Mục đích nghiên cứu nhằm tìm hiểu sự biểu hiện của kháng nguyên P53 đối với giải phẫu bệnh, lâm sàng, hình ảnh học trên bệnh nhân u ác tính vùng mũi xoang. Nghiên cứu thực hiện tại 41 trường hợp u ác tính vùng mũi xoang được phẫu thuật tại Bệnh viện Chợ Rẫy từ tháng 10/2010 đến tháng 3/2012.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT LÂM SÀNG VÀ HĨA MƠ MIỄN DỊCH P53 TRÊN BỆNH NHÂN U ÁC TÍNH VÙNG MŨI XOANG Nguyễn Văn Minh*, Lâm Huyền Trân**, Hứa Thị Ngọc Hà*** TĨM TẮT Mục đích nghiên cứu: Nhằm tìm hiểu biểu kháng nguyên p53 giải phẫu bệnh, lâm sàng, hình ảnh học bệnh nhân u ác tính vùng mũi xoang Phương pháp nghiên cứu: 41 trường hợp u ác tính vùng mũi xoang phẫu thuật Bệnh viện Chợ Rẫy từ tháng 10/2010 đến tháng 3/2012 Sau nghiên cứu hóa mơ miễn dịch p53 Kết quả: Tỷ lệ dương tính kháng nguyên p53 u ác tính vùng mũi xoang 34,1%, p53(1+) 17,1%, p53(2+) 4,8%, p53(3+) 12,2% p53 âm tính 65,9% u ác tính vùng mũi xoang có nhiều loại u ác như: u nguyên bào thần kinh, lymphôm lan tỏa tế bào to dòng B, sarcơm, carcinơm tuyến dạng nang carcinơm tuyến biệt hóa Kết luận: Tỷ lệ dương tính p53 với yếu tố nguy cơ, với vị trí giải phẫu học khối u, với hạch di căn, với giai đoạn lâm sàng, với loại mơ học Có tương quan hóa mơ miễn dịch P53 u ác tính vùng mũi xoang tương quan khơng chặt chẽ Do đó, hóa mơ miễn dịch P53 khơng có ý nghĩa u ác tính vùng mũi xoang Riêng với u ác tính vùng mũi xoang có giải phẫu bệnh vi thể carcinôm tế bào gai hóa mơ miễn dịch P53 có ý nghĩa dù carcinơm tế bào gai biệt hóa mức độ Từ khóa: Đột biến, u ác tính vùng mũi xoang ABSTRACT CLINICAL STUDY AND IMMUNOHISTOCHEMISTRY P53 IN PATIENTS WITH MALIGNANCIES OF THE NOSE AND PARANASAL SINUSES Nguyen Van Minh, Lam Huyen Tran, Hua Thi Ngoc Ha * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - Supplement of No - 2013: 79 - 84 Objective: Study the expression of p53 in immunohistochemistry, clinical and imaging findings, in patients with the malignancies of the nose and paranasal sinuses Materials and Methods: 41 cases of malignancies of the nose and paranasal sinuses were operated at Cho Ray Hospital from 10/2010 to 3/2012 Immunohistochemistry was done to investigate the expression of p53 Results: The expression of p53 was 34.1% in the total specimens, in which p53(1 +) was 17.1%, p53 (2 +) was 4.8%, p53 (3 +) was 12.2% and negative p53 was 65.9% Malignancies of the nose and paranasal sinuses have many kinds of histopathology: cancer of nerve cell, diffuse B cell lymphoma, sarcoma, adenoid cystic carcinoma and undifferentiated adenocarcinomas Conclusion: The positive rate of p53 with risk factors, with the anatomical location of the tumor, lymph nodes, with clinical stage, with histological type Correlation between immunohistochemistry P53 and malignancies of the nose and paranasal sinuses are not closely correlated Therefore, immunohistochemistry P53 was insignificant in the cancer of the nose and paranasal sinuses except there was a significant expression of P53 * BV Điều Dưỡng PHCN- ĐTBNN, TP HCM ** Bộ môn Tai Mũi Họng Đại học Y Dược TP HCM *** Bộ môn Giải Phẫu Bệnh - Đại học Y Dược TP HCM Tác giả liên lạc: BS Nguyễn Văn Minh ĐT: 0908368385 Email: bsnguyenminh@yahoo.com.vn Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng 79 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 in differentiated squamous cell carcinoma Keywords: Mutant, malignancies of the nose and paranasal sinuses dịch p53 thực máy nhuộm tự ĐẶT VẤN ĐỀ động hãng Ventana (Mỹ) U ác tính vùng mũi xoang bệnh nguy Đánh giá kết nhuộm hóa mơ miễn dịch p53: hiểm, ngun nhân bệnh sinh chưa rõ ràng dù Được xác định dương tính nhân tế bào bắt có điều trị ảnh hưởng đến chất màu nâu Mức độ dương tính đánh giá dựa lượng sống, gặp chiếm tỷ lệ 1/200.000 tỉ lệ % số tế bào bướu nhuộm dương tính dân/năm, 1% ung thư toàn thân, 3% ung thư tổng số tế bào bướu Tỉ lệ tính đường hơ hấp trên, khả xâm lấn vào cách đếm số tế bào bướu nhuộm dương quan lân cận nội sọ nguy gây tử vong cao tính tổng số tế bào bướu vi trường Khó phát giai đọan sớm cần kết hợp lâm (x200) Thang điểm đánh giá biểu p53 sàng, nội soi, hình ảnh học, giải phẫu bệnh chia sau: hóa mơ miễn dịch(2,3) Cho đến nay, có nhiều Bảng 1: Thang điểm đánh giá biểu p53 cơng trình nghiên cứu hóa mơ miễn dịch p53 Âm tính Dương tính mơ khác Tuy nhiên việc ứng dụng P53 ▬ + ++ +++ hóa mơ miễn dịch nghiên cứu u ác tính 11- 30% 31- 50% 51- 100% % 0-10% vùng mũi xoang chưa có nhiều Riêng Việt Nam nghiên cứu theo hướng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU bước đầu Vì vậy, nghiên cứu tiến Qua nghiên cứu chúng tơi thu kết hành nhằm tìm hiểu đặc điểm biểu p53 sau: mối tương quan với lâm sàng hình ảnh học ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu thực 41 trường hợp phẫu thuật Bệnh viện Chợ Rẫy trong, thời gian 10/2010 – 3/2012 Bệnh nhân có đầy đủ xét nghiệm tiền phẫu, nội soi, CT Scan, xét nghiệm hóa mơ miễn dịch p53 Tuổi bệnh nhân (trung bình 50,37 ± 16,8) GPB vi thể 17 bệnh nhân (41,4%) carcinôm tb gai, 18 bn (44%) bệnh nhân bị carcinôm tuyến bệnh nhân (14,6%) lại: Melanoma bệnh nhân, u nguyên bào thần kinh bệnh nhân, Lymphoma lan tỏa tế bào to dòng B gặp bệnh nhân, Sarcoma khơng biệt hóa có bệnh nhân sarcoma sụn bệnh nhân Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành theo phương pháp mô tả cắt ngang Các bệnh phẩm sau phẫu thuật u ác tính vùng mũi xoang quan sát mô tả vị trí, kích thước, sau phẫu tích lấy bệnh phẩm từ vùng tổn thương cố định dung dịch formol buffer 10% gửi cho Bộ môn giải phẫu bệnh vòng 24 h Nhuộm hóa mơ miễn dịch p53 với kháng thể đơn dòng chuột (BP53 – 11) hãng Ventana cho mẫu mô cố định formol đệm trung tính vùi paraffin Quy trình nhuộm hóa mơ miễn 80 Biểu đồ 1: Giải phẫu bệnh Hóa mơ miễn dịch P53 Trong nghiên cứu chúng tơi: 27 trường hợp (65,9%) âm tính với protein P53, có 14 bệnh nhân (34,1%) lại cho kết dương tính với protein P53 P53 (1+) có bệnh nhân Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 (17,1%), P53 (2+) có bệnh nhân (4,8%) P53 (3+) có bệnh nhân (12,2%) Nghiên cứu Y học carcinôm tế bào gai nhóm P53 (+) cao tỉ lệ lô nghiên cứu (Biểu đồ 3), nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Bảng3: So sánh di hạch Hạch (-) Hạch (+) Tổng U hốc mũi 28 13 41 Car tế bào gai 11 17 P53 (+) 14 Biểu đồ 2: Hóa mơ miễn dịch P53 Đối chiếu vi thể hóa mơ miễn dịch (P53) Bảng 2: Đối chiếu vi thể hóa mơ miễn dịch P53 Bệnh lý P53 Melanoma U nguyên bào thần kinh Lymphôm lan tỏa tế bào to dòng B Carcinơm tế bào gai biệt hóa Carcinơm tế bào gai biệt hóa vừa Sarcơm khơng biệt hóa Sarcơm sụn Carcinơm bọc dạng tuyến 15 Carcinơm tuyến biệt hóa vừa Tổng 27 0 + 0 + 0 + Tổng 1 0 2 11 0 0 0 0 15 0 41 Nhận xét: Trong nghiên cứu chúng tơi: 17 bệnh nhân (27,9%) có giải phẫu bệnh carcinơm tế bào gai có 14 bệnh nhân (82,4%) dương tính với protein P53, có 17 bệnh nhân bị carcinơm tế bào gai khơng dương tính với protein P53 bệnh nhân carcinôm tế bào gai biệt hóa vừa Các dạng u ác tính vùng mũi xoang dạng khác (kể carcinơm tuyến) âm tính với protein P53 So sánh mẫu nghiên cứu với nhóm carcinơm tế bào gai nhóm p53 (+) So sánh di hạch Số bệnh nhân có hạch khơng có hạch mẫu nghiên cứu (u ác tính vùng mũi xoang loại gồm 41 bệnh nhân), nhóm carcinơm tế bào gai gồm 17 bệnh nhân nhóm P53 (+) có 14 bệnh nhân (Bảng 3) Tỉ lệ hạch nhóm Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng Biểu đồ 3: So sánh di hạch So sánh tổn thương chỗ Bảng4: So sánh tổn thương chỗ Thượng tầng Trung tầng Cả Tổng U hốc mũi 9 23 41 Car tế bào gai 10 17 P53 (+) 14 Biểu đồ 4: So sánh tổn thương chỗ Nhận xét: Theo bảng cho xem số bệnh nhân có tổn thương thượng tầng hay trung tầng thượng tầng trung tầng mẫu nghiên cứu (u ác tính vùng mũi xoang gồm 41 bệnh nhân), nhóm carcinơm tế bào gai gồm 17 bệnh nhân nhóm P53 (+) có 14 bệnh nhân Biểu đồ cho xem tỉ lệ đối tượng trên, nhận thấy tỉ lệ có chênh chút khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 81 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học Nhận xét: Trong nghiên cứu gồm 41 bệnh nhân bị u ác tính vùng mũi xoang với nhiều dạng ung thư khác Chúng tơi ghi nhận có 24 bệnh nhân bị u ác tính vùng mũi xoang khơng phải carcinơm tế bào gai âm tính với P53, bệnh nhân bị carcinơm tế bào gai biệt hóa vừa âm tính với p53, 14 bệnh nhân bị carcinơm lại dương tính với protein P53 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (χ2 = 30,1; p = 0.001) Chúng tơi ghi nhận có mối tương quan carcinôm tế bào gai protein P53 với hệ số tương quan r = 0,86, mối tương quan thuận với mức độ tương quan chặt So sánh tổn thương xâm lấn Bảng 5: So sánh tổn thương xâm lấn Không Mắt Não Cả Tổng U hốc mũi 27 41 Car tế bào gai 11 17 P53 (+) 14 BÀN LUẬN Bảng 6: So sánh tỷ lệ P53 tác giả khác Biểu đồ 5: So sánh tổn thương xâm lấn Nhận xét: Bảng cho xem số bệnh nhân có tổn thương xâm lấn mẫu nghiên cứu (u ác tính vùng mũi xoang gồm 41 bệnh nhân), nhóm carcinơm tế bào gai gồm 17 bệnh nhân nhóm P53 (+) có 14 bệnh nhân Biểu đồ cho xem tỉ lệ đối tượng trên, nhận thấy tỉ lệ có chênh chút nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0.05) Tương quan u ác tính vùng mũi xoang hóa mơ miễn dịch CÁC TÁC GIẢ (1) Anwar cs (10) Suzuki cs (4) Fouret cs (9) Salam cs (11) Tan cộng (7) Fracchiola cs (5) Lê Nguyên Hòa Chúng tơi Năm 1993 1994 1995 1995 1997 1999 2011 2012 Quốc gia Nhật Bản Nhật Bản Pháp Mỹ Mỹ Ý Việt Nam Việt Nam P53 (+) P53 (-) 28 (65,1%) 15 (34,9%) 23 (62,2%) 14 (37,8%) 31 (54,4%) 26 (45,6%) 50 (57,5%) 47 (42,5%) 38 (42,2%) 52 (57,8%) 26 (52%) 24 (48%) 24 (61,5%) 15 (37,5%) 14 (82,3%) (17,7%) Nhìn chung, lơ nghiên cứu chúng tơi ghi nhận tỉ lệ tương đối cao biểu protein p53 u ác tính vùng mũi xoang so với tác giả khác Biểu đồ 6: So sánh tương quan u ác tính vùng mũi xoang hóa mô miễn dịch Bảng 7: Phân bố tỉ lệ p53 với loại carcinôm tế bào gai tác giả Loại mơ học Hóa mơ miễn dich p53 Các nghiên cứu Nghiên cứu Anwar cs (1) (1993) 82 p53(-) p53(1+) p53(2+) p53(3+) Carcinôm tế bào gai Carcinôm tế bào Carcinơm tế bào biệt hóa cao gai biệt hóa vừa gai biệt hóa (53,4%) (13,3%) (13,3%) (20%) (21,1%) (31,5%) (26,3%) (21,1%) (33,3%) (33,3%) (22,2%) (11,1%) Tổng 15 11 Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Các nghiên cứu Loại mơ học Hóa mơ miễn dich p53 Nghiên cứu Lê Ngun Hòa (5) (2011) Chúng tơi (2012) Carcinôm tế bào gai Carcinôm tế bào Carcinôm tế bào biệt hóa cao gai biệt hóa vừa gai biệt hóa Tổng p53(-) p53(1+) p53(2+) p53(3+) Tổng p53(-) p53(1+) p53(2+) p53(3+) Tổng 15 (30%) (20%) (30%) (20%) 10 0 0 Qua nghiên cứu trên, nhận thấy u ác tính vùng mũi xoang hóa mơ miễn dịch p53 dương tính âm tính Tuy nhiên, nghiên cứu chúng tơi, đưa vào tất dạng vi thể khối u như: carcinôm tế bào gai, carcinôm tuyến, Melanôm, u nguyên bào thần kinh, Lymphôm lan tỏa tế bào to dòng B, Sarcơm khơng biệt hóa sarcơm sụn Trong u ác tính vùng mũi xoang, khối u mang chất vi thể carcinôm tế bào gai p53 đóng vai trò quan trọng chẩn đốn có giá trị tiên lượng điều trị Hóa mơ miễn dịch p53 Trong nghiên cứu chúng tơi có 27 trường hợp (65,9%) âm tính với protein P53, 14 bệnh nhân (34,1%) lại cho kết dương tính với protein P53, P53 (1+) có bệnh nhân (17,1%), P53 (2+) có bệnh nhân (4,8%) P53 (3+) có bệnh nhân (12,2%) Bảng 8: Phân bố u ác tính chung protein p53 Năm Tổng p53(-) số Anwar 1993 43 15 (1) c.s (34,9%) Lê Nguyên 2011 39 15 (5) Hòa (38,4%) Chúng 2012 41 27 (65,9%) Tác giả p53(1+) p53(2+) p53(3+) 11 (25,6%) (20,9%) (18,6%) 5 14 (12,8%) (12,8%) (39,9%) (17,1%) (4,8%) (12,2%) So sánh kết nghiên cứu tác giả Anwar cộng (1993)(1) tác giả Lê Ngun Hòa (2011)(5) có khác biệt lớn hóa mơ miễn dịch p53 Tuy nhiên, lô nghiên cứu vi thể toàn Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng Nghiên cứu Y học 19 12 (44,4%) (3,7%) (7,4%) 12 (44,4%) 27 (27,2%) (18,2%) (18,2%) (36,4%) 11 (100%) 0 (83,3%) (16,6%) Tổng 43 15 5 14 39 17 u ác tính vùng mũi xoang, riêng tác giả nghiên cứu carcinôm tế bào gai u ác tính Do đó, tách mẫu nghiên cứu carcinơm tế bào gai mà thơi, chúng tơi lập bảng so sánh sau: Bảng 9: Phân bố tỉ lệ protein p53 BN carcinôm tế gai tác giả Năm Tổng p53(-) số Anwar 1993 43 15 (1) cs (34,9%) Lê 2011 39 15 Nguyên (38,4%) (5) Hòa Chúng tơi 2012 17 (17,6%) Tác giả p53(1+) p53(2+) p53(3+) 11 (25,6%) (20,9%) (18,6%) 5 14(39,9%) (12,8%) (12,8%) (41,1%) (11,8%) (29,5%) Chúng nhận thấy mặt vi thể Carcinôm tế bào gai nhuộm hóa mơ miễn dịch p53 kết gần tương đương cơng trình nghiên cứu KẾT LUẬN Tỷ lệ dương tính kháng nguyên p53 u ác tính vùng mũi xoang 34,1%, p53(1+) 17,1%, p53(2+) 4,8%, p53(3+) 12,2% p53 âm tính 65,9% u ác tính vùng mũi xoang có nhiều loại u ác như: u nguyên bào thần kinh, lymphoma lan tỏa tế bào to dòng B, sarcoma, carcinơm tuyến dạng nang carcinơm tuyến biệt hóa Biểu p53 u ác tính vùng mũi xoang khơng liên quan đến tuổi, giới tính, thói quen hút thuốc uống rượu, vị trí ung thư, kích thước bướu, kích thước hạch, giai đoạn lâm sàng 83 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Sự tương quan Hóa mơ miễn dịch P53 u ác tính vùng mũi xoang tương quan không chặt chẽ Do đó, hóa mơ miễn dịch P53 khơng có ý nghĩa u ác tính vùng mũi xoang Nhưng mức độ biểu p53 có liên quan đến loại mơ học khác biệt có ý nghĩa thống kê (χ2 = 30,1; p = 0,001) Chúng ghi nhận có mối tương quan carcinơm tế bào gai protein P53 với hệ số tương quan r = 0,86, mối tương quan thuận với mức độ tương quan chặt Riêng với u ác tính vùng mũi xoang có giải phẫu bệnh vi thể carcinơm tế bào gai hóa mơ miễn dịch P53 có ý nghĩa dù carcinơm tế bào gai biệt hóa mức độ Nghiên cứu chưa đánh giá ý nghĩa dương tính p53, cần nghiên cứu thêm với cỡ mẫu lớn thời gian dài để xác định tỷ lệ tái phát, tỷ lệ sống bệnh nhân u ác tính vùng mũi xoang thời điểm năm, năm, 10 năm để biết p53 dương tính có thực yếu tố tiên lượng xấu hay không 10 11 TÀI LIỆU THAM KHẢO 84 Anwar K, Nakakuki K, Imai H, Naiki H and Inuzuka M (1993) “Over- expression of p53 protein in human laryngeal carcinoma” Int J Cancer, 53, pp.952-956 Fracchiolla NS, Capaccio P, Carboni N, Pagliari AV, Neri A, Ronchett D, Pruner G, Silvotti MG, Pignataro L, Buffa R, Broich G (1999) “Immunohistochemical and molecular analysis of 12 Bax, BCL-2, and p53 genes in laryngeal squamous cell carcinomas “ Anticancer Research, 19, pp.1043-1052 Golusinski W, Olofsson J, Szmeja Z, Szyfter K, Szyfter W Biczysko W, Hemminki K (1997) “Alteration of p53 gen structure and function in laryngeal squamous cell cancer” Eur Arch Otorhinolaryngol, 254, pp 133-137 Hứa Thị Ngọc Hà, Huỳnh Ngọc Linh (2001) “Ứng dụng kỹ thuật hóa mơ miễn dịch chẩn đoán giải phẫu bệnh” Y học TP.HCM, số đặc biệt chuyên đề giải phẫu bệnh, phụ tập 5(4),tr1-8 Lê Nguyên Hòa (2011) Khảo sát biểu p53 ung thư mối tương quan với lâm sàng hình ảnh học Luận án chuyên khoa II, Đại học Y dược TP.HCM Nguyễn Thế Dân, Hà Xuân Nguyên (2007) “Biểu thụ thể Estrogen, Progesteron, gen p53, Ki67, Her-2/Neu ung thư biểu mô tuyến vú”, Y học thành phố Hồ Chí Minh, phụ tập 13, 11(3), tr.106-109 Nguyễn Thị Hồng (2006) Đột biến gen P53 biểu protein p53, MDM2, Ki67, MMP9, ung thư niêm mạc miệng người Việt Na Luận án tiến sĩ Y học, Đại học Y Dược TPHCM Salam M, Rockett J and Morris A (1995) “The prevalence of different human papillomavirus types and p53 mutations in laryngeal carcinomas: is there a reciprocal relationship ?” European Journal of surgical oncology, 21, pp.290-296 Suzuki T, Shidara K, Hara F, Nakajima T (1994) “High frequency of p53 abnormality in laryngeal cancer of heavy smokers and its relation to human papillomavirus infection” Jpn J cancer Res, 85, pp.1087-1093 Tan LKS and Ogden GR (1997) “p53 over-expression in laryngeal carcinoma is not predictive of response to radiotherapy” Oral oncology, 33(3), pp.177-181 Tatemoto Y, Osaki T, Yoneda K, Yamamoto T, Ueta E, Kimura T (1998), “Expression of p53 and p21 proteins in oral squamous cell carcinoma: correlation with lymph node metastasis and response to chemoradiotherapy”, PatholRes Pract, 194, pp 821830 Trịnh Tuấn Dũng, (2007) “Sự biểu kháng nguyên p53, Her-2/Neu ung thư đại trực tràng hóa mô miễn dịch”, Y học TPHCM, chuyên đề giải phẫu bệnh- tế bào học, phụ tập 11 (3), tr 89-94 Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng ... tương quan Hóa mơ miễn dịch P53 u ác tính vùng mũi xoang tương quan khơng chặt chẽ Do đó, hóa mơ miễn dịch P53 khơng có ý nghĩa u ác tính vùng mũi xoang Nhưng mức độ bi u p53 có liên quan đến... Nhìn chung, lơ nghiên c u ghi nhận tỉ lệ tương đối cao bi u protein p53 u ác tính vùng mũi xoang so với tác giả khác Bi u đồ 6: So sánh tương quan u ác tính vùng mũi xoang hóa mơ miễn dịch Bảng... Tổng p53( -) p53( 1+) p53( 2+) p53( 3+) Tổng p53( -) p53( 1+) p53( 2+) p53( 3+) Tổng 15 (30%) (20%) (30%) (20%) 10 0 0 Qua nghiên c u trên, nhận thấy u ác tính vùng mũi xoang hóa mơ miễn dịch p53 dương tính