1. Trang chủ
  2. » Thể loại khác

Tần suất mang gen sinh β‐lactamase và AMPC của enterobacteriacae trong cộng đồng tại Thành phố Hồ Chí Minh năm 2013

5 93 0

Đang tải... (xem toàn văn)

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 5
Dung lượng 367,58 KB

Nội dung

Đề tài này được tiến hành với mục tiêu nhằm xác định tần suất mang gen sinh ESBL và AmpC của Enterobacteriaceae phân lập được trong cộng đồng tại Tp. Hồ Chí Minh năm 2013. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.

Trang 1

CỦA ENTEROBACTERIACAE TRONG CỘNG ĐỒNG TẠI THÀNH PHỐ 

HỒ CHÍ MINH NĂM 2013 

Nguyễn Đỗ Phúc*, Nguyễn Lý Hoàng Ngân* 

TÓM TẮT 

Đặt vấn đề: Lý do chính đề kháng kháng sinh của Enterobacteriaceae đối với nhóm kháng sinh β‐lactama là 

việc sinh ra men Extended spectrum β‐lactamase (ESBLs) và AmpC β‐lactamas. Tiếp theo nghiên cứu trước về  tần suất vi khuẩn Enterobacteriaceae sinh ESBL trong cộng đồng Tp. Hồ Chí Minh. Nghiên cứu tiếp tục thực  hiện phân tích kiểu gen của vi khuẩn sinh β‐lactamase và sự tương quan giữa kiểu hình ‐ kiểu gen ESBL và  AmpC của các chủng phân lập được.  

Mục  tiêu:  Xác định tần suất mang gen sinh ESBL và AmpC của Enterobacteriaceae phân lập được trong 

cộng đồng tại Tp. Hồ Chí Minh năm 2013. 

Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu tiền cứu, thực hiện từ tháng 6 đến tháng 12 năm 2013 tại Tp. Hồ 

Chí Minh. 148 chủng sinh men β‐lactamas đưa vào nghiên cứu, E.coli là 85 chủng; Klebsiella spp. là 61 chủng và  Citrobacter  là  2  chủng.  Các  chủng  được  phân  tích  xác  định  kiểu  gen  sinh  ESBL  và  AmpC  bằng  kỹ  thuật  multiplex‐PCR. 

Kết quả: Trong số 148 chủng Enterobacteriaceae sinh men β‐lactamase thì tỷ lệ chủng có kiểu hình ESBL là 

113 (76,4%) và AmpC là 35 (23,6%). Tỷ lệ kiểu gen so với kiểu hình của ESBL là 85/113 (85%) và kiểu gen của  AmpC 7/35 (20%). Đối với E. coli, có 62/73 (85%) chủng có mang gen sinh ESBL, trong đó chủng mang 1 gen  phổ biến CTX‐M là 26 (35,6%), TEM là 1 (1,4%); mang 2 gen TEM+CTX‐M là 34 (46,5%) và SHV+CTX‐M là 

1 (1,4%). Chủng mang gen AmpC là 2/12 (33%), trong đó tần suất mang 1 gen DHA là 2 (16,7%), mang 2 gen  FOX+CYM  là  2  (16,7%).Đối  với  Klebsiella  spp.,  có  22/39  (56,4%)  có  mang  gen  sinh  ESBL,  trong  đó  chủng  mang 1 gen CTX‐M là 6 (15,4%), TEM là 2 (5,1%), mang 2 gen SHV+CTX‐M 6 (15,4%) và TEM+CTX‐M là 

4 (10,3%) và mang 3 gen SHV+TEM+CTX‐M là 3 (7,7%). Chủngmang gen sinh AmpC có 2/20 (9%), trong đó 

số chủng mang 1 gen DHA là 2 (4,5%) và mang 2 gen FOX+CYM là 2 (4,5%). Đối với Citrobacter, thì 1 chủng 

có kiểu hình sinh ESBL và kiểu gen là TEM ; 1 chủng có kiểu hình sinh AmpC và kiểu gen CYM. 

Kết luận: Tần suất mang gen ESBL của Enterobacteriaceae: mang 1 gen CTX‐M là 28,3%, TEM là 3,5%, 

SHV  là  1%;  mang  2  gen  TEM+CTX‐M  là  33,6%,  SHV+  CTX‐M  là  6,2%  và  3  gen  SHV+TEM+CTX‐M  là  2,7%. Tần suất mang gen AmpC của Enterobacteriaceae: mang 1 gen DHA là 8,6%, CYM là 2,9% và mang 2  gen FOX+CYM là 8,6%. 

Từ khóa: gen sinh ESBL, Ampc, cộng đồng khỏe mạnh. 

ABSTRACT 

PREVALENCE OF GENES EXTENDED SPECTRUM LACTAMASE (ESBL) AND AMPC PRODUCING 

ENTEROBACTERIACAE 

IN HEALTHY POPULATION, HO CHI MINH, 2013. 

Nguyen Do Phuc, Nguyen Ly Hoang Ngan 

* Y Hoc Tp. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 6‐ 2014: 388 – 392 

Background: A major reason for resistance of Enterobacteriacae to β‐lactamase is the production of ESBLs 

*Viện Y tế công cộng Tp. Hồ Chí Minh 

Trang 2

and AmpC β‐lactamase. Continuing the previous study on prevalence of ESBL producing Enterobacteriacae in a  healthy population in Ho Chi Minh City, a study on genotypes of ESBLs and AmpC are analysed according to  collected Enterobacteriacae isolates. 

Objectives: to determine the prevalence of genotypes of ESBLs and AmpC of Enterobacteriacae in a healthy 

population in Ho Chi Minh City. 

Methods: A prospective cohort study was conducted in Ho Chi Minh City from July to December, in 2013. 

Of  studied  148  isolates  of  β‐lactamase  producing  Enterobacteriacae,  there  were  85  E.coli  isolates;  61  Klebsiella  spp.  isolates  and  2  Citrobacter  isolates.  The  isolates  were  examined  genotypes  of  ESBL  and  AmpC  by  using  multiplex‐PCR technique. 

Result:  148  β‐lactamase  producing  Enterobacteriaceae  iolates,  phenotypes  of  ESBL  is  113  (76.4%)  and 

AmpC is 35 (23.6%). The rate of genotypes compare with phenotypes of ESBL is 85/113 (85%) and of AmpC  7/35 (20%). 62/73 (85%) E. Coli isolates carry genes producing ESBL; among them, number of isolates carrying  one gene CTX‐M is 26 (35.6%), TEM is 1 (1.4%); carrying TEM+CTX‐M genes is 34 (46.5%) and SHV+CTX‐

M  is  1  (1.4%).  Number  of  isolates  carrying  genes  producing  AmpC  is  2/12  (33%);  among  them,  number  of  isolates carrying one gene DHA is 2 (16.7%), carrying two genes FOX+CYM is 2 (16.7%).Klebsiella spp., 22/39  (56.4%) isolates carry genes producing ESBL; among them, number of isolates carrying one gene CTX‐M is 6  (15.4%), TEM is 2 (5.1%), carrying two genes SHV+CTX‐M 6 (15.4%) and TEM+CTX‐M is 4 (10.3%), and  carrying three genes SHV+TEM+CTX‐M is 3 (7.7%).Number of isolates carry genes producing AmpC is 2/20  (9%); among them, number of isolates carrying one gene DHA is (4.5%) carrying two genes FOX+CYM is 2  (4.5%).Citrobacter,  one  phenotype  and  genotype  of  ESBL  is  TEM  ;  one  phenotype  and  genotype  of  AmpC  is  CYM. 

Conclusion:  Prevalence  of  ESBL  Enterobacteriacae  genes:  carrying  one  CTX‐M  gene,  TEM,  SHV, 

TEM+CTX‐M,  SHV+CTX‐M  and  SHV+TEM+CTX‐M  are  28.3%,  3.5%,  1%;  33.6%,  6.2%  and  2.7%  respectively. Prevalence of AmpC Enterobacteriacae genes: carrying one DHA gene, CYM and FOX+CYM are  respectively 8.6%, 2.9% and 8.6%.  

Key words: GenotypesESBL; AmpC; healthy population. 

ĐẶT VẤNĐỀ 

Nhiều nghiên cứu về tần suất mang gen sinh 

β‐lactam  được  nghiên  cứu  tại  nhiều  nước  trên 

thế giới như Đức(5), Cộng hóa Séc(1), Thái Lan(2), 

Nhật  Bản(3),…  trong  cộng  đồng  người  khỏe 

mạnh. Tại Việt Nam, tần suất vi khuẩn sinh men 

β‐lactamase của Enterobacteriacae đã được nghiên 

cứu chủ yếu tại các bệnh viện tại Việt nam. Gần 

đây một số nghiên cứu về tần suất người trên 18 

tuổi  mang  vi  khuẩn  sinh  ESBL  tại  Tp.  Hồ  Chí 

Minh,  nhưng  chỉ  tập  trung  ở  Quận  3(6).  Việc 

nghiên cứu về sự tần suất phân bố các gen sinh 

ESBL  và  AmpC  của  Enterobacteriacae chưa  được 

nghiên cứu tại cộng đồng khỏe mạnh tại Tp. Hồ 

Chí Minh. Đề tài này với mục đích xác định tần 

suất  các  gen  sinh  ESBL  và  AmpC  của 

Enterobacteriacae ở người khỏe mạnh trong cộng 

đồng tại Tp. Hồ Chí Minh với các mục tiêu sau. 

Mục tiêu nghiên cứu 

Tỷ lệ chủng Enterobacteriaceae mang gen sinh 

ESBL và AmpC

Tỷ lệ các gen sinh β‐lactam (ESBL và AmpC) 

phân bố trong các chủng Enterobacteriaceae. 

ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Đối tượng nghiên cứu 

Chủng  có  kiểu  hình  của  Enterobacteriacae 

phân lập trên mẫu phân trong cộng đồng tại Tp. 

Hồ  Chí  Minh:  148  chủng:  E.  coli:  85  chủng, 

Klebsiella spp.: 61 chủngvà Citrobacter: 2 chủng. 

Trang 3

Chuẩn bị DNA 

+  Chuẩn  bị  DNA  để  chạy  phản  ứng 

multiplex  PCR  phát  hiện  gen  sinh  ESBL  và 

AmpC của Enterobacteriacae:  

Từ  khuẩn  lạc  thuần  khiết  trên  môi  trường 

BHI.  Hút  0,1ml  dịch  canh  khuẩn  cho  vào 100μl 

đệm TE (pH 8.0). Đun sôi 100°C trong 10 phút. 

Ly tâm 14.000 vòng, thu dịch nổi và sử dụng cho 

phản ứng multiplex‐PCR. Mẫu dịch chiết còn lại 

lưu giữ ‐20°C. 

+ Trình tự mồi phát hiện các gen sinh AmpC 

bằng kỹ thuật Multiplex PCR: gen đích MOX‐1, 

MOX‐2, CMY‐1, CMY‐8 đến CMY‐11: sản phẩm 

PCR 520 bp, LAT‐1 to LAT‐4, CMY‐2 đến CMY‐

7, BIL‐1: sản phẩm PCR 462 bp, DHA‐1, DHA‐2: 

sản phẩm PCR 405 bp, ACC: sản phẩm PCR 346 

bp,  MIR‐1T ACT‐1:  sản  phẩm  PCR  302  bp  và 

FOX‐1 đến FOX‐5b: sản phẩm PCR 190 bp(1, 4). 

‐  Trình  tự  mồi  phát  hiện  các  gen sinh  ESBL 

bằng kỹ thuật Multiplex PCR: gen đích SHV: sản 

phẩm  PCR  1018  bp,  TEM:  sản  phẩm  PCR  1080 

bp và CTX: sản phẩm PCR 544 bp(1, 5).  

Chu kỳ nhiệt phản ứng multiplex‐PCR 

Sử dụng 2 μl dịch chiết DNA cho vào master 

mix  và  chạy  PCR  theo  chu  kỳ  nhiệt:  1  chu  kỳ: 

95oC/15  phút;  30  chu  kỳ:  95oC/30  giây,  60oC/30 

giây và 72oC/60 giây và 1 chu kỳ: 72oC/10 phút. 

Sản phẩm PCR được điện di trong agarose 2% có 

bổ sung Gel Red.  

Điện di  

Trộn đều sản phẩm PCR và hút 5μl cho vào 

1μl thuốc nhuộm màu. 

Cho vào giếng agarose 2% bổ sung Gel Red 

10.000X. 

Điện di 100V trong 40 phút tại nhiệt độ phòng. 

Chụp band sản phẩm PCR trên máy điện di 

BioRad. 

Phân tích thống kê 

Nhập dữ liệu bằng phần mềm Epidata 3.0 và 

phân  tích  dữ  liệu  bằng  phần  mềm  Stata  10.0. 

Thống  kê  mô  tả  tính  tần  số  và  tỷ  lệ  phần  trăm  được  dùng  để  mô  tả  đặc  tính  của  mẫu.  Dùng  phép kiểm χ2 để kiểm định sự khác biệt của các  biến số. Giá trị p <0,05 được xem như khác biệt 

có ý nghĩa thống kê. 

KẾT QUẢ  

Bảng 1: Đặc điểm kiểu hình của Enterbacteriacae 

sinh men β‐lactamase (n=148) 

Kiểu hình sinh men β-lactamase

Tần số (%)

Trong 148 chủng Enterbacteriacae sinh men β‐

lactamase, qua kết quả xác nhận kiểu hình bằng  phương pháp đĩa kháng sinh kết hợp, có 113/148  (76,4%)  chủng  mang  kiểu  hình  sinh  ESBL  và  35/148 (23,6%) chủng mang kiểu hình AmpC. 

Bảng 2: Tần suất các gen của Enterbacteriacae sinh 

ESBL trong cộng đồng (n=113) 

Các gen đích của ESBL

Số chủng mang gen ESBL (n/%)

E coli

(n=73) (+/%)

Klebsiella spp (n=39)

(+/%)

Citrobacter

(n=1) (+/%)

TEM,

CTX-M

SHV,

SHV, TEM,

Không phát hiện

Trong số 113 chủng có kiểu hình sinh ESBL,  chỉ có 85/113 (75%) chủng mang gen sinh ESBL. 

Trong số các chủng E. coli, tần số xuất hiện kiểu 

gen  sinh  ESBL  là  85%,  trong  đó  tỷ  lệ  chủng  mang  1  gen  vượt  trội  là  CTX‐M  35,6%,  chủng  mang 2 gen TEM/CTX‐M là 46,5%. Trong số các 

chủng  Klebsiella  spp.  tần  số  xuất  hiện  kiểu  gen 

sinh ESBL là 57,4%, trong đó tỷ lệ chủng mang 1  gen  CTX‐M  là  15,4%,  chủng  mang  2  gen  TEM/CTX‐M  và  2  gen  SHV/CTX‐M  lần  lượt  là 

10,3%  và  15,4%.  Trong  số  các  chủng  Klebsiella 

spp.,  tần  số  xuất  hiện  kiểu  gen  sinh  ESBL  là 

57,4%, trong đó tỷ lệ chủng mang 1 gen vượt trội 

Trang 4

là  CTX‐M  15,4%,  mang  2  gen  TEM/CTX‐M  và 

SHV/CTX‐M lần lượt là 10,3% và 15,4%. Chủng 

mang  gen  SHV  chỉ  tìm  thấy  trong  chủng 

Klebsiella spp. (chỉ 1 chủng, tỷ lệ 2,6%). Citrobacter 

hiện nay chỉ phát hiện 1 chủng mang gen TEM.  

Bảng 3: Tần suất các gen của Enterbacteriacae sinh 

AmpC trong cộng đồng (n=35) 

Các gen

đích của

AmpC

E coli

(n=12)

(+/%)

Klebsiella spp

(n=22) (+/%)

Citrobacter

(n=1) (+/%)

Trong số 35 chủng có kiểu hình sinh AmpC, 

chỉ  có  7  chủng(20%)    mang  gen  sinh  AmpC. 

Trong số các chủng E. coli, tần số xuất hiện kiểu 

gen  sinh  AmpC  là  33,3%,  trong  đó  tỷ  lệ  chủng 

mang 1 gen DHA, chủng mang 2 gen FOX/CYM 

cùng tỷ lệ là 16,7%. Trong số các chủng Klebsiella 

spp.  tần  số  xuất  hiện  kiểu  gen  sinh  AmpC  là 

9,1%,  trong  đó  1  chủng  mang  gen  DHA  (4,5%) 

và  1  chủng  mang  2  gen  FOX/CYM  (4,5%). 

Chủng mang gen CYM chỉ tìm thấy trong chủng 

Citrobacter  (chỉ  1  chủng,  tỷ  lệ  2,6%).  Citrobacter 

hiện nay chỉ phát hiện 1 chủng mang gen CYM.  

Trong  số  85  chủng  E.  coli,  thì  73  chủng  có 

kiểu  hình  sinh  ESBL  và  12  chủng  có  kiểu  hình 

sinh  AmpC.  Phân  tích  kiểu  gen  chủng  có  kiểu 

hình sinh ESBL cho thấy có 62/73 (85%) chủng có 

mang  gen  sinh  ESBL,  trong  đó  số  lượt  chủng 

mang 1 gen phổ biến CTX‐M là 26 (35,6%), TEM 

là  1  (1,4%)  mang  2  gen  TEM/CTX‐M  là  34 

(46,5%) và SHV/CTX‐M là 1 (1,4%).Chủng mang 

gen AmpC là 2/12 (33%), trong đó tần suất xuất 

hiện  gen  DHA  là  2  (16,7%),  mang  2  gen 

FOX/CYM là 2 (16,7%). 

Trong số 61 chủng Klebsiella spp., 39 chủng có 

kiểu  hình  sinh  ESBL  và  22  chủng  có  kiểu  hình 

sinh  AmpC.  Phân  tích  kiểu  gen  chủng  có  kiểu 

hình  sinh  ESBL  cho  thấy  có  22/39  (56,4%)  có 

mang  gen  sinh  ESBL,  trong  đó  số  lượt  chủng 

mang 1 gen phổ biến CTX‐M là 6 (15,4%), TEM 

là 2 (5,1%), mang 2 gen SHV/CTX‐M 6 (15,4%) và  TEM/CTX‐M  là  4  (10,3%),  và  mang  3  gen  SHV/TEM/CTX‐M  là  3  (7,7%).Chủng  có  kiểu  hình  mang  gen  sinh  AmpC  cho  thấy  có  2/20  (9%), trong đó tần suất xuất hiện vi khuẩn mang 

1 gen DHA là 2 (4,5%) và mang 2 gen FOX/CYM 

là 2 (4,5%). 

Trong  số  2  chủng  Citrobacter,  thì  1  chủng  có 

kiểu hình sinh ESBL và kiểu gen là TEM; 1 chủng 

có kiểu hình sinh AmpC và kiểu gen CYM. 

BÀN LUẬN 

Bảng  2,  có  85  chủng  Enterobacteriaceae  mang 

gen sinh ESBL trong số 113 chủng (75%), kết quả  này cho thấy rằng kiểu gen đưa vào nghiên cứu  tập trung vào 3 gen chính TEM, SHV và CTX‐M, 

có  nhiều  loại  cũng  như  nhiều  biến  thể  của  của  TEM  hoặc  SHV  điều  khiển  sinh  β‐lactamase  mà  trong nghiên cứu chưa thể phát hiện được. Trong 

số  các  chủng  Enterobacteriaceae,  tỷ  lệ  mang  1  gen 

CTX‐M chiếm ưu thế, kết quả này cũng cho thấy  tương  tự  như  nghiên  cứu  của  tác  giả  Tadahiru, 

2010 trên mẫu phân tại cộng đồng Thái Lan, tỷ lệ  CTX‐M  là  58,2%.  Nhưng  theo  nghiên  cứu  của  Ulzii‐Orshikh  Luvsansharav,  2011  cũng  có  sự  khác nhau về tỷ lệ mang gen CTX‐M trong cộng  đồng  người  Thái  Lan  tại  các  miền  khác  nhau:  29,3%  ở  Nan  (43/147),  29,9%  ở  Nakhon  Si  Thammarat  (43/144)  và  50,6%  ở  Kanchanaburi 

(78/154)  và  E.  coli  là  vi  khuẩn  nổi  trội  trong  họ 

Enterobacteriaceae mang gen sinh CTX‐M

Bảng  3,  tỷ  lệ  kiểu  gen  AmpC  của 

Enterobacteriaceae trong nghiên cứu này thấp, chỉ 

chiếm  20%.  Tần  suất  xuất  hiện  gen  DHA  trội  hơn so với các gen khác, trong khi đó nghiên cứu  của  M.  Kolar,  2010  thì  gen  CYM  lại  cao  hơn  so  với các gen khác khi nghiên cứu trên gia cầm tại  Cộng hòa Séc. Một nghiên cứu tại Hàn Quốc về 

kiểu gen sinh ESBL và AmpC của E. coli tại các 

bệnh viện năm 2007, cho thấy tần suất gen sinh  ESBL thường gặp là CTX‐M và gen sinh AmpC 

là DHA(7). 

Trang 5

Khi  phân  tích  kiểu gen ESBL  và  AmpC  của 

Enterobacteriaceae ở người khỏe mạnh trong công 

đồng tại Tp. Hồ Chí Minh chỉ có 75% chủng có 

kiểu gen ESBL và 20% chủng có kiểu gen AmpC 

khi so sánh với kiểu hình.  

Tần suất mang gen ESB: mang 1 gen CTX‐M 

là 28,3%, TEM là 3,5%, SHV là 1%; mang 2 gen 

TEM, CTX‐M là 33,6%, SHV, CTX‐M là 6,2% và 3 

gen SHV, TEM, CTX‐M là 2,7%. 

Tần suất mang gen AmpC: mang 1 gen DHA 

là 8,6%, CYM là 2,9% và mang 2 gen FOX/CYM 

là 8,6%. 

Tiếp  tục  nghiên  cứu  về  các  kiểu  gen  dạng 

biến thể của ESBL và AmpC. 

LỜI CẢM ƠN 

Nghiên cứu này được thực hiện dưới sự tài 

trợ  của  Tổ  chức  Y  tế  thế  giới  khu  vực  Châu  Á‐ 

Thái  Bình  Dương  (WHO  ‐  Western  Pacific 

Region) ‐ Văn phòng đại diện WHO tại Hà Nội, 

Việt Nam. 

TÀI LIỆU THAM KHẢO 

1 Kolar  M,  Bardon  J,  et  al  (2010).  ESBL  and  AmpC  β‐

lactamase‐producing  Enterobacteriacae  in  poultry  in  the 

Czech Repulic. Veterinarni Medicina. 55(3): 119–124. 

2 Luvsansharav UO, Hirai I, Niki M, et al (2011). Analysis of  risk factor for a high prevalence of Extended‐spectrum β –  lactamase  –  producing  Enterobacteriaceae  in  asymptomatic  individuals  in  rural  Thailand.  Journal  of  Medical Microbiology. 60. 619‐624. 

3 Nakano R, Nakano A, Abe M, Inoue M, Okamoto R (2012).  Regional  outbreak  of  CTX‐M‐2  b‐lactamaseproducing  Proteus  mirabilis  in  Japan.  Journal  of  Medical  Microbiology. 61. 1727–1735. 

4 Pérez‐Pérez FJ, Hanson ND. (2002). Detection of Plasmid‐ Mediated  AmpC‐Lactamase  Genes  in  Clinical  Isolates  by  Using  Multiplex  PCR.  Journal  of  Clinical  Microbiology.  Vol. 40. No. 6. p. 2153–2162. 

5 Schmitt  J,  Jacobs  E,  Schmidt  H.  (2007).  Molecular  characterization  of  extended‐spectrum  β‐lactamases  in  Enterobacteriaceae  from  patients  of  two  hospitals  in  Saxony.  Germany.  Journal  of  Medical  Microbiology.  56.  241–249. 

6 Trần Ngọc Lâm (2013). Tần suất người trên 18 tuổi mang 

vi khuẩn sinh ESBL tại Tp. Hồ Chí Minh. Luận văn BSCKI.  Đại học Y dược Tp. Hồ Chí Minh. Tr. 45‐34. 

7 Wonkeun S. Hyukmin L. Kyungwon L. et al (2009). CTX‐ M‐14  and  CTX‐M‐15  enzymes  are  the  dominant  type  of  extended‐spectrum  β  ‐lactamase  in  clinical  isolates  of  Escherichia  coli  from  Korea.  Journal  of  Medical  Microbiology. 58. 261–266. 

  Ngày nhận bài báo:       26/5/2014  Ngày phản biện nhận xét bài báo:   19/6/2014  Ngày bài báo được đăng:     14/11/2014   

 

Ngày đăng: 22/01/2020, 01:49

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w