Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xác định mức độ đề kháng của S. aureus ở 3 bệnh viện miền Bắc - Việt Nam. Bài viết nghiên cứu mô tả trên 258 chủng S. aureus phân lập từ 3 bệnh viện ở miền Bắc Việt Nam.
Tạp chí y - dợc học quân số 5-2017 XÁC ĐỊNH MỨC ĐỘ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA STAPHYLOCOCCUS AUREUS Ở BỆNH VIỆN MIỀN BẮC VIỆT NAM NĂM 2012 - 2014 Hà Thị Nguyệt Minh*; Nguyễn Thái Sơn**; Vũ Thị Thu Hường*** Vũ Thị Kim Liên***; Trần Thị Hải Âu*** TÓM TẮT Mục tiêu: xác định mức độ đề kháng S aureus bệnh viện miền Bắc - Việt Nam Đối tượng phương pháp: nghiên cứu mô tả 258 chủng S aureus phân lập từ bệnh viện miền Bắc Việt Nam Kết quả: tỷ lệ S aureus kháng methicillin (MRSA) bệnh viện 64,3% Tỷ lệ kháng thuốc xác định phương pháp vi pha loãng chủng S aureus phân lập bệnh viện với penicillin 97,7%; erythromycin 76%; cefoxitin 64,3%; tetracyclin 49,2%; chloramphenicol 40,7%; cefuroxim 39,5%; gentamycin 34,5%; ciprofloxacin 32,6%; cefepim 27,1%; cefotaxim 25,2%; meropenem 20,9%; doxycyclin 5%, rifampicin 3,1% Vancomycin kháng sinh nhạy cảm với S aureus Kết luận: vancomycin kháng sinh nhạy cảm với S aureus * Từ khóa: Staphylococcus aureus; Kháng methicillin; Nồng độ ức chế tối thiểu Determime Extent of Antibiotic Resitant of Staphylococus Aureus in Three Hospitals in North of Vietnam, 2012 - 2014 Summary Objective: To determine extent of antibiotic resistant of Staphylococcus aureus in three hospitals in North of Vietnam Materials and methods: Descriptive study was carried out on 258 strains of S aureus isolated from hospitals Results: The rate of methicillin resistant S aureus (MRSA) in three hospitals was 64.3% Extent of antibiotic resistant was determined by broth microdilution testing to penicillin was 97.7%; erythromycin 76%; cefoxitin 64.3%; tetracyclin 49.2%; chloramphenicol 40.7%; cefuroxim 39.5%; gentamycin 34.5%; ciprofloxacin 32.6%; cefepim 27.1%; cefotaxim 25.2%; meropenem 20.9%; doxycyclin 5%, rifampicin 3.1% Conclusion: Vancomycin is an antibiotics still susceptible with S aureus * Key words: Staphylococcus aureus; Methicillin resistant Staphylococcus aureus; Minimum inhibitory concentration * Trường Cao đẳng Y tế Hà Nội ** Bệnh viện Quân y 103 *** Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương Người phản hồi (Corresponding): Hà Thị Minh Nguyệt (hanguyetminh.cdyhn@gmail.com) Ngày nhận bài: 13/02/2017; Ngày phản biện đánh giá báo: 28/04/2017 Ngày báo đăng: 17/05/2017 135 T¹p chÝ y - dợc học quân số 5-2017 T VN Nhim khuẩn bệnh viện vấn đề quan tâm đặc biệt phát triển phát triển S aureus (tụ cầu vàng) tác nhân quan trọng gây nhiễm khuẩn bệnh viện, đặc biệt tụ cầu vàng kháng methicillin (methicillin resistant Staphylococcus aureus: MRSA) Nghiên cứu gần giới cho thấy chủng MRSA nguyên thường gặp bệnh viện cộng đồng, đặc biệt bệnh viện tuyến cuối, nơi tập trung nhiều bệnh nhân, bệnh cảnh lâm sàng đa dạng thường bệnh nặng, điều trị khó khăn Do vậy, việc phân lập S aureus, chủng MRSA đóng vai trò quan trọng điều trị kiểm soát nhiễm trùng loài vi khuẩn gây Mặc dù có nhiều loại thuốc kháng sinh điều trị S aureus, kháng sinh nhóm β-lactam ức chế β-lactamase (methicillin, oxacillin…), nhiều chủng S aureus kháng lại kháng sinh Tỷ lệ kháng với nhóm kháng sinh khác nhiều sở y tế Cơ chế S aureus kháng methicillin chủ yếu chúng mang gen mecA, gen mã hóa cho protein gắn penecillin 2a, gen khơng có vật liệu di truyền S aureus nhạy cảm với methicillin Khi S aureus mang gen mecA, chúng kháng với kháng sinh nhóm β-lactam, mà kháng lại nhóm kháng sinh khác, dẫn đến tượng đa kháng kháng sinh Chúng nghiên cứu 258 chủng S aureus phân lập bệnh viện miền Bắc Việt Nam (Bệnh viện Bạch Mai, Bệnh viện Nhi Trung ương Bệnh viện Quân y 103) từ - 2012 đến - 2014 với mục tiêu: 136 - Xác định tỷ lệ MRSA bệnh viện miền Bắc, Việt Nam - Xác định mức độ đề kháng S aureus với 14 loại kháng sinh thường dùng phương pháp vi pha loãng ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu * Đối tượng nghiên cứu: 258 chủng S aureus phân lập bệnh viện miền Bắc Việt Nam (Bệnh viện Bạch Mai, Bệnh viện Nhi Trung ương Bệnh viện Quân y 103) * Địa điểm nghiên cứu: Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương, Học viện Quân y, Bệnh viện Quân y 103 * Vật liệu, phương tiện nghiên cứu: - Môi trường, sinh phẩm để nuôi cấy, định danh S aureus (Bio Merieux) + Thạch máu (Blood agar) + Thạch MH (Muller - Hinton) + Thuốc thử catalase + Huyết tương thỏ tươi vô khuẩn + Bộ thử Masta Staphy - 14 loại kháng sinh bột gồm cefoxitin (methicillin, bột methicillin dễ bị tác dụng yếu tố môi trường nên thay bột cefoxitin); vancomycin; penicillin; cefuroxim; cefotaxim; cefepime; meropenem; tetracyclin; doxycyclin; erythromycin; gentamycin; ciprofloxacin; chloramphenicol, rifampicin Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương cung cấp - Chủng chuẩn S aureus ATCC 29213 Bộ môn - Khoa Vi sinh Y học, Học viện Quân y cung cấp T¹p chÝ y - dợc học quân số 5-2017 - Mt s thit bị dụng cụ phòng thí nghiệm dụng cụ tiêu hao Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu mô tả cắt ngang, kết hợp phân tích labo chủng vi khuẩn S aureus gây bệnh miền Bắc, Việt Nam kỹ thuật vi sinh vật học * Kỹ thuật nghiên cứu: - Kỹ thuật định danh chủng nghiên cứu: Các chủng vi khuẩn định danh với tiêu chuẩn chẩn đoán xác định S aureus sau [2]: + Tan máu hoàn toàn + Nhuộm Gram thấy cầu khuẩn Gram (+) * Thiết kế nghiên cứu: - Cỡ mẫu chọn mẫu: + Catalase (+) + Cỡ mẫu: + Coagulase (+) Masta Staphy (+) n = Z2(1 – α/2) x p (1- p) d2 Trong đó: n cỡ mẫu cần nghiên cứu; p tỷ lệ ước tính, p = 0,66 [3]; d sai số tuyệt đối; thay số: n = 239 Thực tế số mẫu nghiên cứu thu thập 258 mẫu - Chọn mẫu: lấy tồn mẫu ni cấy từ bệnh phẩm người bệnh, phân lập S aureus từ bệnh viện miền Bắc từ tháng - 2012 đến - 2014 * Kỹ thuật xác định mức độ kháng kháng sinh S aureus: + Thử nghiệm tính nhạy cảm vi khuẩn với 14 kháng sinh theo CLSI [6] + Tiêu chuẩn xác định MRSA: theo CLSI, đánh giá S aureus kháng methicillin theo phương pháp xác định MIC cefoxitin [6] * Xử lý số liệu: theo test thống kê, tỷ lệ % phầm mềm SPSS 20 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Tỷ lệ MRSA bệnh viện miền Bắc, Việt Nam Bảng 1: Tỷ lệ MRSA bệnh viện miền Bắc, Việt Nam Bệnh viện Bạch Mai Số thứ tự Bệnh viện Nhi Trung ương Bệnh viện Quân y 103 MRSA chung n Tỷ lệ % n Tỷ lệ % n Tỷ lệ % n Tỷ lệ % MRSA 65 50,8 89 80,9 12 60 166 64,3 MSSA 63 49,2 21 19,1 40 92 35,7 Tổng số 128 100 110 100 20 100 258 100 Tỷ lệ MRSA Bệnh viện Nhi Trung ương cao (80,9%) Tỷ lệ MRSA chung cho bệnh viện 64,3% 137 Tạp chí y - dợc học quân sè 5-2017 Xác định mức độ đề kháng S aureus với 14 loại kháng sinh Bảng 2: Phân bố giá trị MIC penicillin 258 chủng S aureus Giá trị MIC (µg/ml) Kháng sinh penicillin n % > 128 2,7 128 1,6 64 33 12,8 32 25 9,7 16 35 13,6 35 13,6 39 15,1 32 12,4 17 6,6 0,5 10 3,9 0,25 15 5,8 0,125 0,4 0,063 1,9 Tổng 258 100 Mức độ đề kháng R = 97,7% S = 2,3% 97,7% S aureus kháng với penicillin; MIC đa số chủng S aureus > µg/ml Bảng 3: Phân bố giá trị MIC cefoxitin 258 chủng S aureus Giá trị MIC (µg/ml) Kháng sinh cefoxitin n % > 128 47 18,2 128 2,3 64 1,6 32 18 7,0 16 53 20,5 38 14,7 45 17,45 45 17,45 0,8 Tổng 258 100 Mức độ nhạy cảm R = 64,3% S = 35,7% Theo khuyến cáo CLSI (2015), sử dụng MIC cefoxitin làm tiêu chuẩn chẩn đoán MRSA Vì vậy, có 64,3% số chủng S aureus kháng methicillin Các chủng nhạy cảm có MIC chủ yếu l àg/ml v àg/ml 138 Tạp chí y - dợc học quân số 5-2017 Bng 4: Phõn bố giá trị MIC vacomycin 258 chủng S aureus Giá trị MIC (µg/ml) Kháng sinh vancomycin n % 70 27,1 160 62,0 0,5 25 9,7 0,25 0,8 0,063 0,4 Tổng 258 100 Mức độ nhạy cảm S = 100% 100% chủng S aureus nhạy cảm với vancomycin, giá trị MIC chủ yếu µg/ml µg/ml Bảng 5: MIC tỷ lệ kháng kháng sinh 258 chủng S aureus MIC tìm (µg/ml) Số thứ tự Các giá trị tham chiếu 258 chủng S aureus (µg/ml) Tỷ lệ kháng (%) Nhỏ Lớn MIC MIC5 (B) MIC9 (C) n %R (A) MIC S aureus 29213 (µg/ml) Kháng sinh Penicillin 0,063 > 128 ≥ 0,25 64 252 97,7 0,25 Cefoxitin > 128 ≥8 > 128 166 64,3 Cefuroxim 0,25 > 128 ≥ 32 > 128 102 39,5 0,5 Cefotaxim 0,25 > 128 ≥ 64 > 128 65 25,2 Cefepime > 128 ≥ 32 > 128 70 27,1 Meropenem 0,062 128 ≥ 16 0,5 32 54 20,9 0,05 Doxycyclin 0,062 > 128 ≥ 16 13 5,0 0,12 Tetracyclin 0,062 128 ≥ 16 32 127 49,2 0,5 Erythromycin 0,063 > 128 ≥8 128 > 129 196 76,0 0,25 10 Gentamycin 0,063 > 128 ≥ 16 129 89 34,5 0,5 11 Chloramphenicol > 128 ≥ 32 64 105 40,7 12 Ciprofloxacin 0,062 > 128 ≥4 0,25 32 84 32,6 0,5 13 Rifampicin 0,062 > 128 ≥4 0,062 0,25 3,1 0,01 14 Vancomycin 0,063 ≥ 16 0 (A: Nồng độ ức chế tối thiểu S aureus kháng kháng sinh; B: Nồng độ ức chế tối thiểu 50% số chủng S aureus kháng kháng sinh; C: Nồng độ ức chế tối thiểu 90% số chủng S aureus kháng khỏng sinh) 139 Tạp chí y - dợc học quân sù sè 5-2017 Mức độ nhạy cảm, trung gian đề kháng với 14 loại kháng sinh 258 chủng S aureus phân bố từ nồng độ 0,063 µg/ml đến > 128 µg/ml Trong đó: cefoxitin; erythromycin; penicillin có MIC50 nằm giới hạn kháng 11 kháng sinh vancomycin; cefuroxim; cefotaxim; cefepime; meropenem; tetracyclin; doxycyclin; gentamycin; chloramphenicol, rifampicin; ciprofloxacin có MIC 50 nằm ngưỡng kháng Với MIC90 vancomycin, rifampicin, doxycyclin nằm giới hạn nhạy cảm trung gian, kháng sinh lại có MIC90 nằm giới hạn kháng Kiểm tra chất lượng xác định giá trị MIC S aureus 29213 với 14 loại kháng sinh thử nghiệm nằm khoảng giá trị khuyến cáo CLSI 2015 [6] BÀN LUẬN Trong nghiên cứu chúng tôi, tỷ lệ MRSA tương đương với nghiên cứu tác giả nước Nguyễn Thái Sơn nghiên cứu Bệnh viện Quân y 103 giai đoạn 2007 - 2010, tỷ lệ MRSA năm 2007 50%, năm 2008 64%, năm 2009 66,67% [3] Nghiên cứu Vũ Thị Kim Liên Bệnh viện Trung ương Huế (2013 - 2014) có tỷ lệ MRSA 64% [1] Phạm Hùng Vân nghiên cứu bệnh viện miền Trung miền Nam cho kết MRSA (2005) 47% [4] Các chủng MRSA tác nhân gây nhiễm khuẩn nặng bệnh viện cộng đồng, điều trị nhiễm khuẩn MRSA gặp nhiều khó khăn, chúng 140 kháng lại với nhiều kháng sinh thường dùng Nghiên cứu tiến hành xác định MIC 14 loại kháng sinh phương pháp vi pha loãng theo hướng dẫn CLSI (2015) [6] Kết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ kháng thuốc chủng S aureus với penicillin 97,7%; erythromycin 76%; cefoxitin 64,3%; tetracyclin 49,2%; chloramphenicol 40,7%; cefuroxim 39,5%; gentamycin 34,5%; ciprofloxacin 32,6%; cefepim 27,1%; cefotaxim 25,2%; meropenem 20,9%; doxycyclin 5%, rifampicin 3,1% Vancomycin kháng sinh nhạy cảm với S aureus Kết phù hợp với tác giả nước Theo Phạm Hùng Vân, 42% kháng gentamycin, 63% kháng erythromycin, 39% kháng ciprofloxacin, 34% kháng cefepim [4] Nghiên cứu Vũ Thị Kim Liên Bệnh viện Trung ương Huế (2013 - 2014) có tỷ lệ kháng penicillin 99%; erythromycin 78%; cefoxitin 64,8%; tetracyclin 49%; chloramphenicol 41,4%; cefuroxim 46%; gentamycin 48%; ciprofloxacin 49% [1] Nghiên cứu Adebayo O (2011): tỷ lệ S aureus kháng với penicillin 88,2%; tetracycllin 55,9%; ciprofloxacin 29,4% [5] Các chủng MRSA kháng chéo với nhóm kháng sinh khác quinolon, aminoglycosid, phenicol Nghiên cứu này, doxycyclin, rifampicin nhạy cảm cao với S aureus, có lẽ kháng sinh sử dụng Vancomycin coi kháng sinh cuối để điều trị MRSA Mặc dù chưa có chủng S aureus kháng với vancomycin, Tạp chí y - dợc học quân số 5-2017 MIC vacomycin chủ yếu nồng độ - µg/ml Một số nghiên cứu giá trị MIC cao có liên quan đến thất bại trình điều trị; theo Sakoulas, kết điều trị nhiễm khuẩn huyết MRSA MIC ≤ 0,5 µg/ml, tỷ lệ thành công 55,6%; MIC ≥ µg/ml, tỷ lệ 9,5% [9, 10] Nhóm có MIC ≥ 1,5 µg/ml gặp tỷ lệ điều trị thất bại cao gấp 2,4 lần so với nhóm có MIC ≤ µg/ml Ngồi ra, tỷ lệ tử vong tăng MIC tăng, không xảy tử vong với MIC = 0,5 µg/ml, tỷ lệ tăng lên 80% MIC = µg/ml [7, 8, 11] Do vậy, chủng S aureus nghiên cứu nhạy cảm với vancomycin, giá trị MIC nồng độ - µg/ml, điều cảnh báo khó khăn điều trị trường hợp nhiễm khuẩn S aureus đó, kháng sinh có MIC50 nằm giới hạn kháng như: cefoxitin; erythromycin; penicillin Còn 11 kháng sinh có MIC50 nằm ngưỡng kháng: vancomycin; cefuroxim; cefotaxim; cefepime; meropenem; tetracyclin; doxycyclin; gentamycin; chloramphenicol, rifampicin; ciprofloxacin KẾT LUẬN Nguyễn Thái Sơn CS Nghiên cứu tỷ lệ mức độ kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn gây bệnh Bệnh viện Quân y 103, giai đoạn 2007 - 2009 Tạp chí Y học Việt Nam 2010, tr.245-251 Các chủng S aureus kháng methicillin bệnh viện (Bệnh viện Bạch Mai, Bệnh viện Nhi Trung ương, Bệnh viện Quân y 103) 64,8% Tỷ lệ đề kháng chủng S aureus với penicillin 97,7%; erythromycin 76%; cefoxitin 64,3%; tetracyclin 49,2%; chloramphenicol 40,7%; cefuroxim 39,5%; gentamycin 34,5%; ciprofloxacin 32,6%; cefepim 27,1%; cefotaxim 25,2%; meropenem 20,9%; doxycyclin 5%, rifampicin 3,1% 100% số chủng S aureus nhạy cảm với vancomycin Mức độ nhạy cảm, trung gian đề kháng với 14 loại kháng sinh 258 chủng S aureus phân bố từ nồng độ 0,063 µg/ml đến > 128 µg/ml Trong Với MIC90 có vancomycin, rifampicin, doxycyclin nằm giới hạn nhạy cảm trung gian, kháng sinh lại có MIC90 nằm giới hạn kháng TÀI LIỆU THAM KHẢO Vũ Thị Kim Liên CS Tỷ lệ mức độ kháng kháng sinh chủng Staphylococcus aureus Bệnh viện Trung ương Huế giai đoạn 2013 - 2014 Tạp chí Y học dự phòng Tổng hội Y học Việt Nam 2013-2014, tr.42 Lê Văn Phủng Staphylococci Sách đào tạo bác sỹ học viên sau đại học, Nhà xuất Giáo dục, Việt Nam 2009, tr.45-62 Phạm Hùng Vân, Phạm Thái Bình Tình hình đề kháng kháng sinh vi khuẩn Staphylococcus aureus kết nghiên cứu đa trung tâm thực 235 chủng vi khuẩn Tạp chí Y học thực hành Bộ Y tế 2005, Adebayo O.S, Kenneth O, Solayide A, Omotayo O, Wolfgang W Antibiotic resistant and molecular epidermiology of Staphylococcus aureus in Nigeria, BMC Microbiology 2011, 11, pp.92-100 CLSI Performance standards for antimicrobial supceptibility testing Nineteenth Informational Supplement 2015, pp.64-70 141 Tạp chí y - dợc học quân sù sè 5-2017 Hiramatsu K, Hanaki H, Ino T, Yabuta K, Oguri T, Tenover F.C Methicillin-resistant Staphylococcus aureus clinical strain with reduced vancomycin susceptibility J Antimicrob Chemother 1997, 40 (1), pp.135-136 Lodise T.P, Graves J, Evan A, Graffunder E, Helmecke M Relationship between vancomycin MIC and failure among patients with methicillin resistant Staphylococcus aureus bacteremia treated with vancomycin Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2008, 52 (9), pp.3315-3320 Sakoulas G, Moellering R.C Increasing antibiotic resistance among methicillin resistant Staphylococcus aureus strains 142 Clinical Infectiuos Diseases 2008, 46, pp 360-367 10 Sakoulas G, Moise-Broder P.A, Schentag J, Forrest A, Moellering R.C Relationship of MIC and bactericidal activity to efficacy of vancomycin for treatment of methicillin resistant Staphylococcus aureus bacteremia Journal of Clinical Microbiology 2004, 42 (6), pp.2398-2402 11 Soriano A, F Marco, J.A Martinez, E Pisos, M Almela, V.P Dimova infuence of vancomycin minimun inhibitory concentration on the treatment of methicillin resistant Staphylococcus aureus bacteremia Clinical Infectiuos Diseases 2008, 46, pp.193-200 ... S aureus phân lập bệnh viện miền Bắc Việt Nam (Bệnh viện Bạch Mai, Bệnh viện Nhi Trung ương Bệnh viện Quân y 1 03) từ - 2012 đến - 2014 với mục tiêu: 136 - Xác định tỷ lệ MRSA bệnh viện miền Bắc, ... aureus phân lập bệnh viện miền Bắc Việt Nam (Bệnh viện Bạch Mai, Bệnh viện Nhi Trung ương Bệnh viện Quân y 1 03) * Địa điểm nghiên cứu: Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương, Học viện Quân y, Bệnh viện. .. lệ mức độ kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn gây bệnh Bệnh viện Quân y 1 03, giai đoạn 2007 - 2009 Tạp chí Y học Việt Nam 2010, tr.245-251 Các chủng S aureus kháng methicillin bệnh viện (Bệnh viện