Ứng dụng kỹ thuật PCR phát hiện sự hiện diện của gen sry trong chẩn đoán trước sinh các bệnh lý di truyền

Nghiên cứu nhằm mục tiêu trình bày ứng dụng quy trình PCR chẩn đoán sự hiện diện của gen SRY nằm trên nhiễm sắc thể Y. Nghiên cứu tiến hành DNA của 5 thai nhi được tách chiết từ các mẫu dịch ối của 5 thai phụ có tuổi lớn hơn 40. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số * 2013 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR PHÁT HIỆN SỰ HIỆN DIỆN CỦA GEN SRY TRONG CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH CÁC BỆNH LÝ DI TRUYỀN Nguyễn Thị Băng Sương* TÓMTẮT Mở đầu: Việc điều trị bệnh lý di truyền vấn đề thách thức y học, việc phòng bệnh chẩn đốn trước sinh biện pháp cần thiết có hiệu cao Đối với bệnh di truyền liên kết với giới tính, chẩn đốn giới tính thai nhi đóng vai trò quan trọng q trình chẩn đốn trước sinh Mục tiêu: Ứng dụng quy trình PCR chẩn đốn diện gen SRY nằm nhiễm sắc thể Y Đối tượng phương pháp nghiên cứu: DNA thai nhi tách chiết từ mẫu dịch ối thai phụ có tuổi > 40 Các mẫu dịch ối xét nghiệm nhiễm sắc thể đồ để chẩn đốn thai nhi có mắc hội chứng Down hay khơng Tiến hành kỹ thuật PCR khuếch đại đoạn gen SRY nằm nhiễm sắc thể Y cặp mồi đặc hiệu Sau điện di gel agarose 1,5% để xác định giới tính thai nhi So sánh với kết giới tính xác định nhiễm sắc thể đồ Kết quả: Phát thai nhi có giới tính nam thai nhi có giới tính nữ Kết phù hợp với phân tích nhiễm sắc thể đồ Kết luận: Nghiên cứu ứng dụng thành công kỹ thuật PCR giúp xác định giới tính thai nhi, điều có ý nghĩa thực tiễn chẩn đoán trước sinh bệnh lý di truyền nhiễm sắc thể giới tính Từ khố: chẩn đoán trước sinh, gen SRY, nhiễm sắc thể Y ABSTRACT APPLICATION OF PCR TECHNIQUE FOR IDENTIFICATION OF SRY GENE IN PRENATAL DIAGNOSIS OF GENETIC DISEASES Nguyen Thi Bang Suong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - No - 2013: 38 - 43 Introduction: The treatment of genetic diseases is still a challenge in medicine, then prevention by prenatal diagnosis is necessary and effective For disorders are sex-linked genetic disease, detection of fetal gender is very important in prenatal diagnosis Objective: Application of PCR technique for detection the presence of SRY gene located on Y chromosome Patients and Methods: DNA was extracted from five amniotic fluid samples of five women with age > 40 The amniotic fluid samples were tested to diagnose Down syndrome before by karyotype The SRY gene was amplified with a pair of specific primer After that, PCR products were electrophoresis on agarose gel to determine the sex of fetus Results: fetus are male and the other fetus are female, this result is suitable for the sex of fetus analyzed by karyotype Conclusion: This study applied successfully PCR techniques to determine the sex of fetus, this process is very important in prenatal diagnosis of sex-linked disorders * Bộ mơn Hóa Sinh, Trung Tâm Sinh Học Phân Tử, Khoa Y - Đại học Y Dược TPHCM Tác giả liên lạc: TS BS Nguyễn Thị Băng Sương ĐT: 0914007038 Email: suongnguyenmd@gmail.com 38 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số * 2013 Nghiên cứu Y học Keywords: prenatal diagnosis, SRY gene, Y chromosome nhiều tác giả sử dụng(1) Chúng tiến hành đề ĐẶTVẤNĐỀ tài với mục tiêu: “Ứng dụng quy trình PCR Các bệnh lý di truyền chiếm tỷ lệ chẩn đoán diện gen SRY nằm cao nguyên nhân gây tử vong nhiễm sắc thể Y” thời kỳ sơ sinh Một số bệnh trạng thái dị ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU hợp tử có biểu hồn tồn bình thường, người mang gen kết khả Đối tượng nghiên cứu truyền gen bệnh cho hệ sau với tỷ lệ cao - 20 người bình thường gồm 10 người nam Trường hợp bệnh thuộc dạng di truyền liên kết 10 người nữ dùng làm mẫu đối chứng nam giới tính X (như hemophilia A, hemophilia B, nữ để chuẩn hóa quy trình Mỗi người lấy loạn dưỡng Duchenne,…) tỷ lệ mắc bệnh ml máu tĩnh mạch chống đông EDTA trẻ nam tương đối cao so với nữ cần - mẫu dịch ối năm thai phụ có độ tuổi nhận nhiễm sắc thể X bị đột biến từ người mẹ 40, chọc ối để làm nhiễm sắc thể đồ giúp biểu bệnh, trường hợp chẩn đốn thai nhi có bị hội chứng Down hay người mẹ có kiểu gen dị hợp tử khả khơng Kết nhiễm sắc thể đồ xác định có truyền gen bệnh cho trai 50%(8) Việc điều thai nam thai nữ trị bệnh lý di truyền thách Phương pháp nghiên cứu thức lớn y học Phần lớn bệnh nhân tử vong, để lại hậu nặng nề cho gia đình Kỹ thuật tách chiết ADN từ máu ngoại vi và xã hội Hiện nay, nhờ tiến ngành từ dịch ối sinh học phân tử, số bệnh lý di truyền - Ly trích DNA từ máu ngoại vi: Máu tươi điều trị khả quan Tuy nhiên, trước chống đơng EDTA, tách có phương pháp điều trị triệt để bệnh vòng 24 Quy trình tách chiết DNA từ 200 μl lý di truyền liệu pháp gen việc chẩn máu ngoại vi tiến hành theo QiAgen Kit đoán trước sinh phòng bệnh phương Đo nồng độ độ tinh DNA, pháp phá thai chủ động thai nhi mắc mẫu có giá trị tỷ lệ mật độ quang đo bước bệnh nhà khoa học khuyên dùng sóng 260/280 đạt ≥ 1,8 sử dụng để tiến chưa thực kỹ thuật PGD hành phản ứng PCR (preimplantation genetic diagnosis) Đối với - Ly trích DNA thai nhi từ mẫu dịch ối: lấy bệnh lý di truyền liên kết giới tính, phân ml dịch ối cho vào ống tube ml, quay ly tâm tích giới tính thai nhi ln kèm với việc phân 10.000 vòng/phút, thu cặn Hòa tan cặn 200 tích gen để xác định tình trạng bệnh lý(4) Nếu nước tinh khiết tiến hành tách DNA dịch ối bệnh di truyền theo nhiễm sắc thể X giới tính QiAgen Kit tương tự quy trình tách nam thai nhi xếp vào nhóm yếu tố mẫu máu ngoại vi Sau tách DNA, đo nồng nguy cao, khả mắc bệnh lớn Việc xác độ độ tinh DNA, mẫu có giá định giới tính thai nhi chẩn đoán trước trị tỷ lệ mật độ quang đo bước sóng 260/280 sinh bệnh lý di truyền nghiên cứu đạt ≥ 1,8 sử dụng để tiến hành phản nhiều, tác giả thường lựa chọn kỹ thuật xác ứng PCR định gen SRY nằm nhiễm sắc thể Y(5) Có - Quy trình tách chiết DNA từ máu ngoại vi nhiều phương pháp tiến hành để xác định dịch ối theo QiAgen Kit: diện gen SRY nhiễm sắc thể Y + Bước 1: Cho vào tube 1,5ml: 20μl QIAGEN PCR, realtime PCR,… nhiên, phương protease (proteinase K), 200μl máu toàn phần pháp PCR thực đơn giản, hiệu quả, thời (hoặc 200 μl cặn dịch ối), 200μl Buffer AL Vortex gian nhanh giá thành tương đối rẻ nên 39 Nghiên cứu Y học 15 giây + Bước 2: Ủ tube 56OC 10 phút, spin giây để loại bọt khí Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số * 2013 Tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi khuếch đại gen GAPDH, sản phẩm khuếch đại có kích thước 290 bp (base pair) + Bước 3: Thêm 200μl Ethanol (96 – 100%) vào tube, vortex 15giây, spin giây Mồi xuôi GAPDH: + Bước 4: Chuyển hỗn hợp sang cột lọc chứa tube ml, quay ly tâm 8.000 vòng phút Mồi ngược GAPDH + Bước 5: Chuyển cột sang tube 2ml mới, hút 500μl Buffer AW1 cho vào cột lọc, quay ly tâm 8.000 vòng phút + Bước 6: Chuyển cột sang tube 2ml mới, hút 500μl Buffer AW2 cho vào cột lọc, quay ly tâm 14.000 vòng/ phút + Bước 7: Chuyển cột sang tube 2ml mới, quay ly tâm 14.000 vòng/1phút + Bước 8: Chuyển sang cột thu 1,5ml Thêm 200 μl Buffer AE (đối với mẫu dịch ối thêm 100 μl Buffer AE) Ủ nhiệt độ phòng phút, quay ly tâm 8.000 vòng phút + Bước 9: Thu DNA bảo quản nhiệt độ 20OC Đo nồng độ độ tinh DNA Theo nguyên lý - Acid nucleic có phổ hấp thụ cực đại ánh sáng tử ngoại 260 nm có mặt base purin pyrimidin Giá trị mật độ quang bước sóng 260 nm (A260nm) mẫu cho phép xác định nồng độ acid nucleic mẫu - Protein hấp thụ ánh sáng tử ngoại bước sóng 280 nm hấp thụ acid amin thơm dị vòng tyrosin, tryptophan phenylalanin Đo phổ hấp thụ protein bước sóng 280 nm (A280nm) - Dựa vào tỷ lệ A260nm/A280nm để kiểm tra độ tinh DNA, A260nm /A280nm = 1,8- 2,0 DNA coi tinh Các mẫu DNA có kết 1,8 – 2,0 dùng để tiến hành phản ứng PCR Kiểm tra chất lượng phân tử DNA tách từ máu dịch ối 40 5’–ACATGTTCCAATATGATTCC – 3’ 5’–TGGACTCCACGACGTACTCA – 3’ Thành phần phản ứng Thành phần Thể tích (µl) 10 x buffer 2,0 dNTP (2,5 mM) 2,0 Taq polymerase (5 U/µL) 0,2 Mồi xi (10 pmol) 1,0 Mồi ngược (10 pmol) 1,0 DNA tách từ máu (tế bào ối) 1,0 (4,0) Nước cất 12,8 (9,8) Tổng số 20 Chu kỳ nhiệt phản ứng Đầu tiên giai đoạn biến tính 96°C phút, 40 chu kỳ gồm biến tính 94°C 30 giây; gắn mồi 55°C 30 giây bước kéo dài 72°C 60 giây, cuối giai đoạn hoàn chỉnh 72°C phút bảo quản tạm thời sản phẩm PCR 15°C Kết khuếch đại điện di gel agarose 1,5% Xác định diện gen SRY Sử dụng cặp mồi đặc hiệu khuếch đại đoạn gen SRY (có kích thước 252 bp) đặc hiệu NST Y, cặp mồi thiết kế phần mềm Lightscanner primer design Sau thiết kế, mồi kiểm tra SNPs (single nucleotide polymorphism) để đảm bảo diện SNP trình tự mồi: - Mồi xuôi SRY: 5’- ACGTCCAGGATAGAGTGAAGCGAC- 3’ - Mồi ngược SRY: 5’- GGCAGCATCTTCGCCTTCCGACGA- 3’ Thành phần phản ứng Thành phần Thể tích (µl) 10 x buffer 2,0 dNTP (2,5 mM) 2,0 Taq polymerase (5 U/µL) 0,2 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số * 2013 Thành phần bước kéo dài 72°C 45 giây, cuối giai đoạn hoàn chỉnh 72°C phút bảo quản tạm thời sản phẩm PCR 15°C Thể tích (µl) Mồi xi (10 pmol) 1,0 Mồi ngược (10 pmol) 1,0 DNA tách từ máu (tế bào ối) 1,0 (4,0) Nước cất 12,8 (9,8) Tổng số 20 Nghiên cứu Y học Kết PCR điện di thạch agarose nồng độ 1,5% Dựa vào xuất vạch điện di có kích thước 252 bp, tương ứng với diện NST Y để xác định diện nhiễm sắc thể Y (chứa gen SRY) Chu kỳ nhiệt phản ứng Đầu tiên giai đoạn biến tính 96°C phút, 40 chu kỳ gồm biến tính 94°C 45 giây; gắn mồi 53°C 30 giây KẾTQUẢNGHIÊNCỨU Kết tách chiết DNA từ bạch cầu máu ngoại vi từ dịch ối Bảng 1: Nồng độ độ tinh mẫu DNA Mã số (mẫu chứng) C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 Nồng ñộ DNA ðộ tinh Mã số (mẫu Nồng ñộ DNA ðộ tinh chứng) (A260/A280) (A260/A280) (ng/µl) (ng/µl) 60 55 65 50 50 45 60 50 62 60 1,84 1,82 1,85 1,84 1,85 1,84 1,83 1,84 1,87 1,82 C11 C12 C13 C14 C15 C16 C17 C18 C19 C20 50 48 65 52 57 60 55 60 49 54 1,87 1,85 1,83 1,83 1,82 1,85 1,87 1,85 1,85 1,86 Mã số (dịch ối) O21 O22 O23 O24 O25 Nồng độ DNA (ng/µl) 10 11 15 14 13 ðộ tinh (A260/A280) 1,82 1,84 1,81 1,82 1,85 Nhận xét - DNA tổng số tách từ bạch cầu máu ngoại vi có giá trị từ 45-65 ng/µl Trong nồng độ DNA tách chiết từ dịch ối thấp hơn, từ 10-15 ng/µl - Độ tinh mẫu DNA đạt yêu cầu với tỷ lệ mật độ quang đo bước sóng 260/280 nm ln nằm khoảng 1,8-2,0 Với độ tinh này, phân tử DNA sử dụng để tiến hành phản ứng PCR Kiểm tra chất lượng phân tử DNA tách từ máu dịch ối cặp mồi GAPDH Các vạch điện di có băng sáng đồng nhất, bờ đều, sắc gọn Chứng tỏ chất lượng sản phẩm DNA tốt, khơng bị đứt gãy sử dụng để thực phản ứng phân tích (Hình 1) Hình 1: Kết khuếch đại DNA cặp mồi GAPDH Mẫu C5: mẫu đối chứng nam, C10: chứng nữ, Ối đến Ối 5: mẫu dịch ối Kết xác định gen SRY thai nhi Tiến hành khuếch đại gen SRY thai nhi, phản ứng kèm hai mẫu đối chứng nam nữ Ở mẫu chứng nam có xuất vạch điện di có kích thước 252 bp, tương ứng với vạch khuếch đại gen SRY, mẫu chứng nữ mẫu nước (không chứa DNA) 41 Nghiên cứu Y học không xuất vạch Các mẫu dịch ối 2, ối xuất vạch tương ứng với vạch khuếch đại đoạn gen SRY Trong mẫu dịch ối 1, ối ối không xuất vạch (Hình 2) Hình 2: Kết xác định có mặt gen SRY thai nhi BÀNLUẬN Sự phát triển không ngừng sinh học phân tử thập niên gần giúp cho ngành khoa học phát triển lĩnh vực Trong lĩnh vực Y học, kỹ thuật sinh học phân tử giúp chẩn đoán nhiều bệnh lý ung thư, di truyền, nhiễm trùng,… Bên cạnh ứng dụng điều trị phòng bệnh Hiện có nhiều kỹ thuật di truyền giúp chẩn đoán bệnh lý mức độ gen PCR, giải trình tự gen, kỹ thuật lai phân tử, tạo dòng, … Tuy nhiên muốn thực kỹ thuật di truyền bước phải tách chiết phân tử acid nucleic tế bào Trong nghiên cứu sử dụng kit ly trích DNA (QIAamp Blood Kit) hãng QiAgen Đây hãng hóa chất uy tín Mỹ Bộ kít hóa chất sử dụng để tách DNA từ tế bào bạch cầu, tự dịch ối dịch khác thể Quy trình tách chiết gồm nhiều phản ứng liên tiếp, có phản ứng lặp lại nhiều lần để loại bỏ hết chất khơng cần thiết giúp sản phẩm có độ tinh cao Năm 2011, Hui L sử dụng kit QIAamp Blood Kit để tách chiết tế bào thai nhi từ dịch ối nghiên cứu thu phân tử DNA có đặc tính tốt, giúp cho nghiên cứu thành công(3) Bảng mô tả nồng độ độ tinh phân tử DNA tách chiết từ máu ngoại vi mẫu đối chứng mẫu DNA thai nhi 42 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số * 2013 tách từ dịch ối Nồng độ DNA mẫu đối chứng (tách từ bạch cầu máu ngoại vi) có giá trị từ 45-65 ng/µl, mẫu DNA tách chiết từ dịch ối có nồng độ thấp hơn, khoảng 1015 ng/µl Điều phù hợp với thực tế máu ngoại vi chứa nhiều bạch cầu có nhân (nhân tế bào chứa acid nucleic), số lượng tế bào thai nhi dịch ối không nhiều số lượng bạch cầu máu ngoại vi Bảng cho thấy mật độ quang mẫu DNA đo bước sóng 260 nm 280 nm Theo Khất Hữu Thanh, tỷ lệ mật độ quang đo bước sóng 260/280 nm nằm khoảng 1,8-2,0 phân tử DNA có độ tinh cao(6) Sản phẩm tách chiết chúng tơi có tỷ lệ 260/280 nm giao động từ 1,81 đến 1,87, chứng tỏ quy trình tách chiết DNA hiệu quả, có độ tinh cao Sau xác định nồng độ độ tinh DNA tiến hành kiểm tra chất lượng DNA phản ứng khuếch đại gen GAPDH với cặp mồi đặc hiệu Gen GADPH diện tế bào thể xem gen nội chuẩn sử dụng để kiểm tra chất lượng DNA nói chung Sau phản ứng khuếch đại, chất lượng DNA không tốt, bị đứt gãy hay tạp nhiễm băng điện di agarose mờ, bờ không đều, loang lổ, xuất băng phụ(7) Đối với nghiên cứu chúng tôi, sau khuếch đại phân tử DNA cặp mồi GADPH, kết điện di agarose xuất băng sáng, bờ đều, khơng có băng phụ (hình 1) Như vậy, chứng minh phân tử DNA thu có chất lượng tốt, sử dụng để tiến hành kỹ thuật sinh học phân tử khác Để xác định giới tính thai nhi, sử dụng cặp mồi đặc hiệu cho phép khuếch đại đoạn gen SRY nằm NST Y, trình tự nucleotid cặp mồi thiết kế phần mềm chuyên dụng Phản ứng PCR tiến hành mẫu DNA thai nhi, kèm theo mẫu đối chứng nam (mẫu chứng dương), chứng nữ (mẫu chứng âm) mẫu nước không chứa DNA để kiểm tra khả ngoại nhiễm Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số * 2013 phản ứng PCR Sản phẩm khuếch đại điện di thạch agarose nồng độ 1,5% Xác định giới tính thai nhi dựa vào xuất vạch điện di đặc hiệu có kích thước 252 bp, so sánh với kích thước vạch xuất mẫu đối chứng nam Mỗi mẫu DNA thai nhi, lặp lại phản ứng ba lần để tránh nhầm lẫn Hình cho thấy mẫu đối chứng nam xuất vạch có kích thước 252 bp, tương vứng với kích thước đoạn gen SRY khuếch đại, mẫu đối chứng nữ mẫu nước không xuất sản phẩm khuếch đại Điều chứng tỏ có diện gen SRY người này, kết phù hợp người nam bình thường Quan sát hình ảnh điện di mẫu ối ối thấy có xuất vạch tương ứng với vạch đoạn gen SRY mẫu đối chứng nam (có kích thước 252 bp) Theo nghiên cứu Hussey ND, điện kết khuếch đại gen SRY cặp mồi đặc hiệu, có xuất vạch có kích thước tương ứng với kích thước đoạn gen SRY khuếch đại mẫu DNA có mang gen SRY hay nói cách khác mẫu DNA người có giới tính nam Trong trường hợp kết điện di không xuất vạch tương ứng với đoạn gen SRY mẫu DNA khơng chứa gen SRY, giới tính nữ(4) Như hình giúp kết luận mẫu ối ối có giới tính nam Đối với mẫu ối 1, 4, kết điện di không xuất vạch cả, chứng tỏ khơng có diện gen SRY thai nhi này, hay nói cách khác thai nhi có giới tính nữ Chúng tơi lặp lại thí nghiệm lần có kết Khi so sánh với kết nhiễm sắc thể đồ thai nhi thấy kết nghiên cứu phù hợp với kết nhiễm sắc thể đồ, thai nhi có diện nhiễm sắc Nghiên cứu Y học thể Y, thai nhi 1, mang cặp nhiễm sắc thể giới tính XX Điều chứng tỏ quy trình xác định giới tính nghiên cứu có độ tin cậy cao KẾTLUẬN Nghiên cứu xây dựng quy trình xác định giới tính thai nhi kỹ thuật PCR, điều có ứng dụng thực tiễn lớn q trình chẩn đốn trước sinh tư vấn bệnh lý di truyền, đặc biệt bệnh di truyền liên kết nhiễm sắc thể giới tính TÀILIỆUTHAMKHẢO Coriat AM, Müller U, Harry JL, Uwanogho D, Sharpe PT (1993), “PCR amplification of SRY-related gene sequences reveals evolutionary conservation of the SRY-box motif” PCR Methods Appl, 2(3); pp.218-22 Galbiati S, Smid M, Gambini D, Ferrari A, Restagno G, Viora E, Campogrande M, Bastonero S, Pagliano M, Calza S, Ferrari M, Cremonesi L (2005), “Fetal DNA detection in maternal plasma throughout gestation” Hum Genet, 117(2-3); pp.243-8 Hui L, Bianchi DW (2011), “Cell-free fetal nucleic acids in amniotic fluid” Hum Reprod Update, 17(3); pp 362-71 Hussey ND, Donggui H, Froiland DA, Hussey DJ, Haan EA, Matthews CD, Craig JE (1999), “Analysis of five Duchenne muscular dystrophy exons and gender determination using conventional duplex polymerase chain reaction on single cells” Mol Hum Reprod, 5(11); pp.1089-94 Jameson JL, Achermann JC, Ozisik G, Meeks JJ (2003), “Battle of the sexes: new insights into genetic pathways of gonadal development” Trans Am Clin Climatol Assoc, 114; pp.51-63 Khuất Hữu Thanh (2006), “Kỹ thuật gen - Nguyên lý ứng dụng”, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 102-53 Tran V.K., Takeshima Y., Zhang Z., Yagi M., Nishiyama A., Habara Y., Matsuo M (2007), “A nonsense mutation-created intraexonic splice site is active in the lymphocytes, but not in the skeletal muscle of a DMD patient” Hum Genet, 120, pp 737-42 Wilhelm D, Palmer S, Koopman P (2007), “Sex determination and gonadal development in mammals” Physiol Rev, 87(1); pp.1-28 Ngày nhận bài: 29/11/2012 Ngày phản biện đánh giá báo: 06/1/2013 Ngày báo đăng: 31/01/2013 43 ... cạnh ứng dụng điều trị phòng bệnh Hiện có nhiều kỹ thuật di truyền giúp chẩn đoán bệnh lý mức độ gen PCR, giải trình tự gen, kỹ thuật lai phân tử, tạo dòng, … Tuy nhiên muốn thực kỹ thuật di truyền. .. prenatal diagnosis, SRY gene, Y chromosome nhiều tác giả sử dụng( 1) Chúng tiến hành đề ĐẶTVẤNĐỀ tài với mục tiêu: Ứng dụng quy trình PCR Các bệnh lý di truyền chiếm tỷ lệ chẩn đoán di n gen SRY nằm... quy trình xác định giới tính thai nhi kỹ thuật PCR, điều có ứng dụng thực tiễn lớn q trình chẩn đốn trước sinh tư vấn bệnh lý di truyền, đặc biệt bệnh di truyền liên kết nhiễm sắc thể giới tính