Đánh giá vai trò của HLA‐DR trong chẩn đoán bệnh bạch cầu cấp dòng tủy phân nhóm M3

Mục tiêu nghiên cứu nhằm khảo sát vai trò của HLA‐DR trong chẩn đoán bệnh bạch cầu cấp dòng tủy phân nhóm M3 (BCCDT‐M3). Nghiên cứu tiến hành trong 156 ca chẩn đoán bạch cầu cấp dòng tủy có 18 ca thuộc phân nhóm M3 và 138 ca khác phân nhóm M3.

Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 ĐÁNH GIÁ VAI TRỊ CỦA HLA‐DR TRONG CHẨN ĐỐN   BỆNH BẠCH CẦU CẤP DỊNG TỦY PHÂN NHĨM M3  Nguyễn Hồng Điệp*, Nguyễn Phương Liên*  TĨM TẮT  Mục  tiêu  nghiên  cứu:  Khảo sát vai trò của HLA‐DR trong chẩn đốn bệnh bạch cầu cấp dòng tủy phân  nhóm M3 (BCCDT‐M3).  Phương pháp nghiên cứu: Mơ tả hàng loạt ca. Sử dụng các kháng thể đơn dòng có gắn huỳnh quang và  phân  tích  bằng  hệ  thống  máy  FACSCanto  II  trên  phần  mềm  Diva  để  xác  định  kiểu  hình  dấu  ấn  miễn  dịch  (DAMD). Tiến hành nghiên cứu trên 156 bệnh nhân mắc bệnh bạch cầu cấp dòng tủy có làm xét nghiệm tủy đồ,  DAMD và sinh học phân tử (SHPT) tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học TP.HCM từ tháng 04/2010 đến  09/2012.  Kết quả: Trong 156 ca chẩn đốn BCCDT có 18 ca thuộc phân nhóm M3 và 138 ca khác phân nhóm M3.  Ghi nhận 36/156 ca có HLA‐DR âm tính, gặp ở tất cả các phân nhóm BCCDT: 94% trong các ca M3; 33%  trong M0; 15% trong M2; 4% trong Mono; 25% trong M6 và 50% trong M7. Trong 18 ca được chẩn đốn xác  định M3 với t(15;17) và PML‐RARA dương tính: 17 ca có HLA‐DR âm tính và 1 ca có HLA‐DR dương tính  yếu.  Kết luận: HLA‐DR âm tính gặp ở tất cả các phân nhóm BCCDT. Do đó, HLA‐DR âm tính trong BCCDT  khơng còn được xem là tiêu chuẩn vàng để thiết lập chẩn đốn phân nhóm M3 về mặt DAMD. Khi kết quả tủy  đồ hướng BCCDT‐M3 bước tiếp theo phải bổ sung xét nghiệm SHPT để chẩn đốn xác định.  Từ khóa: Bạch cầu cấp dòng tủy với HLA‐DR, bạch cầu cấp dòng tủy phân nhóm M3, bạch cầu cấp, kiểu  hình dấu ấn miễn dịch.   ABSTRACT  EVALUATING THE ROLE OF HLA‐DR IN THE DIAGNOSIS OF ACUTE PROMYELOCYTIC  LEUKEMIA  Nguyen Hong Diep, Nguyen Phuong Lien   * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ No 5 ‐ 2013: 126 ‐ 131  Objective: to determine the values of HLA‐DR in diagnosis of acute promyelocytic leukemia.  Methods:  Case  series.  Using  flourescent  monoclonal  antibodies  and  analysing  results  on  FACSCanto  II  system  with  Diva  software  to  perform  immunophenotyping  on  the  specimens  of  bone  marrow  aspirated  from  AML patients, at Blood Transfusion Hematology Hospital, from 04/2010 to 09/2012.  Results:  In 156 AML cases, there were 18 acute promyelocytic leukemia (APL/AML‐M3) cases and 138  other subtypes of AML cases. HLA‐DR antigens were not detected on AML cells from 36 patients, including  17/18 with APL (in 94% APL); and 19/138 with other subtypes of AML (in 33% M0; 15% M2; 4% Mono;  25% M6 and 50% M7). All 18 APL cases had t(15;17) and/or PML‐RARA, including 17 cases with HLA‐DR‐ negative and 1 case with HLA‐DR dim.  Conclusion:  HLA‐DR  antigens  were  not  detected  on  36/156  AML  cases,  including  APL  and  other  subtypes  of  AML.  The  diagnosis  of  APL  cannot  be  based  on  lack  of  HLA‐DR  antigen  expression;  rather,  it  requires further cytogenetic or molecular studies.  * Bệnh viện Truyền máu Huyết học TP.HCM.  Tác giả liên lạc: TS. BS. Nguyễn Phương Liên. ĐT: 0903 333 994. Email: lien_nguyen1974@yahoo.com.  126 Chuyên Đề Truyền Máu – Huyết Học   Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013  Nghiên cứu Y học Keywords: HLA‐DR‐negative AML, AML‐M3, leukemia, immunophenotyping.   ĐẶT VẤN ĐỀ  Trước  đây,  việc  chẩn  đoán  bệnh  BCCDT‐ M3  về  mặt  DAMD  thường  dựa  vào  đặc  điểm  HLA‐DR  âm  tính,  vì  đối  với  dòng  tủy,  HLA‐ DR  dương  tính  trên  những  tế  bào  (TB)  non  nhất  (myeloblast),  từ  giai  đoạn  promyelocyte  trở đi sẽ khơng còn hiện diện(8). Ngày nay, mặc  dù  BCCDT‐M3  có  những  đặc  trưng  riêng  về  hình  thái  và  DAMD  nhưng  quyết  định  chẩn  đoán  BCCDT‐M3  phải  dựa  vào  kết  quả  phân  tích  di  truyền  học  TB  và  SHPT  nhờ  sự  hiện  diện  của  chuyển  đoạn  t(15;17)  và/hoặc  phức  hợp PML‐RARA. Theo một số báo cáo gần đây  cho  thấy  ở  các  phân  nhóm  khác  BCCDT  (về  mặt  DAMD)  vẫn  có  trường  hợp  HLA‐DR  âm  tính(15). Vì vậy chúng tơi thực hiện nghiên cứu  này nhằm khảo sát vai trò của HLA‐DR trong  các  ca  BCCDT  để  tìm  hiểu  xem  HLA‐DR  âm  tính  có  phải  là  tiêu  chuẩn  phù  hợp  để  chẩn  đốn BCCDT‐M3 hay khơng.   Mục tiêu tổng qt  Khảo  sát  vai  trò  của  HLA‐DR  trong  chẩn  đoán  bệnh  BCCDT‐M3  tại  bệnh  viện  Truyền  Máu Huyết Học TP.HCM từ tháng 04/2010 đến  tháng 09/2012.  Mục tiêu chuyên biệt  Xác  định  tỉ  lệ  HLA‐DR  âm  tính  trong  các  phân nhóm của BCCDT; Xác định tỉ lệ HLA‐DR  âm  tính  có  t(15;17)  và/hoặc  PML‐RARA;  Xác  định kiểu hình DAMD thường gặp của BCCDT‐ M3.  ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Thiết kế nghiên cứu  Mô tả hàng loạt ca.  Đối tượng nghiên cứu  Những  bệnh  nhân  mắc  bệnh  BCCDT  tại  bệnh  viện  Truyền  Máu  Huyết  Học  TP.HCM  có  làm xét nghiệm tủy đồ, DAMD và SHPT (cụ thể  là  FISH/PCR)  từ  tháng  04/2010  đến  tháng  09/2012.   Tiêu chuẩn chọn bệnh  Bệnh  nhân  được  chẩn  đốn  lần  đầu  (de  novo),  có  kết  quả  tủy  đồ/  DAMD  xác  nhận  là  BCCDT.  Tiêu chuẩn loại trừ  Không  đưa  vào  nghiên  cứu  các  ca  BCCDT  tái phát hoặc thứ phát.  Cỡ mẫu  Từ tháng 04/2010 đến tháng 09/2012, có 156  ca BCCDT được chọn vào nghiên cứu.  Phương pháp tiến hành  Ban đầu, các mẫu tủy đều được nhuộm với  cùng một bộ thuốc thử (kháng thể đơn dòng có  gắn  huỳnh  quang  của  hãng  Becton  Dickinson  ‐  Mỹ) để xác định BCCDT: CD2, CD3, CD4, CD5,  CD7,  CD8,  CD10,  CD13,  CD15,  CD19,  CD20,  CD22,  CD33,  CD34,  CD36,  CD45,  CD56,  MPO,  HLA‐DR.  Sau  đó,  tùy  từng  trường  hợp  mà  các  mẫu tủy được nhuộm với các thuốc thử sau để  phân nhóm BCCDT: CD14, CD64, CD11b, CD16,  CD117, CD41a, CD61, CD71, CD235a. Sau cùng  được thu thập trên máy FACS Canto II và được  phân tích trên phần mềm FACS Diva version 2.1  của hãng Becton Dickinson ‐ Mỹ.   Phân tích số liệu  Sử dụng phần mềm Stata để phân tích thống  kê.  Đánh  giá  phần  trăm  đồng  thuận  giữa  các  nhóm nghiên cứu bằng Kappa test.  KẾT QUẢ  Đặc  điểm  chung  về  tuổi  và  giới  tính  của  quần thể nghiên cứu  ‐  Bệnh  gặp  ở  nam  tương  đương  ở  nữ  (79  nam và 77 nữ). Tỉ lệ nam/nữ: 1/1.  ‐ Tuổi trung bình: 36 tuổi; ≤15 tuổi: 20%; >15  tuổi: 80%.   Tỉ lệ HLA‐DR âm tính trong các phân nhóm  của BCCDT  Ghi  nhận  36/156  (23%)  ca  BCCDT  có  HLA‐ DR âm tính.   Bảng 1: Sự hiện diện của HLA‐DR trong các phân nhóm BCCDT theo tiêu chuẩn phân lọai FAB.  Chun Đề Truyền Máu – Huyết Học  127 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013  Nghiên cứu Y học FAB Sự biểu HLA-DR M0 M1 M2 M3 Mono M6 M7 n (%) n (%) n (%) n (%) n (%) n (%) n (%) HLA-DR (─) (n=36) (33) (0) 13 (15) 17 (94) (4) (25) (50) HLA-DR (+) (n=120) (67) 10 (100) 72 (85) (6) 28 (96) (75) (50) Tổng số (100) 10 (100) 85 (100) 18 (100) 29 (100) (100) (100) Nhận xét: Đặc điểm HLA‐DR âm tính trong  BCCDT gặp nhiều nhất ở phân nhóm M3 (94%  M3).  Tỉ  lệ  HLA‐DR  âm  tính  có  t(15;17)  và/hoặc  PML‐RARA.   Trong  36  ca  BCCDT  với  HLA‐DR  âm  tính,  ghi  nhận  17  ca  (47%)  có  t(15;17)  và/hoặc  PML‐ RARA.   Bên cạnh đó, ghi nhận được 1 ca BCCDT với  HLA‐DR  dương  tính  có  biểu  hiện  t(15;17)  và  PML‐RARA.  Chúng  tôi  tiến  hành  so  sánh  kết  quả  DAMD  và  tủy  đồ  với  kết  quả  SHPT  (FISH/PCR) của 156 ca trong nghiên cứu (Bảng2  và bảng3).  Bảng 2: So sánh sự đồng thuận giữa kết quả DAMD  với kết quả SHPT  KQDAMD KQ SHPT BCCDT-M3 t(15;17)/ PML-RARA BCCDT- Tổng khác M3 cộng Phân tích kiểu hình của 18 ca BCCDT‐M3 có  t(15;17) và/hoặc PML‐RARA, ghi nhận:  * Tỉ lệ quần thể bất thường trong mẫu khảo  sát: trung bình 85 ± 11% (56 ‐ 95%).  Đặc điểm CD45 và SSC  ‐  100%  BCCDT‐M3  có  nồng  độ  biểu  hiện  CD45 trung bình.  ‐ Đặc điểm SSC: 78% có SSC trải dài từ thấp  tới  cao,  tương  ứng  BCCDT‐M3  dạng  nhiều  hạt  (APL); 22% có SSC thấp, tương ứng BCCDT‐M3  dạng ít hạt (APLv).  Sự  hiện  diện  của  các  kháng  nguyên  (KN)  non  Bảng 4: Sự phân bố mật độ dương tính với các KN  non  Mật độ dương tính với KN HLA-DR CD34 CD117 n (%) n (%) n (%)