Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm so sánh hiệu quả phân lập vi khuẩn (VK) kị khí của 4 phương pháp nuôi cấy VK kị khí hiện nay tại Bệnh viện Hữu nghị Việt Đức. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Tạp chí y - dợc học quân số 5-2017 SO SÁNH HIỆU QUẢ PHÂN LẬP VI KHUẨN KỊ KHÍ CỦA BỐN PHƯƠNG PHÁP NI CẤY VI KHUẨN KỊ KHÍ TẠI BỆNH VIỆN HỮU NGHỊ VIỆT ĐỨC Nguyễn Thị Vân*; Nguyễn Thái Sơn**; Kiều Chí Thành** TĨM TẮT Mục tiêu: so sánh hiệu phân lập vi khuẩn (VK) kị khí phương pháp ni cấy VK kị khí Bệnh viện Hữu nghị Việt Đức Phương pháp: nghiên cứu mô tả tiến cứu Kết quả: tỷ lệ mọc VK kị khí phương pháp sử dụng hệ thống Whitley anaerobic Workstations 26,1%, phương pháp tạo khí trường phản ứng hóa học 14,2%, phương pháp dùng túi Genbag anaer 13,0% phương pháp dùng hệ thống ANOXOMAT 12,1% Tỷ lệ mọc VK kị khí phương pháp sử dụng hệ thống Whitley anaerobic Workstations cao 2,14 lần phương pháp tạo khí trường phản ứng hóa học (OR: 2,14; 95%CI: 1,37 - 3,32); 2,36 lần phương pháp dùng túi Genbag anaer (OR: 2,36; 95%CI: 1,50 - 3,72) 2,56 lần phương pháp dùng hệ thống ANOXOMAT (OR: 2,56; 95%CI: 1,62 - 4,07) Kết luận: hệ thống Whitley anaerobic Workstations cho tỷ lệ phân lập VK kị khí cao so với ba phương pháp lại * Từ khóa: Vi khuẩn kị khí; Phân lập; Phương pháp nuôi cấy Comparison of the Efficiency of Four Current Anaerobic Culture Methods in Vietduc Hospital Summary Objectives: To compare the efficiency of different current methods on anaerobic culture in Vietduc Hospital Methods: Prospective descriptive study Results: The anaerobic growth rate of Whitley anaerobic Workstations method was 26.1%; the method creating atmosphere by chemical reactions was 14.2%; the method using Genbag anaer was 13.0% and the method using ANOXOMAT system was 12.1% The microbial growth rate of Whitley anaerobic Workstations method was 2.14 times more than that of the chemical reaction-based method (OR: 2.14; 95%CI: 1.37 - 3.32); 2.36 fold higher than Genbag anaer method (OR: 2.36; 95%CI: 1.50 - 3.72) and 2.56 times greater than ANOXOMAT method (OR: 2.56; 95%CI: 1.62 - 4.07) Conclusion: Whitley anaerobic Workstations method has the highest anaerobic growth rate in comparison with the other three methods * Key words: Anaerobe; Isolation; Culture method ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, việc nuôi cấy VK kị khí phòng xét nghiệm hạn chế chi phí cao, kỹ thuật phức tạp Với tỷ lệ nhiễm khuẩn khơng nhỏ VK kị khí, hậu nghiêm trọng tình hình kháng kháng sinh ngày gia tăng, ni cấy VK kị khí phải xét nghiệm thường quy phòng xét nghiệm vi sinh [3, 6] * Bệnh viện Hữu nghị Việt Đức ** Bệnh viện Quân y 103 Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Thị Vân (dchkc76v@gmail.com) Ngày nhận bài: 10/02/2017; Ngày phản biện đánh giá báo: 24/04/2017 Ngày báo ng: 22/05/2017 130 Tạp chí y - dợc học quân sù sè 5-2017 Hiện nay, phương pháp tạo khí trường kị khí ứng dụng Bệnh viện Hữu Nghị Việt Đức: phương pháp tạo khí trường phản ứng hóa học; phương pháp dùng túi Genbag anaer (BioMerieux), phương pháp tạo khí trường hệ thống ANOXOMAT (Đức) gần phương pháp sử dụng hệ thống Whitley anaerobic Workstations (Anh) khép kín Các sở bắt đầu tìm hiểu chuẩn bị triển khai ni cấy VK kị khí thường lúng túng việc chọn phương pháp thiết bị phù hợp Để góp phần hỗ trợ cung cấp thông tin cho sở triển khai ni cấy VK kị khí, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài với mục tiêu: So sánh hiệu phân lập VK kị khí phương pháp ni cấy VK kị khí ứng dụng Bệnh viện Hữu nghị Việt Đức - Các chất hóa học cần thiết để tạo khí trường: - 10% CO2, - 10% H2, 80% N2 như: axít sulphuric, axít citric, kẽm, nước chất xúc tác ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU + Vận chuyển bệnh phẩm: bệnh phẩm sau lấy chuyển đến khoa vi sinh sớm có thể, vòng 60 phút vận chuyển bệnh phẩm xi lanh, vận chuyển bệnh phẩm môi trường chuyên dụng BAYK, thời gian vận chuyển không 24 Đối tượng nghiên cứu Các loại bệnh phẩm mủ lấy ổ áp xe gan, não, thận bệnh phẩm dịch ổ bụng nhiễm trùng ổ bụng có biến chứng như: viêm phúc mạc ruột thừa, thấm mật phúc mạc Vật tư trang thiết bị nghiên cứu - Môi trường nuôi cấy: canh thang, thạch máu, thạch Mac-conkey (Hãng Oxoid), thạch máu Columbia, vitamin K, hemin (Hãng BD) - Hệ thống ANOXOMAT (Đức) bình ni cấy kị khí đồng với hệ thống - Hệ thống Whitley anaerobic Workstations; model: DG250 (Anh Quốc) - Bình khí trộn gồm: 10% CO2, 10% H2, 80% N2 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu mô tả tiến cứu * Kỹ thuật tiến hành: - Lấy vận chuyển bệnh phẩm: + Mẫu bệnh phẩm: mủ dịch ổ bụng + Lượng bệnh phẩm: yêu cầu lấy ml (tốt - 10 ml) bệnh phẩm - Các bước tiến hành nuôi cấy định danh tìm VK kị khí: + Ni cấy mẫu bệnh phẩm mủ, dịch ổ bụng đồng thời phương pháp khác Sau tiến hành phân lập, định danh thử nghiệm kháng sinh đồ với loại VK kị khí phân lập được: - Các kít định danh: RAPID ID 32 A phần mềm đọc định danh VK túi Genbag anaer (Hãng Bio-Merieux) Phương pháp 1: ni cấy bình MART dung tích lít, có nắp gioăng cao su để vặn chặt nắp, tạo khí trường phản ứng hóa học [1, 2, 3, 4] - Khoanh giấy giấy kháng sinh (Hãng Bio-Merieux) Phương pháp 2: nuôi cấy dùng túi Genbag anaer (Hãng Bio Merieux) Chất 131 Tạp chí y - dợc học quân số 5-2017 liệu túi plastic, dung tích lít, có ghim chặt miệng túi, khí trường tạo túi hóa chất đóng sẵn [3, 5] bình tạo phản ứng hóa học Phương pháp 3: ni cấy bình MART, khí trường từ bình khí trộn (10% CO2, 10% H2 80% N2) đưa vào bình ni cấy qua hệ thống ANOXOMAT (Đức) [2, 5] - Cho đĩa thạch kị khí vào bình ni cấy MART: khí trường kị khí bình đưa vào từ bình khí trộn hệ thống ANOXOMAT Phương pháp 4: nuôi cấy hệ thống Whitley anaerobic Workstations, model: DG250 (Anh Quốc); tủ ấm kín, dung tích 79,6 lít, có vỏ chất liệu acrylic suốt, qua găng tay thao tác xử lý mẫu tủ, khí trường đưa vào từ bình khí trộn (10% CO2, 10% H2 80% N2) hệ thống tự động Có bảng điện từ theo dõi nhiệt độ nồng độ khí tủ [3, 4, 5, 6] * Các bước nuôi cấy VK kị khí: - đĩa thạch kị khí cho vào túi genbag - đĩa thạch kị khí cho vào tủ cấy kị khí Whitley anaerobic Workstations - Ni cấy VK khí đồng thời: ủ ấm đĩa thạch máu thường, đĩa thạch Macconkey khí trường bình thường tủ ấm 370C - Định danh VK kị khí tìm được: sau xác định VK kị khí, tiến hành định danh VK kít định danh ID 32 A (Hãng Bio Merieux) * Phân tích xử lý liệu: - Bệnh phẩm cấy đồng thời đĩa thạch kị khí (trong lít thạch Columbia có 50 ml máu cừu, 2,5 mg haemin mg vitamin K) theo phương pháp phân vùng đĩa thạch máu thường, đĩa thạch Maccokey [5] Nhập làm liệu phần mềm Epidata 3.1, sau xử lý phần mềm STATA 12.0 Trình bày thống kê mô tả dạng tần số (n) tỷ lệ phần trăm (%) Phân tích hồi quy logistic đơn biến để xác định mối tương quan phương pháp nuôi cấy - Cho đĩa thạch kị khí vào bình ni cấy MART: khí trường kị khí Các phép kiểm định, so sánh có ý nghĩa thống kê p < 0,05 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Bảng 1: Phân bố bệnh phẩm mủ dịch sử dụng phương pháp nuôi cấy Bệnh phẩm Phương pháp Phương pháp Phương pháp Phương pháp n % n % n % n % Mủ loại 188 55,5 188 55,5 188 55,5 118 49,6 Dịch loại 151 44,5 151 44,5 151 44,5 120 50,4 339 100 339 100 339 100 238 100 Tổng Tỷ lệ mẫu bệnh phẩm mủ, dịch phương pháp 1, 2, (phương pháp tạo khí trường phản ứng hóa học, phương pháp sử dụng túi genbag phương pháp sử dụng hệ thống ANOXOMAT) Phương pháp (sử dụng hệ thng Whitley 132 Tạp chí y - dợc học quân sù sè 5-2017 anaerobic Workstations), số bệnh phẩm mủ dịch ni cấy Sự khác nghiên cứu chia giai đoạn, kinh phí khơng đủ để thực song song phương pháp Tuy nhiên, đối tượng nghiên cứu VK kị khí có mặt mẫu bệnh phẩm mủ dịch, nên khơng có thay đổi đáng kể tính chất sinh học VK sau năm Nghiên cứu đánh giá hiệu ni cấy VK kị khí sử dụng phương pháp khác yếu tố tỷ lệ mọc VK tỷ lệ loại VK kị khí mọc Bảng 2: So sánh khả mọc VK kị khí phương pháp Bệnh phẩm Bệnh phẩm mọc VK kị khí Bệnh phẩm khơng mọc VK kị khí Số lượng Tỷ lệ (%) Số lượng Tỷ lệ (%) Phương pháp 62 26,1 176 73,9 Phương pháp 48 14,2 291 85,8 Phương pháp 62 26,1 176 73,9 Phương pháp 44 13,0 295 87,0 Phương pháp 62 26,1 176 73,9 Phương pháp 41 12,1 298 87,9 So sánh phương pháp (hệ thống Whitley anaerobic Workstations) với phương pháp lại thấy: tỷ lệ mọc VK kị khí phương pháp 26,1% Trong đó, tỷ lệ mọc phương pháp 1, 2, (phương pháp tạo khí trường phản ứng hóa học, phương pháp sử dụng túi genbag phương pháp sử dụng hệ thống ANOXOMAT) 14,2%; 13,0% 12,1% So sánh tỷ lệ mọc phương pháp với hai phương pháp lại thấy, tỷ lệ mọc VK kị khí phương pháp cao 2,14 lần so với phương pháp OR (95%CI) 2,14 1,37 - 3,32 2,36 1,50 - 3,72 2,56 1,62 - 4,07 (OR: 2,14; 95%CI: 1,37 - 3,32) Tỷ lệ mọc VK kị khí phương pháp cao 2,36 lần tỷ lệ mọc VK kị khí phương pháp (OR: 2,36; 95%CI: 1,50 - 3,72); tỷ lệ mọc VK kị khí phương pháp cao 2,56 lần tỷ lệ mọc VK kị khí phương pháp (OR: 2,56; 95%CI: 1,62 - 4,07) Khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Như vậy, tổng số mẫu nuôi cấy phương pháp (hệ thống Whitley anaerobic Workstations) phương pháp 1, 2, tỷ lệ mẫu bệnh phẩm mọc VK kị khí lại cao Bảng 3: Các chủng VK kị khí phân lập từ bệnh phẩm mủ, dịch VK kị khí Phương pháp Phương pháp Phương pháp Phương pháp n % n % n % n % Bacteroides spp 24 48,0 22 47,8 19 44,2 25 30,1 Prevotella spp 10,0 10,9 16,3 14 16,9 Clostridium 6,0 4,3 4,7 11 13,3 Gemella 4,0 4,3 4,7 3,6 133 T¹p chí y - dợc học quân số 5-2017 Fusobacterium spp 0 0 0 2,4 Propionibacterium 11 22,0 10 21,7 20,9 9,7 Actinomyces 2,0 2,2 2,3 3,6 Micromonas micros 2,0 2,2 2,3 10,8 Các loại khác 6,0 6,5 4,7 9,6 50 100 46 100 43 100 83 100 Tổng Bacteroides spp VK kị khí phân lập nhiều chiếm tỷ lệ cao Kết phù hợp với nghiên cứu công bố giới [3] nước [2] Khơng có khác biệt tỷ lệ B fragilis mọc phương pháp sử dụng khác nhau, có khác biệt chủng loại VK kị khí khác như: Prevotella spp, Clostridium, Fusobacterium spp, Micromonas micros… Phương pháp (hệ thống Whitley anaerobic Workstations) hệ thống kín nên tránh tối đa thời gian tiếp xúc với khơng khí, đảm bảo cho loại VK khó mọc tồn nên số lượng loại VK kị khí Prevotella spp, Clostridium, Fusobacterium spp, Micromonas micros mọc môi trường nuôi cấy hệ thống KẾT LUẬN Qua nghiên cứu, rút kết luận: hệ thống Whitleyanaerobic Workstations cho tỷ lệ phân lập VK kị khí cao so với phương pháp lại: phương pháp tạo khí trường phản ứng hóa học, phương pháp sử dụng túi genbag phương pháp sử dụng hệ thống ANOXOMAT TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Thiều Hoa Phương pháp nuôi cấy phân loại VK kị khí cho phòng xét nghiệm khơng chun Luận án Tiến sỹ Y học Trường Đại học Huboldt Berlin 1988 134 Lê Thiều Hoa Kết nuôi cấy phân lập 632 bệnh phẩm tìm VK kị khí Khoa Vi sinh, Bệnh viện Hữu Nghị Việt Đức từ 30 - 12 - 1992 đến - 10 - 1995 Tạp chí Y học Thực hành 1996, 11, tr.17-19 Sutter V.L, Citron D.M, Finegold S.M Wadsworth anaerobic bacteriology manual Ed 3, St Louis Toronto London 1980 Kenneth J Ryan C George Ray.Sherris th Medical microbiology edition pp.326-349 Lynne S Garcia Clinical microbiology procedures handbook 2016, fourth edition, section 2, section 4, section Bailay and Scott’s Diagnostic Microbiology Chapter 22: anaerobes of clinical th important 2015, 13 edition pp.495-528 ... sở triển khai ni cấy VK kị khí, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài với mục tiêu: So sánh hiệu phân lập VK kị khí phương pháp ni cấy VK kị khí ứng dụng Bệnh vi n Hữu nghị Vi t Đức - Các chất... nay, phương pháp tạo khí trường kị khí ứng dụng Bệnh vi n Hữu Nghị Vi t Đức: phương pháp tạo khí trường phản ứng hóa học; phương pháp dùng túi Genbag anaer (BioMerieux), phương pháp tạo khí trường... đánh giá hiệu ni cấy VK kị khí sử dụng phương pháp khác yếu tố tỷ lệ mọc VK tỷ lệ loại VK kị khí mọc Bảng 2: So sánh khả mọc VK kị khí phương pháp Bệnh phẩm Bệnh phẩm mọc VK kị khí Bệnh phẩm