆN CD64 TRÊN QUẦN THỂ NEUTROPHIL CỦA NHÓM NGƯỜI BÌNH THƯỜNG VÀ NHĨM BỆNH NHÂN CĨ BỆNH CẢNH NHIỄM TRÙNG Hà Thị Thu*, Trần Thị Mỹ Hạnh**, Nguyễn Văn Lộc**, Nguyễn Phương Liên*** TÓM TẮT Mục tiêu ngiên cứu: Phân tích biểu CD64 quần thể neutrophil nhóm người bình thường nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng để đánh giá ý nghĩa dấu ấn việc chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết Phương pháp nghiên cứu: Mô tả hàng loạt ca Sử dụng panel CD14 – FITC, CD64 – PE CD45 – PerCP quy trình ly giải – không rửa để nhuộm xử lý 123 mẫu máu tồn phần nhóm đối tượng nghiên cứu: nhóm người bình thường nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng, định cấy máu Sau thực phân tích mẫu hệ thống máy Flow Cytometry – BD FACSCanto II để thu nhận giá trị CD64 – MFI Kết nghiên cứu: Trong nhóm đối tượng nghiên cứu số CD64 – MFI neutrophil cao so với lympho thấp so với mono CD64 – MFI neutrophil nhóm 73 bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng (Median: 1012; IQR: 651 – 1543) cao cách có ý nghĩa thống kê (P < 0,001) so với nhóm 50 người bình thường (Median: 385; IQR: 329 – 452) Mặt khác, giá trị MFI – CD64 neutrophil nhóm cấy máu dương (Median: 892; IQR = 703 – 1269) cấy máu âm (Median: 1118; IQR: 635 – 1642) khơng có khác biệt ý nghĩa Với giá trị ngưỡng cut-off bách phân vị thứ 90 CD64 – MFI neutrophil nhóm người bình thường 482, 90,9% mẫu nhóm cấy máu dương 92,2% mẫu nhóm cấy máu âm có giá trị cao ngưỡng cut-off Kết luận: Trong panel phân tích quần thể mono xem nội chứng dương lympho nội chứng âm CD64 neutrophil nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng tăng đáng kể so với nhóm bình thường Điều chứng tỏ CD64 neutrophil dấu ấn tiềm để chẩn đoán nhiễm trùng hay nhiễm trùng huyết Tuy nhiên, cần thực nghiên cứu để đánh giá đồng thời giá trị CD64 neutrophil xét nghiệm khác tổng bạch cầu, CRP, procalcitonin dấu hiệu lâm sàng để xác định ngưỡng cut-off tối ưu CD64 neutrophil đánh giá việc sử dụng dấu ấn để chẩn đoán sớm nhiễm trùng hay nhiễm trùng huyết Từ khóa: nhiễm trùng, nhiễm trùng huyết, CD64, MFI, neutrophil, flow cytometry ABSTRACT CD64 EXPRESSION ON NEUTROPHILS OF NORMAL HEALTHY AND SUSPECTED INFECTION SUBJECTS Ha Thi Thu, Tran Thi My Hanh, Nguyen Van Loc, Nguyen Phuong Lien * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - No - 2014: 63 - 70 Objective: Study the expression of surface marker CD64 on neutrophil in healthy and infection or sepsis suspected subjects and determine the utility of neutrophil CD64 as a diagnostic marker for sepsis or infection Materials and methods: Case series Whole blood of 123 subjects in study groups, healthy and infection * Trường ĐH Quốc Tế - ĐH Quốc Gia Tp.HCM, ** BV Nhân Dân 115, *** BV Truyền Máu - Huyết Học Tác giả liên lạc: Hà Thị Thu ĐT: 0985 339 661 Email: hathu.546@gmail.com 63 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số * 2014 suspected group were stained with 3-color reagent panel: CD14 – FITC, CD64 – PE and CD45 – PerCP and processed by Lyse – No Wash procedure Prepared samples were then analyzed on Flow Cytometer system – BD FACSCanto II to get results of CD64 – MFI Results: In both study groups, CD64 – MFI on neutrophils was always higher than on lymphocytes but lower than on monocytes The CD64 expression on neutrophil between 50 subjects of no - infection and 73 subjects of suspected - infection groups was proven to have a statistically significant change with the interquatile range of 329 – 452 (median 385) and 651 – 1543 (mean 1012) accordingly (P < 0.001) On the other hand, there is no significant difference between MFI – CD64 on neutrophil of positive blood culture patient group (Median: 892; IQR = 703 – 1269) and negative blood culture patient group (Median: 1118; IQR: 635 – 1642) As compared to cut off value, 482, determined from 90th percentile of MFI – CD64 on neutrophil of healthy group, 90.9% of samples in positive blood culture group and 92.2 of samples in negative blood culture group presented MFI – CD64 higher than cut-off value Conclusion: In panel analyzed, monocyte population is considered as positive internal control whereas lymphocyte works as negative internal control For CD64 expression on neutrophil, infection group presented statically significant increase in comparison to healthy group This result might prove that neutrophil CD64 will be a very promising infection biomarker However, validation in large studies to define strict cut-off value and to see the correlation between CD64 assay and other infection tests is required before neutrophil CD64 can be recommended as an infection biomarker for routine use for infection or sepsis diagnosis Keywords: infection, sepsis, CD64, flow cytometry, neutrophil nhiều tác giả giới tranh ĐẶT VẤN ĐỀ cãi giá trị trị số này(15,16) Vì vậy, việc tìm Cho đến nay, kết nhà điều tra kiếm dấu ấn khác có độ nhạy, độ đặc hiệu dịch tễ học cho thấy nhiễm trùng nhiễm cao để chẩn đoán sớm nhiễm trùng cần khuẩn huyết, sốc nhiễm khuẩn thiết quan trọng để bảo đảm hiệu cho nguyên nhân gây tử vong khoa việc điều trị điều trị tích cực (11,15,11) Phương pháp nuôi cấy vi sinh coi “tiêu chuẩn vàng” chuẩn đoán nhiễm trùng xét nghiệm thường có kết âm tính giả bệnh nhân sử dụng kháng sinh từ trước(6,9,11,16) Mặt khác, thời gian có kết vi sinh thường dài, trung bình 48 – 72 giờ(1,1,17) Những xét nghiệm khác tổng số bạch cầu định lượng CRP (C – reactive protein) thường sử dụng chẩn đốn nhiễm trùng có độ đặc hiệu khơng cao(1,15,1) Ngồi ra, CRP xem dấu ấn “muộn” số thường tăng chậm đạt giá trị cao khoảng thời điểm 36 sau tiếp xúc với nội độc tố(17) Mặc dù, năm gần đây, Procalcitonin (PCT), đánh giá cao chẩn đoán phân biệt trường hợp viêm nhiễm vi khuẩn hay tác nhân khác 64 Trong năm gần có nhiều cơng trình nghiên cứu giới tập trung vào việc đánh giá việc sử dụng kháng nguyên CD64 bề mặt tế bào neutrophil để chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết Riêng Việt Nam theo chúng tơi biết chưa có cơng trình nghiên cứu liên quan đến giá trị dấu ấn mối tương quan với bệnh nhiễm trùng nhiễm trùng huyết công bố Do vậy, thực đề tài để khảo sát biểu CD64 quần thể tế bào neutrophil nhóm người bình thường nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng nhằm đánh giá ý nghĩa số việc chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số * 2014 Mục tiêu chuyên biệt - Xác định giá trị CD64 – MFI quần thể Lympho, mono để đánh giá vai trò quần thể panel nghiên cứu phân tích - Xác định giá trị CD64 – MFI neutrophil nhóm người bình thường Qua đó, xác định giá trị ngưỡng cut-off số - So sánh biểu CD64 neutrophil nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng với nhóm người bình thường - Đánh giá mối tương quan số CD64 neutrophil với việc chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết dựa giá trị cut-off xác định ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Gồm nhóm Nghiên cứu Y học - Nhóm 01: người bình thường, khơng có bệnh cảnh nhiễm trùng - Nhóm 02: bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng sốt và/ có ổ nhiễm trùng, định cấy máu theo dõi điều trị BV 115 Phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu Mô tả hàng loạt ca Phương pháp tiến hành: Lấy máu Mẫu máu toàn phần sử dụng cho nghiên cứu đánh giá CD64 lấy thời điểm lấy máu làm xét nghiệm cấy máu lưu trữ ống có chứa chất chống đông EDTA Cấy máu Mẫu máu cấy hệ thống BD Bactec 9120 (Becton and Dickinson Company, USA) Hình 1: Khoanh vùng phân tích quần thể tế bào bạch cầu a) Đồ thị FSC – SSC: loại bỏ nhiễu quần thể tế bào eosinophil tự phát quang b) Đồ thị SSC – CD14 FITC: khoanh vùng quẩn thể mono, dương tính với CD14 FITC c) Đồ thị SSC – CD45 PerCP sau loại bỏ quần thể mono: khoanh vùng quần thể neutrophil (SSC cao CD45 dương) quần thể lympho (SSC thấp CD45 dương tính mạnh) d) Đồ thị SSC – CD64 PE: biểu CD64 quần thể mono, neutrophil lympho giá trị MFI kênh màu PE tương ứng Xử lý mẫu phân tích hệ thống máy Flow + Mẫu người bình thường bệnh nhân: ủ Cytometry 50 µl mẫu máu người bình thường bệnh 65 Nghiên cứu Y học nhân chống đơng EDTA với 10 µl loại thuốc thử có chất kháng thể đơn dòng có đánh dấu huỳnh quang gồm CD14 – FITC, CD64 – PE CD45 – PerCP (Becton Dickinson Immunocytometry Systems) điều kiện tránh ánh sáng nhiệt độ phòng vòng 15 phút Sau thời gian 15 phút ủ mẫu với thuốc thử, thực ly giải hồng cầu với 450 µl dung dịch BD FACSLysing 1X (Becton Dickinson Immunocytometry Systems) 15 phút điều kiện nhiệt độ phòng tránh ánh sáng Sau thực chạy mẫu hệ thống máy Flow Cytometry + Mẫu chứng âm để xác định tín hiệu kênh PE không nhuộm với CD64 – PE: chuẩn bị tương tự quy trình sử dụng thuốc nhuộm CD14 – FITC CD45 – PerCP để ủ mẫu Thu thập phân tích mẫu hệ thống Flow Cytometry Thu thập phân tích phần mềm FACSDiva 6.0 hệ thống máy Flow Cytometry BD FACSCanto II 06 màu (Becton and Dickinson Company, USA) phòng Dấu Ấn Miễn Dịch BV Truyền Máu Huyết Học TP.HCM Quần thể tế bào Mono xác định dựa kết dương tính với CD14 – FITC đồ thị CD14 – FITC SSC (tín hiệu tán xạ bên tương ứng độ phức tạp tế bào) Sau đó, khoanh vùng 02 quần thể Neutrophil Lympho dựa đồ thị CD45 – PerCP SSC Cuối cùng, vẽ đồ thị SSC CD64 – PE thể 03 quần thể Mono, Lympho Neutrophil đồ thị bảng liệu thống kê tương ứng để xác định giá trị MFI quần thể tế bào kênh màu PE Phương pháp thống kê Thực phân tích liệu phần mềm SPSS 16.0 Tất liệu thể dạng giá trị trung vị khoảng tứ phân vị (IQR) Sự khác biệt giá trị trung bình nhóm với ống chứng âm (không nhuộm 66 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số * 2014 CD64 – PE) đánh giá thông qua phép kiểm định thống kê Student χ2 với giá trị P < 0,05 Định nghĩa biến số - MFI (median Fluorescence intensity): giá trị trung vị cường độ huỳnh quang Giá trị MFI lớn tín hiệu huỳnh quang kênh màu huỳnh quang lớn ngược lại - IQR (interquartile range): khoảng tứ phân vị từ tứ phân vị thứ đến tứ phân vị thứ (khoảng cách từ bách phân vị thứ 25 đến bách phân vị thứ 75) KẾT QUẢ Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu Bảng 1: Đặc điểm chung tuổi giới tính quần thể nghiên cứu Nhóm bình thường N 50 Nhóm bệnh cảnh nhiễm trùng 73 Tỉ số Nam/Nữ Tuổi trung bình 1:1,17 41 ± 26 1,08:1 46 ± 34 - Tổng số lượng mẫu nghiên cứu thực hiện: 123 mẫu, đó: + Nhóm người bình thường: 50 mẫu + Nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng 73 mẫu định cấy máu, gồm: Nhóm cấy máu dương tính: 22/73 mẫu Nhóm cấy máu âm tính: 51/73 mẫu - Tỉ số nam/nữ nhóm tương đương khơng có khác biệt mang ý nghĩa thống kê (~1:1) - Đối tượng nghiên cứu người trưởng thành có độ tuổi khoảng 15 – 84 tuổi, với độ tuổi trung bình 41 ± 26 tuổi (nhóm 01) 46 ± 34 tuổi (nhóm 02) Độ tuổi khảo sát nhóm quần thể nghiên cứu khơng có khác biệt mang ý nghĩa thống kê Kết giá trị MFI kênh huỳnh quang PE ống chứng âm Bảng 2: Giá trị MFI kênh PE 20 ống chứng âm (khơng nhuộm hóa chất CD64 – PE) Quần thể Mono MFI – Trung vị 182 IQR 162 – 203 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số * 2014 Neutro Lympho 168 141 151 – 179 117 – 165 Giá trị MFI kênh màu huỳnh quang PE quần thể Mono, Neutrophil Lympho 20 ống chứng âm (mẫu nhuộm với CD45 – PerCP CD14 – FITC, khơng nhuộm với CD64 – PE) khơng có khác biệt mang ý nghĩa thống kê ( P > 0,05) Nghiên cứu Y học So sánh MFI CD64 – PE neutrophil nhóm cấy máu dương nhóm cấy máu âm so với giá trị ngưỡng cut-off bình thường Ở phân nhóm nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng nhóm cấy máu dương nhóm cấy máu âm giá trị CD64 – MFI neutrophil cao rõ rệt so với giá trị nhóm người khỏe mạnh Tuy nhiên, phân nhóm khơng thấy khác biệt ý nghĩa (P = 0,082) Bảng 3: Giá trị CD64 – MFI Lympho, Neutrophil Mono nhóm bình thường (n =50) Bảng 5: Kết MFI CD64 – PE neutrophil nhóm cấy máu dương âm Kết MFI CD64-PE nhóm người CD64 Mono_CD64 Neutro_CD64 MFI – trung vị 2218 385 IQR 1968 - 2626 329 - 452 Lympho_CD64 198 168 - 215 Giá trị CD64 – MFI mono đạt giá trị cao nhất, tiếp đến neutrophil cuối cùng, CD64 – MFI lympho thấp Giá trị cut-off CD64 neutrophil phạm vi đề tài xác định dựa giá trị bách phân vị thứ 90 CD64 – MFI neutrophil nhóm người bình thường 482 Kết MFI CD64-PE nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng Bảng 4: Giá trị MFI CD64 - PE Lympho, Neutrophil Mono nhóm bệnh (n=73) CD64 MFI - Trung vị Mono_CD64 Neutro_CD64 Lympho_CD64 4094 1012 233 IQR P (so sánh nhóm 01) 2988 – 6473 0,018 651 – 1543 < 0,001 200 – 263 0,082 - Tương tự nhóm người bình thường, nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng có kết CD64 – MFI mono đạt giá trị cao nhất, tiếp đến neutrophil cuối lympho số có giá trị thấp - Giá trị MFI CD64 lympho khơng có khác biệt ý nghĩa nhóm (P > 0,05) quần thể mono neutrophil số CD64 – MFI nhóm bệnh cao nhóm bình thường (P < 0,05) Nhóm cấy máu dương Nhóm cấy máu âm MFI trung vị 892 1118 IQR 703 – 1269 635 – 1642 Bảng 6: kết CD64 – MFI neutrophil so với giá trị ngưỡng Nhóm cấy máu dương (n = 22) Nhóm cấy máu âm (n = 51) ≥ Cut - off 20/22 (90,9%) < cut-off 02/22 (9,1%) 47/51 (92,2%) 04/51 (7,8%) BÀN LUẬN Theo số báo cáo giới, biểu CD64 neutrophil trẻ em trẻ sơ sinh khỏe mạnh trẻ bị nhiễm trùng thường cao so với nhóm người trưởng thành(8,18) Mặt khác, Hoffman cộng nhận định số CD64 nên khảo sát riêng biệt nhóm đối tượng trưởng thành trẻ em để tránh dao động nhiều kết phân tích(8) Do vậy, nghiên cứu này, tập trung khảo sát đối tượng người trưởng thành, bao gồm 50 người bình thường 73 người có bệnh cảnh nhiễm trùng định cấy máu Độ tuổi trung bình nhóm khảo sát 44 tuổi, dao động khoảng 15 – 84 tuổi với tỉ lệ nam nữ tương đương Ngồi ra, nhóm 73 bệnh nhân nghi ngờ có bệnh cảnh nhiễm trùng có 22 người có kết cấy máu dương tính 51 người có kết cấy máu âm tính 67 Nghiên cứu Y học Kết giá trị CD64 – MFI quần thể lympho mono nhóm nghiên cứu Dựa vào bảng kết 3.3 3.4, nhận thấy: - CD64 lympho nhóm chứng khỏe mạnh nhóm có bệnh cảnh nhiễm trùng có giá trị MFI thấp khơng có khác biệt mang ý nghĩa thống kê số nhóm với IQR nhóm bình thường nhóm bệnh nhân là: 168 – 215 200 – 263 (P = 0,082) Mặt khác, giá trị CD64 – MFI lympho nhóm không khác biệt so với giá trị ống chứng âm (kết bảng 3.2) Do vậy, CD64 coi âm tính lympho nhận định hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu khác (3,8,7,11,15,18) - Ngược lại, nhóm khảo sát, giá trị MFI CD64 – PE quần thể mono đạt giá trị cao cao 10 – 20 lần so với giá trị MFI CD64 – PE lympho so với giá trị (kết bảng 3.3) Điều cho thấy CD64 ln thể dương tính mạnh quần thể mono kết tương thích với nhận định Hoffman (2010) Hiesmayr MJ (1999) Ngoài ra, giá trị CD64 –MFI mono nhóm bệnh nhân (IQR: 1968 – 2626) cao so với nhóm chứng khỏe mạnh (IQR: 2988 - 6473) với P = 0,018 Kết cho thấy, CD64 mono kích hoạt trường hợp nhiễm trùng hay nhiễm trùng huyết Tuy nhiên, theo Hiesmayr MJ cộng sự(7), CD64 tế bào mono tăng mạnh số trường hợp sau phẫu thuật, theo tác giả này, tăng biểu CD64 mono không đặc hiệu so với neutrophil CD64-Mono thường xem chứng dương CD64-Lympho coi chứng âm Kết giá trị CD64 – MFI quần thể neutrophil nhóm nghiên cứu Theo kết bảng 3.3 bảng 3.4, quần thể neutrophil nhóm người bình thường, giá trị MFI CD64 – PE trung vị 68 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số * 2014 385 (IQR: 329 - 452) giá trị tăng đáng kể nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng với trị số trung vị nhóm 1012 (IQR: 651 - 1543) Như vậy, nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng nhóm chứng khỏe mạnh biểu CD64 quần thể tế bào neutrophil có khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,001) Nhận định tương thích với kết nghiên cứu tác giả giới (3,6,9,9,10,111,13, 18) Kết giải thích dựa chất CD64 – thụ thể Fc IgG, đóng vai trò quan trọng chế gây độc tế bào phụ thuộc kháng thể, xóa bỏ phức hợp miễn dịch, hoạt động thực bào kháng nguyên opsonin hóa điều hòa giải phóng loại cytokine IL-1, IL-6 TNF-α CD64 thường biểu mạnh tế bào mono đại thực bào, diện tế bào neutrophil Tuy nhiên, trường hợp nhiễm trùng hay nhiễm trùng huyết neutrophil kích hoạt tế bào hệ thống miễn dịch tham gia vào trình chống tác nhân lạ xâm nhiễm thể số lượng thụ thể CD64 tăng lên đáng kể để hỗ trợ neutrophil thực hoạt động sinh lý quan trọng: thực bào(6,8,12) Theo nhiều tác giả giới biểu CD64 neutrophil tăng lên nhanh vòng – sau tiếp xúc với số thành phần vách tế bào vi khuẩn lipopolysaccharide (LPS) số cytokine interferon-γ (IFN-γ) hay tác nhân kích thích cụm tế bào bạch cầu hạt (Granulocyte colonystimulating factor =G-CSF)(10,15,28,18) Giá trị ngưỡng cut-off CD64 – MFI neutrophil dựa nhóm người bình thường Giá trị cut-off CD64 neutrophil dựa đơn vị MFI nhiều tác giả giới sử dụng Dankilas (2008) Dilli (2010) Ngoài ra, để thu nhận số MFI khơng đòi hỏi sử dụng hạt bead chuẩn hay Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số * 2014 phần mềm hóa chất chuyên biệt đắt tiền số đơn vị khác, ví dụ số lượng phân tử/tế bào (8,13) “CD64 index”(4,8) Mặt khác, để tính giá trị cut-off tối ưu chúng tơi nên xây dựng đường cong ROC (Receiver operating characteristic) thể độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm CD64 giá trị cut-off Tuy nhiên, đề tài nghiên cứu giới hạn việc khảo sát giá trị CD64 dựa kết cấy máu bệnh cảnh lâm sàng ban đầu mà chưa đánh giá so sánh tương quan với xét nghiệm khác tiêu lâm sàng khác để chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết nên chưa xác định độ nhạy, độ đặc hiệu xét nghiệm CD64 vẽ ROC để xác định giá trị cut-off tối ưu Do vậy, phạm vi đề tài, xác định giá trị cut-off dựa giá trị bách phân vị thứ 90 CD64 – MFI neutrophil nhóm người bình thường 482 Tuy nhiên, giá trị cut-off không tương ứng với giá trị cut-off mà Dankilas (2008) Dilli (2010) đưa nghiên cứu với trị số 2.8 87.7 Điều giải thích khác biệt hệ thống máy phân tích (các loại máy Flow cytometer khác nhau) với độ phân giải tín hiệu tương ứng số kênh tín hiệu huỳnh quang khác nhau, thơng số cài đặt ứng dụng hóa chất sử dụng khác Do vậy, Hoffman (2011) G Fjaertoft (2007) nhận định, giá trị ngưỡng nghiên cứu phòng Lab khác phòng Lab tự thiết lập, tối ưu đánh giá Giá trị CD64 – MFI neutrophil mối tương quan với việc chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết Theo kết bảng 3.3 3.5, phân nhóm cấy máu dương cấy máu âm nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng có giá trị CD64 – MFI neutrophil tăng cách có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) so với nhóm bình thường Mặt khác, nhóm cấy máu dương cấy máu âm, không nhận thấy có khác biệt ý nghĩa biểu CD64 Nghiên cứu Y học quần thể neutrophil so sánh số CD64 – MFI Kết giải thích dựa theo nhiều yếu tố khác Thứ nhất, kết cấy máu bị âm tính giả bệnh nhân có sử dụng thuốc kháng sinh từ trước Thứ hai, số tác giả nhận định, CD64 không bị kích hoạt đặc hiệu vi khuẩn mà virut, nấm, ký sinh trùng(8,9,13) … mà kết cấy máu lại không phát trường hợp nhiễm virut hay ký sinh trùng Ngoài ra, CD64 neutrophil nhiều nhà khoa học giới nhận định không trường hợp nhiễm trùng huyết mà trường hợp nhiễm trùng khu trú dấu ấn kích hoạt đáng kể(8,13,10,15) Tuy nghiên cứu này, chưa tính độ nhạy, độ đặc hiệu chưa xác định ngưỡng cut-off tối ưu dựa vào kết bảng 3.6, cho CD64 dấu ấn sinh học tiềm để chẩn đoán nhiễm trùng hay nhiễm trùng huyết Mặt khác, có nhiều báo cáo với nhiều tác giả khác giới đưa nhận định tương tự độ nhạy/ độ đặc hiệu CD64 neutrophil mà họ xác định chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết có giá trị cao, ví dụ Hsu cộng (89%/ 96%); Livaditi cộng (95%/ 100%); Cardelli cộng (96%/ 95%); Lobreglio cộng (92%/ 100%) Do vậy, đề nghị cần thực thêm nghiên cứu có khảo sát đầy đủ yếu tố lâm sàng xét nghiệm thường quy khác xác định tổng bạch cầu, CRP, Procalcitonin kết hợp số CD64 để có sở kết luận xác đánh giá hiệu việc sử dụng dấu ấn này, dùng riêng lẻ dùng kết hợp với xét nghiệm khác để tìm dấu ấn có độ nhạy, độ đặc hiệu cao, có giá trị chẩn đốn tốt, nhanh KẾT LUẬN Trên nhóm người bình thường nhóm bệnh nhân, CD64 âm tính quần thể lympho dương tính mạnh mono nên lympho 69 Nghiên cứu Y học xem nội chứng âm mono nội chứng dương - Kết nghiên cứu cho thấy biểu CD64 quần thể tế bào neutrophil nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng tăng cách có ý nghĩa so với nhóm người bình thường: giá trị trung vị 1012 (IQR: 651 - 1543) so với 385 (IQR: 329 - 452) nhóm chứng bình thường - Với giá trị ngưỡng cut-off CD64 neutrophil xác định dựa giá trị phân vị thứ 90 482, nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh lâm sàng, 90,9% mẫu nhóm cấy máu dương tính 92,2% mẫu nhóm cấy máu âm tính có giá trị CD64 – MFI neutrophil vượt giá trị ngưỡng cut-off Điều cho thấy CD64 dấu ấn tiềm việc chẩn đoán sớm nhiễm trùng nhiễm trùng huyết - Cần thực nghiên cứu để đánh giá đồng thời giá trị CD64 neutrophil xét nghiệm thường quy khác yếu tố lâm sàng nhằm xác định ngưỡng cut-off tối ưu, độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị tiên đoán âm tiên đoán dương CD64 riêng lẻ hoặy kết hợp với xét nghiệm khác để tìm dấu ấn hỗ trợ chẩn đốn nhanh, xác nhiễm trùng nhiễm trùng huyết TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 Adams SKK, Barlow G (2011) Diagnostic and prognostic biomarkers of sepsis in critical care J Antimicrob Chemother; 66 Suppl 2: 33 – 40 Cardelli P, Ferraironi M, Amodeo R, Tabacco F, de Blasi RA, Nicoletti M, et al (2008) Evaluation of neutrophil CD64 expression and procalcitonin as useful markers in early diagnosis of sepsis Int J Immunopathol Pharmacol; 21:43-9 Danikas DD, Karakantza M, Theodorou GL, Sakellaropoulos GC, Gogos CA (2008) Prognostic value of phagocytic activity of neutrophils and monocytes in sepsis Correlation to CD64 and CD14 antigen expression Clin Exp Immunol; 154:87-97 Dilli D, Oguz ŞS, Dilmen Uu, et al (2010) Predictive values of neutrophil CD64 expression compared with interleukin-6 and C-reactive protein in early diagnosis of neonatal sepsis J Clin Lab Anal; 24:363-70 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số * 2014 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Fjaertoft G, Håkansson L, Foucard T, Ewald U, Venge P (2005) CD64 Fcgamma receptor I cell surface expression on maturing neutrophils from preterm and term newborn infants Acta Paediatr; 94:295-302 Gerrits JH, McLaughlin PMJ, Nienhuis BN, Smit JW and Loef B (2013) Polymorphic mononuclear neutrophils CD64 index for diagnosis of sepsis in postoperative surgical patients and critically ill patients Clin Chem Lab Med; 51(4): 897–905 Hiesmayr MJ, Spittler A, Lassnigg A, Berger R, Laufer G, Kocher A, et al (1999) Alterations in the number of circulating leucocytes, phenotype of monocyte and cytokine production in patients undergoing cardiothoracic surgery Clin Exp Immunol 115: 315_23 Hoffmann JJML (2011) Neutrophil CD64 as a sepsis biomarker Biochemia Medica;21(3):282-90 Hsu KH, Chan MC, Wang JM, Lin LY, Wu CL (2011) Comparison of Fcgamma receptor expression on neutrophils with procalcitonin for the diagnosis of sepsis in critically ill patients Respirol; 16:152-60 Icardi M, Erickson Y, Kilborn S, et al (2009) CD64 Index provides simple and predictive testing for detection and monitoring of sepsis and bacterial infection in hospital patients Journal of Clinical Microbiology, p 3914–3919 Lever A, Mackenzie I (2007) “Sepsis: definition, epidemiology, and diagnosis” BMJ, 335:879-883 Livaditi O, Kotanidou A, Psarra A, Dimopoulou I, Sotiropoulou C, Augustatou K, et al (2006) Neutrophil CD64 expression and serum IL-8: sensitive early markers of severity and outcome in sepsis Cytokine; 36:283-90 Lobreglio GB, d’Aversa P, Leo L, Scolozzi S, Fiore G (2008) Quantitative expression of CD64 on neutrophil granulocytes as early marker of sepsis or severe infection Haematologica; 93:21 Marshall JC, Reinhart K (2009) “Biomarkers of sepsis” Critical Care Med 37:2290-2298 Nuutila J et al (2010) The novel applications of the quantitative analysis of neutrophil cell surface FcgammaRI CD64 to the diagnosis of infectious and inflammatory diseases Curr Opin Infect Dis; 23:268-74 Pierrakos C, Vincent JL (2010) Sepsis biomarkers: a review Critical care 14:R15 Schmit X, Vincent JL (2008): The time course of blood Creactive protein concentrations in relation to the response to initial antimicrobial therapy in patients with sepsis Infection 2008, 36:213-219 Vineet B, Chao W, et al (2008) “Hematologic Profile of Sepsis in Neonates: Neutrophil CD64 as a Diagnostic Marker” America Academy of Pediatrics 121:129-134 Ngày nhận báo: Ngày phản biện đánh giá báo: Ngày báo đăng: 02/01/2014 07/03/2014 20/03/2014 ... ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Gồm nhóm Nghiên cứu Y học - Nhóm 01: người bình thường, khơng có bệnh cảnh nhiễm trùng - Nhóm 02: bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng sốt và/ có ổ nhiễm trùng, ... - So sánh biểu CD64 neutrophil nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng với nhóm người bình thường - Đánh giá mối tương quan số CD64 neutrophil với việc chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết... tài để khảo sát biểu CD64 quần thể tế bào neutrophil nhóm người bình thường nhóm bệnh nhân có bệnh cảnh nhiễm trùng nhằm đánh giá ý nghĩa số việc chẩn đoán nhiễm trùng nhiễm trùng huyết Y Học