Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu điều kiện phân tích các sulfamit bằng phương pháp sắc ký

Trong luận văn này, tác giả tiến hành nghiên cứu các điều kiện tách và xác định đồng thời chất kháng sinh metronidazole(MTD) và các sulfamit như sulfaguanidine (SGU),sulfamethoxazone (SMX), (SMP), sulfadoxin (SDO) bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) hấp phụ pha ngược ghép nối.

Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ MỞ ĐẦU ………………………………………………………………… Chương 1 ­ TỔNG QUAN ……………………………………………… 1.1 Giới thiệu chung về sulfamit (SAs), metronidazole (MTD) ……… 1.1.1. Cấu trúc phân tử ………………………………………………… 1.1.2 Tính chất vật lý và hố học của các Sulfamit, Metronidazole  ………… 1.1.3 Tính chất dược lý và phổ tác dụng của Sulfamit,  Metronidazole  1.1.4 Cơ chế tác dụng kháng khuẩn của Sulfamit,  Metronidazole  1.1.5 Một số chế phẩm của Sulfamit tiêu biểu ……… ……………… 1.2. Phương pháp xác  định……………………………………………… 1.2.1. Một số cơng trình nghiên cứu xác định Sas bằng phương pháp sắc  ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) …………………………………………… 1.2.2. Một số cơng trình nghiên cứu xác định Metronidazole bằng  phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)  …………………………………… 1.2.3. Một số cơng trình nghiên cứu xác định đồng thời các sulfamit và  metronidazole bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC  ……… Chương 2 ­ ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  …… Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  2.1  Đối tượng, mục tiêu và nhiệm vụ nghiên cứu………………… 2.1.1 Đối tượng và mục tiêu nghiên cứu  ………………………………… 2.1.2. Nhiệm vụ nghiên cứu  ……………………………………………   2.2  Phương pháp nghiên cứu………………………………………… 2.2.1 Nguyên tắc chung và trang bị của phương pháp HPLC  …… 2.2.2 2.3 Phân tích định lượng bằng HPLC …………………………  Giới thiệu chung về phương pháp chiết pha rắn … ………… 2.4  Hóa chất và dụng cụ…………………………………………… 2.4.1 Hố chất  ………………………………………………… 2.4.2 Dụng cụ  ……………………………………………………… Chương 3 ­ KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN  ……………………………… 3.1. Khảo sát các điều kiện sắc ký  ……………………………………… 3.1.1. Chọn bước sóng của detector  …………………………………… 3.1.2. Thăm dò khả năng tách của các Sulfamit trên cột RP­C18  ……… 3.2. Chọn pha tĩnh …………………………………………………… 3.3. Tối ưu hóa pha động  ………………………………………………… 3.3.1. Nồng độ đệm axetat của pha động  ……………………………… 3.3.2. Độ pH cho dung dịch đệm axetat  Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  ………………………………… 3.3.3. Tỉ lệ thành phần pha động  ……………………………………… 3.3.4. Tốc độ pha  động  3.4. Đánh giá phương pháp phân tích ………………………………… 3.4.1. Khảo sát lập đường chuẩn trong khoảng nồng độ 0,05 –  1,000ppm 3.4.2. Giới hạn phát hiện (LOD); Giới hạn định lượng  (LOQ)  3.4.3. Độ đúng, độ lặp lại của phép đo  ………………………………… 3.5. Mẫu thực, quy trình xử lý và kết quả phân tích  ………………… 3.5.1. Quy trình xử lý mẫu, xác định hiệu suất thu hồi  ………………… 3.5.2. Phân tích mẫu thực  ……………………………………………………… KẾT LUẬN ……………………………………………………………… TÀI LIỆU THAM KHẢO Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT Viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ACN Acetonitrin Axetonitrin Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn BNNPTNT CV Coeficient Variation Hệ số biến thiên HPLC High Performance Liquid  Chromatography Sắc ký lỏng hiệu năng  cao RP Reversed phase Hấp phụ pha đảo LOD Limit of Detection Giới hạn phát hiện LOQ Limit of Quantity Giới hạn định lượng TT UV ­ Vis Thông tư Untraviolet ­ Visibet Tử ngoại – Khả kiến Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1: Bảng 3.2: Bảng 3.3: Bảng 3.4: Bảng 3.5: Bảng 3.6: Bảng 3.7: Bảng 3.8: Bảng 3.9: Bảng 3.10: Bảng 3.11: Diện tích của pic phụ thuộc vào bước sóng  detector………………… Thời gian lưu và thứ tự ra pic của các chất phân  tích……………… Sự phụ thuộc k’ vào nồng độ đệm axetat của pha  động…………… Hệ số dung tích ở các giá trị pH khác  nhau………………………… Hệ số dung tích phụ thuộc vào %ACN trong pha  động…………… Diện tích pic của các chất phân tích phụ thuộc vào tốc độ pha  động Diện tích pic sắc ký phụ thuộc vào nồng độ các chất phân  tích……… Bảng giá trị các Ftính của các chất phân  tích LOD, LOQ tính theo phương trình hồi quy  Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ  0,08ppm) Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ  0,4ppm) Bảng 3.12: Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ  25 27 29 31 33­34 36 38­39 42 43 45 46 47­48 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  0,8ppm) Bảng 3.13: Bảng 3.14: Bảng 3.15: Bảng 3.16: Bảng 3.17: Bảng 3.18: Bảng 3.19: Bảng 3.20: Bảng 3.21: Bảng 3.22: Chiều cao píc sắc ký mẫu tơm ở các nồng độ thêm chuẩn khác  Kết quả xác định hiệu suất thu hồi các chất phân  tích……………… Kết quả phân tích các chất  đối với mẫu tơm  rảo…………………… Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm  rảo………………… Kết quả phân tích các chất  đối với mẫu tơm chân  trắng…………… Hàm lượng chất phân tích trong mẫu tơm chân  trắng……………… Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm  sú…………………… Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm  sú…………………… Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm  lớt…………………… Hàm lượng chất phân tích trong mẫu tơm  lớt………………………                                     50 51 52 53 54 54 55 55 56 57 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1: Hình 2.1: Hình 3.1: Sơ đồ chuyển hố axít folic thành nucle  protein………………… Sơ đồ khối hệ thống HPLC đầy  đủ……………………………… Phổ hấp thụ trong vùng tử ngoại khả kiến của các  Sas…………… 19 23­24 Luận văn Thạc sĩ Thái Hình 3.2:                                                                                   Bùi Minh  Diện tích của pic phụ thuộc vào bước sóng  detector……………… 25 Hình 3.3: Thời gian lưu của các sulfamit…………………………………… 26­27 Hình 3.4: Hình 3.5: Hình 3.6: Hình 3.7: Hình 3.8: Hình 3.9: Hình 3.10: Hình 3.11: Hình 3.12: Hình 3.13: Hình 3.14: Hình 3.15: Hình 3.16: Sự phụ thuộc của k’ vào nồng độ đệm axetat trong pha  động…… Píc sắc ký ở các giá trị nồng độ đệm khác  Sự phụ thuộc của K’ vào pH của pha  động Sắc đồ sắc ký ở pH khác  Sự phụ thuộc k’ vào tỉ lệ % ACN trong pha  động Sắc đồ píc sắc ký tại các tỉ lệ thành phần pha động khác  Sự phụ thuộc diện tích píc sắc ký vào tốc độ pha  động Sắc đồ tốc độ khác nhau của pha  động Đường chuẩn của chất phân tích trong khoảng nồng độ 0,05­ 1,00ppm… Sắc đồ của các chất phân tích nồng độ khác nhau tại bước sóng  270nm… Sắc đồ của các chất phân tích nồng độ khác nhau tại bước sóng  320nm… Sắc đồ của 5 chất phân tích với nồng độ  0,01ppm………………… Sắc đồ các chất phân tích sau 8 lần bơm mẫu nồng độ 0,08ppm  … 29 29­30 31 32 34 34­35 36 37 39­40 40 41 43 45 Luận văn Thạc sĩ Thái Hình 3.17: Hình 3.18: Hình 3.19: Hình 3.20: Hình 3.21: Hình 3.22: Hình 3.23: Hình 3.24: Hình 3.25: Hình 3.26: Hình 3.27: Hình 3.28:                                                                                   Bùi Minh  Sắc đồ các chất phân tích sau 8 lần bơm mẫu nồng độ 0,4ppm  …… Sắc đồ các chất phân tích sau 8 lần bơm mẫu nồng độ 0,8ppm  …… Sơ đồ xử lý mẫu  Tôm Sắc đồ hiệu suất thu hồi theo quy trình xử lý mẫu  tơm Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm rảo khi phân tích thêm  chuẩn… Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU  trong mẫu tơm  rảo……… Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm chân trắng khi phân tích thêm  chuẩn Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU trong mẫu tơm chân  trắng Đường chuẩn của SGU, SMP trong mẫu tơm sú khi phân tích thêm  chuẩn   Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU, SMP trong tơm  sú……… Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm lớt khi phân tích thêm  chuẩn… Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU  trong tơm  lớt…………… 47 48 49 50 53 53 54 54 55 56 57 57 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  MỞ ĐẦU Dư  lượng kháng sinh trong thực phẩm hiện là vấn đề  quan ngại của hầu  hết các cơ quan kiểm sốt thực phẩm trên thế giới. Một số loại kháng sinh thơng  thường (chloramphenicol, malachite green, metronidazole…) bản thân nó có thể  gây ra tác động có hại cho sức khoẻ người tiêu dùng, một số  loại khác như  các   kháng sinh nhóm nitrofurans qua q trình trao đổi chất trong cơ thể động vật có  thể sinh ra những hợp chất có độc tính cao đối với cơ thể sống. Họ thuốc kháng  khuẩn Sulfamit (SAs) là nhóm kháng khuẩn có hoạt phổ  rộng, được sử  dụng  nhiều trong trong ni trồng, chế biến nơng thủy sản, v.v Việc sử  dụng chất này một cách tùy  tiện có thể  dẫn đến tồn dư  một  lượng lớn quá giới hạn cho phép trong cơ thể  động vật. Khi người tiêu dùng sử  dụng thực phẩm có dư lượng lớn sulfamit hay các chất kháng sinh trong thời  gian  10 Luận văn Thạc sĩ                                                                                   Bùi Minh  Thái Xây dựng đồ thị biểu diễn diện tích pic theo nồng độ chất thêm Nồng độ chất phân tích trong mẫu Cx  được tính theo cơng thức:  Cx = A/B (với A, B ­ hệ số trong phương trình hồi quy của đồ thị thêm   chuẩn) Khoảng tin cậy của nồng độ chất phân tích trong mẫu là:                           Sx Cx ( Sa ) a ( Sb ) b Trong đó:  Cx : Nồng độ chất phân tích có trong dung dịch bơm vào cột tách a,b là hệ số trong phương trình  hồi qui Sa, Sb : sai số của hệ số trong phương trình hồi qui Sx là sai số nồng độ xác định theo phương pháp thêm chuẩn Khối lượng chất phân tích có trong a(g) mẫu cân đơng khơ ban đầu là : mcpt = V*Cx*F*10­3(mg) Trong đó mcpt : Khối lượng chất phân tích trong a (g) mẫu                 (mg) V : Thể tích dung dịch được pha từ a(g)                              (ml) F : Hệ số pha lỗng Cx : Nồng độ của chất phân tích xác định được từ phương trình hồi  quy 10­3 : Hế số chuyển từ µg sang mg 3.5.2.1. Mẫu tơm rảo  Khối lượng mẫu thịt tơm tươi            : 142,8g Khối lượng mẫu sau khi đơng khơ     : 32,9g Lượng nước có trong mẫu                  : 77% Với mỗi mẫu được xử  lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị  trung   bình.  66 Luận văn Thạc sĩ                                                                                   Bùi Minh  Thái   Kết quả phân tích như sau:               Bảng 3.15: Kết quả phân tích các chất  đối với mẫu tơm rảo Chất phân tích SGU Diện tích píc sắc ký (mAu.s) Mẫu thêm chuẩn  Mẫu thêm chuẩn  0,1ppm chất phân tích 0,2ppm chất phân tích 45766 75734 Mẫu tơm  Rảo 22151   Ta có phương trình hồi quy:     80000 Spic(mAu.s) 70000 60000 50000 40000 Y=A+B*X He so Gia tri Sai so -A 21092.16667 2367.62331 B 267915 18339.5313 30000 20000 R SD N P -0.99767 2593.60139 0.04351 10000 -0,15 -0,10 -0,05 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 CSGU(ppm)                             Hình 3.21: Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm rảo khi phân tích thêm chuẩn               Bảng 3.16:  Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm rảo Chất  phân tích SGU          CSAs từ đường  chuẩn (ppm) Hàm lượng chất  trong  mẫu  đông khô (ppm) Hàm lượng chất  trong  mẫu tươi (ppm) 0,079 ± 0,010 0,53 ± 0,07 0,12 ± 0,02 67 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  mV 7.0 Detector A Ch1:270nm mV 7.0 Detector A Ch1:270nm 6.0 6.0 5.0 5.0 4.0 4.0 3.0 3.0 2.0 2.0 mV Detector A Ch1:270nm 7.0 6.0 1/3.407 5.0 1/3.363 4.0 1/3.441 3.0 2.0 1.0 1.0 1.0 0.0 0.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0               Mẫu chưa thêm              Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm      Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm Hình 3.22:  Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU  trong mẫu tơm rảo      3.5.2.2. Mẫu tơm chân trắng Khối lượng mẫu thịt tươi                   : 150,1g       Khối lượng mẫu sau khi đơng khơ   : 30,5g      Lượng nước có trong mẫu                 :79,7% Bảng 3.17: Kết quả phân tích các chất  đối với mẫu tơm chân trắng Chất phân  tích SGU Mẫu tơm  Diện tích píc sắc ký (mAu.s) Mẫu thêm chuẩn  Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm  chân trắng 0,1ppm chất phân tích chất phân tích 30407 59365 74137 Ta có phương trình hồi quy: 68 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  90000 6000 Spic(mAu.s) 80000 5000 70000 4000 60000 50000 3000 40000 Y=A+B*X 20000 -0.15 -0.10 -0.05 0.00 1000 R SD N P -0.99899 1708.92734 0.02862 10000 -0.20 2000 He so Gia tri Sai so -A 31104.66667 1560.03009 B 268650 12083.94113 30000 0.05 0.10 0.15 0.20 0.0 CSGU(ppm) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 Hình   3.23:   Đường   chuẩn   SGU      Hình 3.24: Sắc đồ pic sắc ký khi thêm   mẫu  tơm chân trắng khi phân tích thêm   chuẩn SGU trong mẫu tơm chân trắng chuẩn Bảng 3.18: Hàm lượng chất phân tích trong mẫu tơm chân trắng Chất phân  CSAs từ đường  tích chuẩn (ppm) SGU 0,115 ± 0,008 Hàm lượng chất  trong mẫu đông  khô(ppm) 0,77 ± 0,05 Hàm lượng chất  trong mẫu tươi(ppm) 0,16 ± 0,01        3.5.2.3. Mẫu tôm Sú   Khối lượng mẫu thịt tôm   tươi      : 123,6g  Khối lượng mẫu sau khi đơng khơ: 37,4g  Lượng nước có trong mẫu              : 69,7%  Với mỗi mẫu được xử  lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị  trung   bình.    Kết quả phân tích như sau:     Bảng 3.19: Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm sú Chất phân  tích Mẫu tơm sú Diện tích píc sắc ký (mAu.s) Mẫu thêm chuẩn  Mẫu thêm chuẩn  0,1ppm chất phân tích 69 0,2ppm chất phân tích Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  SGU 18451 30532 45849 SMP 7010 20175 35745 Ta có phương trình hồi quy:     40000 50000 45000 Spic(mAu.s) 35000 40000 Spic(mAu.s) 30000 35000 25000 30000 20000 25000 Y=A+B*X 20000 15000 10000 -0,15 -0,10 -0,05 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 C (ppm) He so Gia tri Sai so -A 6609.16667 896.29058 B 143675 6942.63699 10000 R SD N P -0.99768 1321.09147 0.04334 5000 -0,20 Y=A+B*X 15000 He so Gia tri Sai so -A 17911.66667 1205.986 B 136990 9341.52736 5000 -0.10 -0.05 0.00 R SD N P -0.99883 981.83714 0.03074 0.05 0.10 0.15 0.20 SGU CSMP(ppm) Hình 3.25:  Đường chuẩn của SGU, SMP trong mẫu tơm sú khi phân tích thêm chuẩn                Bảng 3.20: Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm sú Hàm lượng chất  Chất phân  CSAs từ đường  tích chuẩn (ppm) SGU 0,130 ± 0,012 0,87 ± 0,08 SMP 0,046 ± 0,007 0,30 ± 0,04 trong mẫu đơng khơ  (ppm) 70 Hàm lượng chất trong  mẫu tươi (ppm) 0,26 ± 0,02 0,09 ± 0,01 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  mV 5.0 Detector A Ch1:270nm mV 5.0 Detector A Ch1:270nm mV 5.0 Detector A Ch1:270nm 4.0 4.0 1/3.340 4.0 3.0 3.0 1/3.358 3.0 2.0 2.0 2/4.476 2/4.877 1.0 1.0 2/4.675 1/3.308 2.0 1.0 0.0 0.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0                Mẫu chưa thêm              Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm      Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm Hình 3.26: Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU, SMP trong tơm sú 3.5.2.4. Mẫu tơm lớt       Khối lượng mẫu tơm tươi             : 132,5g         Khối lượng mẫu sau khi đơng khơ: 28,4g         Lượng nước có trong mẫu              : 78,6%          Với mỗi mẫu được xử  lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị  trung   bình.  Kết quả phân tích như sau:     Bảng 3.21: Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm lớt Diện tích píc sắc ký (mAu.s) Chất phân  tích SGU Mẫu tơm lớt Mẫu thêm chuẩn  Mẫu thêm chuẩn  0,1ppm chất phân tích 0,2ppm chất phân tích  26845 40548 Ta có phương trình hồi quy:     71 60849 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  65000 60000 Spic(mAu.s) 55000 50000 45000 40000 35000 30000 Y=A+B*X 25000 He so Gia tri Sai so -A 25745.3333 2458.929 B 170020 19046.78538 20000 15000 10000 5000 -0,20 -0,15 -0,10 -0,05 0,00 R SD N P -0.99883 2693.62222 0.07102 0,05 0,10 0,15 0,20C SGU (ppm)                             Hình 3.27: Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm lớt khi phân tích thêm chuẩn   Bảng 3.22: Hàm lượng chất phân tích trong mẫu tơm lớt CSAs từ đường  tích chuẩn (ppm) SGU 0,151 ± 0,022 Hàm lượng chất  Hàm lượng chất  trong mẫu đông  trong mẫu  khô(ppm) tươi(ppm) 1,00 ± 0,15 0,21 ± 0,03 mV 10.0 Detector A Ch1:270nm 9.0 9.0 9.0 8.0 8.0 8.0 7.0 7.0 7.0 6.0 6.0 6.0 5.0 5.0 5.0 4.0 4.0 4.0 3.0 3.0 3.0 2.0 2.0 1.0 1.0 1.0 0.0 0.0 0.0 2.0 1/3.395 mV 10.0 Detector A Ch1:270nm 1/3.427 mV 10.0 Detector A Ch1:270nm 1/3.485 Chất phân         0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0       0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0          Mẫu chưa thêm                 Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm         Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 Hình 3.28: Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU  trong tơm lớt 72 Luận văn Thạc sĩ                                                                                   Bùi Minh  Thái Nhận xét: Với kết quả xác định trên cho thấy trong các mẫu tơm đều xuất  hiện chất dư lượng kháng khuẩn SGU. Với giới hạn dư lượng sulfamit trong thịt  thủy sản cho phép là 0,1ppm( theo thơng tư  số:29/2010/TT­BNNPTNT) thì các  mẫu tơm mà chúng tơi phân tích đều vượt mức giới hạn. Với mẫu tơm sú, tơm   lớt dư  lượng gấp 2 lần lượng cho phép. Khơng   phát hiện thấy MTD, SMX,  SDO, SMP( trừ tơm sú) trong các mẫu tơm 73 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh  KẾT LUẬN Trên cơ sở nghiên cứu các điều kiện thực nghiệm, nhằm ứng dụng kỹ thuật   phân tích HPLC – UV­Vis để  tách, xác định đồng thời metronidazole và một số  sulfamit (SGU, SMP, SDO, SMX) trong một số loại tơm, chúng tơi thu được một  số kết quả sau đây: Đã chọn được các điều kiện tối ưu  cho q trình sắc ký: Cột tách RP ­ C18: 25 cm × 4,6 mm; 5mm  Detector UV­VIS: 2 kênh l  = 270 nm; l  =320nm.Rise time = 0,1 s; Range  = 0,01 AUFS  Máy ghi: tốc độ giấy = 1 mm/phút; thế ghi = 10 mV Thành phần pha động: dung dịch đệm axetat (pH = 4,5) 10mM /aceto­ nitril: 80/20 (v/v)  Tốc độ pha động: 1 ml/phút 2.  Đã đánh giá phương pháp phân tích: Khoảng tuyến tính của các sulfamit: 0,05 – 1,00ppm Giới hạn phát hiện: 0,012 – 0,029 ppm Giới hạn định lượng: 0,040 ­ 0,096 ppm  Hệ số biến thiên: 0,2% – 5% trong khoảng nồng độ 0,08­ 0,8ppm    3. Khảo sát mẫu thực  Chọn quy trình xử  lý mẫu thích hợp, hiệu suất thu hồi các chất phân  tích trong mẫu tơm đạt từ 71 ­90% 74 Luận văn Thạc sĩ                                                                                   Bùi Minh  Thái   Xác   định     dư   lượng  SGU  trong   mẫu   tôm   chân   trắng:  0,16  ±  0,01ppm,  tôm  lớt:  0,21±0,03ppm,  tơm  rảo:0,12±0,02ppm,   tơm  sú :0,26±0,02ppm, dư lượng SMP trong tơm sú 0,09 ± 0,01ppm  Khơng phát hiện thấy MTD, SDO, SMX, SMP( trừ  tơm sú) trong các  mẫu tơm Từ các kết quả thu được, chúng tơi thấy phương pháp HPLC – Detector UV­ Vis có độ nhạy cao, thích hợp cho phân tích đồng thời metronidazole và các chất   kháng khuẩn SGU, SMP, SDO và SMX trong tơm Chúng tơi hy vọng những nghiên cứu trên sẽ  góp phần vào việc  ứng dụng   kỹ thuật HPLC – UV­Vis nói riêng và các kỹ  thuật HPLC nói chung để  xác định  metronidazole và các hợp chất thuộc họ sulfamit trong thực phẩm, nhằm phục vụ  đắc lực cho các ngành khoa học và đặc biệt trong lĩnh vực vệ  sinh an toàn thực  phẩm, giúp bảo vệ sức khoẻ cho con người.                                                                                                                                                75 Luận văn Thạc sĩ Thái                                                                                   Bùi Minh           TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Chu Đình Bính, Phạm Luận, Nguyễn Thị  Ánh Nguyệt, Nguyễn Phương   Thanh (2007), “Xác định dư lượng các chất kháng khuẩn họ sulfamit trong  thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao”, Tạp chí Khoa   học và Cơng nghệ, 45(1B), tr 33 – 41 Nguyễn Thị  Kim Dung (2004),   Xác định sulfonamide trong thuốc bằng   phương pháp hấp thụ  nguyên tử, Luận văn Thạc sĩ khoa học, Đại học  Quốc gia Hà Nội Trần Đức Hậu, Nguyễn Đình Hiển, Thái Duy Thìn, Huỳnh Kim Thoa,  Nguyễn Văn Thục (2006),  Hố dược tập 2, Bộ  mơn hố dược, Đại học  Dược, Hà Nội Nguyễn   Thị   Phương   Linh   (2006),  Xác   định   gián   tiếp   hàm   lượng   sulfamethoxazole trong thuốc bằng phép đo F­AAS, Luận văn thạc sĩ khoa  học, Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Luận (1998), Cơ  sở  lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu nâng cao ,  Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Thị Ánh Nguyệt (2007), Nghiên cứu tách và xác định đồng thời một   số sulfamit trong thức ăn chăn ni và thực phẩm bằng phương pháp sắc ký   lỏng hiệu nâng cao (HPLC), Luận văn thạc sĩ khoa học, Đại học Quốc gia   Hà Nội 76 Luận văn Thạc sĩ                                                                                   Bùi Minh  Thái Nguyễn   Văn   Ri,   Nguyễn   Xuân   Trung,   Trần   Tứ   Hiếu,   Từ   Vọng  Nghi(2003), Hóa học phân tích­ Phần 2(Các phương pháp phân tích cơng   cụ), Đại học Quốc Gia Hà Nội Tạ  Thị  Thảo (2005),  Thống kê trong hố phân tích, Đại học Quốc gia Hà  Nội Tiêu chuẩn ngành (2004),  Sulfonamit trong sản phẩm thuỷ  sản­Phương   pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao, 28 TCN 196:2004 10 Vũ Cẩm Tú (2009), Xác định các sulfamit trong mẫu Dược phẩm và thực   phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao(HPLC), Khóa luận tốt  nghiệp, Đại học Khoa học Tự nhiên Tiếng Anh 11 A. V. Pereira, Q. B. Cass(2005), “High­ performance liquid chromatography  method   for   the   simultaneous   determination   of   sulfamethoxazole   and  trimethoprim in bovine milk using an on­line clean­up column”, Journal of  chromatography B, 826, pp. 139­ 146 12 Cheong,   C.K.,   Hajeb,   P.Jinap,   S   and   Ismail­Fitry,   M.R(2010),  “Sulfonamides   determination   in   chicken   meat   products   from   Malaysia’’,  International Food Research Journal,17, pp. 885­892 13 Craig   D.C   Salisbury,  Jason   C   Sweet,   Roger   Munro(2004),  “  Determination of  sulfonamide residues in the Tissues of  food animals using  automated     precolumn   derivatization   and   liquid   chromatography   with  fluorescence detection”,  Journal of AOAC international,  87( 5), pp.1264­ 1268 14 D.G   Kennedy,   R.J.McCracken,   A.Cannavan,   S.A.Hewitt   (1998),“Use   of  liquid       chromatography­mass spectrometry in the analysis of residues of  antibiotics on meat and milk”. Journal of chromatography A, 812, pp.77­98 15 Gertraud Suhren and W Heeschen(1993) “Detection of eight sulphonamides  and   dapsone   in   milk   by   a   liquid   chromatographic   method”,  Analytica   Chimica Acta, 275, pp. 329­333 77 Luận văn Thạc sĩ                                                                                   Bùi Minh  Thái 16 Hadir   M   Maher,   Rasha   M   Youssef,   Riad   H   Khalil   and   Sabry   M   El­ Bahr(2008),  “  Simultaneous  multiresidue  determination   of   metronidazole  and   spiramycin   in   fish   muscle   using   high   performance   liquid  chromatography   with   UV   detection   ’’,  Journal   of   Chromatography   B,  876(2), pp.175­181 17 Han­Wen   Sun,   Feng­Chi   Wang   and   Lian­Feng   Ai(2007),  “  Simultaneous  determination  of seven nitroimidazole residues in meat by using HPLC­UV  detection   with   solid­phase   extraction”,  Journal   of   Chromatography   B,  857(2), pp. 296­300.  18 Ivan   Pecorelli,   Rita   Bibi,   Laura   Fioroni,   Roberta   Galarini  (2004)   ,“Validation   of   a   confirmatory   method   for   the   determination   of  sulphonamides   in   muscle   according   to   the   European   Union   regulation  2002/657/EC”, Journal of chromatography A, 1032(1­2),pp. 23­29 19 M   Brandtner,   W   Hela,   R   Widek,   R   Suhuh   (2003),   “Determination   of  sulfonamides in animal tissues using cation exchange reversed phase sorbent  for sample cleanup and HPLC­DAD for detection”, Food Chemistry, 83, pp  601­608 20 Naser   Tavakoli,   Jaleh   Varshosaz,   Farid   Dorkoosh   and   Mohammad   R.  Zargarzadeh (2007), “Development and validation of a simple HPLC method  for simultaneous in vitro determination of amoxicillin and metronidazole at  single  wavelength’’,  Journal of Pharmaceutical  and  Biomedical Analysis,  43(1), pp.325­ 329 21 Naoto   Furusawa(2000),   “Simplified   determining   procedure   for   routine  residue   monitoring   of   sulphamethazine   and   sulphadimethoxine   in   milk”.  Journal of chromatography A, 898, pp.185 – 191 22 PVinas, C.Lopez   Erroz,N.Campillo, M.Hernandez(1996), “ Determination  of   sulphonamides   in   foods   by   liquid   chromatography   with   postcolumn  fluorescence   derivatization”,  Journal   of   Chromatography   A,  726(1­2),  pp.125­131 78 Luận văn Thạc sĩ                                                                                   Bùi Minh  Thái 23 Qiong­Hui Zou, Xiang­Feng Wang,Yuan Liu, Jin Wang, Jia Song, Hui Gao,  Jie Han(2007), “ Determination of sulphonamides in animal tissues by high  performance   liquid   chromatography   with   pre­column   derivatization   of   9­ fluorenylmethyl chloroformate”,  Journal of Separation Science ,30(16),  pp.  2647–2655 24 Richard Lindberg, Per­Åke Jarnheimer, Björn Olsen, Magnus Johansson  and  Mats Tysklind  (2004),    “Determination  of antibiotic substances in hospital  sewage water using solid phase extraction and liquid chromatography/mass  spectrometry   and   group   analogue   internal   standards”,  Chemosphere,  57(10) ,pp.1479 ­1488 25 Rodrigo H.M.M. Granja, Alfredo M. Montes Niño, Fernanda Rabone  and  Alessandro   Gonzalez   Salerno(2008),  “A   reliable   high­performance   liquid  chromatograph   with   ultraviolet   detection   for   the   determination   of  sulfonamides in honey” ,  Analytica Chimica Acta , 613(1), pp. 116­119.  26 Ticiano Gomes do Nascimento, Eduardo de Jesus Oliveira and Rui Oliveira  Macêdo(2005),’’  Simultaneous   determination  of   ranitidine   and  metronidazole  in   human   plasma   using   high   performance   liquid  chromatography   with   diode   array   detection’’,  Journal   of   Pharmaceutical   and Biomedical Analysis, 37( 4), pp. 777­783.  27 Theresa A. Gehring, Bill Griffinb, Rod Williams , Charles Geiseker ,Larry  G     Rushing   ,   Paul   H   Siitonen(2006),   “    Multiresidue   determination   of  sulfonamides   in   edible   catfish,   shrimp   and   salmon   tissues   by   high­ performance   liquid   chromatography   with   postcolumn   derivatization   and  fluorescence detection”, Journal of Chromatography B, 840,pp.132–138 28 W.M.A. Niessen(1998), “Analysis of antibiotics by liquid chromatography –  mass spectrometry”. Journal of chromatography A, 812, pp. 53 – 75 29 W. Hela,  , M. Brandtner, R. Widek and R. Schuh(2003), “ Determination of  sulfonamides in animal tissues using cation exchange reversed phase sorbent  79 Luận văn Thạc sĩ                                                                                   Bùi Minh  Thái for sample cleanup and HPLC–DAD for detection”,  Food Chemistry,83(4),  pp.601­608 30 Xiaojia   Huang,   Dongxing   Yuan,   Benli   Huang   (2007)   ,“Simple   and   rapid  determination   of   sulfonamides   in   milk   using   Ether­   type   column   liquid  chromatography”, Talanta ,72 ,pp.1298 ­1301 31 Wang   P,  Li  J,  Zheng   H.(2007),  “  Simultaneous   determination   of  seven  sulfonamides and metronidazole and chloramphenicol in cosmetics by high  performance liquid chromatography’’, Chineses journal  of chromatography,   25(5), pp.743­746 32           Wikipedia,   “the   free   encyclopedia   (2005),   sulfonamide   (medicine)”.  Http://en.wikipedia.org/wiki/Sulfonamide (medicin) 33   Http://www.uptodate.com/contents/metronidazole­an­overview      80 ... Tối ưu hố các điều kiện xử lý mẫu phân tích: Chọn phương pháp xử lý mẫu và xác định hiệu suất thu hồi  Xây dựng quy trình phân tích và ứng dụng quy trình nghiên cứu để phân tích   một số mẫu tơm 2.6 Phương pháp nghiên cứu. .. Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ  0,4ppm) Bảng 3.12: Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ  25 27 29 31 33­34 36 38­39 42 43 45 46 47­48 Luận văn Thạc sĩ Thái... Chiều cao píc sắc ký mẫu tơm ở các nồng độ thêm chuẩn khác  Kết quả xác định hiệu suất thu hồi các chất phân tích …………… Kết quả phân tích các chất  đối với mẫu tơm  rảo…………………… Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm