Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài này được thực hiện với mục tiêu khảo sát đột biến alen STR nhằm tránh nhầm lẫn trong biện luận kết quả liên hệ huyết thống. Nghiên cứu tiến hành trên các trường hợp người Việt Nam đến xét nghiệm DNA huyết thống tại bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TP. HCM từ tháng 4/2010 đến tháng 8/2011. Tất cả các trường hợp xuất hiện với sự khác biệt 1 alen STR giữa cha/con hoặc mẹ/con được ghi nhận và khảo sát về hiện tượng đột biến.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 TỈ LỆ ĐỘT BIẾN ALEN STR QUA GIÁM ĐỊNH HUYẾT THỐNG TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC TP HỒ CHÍ MINH Bửu Mật*, Đặng Thị Tố Linh*, Phạm Thị Mỹ Hạnh*, Bùi Thị Phụng* TÓM TẮT Mục tiêu: Khảo sát đột biến alen STR nhằm tránh nhầm lẫn biện luận kết liên hệ huyết thống Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Các trường hợp người Việt Nam đến xét nghiệm DNA huyết thống bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TP HCM từ tháng 4/2010 đến tháng 8/2011 Tất trường hợp xuất với khác biệt alen STR cha/con mẹ/con ghi nhận khảo sát tượng đột biến Kết quả: Qua khảo sát 9586 alen STR cha mẹ truyền cho con, ghi nhận có 20 trường hợp đột biến Số trường hợp đột biến cha/con cao mẹ/con Sự đột biến xảy 12/15 (80%) loci khảo sát Ở loci THO1, D21S11, Penta D TPOX, không ghi nhận đột biến 95% đột biến xảy với cách biệt step Một trường hợp đột biến có diện alen ẩn Ngồi ra, chúng tơi ghi nhận có trường hợp đột biến với step trường hợp xảy đột biến loci khác CSF1PO D13S1358 Kết luận: Xác suất liên hệ huyết thống tất trường hợp có đột biến đạt từ 99,9% đến >99,99% Điều cho thấy có đột biến (hoặc đột biến), loại bỏ có liên hệ huyết thống Từ khóa: Alen STR, đột biến, tỉ lệ đột biến ABSTRACT MUTATION RATE OF STR ALLELES THROUGH FORENSIC STUDY AT THE BLOOD TRANSFUSION HEMATOLOGY HOSPITAL HCMC Buu Mat, Dang Thi To Linh, Pham Thi My Hanh, Bui Thi Phung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 470 - 473 Objective: Mutation of STR alleles has been studied aiming to avoid errors in DNA parentage assessment Subjects and Methods: The study covers all DNA parentage testings occurred from may 4/2010 to march 8/2011; all cases happening with one inconsistency within STR allele between parents and child were studied for presence of mutation Results: A study of 9586 paternal and maternal allele STR transferring to children, has showed 20 cases of mutation The overall paternal mutation percentage is higher than that of maternal mutation Mutations were observed at 12 among 15 loci studied while there are no mutation at loci THO1, D21S11, Penta D and TPOX 95% of mutation occurred with one step One mutation assumed to be an null allele On the other hand, we have recorded one case of mutation with steps, and one case with mutations at different loci CSF1PO and D13S1358 Conclusion: The probability of paternity in all cases of mutations has been ranged from 99,9% to more than 99,99%; thus allowing us to conclude that we cannot exclude the presence of paternity Keywords: STRs, mutation, mutation rate * Bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TP HCM Tác giả liên lạc: PGS Bửu Mật 470 ĐT: 0918348228 Email: mtbuu245@yahoo.com.au Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 ĐẶT VẤN ĐỀ Truy tìm huyết thống thực năm 1920, với hệ thống kháng nguyên hồng cầu, tiếp sau hệ thống kháng nguyên bạch cầu Ngày nay, với hiểu biết di truyền gen với kỹ thuật sinh học phân tử khảo sát hệ thống STR; chất lượng truy tìm huyết thống từ nâng lên nhiều Ngày nay, tỉ lệ liên hệ huyết thống cha/ hay mẹ/con đạt 99,9999% Tuy nhiên, nhà khoa học giới chứng minh trường hợp có alen khác biệt cha/con mẹ/con tỉ lệ liên hệ huyết thống >99% bao gồm alen liên hệ, trường hợp xác nhận có liên hệ huyết thống; nhà khoa học chứng minh tượng có đột biến xảy giai đoạn phân bào giảm nhiễm (meiosis) trình hình thành phơi thai(2,3) Do đó, nghiên cứu tượng đột biến việc làm quan trọng nhằm khẳng định liên hệ huyết thống để tránh nhầm lẫn loại bỏ liên hệ cha/con hay mẹ/con ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng Tất trường hợp người Việt Nam đến xét nghiệm DNA huyết thống bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TP HCM từ tháng 4/2010 đến tháng 8/2011 Nghiên cứu Y học Genomic DNA kit (Sigma -Mỹ) Xác định lượng DNA tinh với máy quang phổ Ultrospec 5300 pro (Thụy Điển) DNA tinh khuếch đại với kit PowerPlex 16HS system(Error! Reference source not found.) (Promega – Mỹ) kit AmpFl STRRIdentifilerTM (Applied Biosystems - Mỹ) Tiếp theo, tiến hành điện di sản phẩm DNA sau PCR máy giải trình tự gen tự động AB3130 (Applied Biosystems - Mỹ) Kết phân tích phần mềm GeneMapper ID v.3.1 (Applied Biosystems -Mỹ) Chúng chọn trường hợp có khác biệt alen STR cha/con mẹ/con, để khảo sát đột biến KẾT QUẢ Tiến hành khảo sát alen STR D3S1358, TH01, D21S11, D18S51, Penta E, D5S818, D13S317, D7S820, D16S539, CSF1PO, Penta D, vWA, D8S1179, TPOX, FGA, tổng số 9586 alen truyền từ cha sang từ mẹ sang con, chúng tơi nhận thấy có 20 trường hợp có đột biến xảy ra, có 18 trường hợp đột biến cha/con, trường hợp đột biến mẹ/con Trong đó, số trường hợp có nhiều đột biến xảy loci D18S51 FGA (3 trường hợp), loci khác thấp hơn, có loci TH01, D21S11, Penta D, TPOX khơng có trường hợp (Bảng 1) Phương pháp tiến hành Máu tĩnh mạch lấy ống nghiệm EDTA, sau trích DNA với kit DNA QIAGEN (Đức) GenElute Blood Bảng 1: Tỉ lệ đột biến alen đột biến 15 loci STR Loci D3S1358 TH01 D21S11 D18S51 Penta E D5S818 D13S317 D7S820 Số alen cha Số ca đột biến Tỉ lệ đột biến Số alen mẹ truyền cho cha - cha – (%) truyền cho 483 0,207 159 483