Mục tiêu nghiên cứu cả bài viết nhằm đánh giá hình thái phôi nuôi cấy ngày 3 ảnh hưởng đến khả năng hình thành phôi túi và tìm hiểu mối liên hệ giữa chất lượng phôi nuôi cấy ngày 3 và phôi nuôi cấy ngày 5.
TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2015 MỐI LIÊN QUAN GIỮA HÌNH THÁI PHƠI NI CẤY NGÀY VÀ KHẢ NĂNG HÌNH THÀNH PHƠI TÚI, CHẤT LƢỢNG PHÔI TÚI KHI NUÔI CẤY NGÀY TẠI TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ PHƠI, HỌC VIỆN QN Y Dương Đình Hiếu*; Nguyễn Đình Tảo*; Nguyễn Thanh Tùng*; Nguyễn Ngọc Diệp* TĨM TẮT Mục tiêu: đánh giá mối liên hệ đặc điểm hình thái phơi ni cấy ngày ảnh hƣởng đến khả hình thành phơi túi, mối liên hệ chất lƣợng phôi nuôi cấy ngày ngày Đối tượng: 430 phôi nuôi cấy ngày 184 phôi túi nuôi cấy ngày 59 bệnh nhân (BN) làm IVF Trung tâm Công nghệ Phôi, Học viện Quân y Kết quả: tỷ lệ hình thành phơi túi 42,8% Các đặc điểm hình thái phơi nuôi cấy ngày không liên quan đến khả hình thành mà liên quan đến chất lƣợng phơi túi ni cấy ngày Tỷ lệ hình thành phơi túi với phơi có phơi bào nuôi cấy ngày > 70% Trong số 82 phơi túi hình thành từ phơi ni cấy ngày có chất lƣợng tốt, 42 phơi túi có chất lƣợng tốt (51,2%) * Từ khóa: Hình thái phơi ngày 3; Phôi túi; Phôi ngày The Correlation between Day Embryo’s Morphological Characteristics and the Blastocyst Developing Rate, the Quality of Day Embryos at the IVF Center of VMMU Summary Objective: We assessed the correlations between day embryo's morphological features and the quality, developing rate of blastocysts cultured to day Subjects: Research the morphological features of 430 day embryos and 184 day blastocysts of 59 patients indicated IVF treatment at the IVF centre of VMMU Result: The blastocyst developing rate was 42.8% There were the correlations between morphological characteristics of day embryos not only with the developing rate of blastocysts, but also with the quality of blastocysts Day good quality embryos (8 blastomered embryos) had the ability to develop to blastocyst with the rate of over 70% There were 42 good blastocysts in 82 blastocysts forming from day good embryos (51.2%) * Key words: Morphology of day embryo; Blastocyst; Day embryo ĐẶT VẤN ĐỀ Ƣu điểm chuyển phôi túi khả lựa chọn đƣợc phôi có khả phát triển tốt nhất, tiềm làm tổ tối ƣu làm tăng khả thành công kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm giảm nguy đa thai Hơn nữa, việc sinh thiết phôi * Học viện Quân y Ngi phn hi (Corresponding): D-ơng Đình HiÕu (dhieuembryo@yahoo.com) Ngày nhận bài: 28/01/2015; Ngày phản biện đánh giá báo: 10/02/2015 Ngày báo đăng: 04/03/2015 để làm xét nghiệm di truyền giai đoạn phôi túi có nhiều tế bào khơng làm 161 ảnh hƣởng đến sức sống phôi [4] Tuy nhiên, việc ni cấy phơi kéo dài đến TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2015 giai đoạn phôi túi có trở ngại, đặc biệt phơi khơng thể hình thành phơi túi ni cấy ngày 5, dẫn đến nguy khơng có phơi để chuyển Để tìm hiểu mối liên hệ đặc điểm hình thái phôi nuôi cấy ngày ảnh hƣởng đến khả hình thành phơi túi nhƣ chất lƣợng phôi túi tạo thành, tiến hành đề tài nhằm: - Đánh giá hình thái phơi ni cấy ngày ảnh hưởng đến khả hình thành phơi túi - Tìm hiểu mối liên hệ chất lượng phôi nuôi cấy ngày phôi nuôi cấy ngày ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên cứu Đánh giá tiêu chuẩn hình thái 430 phôi nuôi cấy ngày 59 BN có định làm thụ tinh ống nghiệm nuôi cấy phôi kéo dài, chuyển phôi ngày (giai đoạn phôi túi) Trung tâm Công nghệ Phôi, Học viện Quân y * Tiêu chuẩn chọn BN: - Có < phơi có phơi bào nuôi cấy phôi ngày Thời gian tiến hành: 28 - 05 - 2012 đến 01 - 09 - 2013 Phƣơng pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiến cứu, mô tả cắt ngang Áp dụng cơng thức tính cỡ mẫu để ƣớc định tỷ lệ với giá trị lớn nhất, cho kết cần 385 phôi nuôi cấy ngày Trong nghiên cứu này, tiến hành đánh giá hình thái 430 phôi nuôi cấy ngày sang ngày - Các tiêu chuẩn đánh giá chất lƣợng phôi ni cấy theo tiêu hình thái: tất phơi ni cấy áp dụng tiêu chuẩn phân loại hình thái theo Đồng thuận đánh giá chất lƣợng noãn phơi [1, 2] * Tiêu chuẩn đánh giá hình thái phôi nuôi cấy ngày 3: Bảng 1: Phân loại phôi nuôi cấy ngày PHÂN LOẠI Tốt - Tuổi ngƣời vợ ≤ 35 - Có > 10 trứng chọc hút đƣợc - Có phơi có - phôi bào nuôi cấy ngày tỷ lệ phôi tốt ngày tổng số phôi đạt đƣợc > 30% [3, 9] * Tiêu chuẩn loại trừ: - BN > 35 tuổi - Có < 10 nỗn thu đƣợc sau chọc nỗn 162 Trung bình Xấu MƠ TẢ - Phơi có - phơi bào, phơi bào có kích thƣớc tƣơng đối đồng - Tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng < 10% - Phơi có < phơi bào, đa số phơi bào có kích thƣớc tƣơng đối đồng - Tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng 10 - 25% - Các phôi bào có kích thƣớc khơng đồng - Tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng > 25% (Nguồn: Đồng thuận đánh giá chất lượng nỗn phơi [2]) * Tiêu chuẩn đánh giá hình thái phơi ni cấy ngày 5: TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2015 Bảng 2: Phân loại chất lƣợng phơi túi CHẤT LƢỢNG PHƠI TÚI MƠ TẢ Tốt - Phơi có mức độ giãn rộng ≥ - Phân loại ICM TPD: AA, AB, BA Trung bình - Phơi có mức độ giãn rộng ≥ - Phân loại ICM TPD: BB, BC Xấu - Phơi có mức độ giãn rộng < ≥ - Phân loại ICM TPD: AC, CB, CB, CC (Nguồn: Đồng thuận đánh giá chất lượng nỗn phơi [2]) * Phương pháp ni cấy phôi: Theo phƣơng pháp nuôi cấy phôi đơn, môi trƣờng giọt nhỏ, thay môi trƣờng nuôi cấy hàng ngày Phôi đƣợc nuôi cấy sử dụng môi trƣờng nuôi cấy phơi liên tục, giọt mơi trƣờng tích 20 μl, có phủ dầu khống Ovoil Hàng ngày, tiến hành thay môi trƣờng đánh giá chất lƣợng riêng biệt phôi theo tiêu chuẩn phân loại Đồng thuận đánh giá chất lƣợng nỗn phơi [4] * Phân tích xử lý số liệu: số liệu thu thập đƣợc phân tích, so sánh đánh giá kiểm định giả thiết thống kê sử dụng kiểm định χ2 phần mềm SPSS 13.0 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Đặc điểm hình thái phơi ni cấy ngày khả hình thành phơi túi nuôi cấy ngày Tiến hành đo đạc đánh giá đặc điểm hình thái 430 phơi ni cấy ngày 184 phôi nuôi cấy ngày 59 BN, lập bảng 2x2 so sánh đánh giá khác biệt theo tiêu chuẩn hình thái * Mối liên hệ số lượng phôi bào phôi ngày khả hình thành phơi túi: Bảng 3: Khả hình thành phơi túi phơi ni cấy ngày có số phơi bào khác HÌNH THÀNH PHÔI TÚI SỐ LƢỢNG PHÔI BÀO CỦA PHÔI NGàY n - phôi bào 4 phôi bào Số lƣợng % 20 10 phôi bào 76 10,5 phôi bào 108 28 25,9 phôi bào 114 69 60,5 phôi bào 91 65 71,4 phôi bào 11 72,7 10 phôi bào 66,7 430 184 42,8 Tổng (p tính theo kiểm định Fisher’s Exact) 163 p < 0,01 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2015 Tỷ lệ hình thành phôi túi đạt 42,8% (184 phôi túi tổng số 430 phơi ni cấy ngày 3) Có mối liên hệ số lƣợng phôi bào phôi nuôi cấy ngày với khả hình thành phơi túi ni cấy ngày (p < 0,01) Tỷ lệ hình thành phơi túi phơi có - phơi bào nuôi cấy ngày đạt 60 - 70% Kết phù hợp với nghiên cứu Racowsky đánh giá trƣờng hợp có tối thiểu phơi tốt nuôi cấy ngày 3, tiếp tục nuôi cấy đến ngày có phơi chuyển [9] * Mối liên hệ tỷ lệ mảnh vỡ bào tương phơi ni cấy ngày khả hình thành phơi túi: Bảng 4: Khả hình thành phơi túi phôi ngày khác tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng HÌNH THÀNH PHƠI TÚI TỶ LỆ MẢNH VỠ BÀO TƢƠNG CỦA PHÔI NGÀY n 0% p Số lƣợng % 57 46 80,7 - 10% 149 91 61,1 11 - 25% 170 44 25,9 > 25% 54 5,6 Tổng 430 184 42,8 < 0,01 (p tính theo kiểm định χ2) Tỷ lệ hình thành phơi túi > 60% nhóm có < 10% mảnh vỡ bào tƣơng Đặc biệt, tỷ lệ hình thành phơi túi nhóm phơi khơng có mảnh vỡ bào tƣơng nuôi cấy ngày lên tới 80,7% Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Điều cho thấy có mối liên hệ tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng với khả hình thành phơi túi tỷ lệ bình thƣờng nhiễm sắc thể có liên hệ trực tiếp đến hình thành chất lƣợng phôi túi [7, 8] Nghiên cứu gần Braga (2012) Heitmann (2013) khẳng định mối liên hệ chặt chẽ tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng đến khả nuôi cấy tiếp phôi ngày tỷ lệ hình thành phơi túi [3, 6] Tỷ lệ hình thành phơi túi chúng tơi phù hợp với nghiên cứu Tao (2012), Guerif (2011): tỷ lệ hình thành phơi túi từ 44 - 61,2% [5, 10] ngày chất lƣợng phôi túi Số lƣợng phôi bào, tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng phôi ni cấy ngày có vai trò quan trọng việc đánh giá tiềm sống sót, tốc độ phát triển nhƣ 164 Đặc điểm hình thái phơi ni cấy Mục tiêu thứ hai tìm hiểu mối liên hệ đặc điểm hình thái chất lƣợng phôi nuôi cấy ngày chất lƣợng phôi túi * Mối liên hệ số lượng phôi bào đến chất lượng phơi ngày 5: TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2015 Bảng 5: Mối liên hệ số lƣợng phôi bào đến chất lƣợng phơi túi SỐ LƢỢNG PHƠI BÀO CỦA PHƠI NI CẤY NGÀY n 10 28 69 65 Đặc điểm hình thái phơi túi Phân loại độ giãn rộng phơi túi 21 63 63 p 19 159 22 < 0,01 A B C 2 12 10 33 41 11 28 10 p 90 50 < 0,01 A Phân loại nụ phôi 184 Phân loại nuôi TỔNG B C 41 12 46 21 10 p 60 82 20 < 0,01 (p tính theo kiểm định Fisher’s Exact) Có mối liên hệ số lƣợng phôi bào phôi nuôi cấy ngày đến đặc điểm hình thái đặc trƣng phôi túi tiếp tục nuôi cấy đến ngày (p < 0,01) * Mối liên hệ tỷ lệ mảnh vỡ bào tương chất lượng phôi túi: Bảng 6: Mối liên hệ tỷ lệ mành vỡ bào tƣơng phôi nuôi cấy ngày đặc điểm hình thái phơi túi TỶ LỆ MẢNH VỠ BÀO TƢƠNG TỔNG Đặc điểm hình thái phơi túi n 165 0% - 10% 11 - 25% > 25% 46 91 44 184 9 19 33 159 Độ giãn rộng phôi túi p 45 80 < 0,01 184 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2015 Phân loại nuôi A 9 22 B 34 40 16 90 C 33 13 p < 0,05 Phân loại nụ phôi 162 A 30 20 10 B 13 50 18 C 12 p 50 60 82 20 < 0,01 162 (p tính theo kiểm định Fisher’s Exact) Có mối liên hệ tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng phôi ngày đến tốc độ giãn rộng xoang túi phôi 184 phôi túi chất lƣợng nụ phôi nhƣ nuôi 162 phôi túi Chỉ có 162 phơi đánh giá chất lƣợng nụ phơi ni có 22 phơi (có độ giãn rộng túi phôi loại 2) không đánh giá phân loại nụ phơi ni Ngồi ra, xem xét ảnh hƣởng yếu tố đồng phôi bào phơi ni cấy ngày có khác biệt đánh giá liên hệ với khả hình thành chất lƣợng phôi túi tiếp tục nuôi cấy ngày Tỷ lệ hình thành phơi túi nhóm phôi bào đồng 67,4% so với 25,4% nhóm phơi bào khơng đồng * Mối liên hệ chất lượng phôi ngày phôi ngày phân loại theo Đồng thuận đánh giá chất lượng noãn phôi: Bảng 7: Mối liên hệ chất lƣợng phôi nuôi cấy ngày ngày PHÂN LOẠI PHƠI NI CẤY NGÀY Phân loại phơi túi Tốt (n = 119) Trung bình (n = 186) Xấu (n = 125) CỘNG Tốt 42 (51,2%) 18 (23,7%) (3,8%) 61 Trung bình 35 (42,7%) 36 (47,4%) 10 (38,5%) 81 Xấu (6,1%) 22 (28,9%) 15 (57,7%) 42 82 (100%) 76 (100%) 26 (100%) 184 Cộng (p < 0,01, tính theo kiểm định Fisher’s Exact) Có mối liên hệ chất lƣợng phôi nuôi cấy ngày chất lƣợng phôi nuôi cấy ngày phân theo loại: tốt, trung bình xấu, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Trong đó, tỷ lệ hình thành phơi túi có chất lƣợng tốt từ phơi tốt ngày 51,2% Tỷ lệ giảm xuống nhóm phơi ngày có chất lƣợng trung bình xấu lần lƣợt 23,7% 3,8% 166 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2015 KẾT LUẬN Trong tổng số 184 phôi túi đƣợc tạo thành nuôi cấy tiếp tục 430 phôi ngày 59 BN, thấy: - Tỷ lệ hình thành phơi túi đạt 42,8% Khơng có BN khơng có phơi túi để chuyển phơi ngày - Có mối liên hệ số lƣợng phôi bào, tỷ lệ mảnh vỡ bào tƣơng độ đồng phôi bào phơi ni cấy ngày với tỷ lệ hình thành phơi túi tiếp tục ni cấy ngày Ngồi ra, đặc điểm hình thái phơi ni cấy ngày có liên hệ chặt chẽ đến chất lƣợng phôi túi tạo thành TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Viết Tiến, Nguyễn Thị Ngọc Phượng CS Đồng thuận đánh giá phân loại nỗn, phơi hỗ trợ sinh sản Hội Phụ sản khoa sinh đẻ có kế hoạch Việt Nam - VINAGOFPA, Chi hội Y học sinh sản Việt Nam - VSRM 2012 Alpha Scientists in Reproductive Medicine and ESHRE Special Interest Group of Embryology The Istanbul consensus workshop on embryo assessment: proceedings of an expert meeting Human Reproduction 2011, 26 (6), pp.1270-1283 Braga DP, Setti AS, de Cassia S, Figueira R et al Patient selection criteria for blastocyst transfers in extended embryo culture programs J Assist Reprod Genet 2012, 29 (12), pp.1357-1362 David K Gardner, Surrey E, Minjarrez D, Leitz A et al Single blastocyst transfer: a prospective randomized trial Fertil Steril 2004, 81, pp.551-555 Guerif F, Frapsauce C, Chavez C, Cadoret V, Royere D Treating women under 36 years old without top-quality embryos on day 2: a prospective study comparing double embryo transfer with single blastocyst transfer Hum Reprod 2011, 26 (4), pp.775-781 Heitmann RJ, Hill MJ, Richter KS, DeCherney AH, Widra EA The simplified SART embryo scoring system is highly correlated to implantation and live birth in single blastocyst transfers J Assist Reprod Genet 2013, 30 (4): pp.563-567 Hourvitz A, Lerner-Geva L, Elizur SE, Baum M et al Role of embryo quality in predicting early pregnancy loss following assisted reproductive technology Reprod Biomed Online 2006, 13, pp.504-509 Racowsky C, Combelles CM, Nureddin A, Pan Y, Finn A et al Day and day morphological predictors of embryo viability Reprod Biomed Online 2003, (3), pp.323-331 Racowsky C, Jackson KV, Cekleniak NA et al The number of eight-cell embryos is a key determinant for selecting day or day transfer Fertil Steril 2000, 73, 558-564 10 Tao T, Robichaud A, Mercier J, Ouellette R Influence of group embryo culture strategies on the blastocyst development and pregnancy outcome J Assist Reprod Genet 2013, 30 (1), pp.63-68 167 ... (184 phôi túi tổng số 430 phôi nuôi c y ng y 3) Có mối liên hệ số lƣợng phơi bào phơi ni c y ng y với khả hình thành phôi túi nuôi c y ng y (p < 0,01) Tỷ lệ hình thành phơi túi phơi có - phôi. .. mối liên hệ đặc điểm hình thái chất lƣợng phơi ni c y ng y chất lƣợng phôi túi * Mối liên hệ số lượng phôi bào đến chất lượng phôi ng y 5: TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3- 20 15 Bảng 5: Mối liên. .. SPSS 13. 0 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Đặc điểm hình thái phôi nuôi c y ng y khả hình thành phơi túi ni c y ng y Tiến hành đo đạc đánh giá đặc điểm hình thái 430 phôi nuôi c y ng y 184 phôi nuôi