Tách và xác định đồng thời kháng sinh β - Lactam bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) sử dụng detector huỳnh quang trong mẫu sinh học và dược phẩm là một hướng nghiên cứu mới, với những ưu điểm của nó ngày càng được áp dụng nhiều trong các phòng thí nghiệm và phân tích mẫu dịch vụ. Trên cơ sở đó, tác giả chọn đề tài là: “Nghiên cứu điều kiện phân tích thuốc kháng sinh họ β - Lactam trong các mẫu sinh học và dược phẩm.
Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung ĐAI HOC QUÔC GIA HA NÔI ̣ ̣ ́ ̀ ̣ TRƯƠNG ĐAI HOC KHOA HOC T ̀ ̣ ̣ ̣ Ự NHIÊN TRẦN THỊ DUNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN PHÂN TÍCH THUỐC KHÁNG SINH HỌ β – LACTAM TRONG CÁC MẪU SINH HỌC VÀ DƯỢC PHẨM LN VĂN THAC SI KHOA HOC ̣ ̣ ̃ ̣ Hà Nội 2011 Chun ngành Hố Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn PGS – TS. Nguyễn văn Ri đã giao đề tài và nhiệt tình giúp đỡ em trong suốt q trình thực hiện đề tài Em xin chân thành cảm ơn tới các thầy cơ giáo trong bộ mơn Hóa phân tích, TS. Dương Hồng Anh Trung tâm nghiên cứu cơng nghệ mơi trường và phát triển bền vững ĐH Khoa học Tự nhiên ĐHQGHN, Ths. Nguyễn Thị Tuyết ĐH Y Dược Thái Nguyên luôn giúp đỡ trao đổi những kinh nghiệm trong thời gian qua. Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới các anh chị trong trung tâm môi trường, các bạn học viên sinh viên bộ mơn Hóa phân tích, gia đình đã động viên và giúp đỡ em hồn thành luận văn này Hà nội, ngày 29 tháng 11 năm 2011 H ọc viên Tr ần Th ị Dung Chun ngành Hố Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương Tổng quan 1.1 Giới thiệu chung chất kháng sinh .2 1.1.1. Lịch sử ra đời 1.1.2. Phân loại 1.1.3. Đánh giá tác dụng 1.2. Kháng sinh β – Lactam 1.2.1. Định nghĩa .3 1.2.2 Cấu trúc phân loại 1.2.3 Tính chất vật lý hóa học .7 1.2.4 Tác dụng 1.2.5 chế Chun ngành Hố Phân tích Điều Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung 1.2.6. Tình hình sử dụng thuốc kháng sinh Việt Nam và trên thế giới hiện .9 1.3 Các phương pháp định lượng β – Lactam 11 1.3.1 Các phương pháp quang học 11 1.3.2 Các phương pháp điện hóa 12 1.3.3 Các phương pháp điện di mao quản 12 1.3.4 Sắc kí bản mỏng 13 1.3.5 Sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) 14 Chương Đối tượng phương pháp nghiên cứu 17 2.1 Đối tượng, mục tiêu nội dung nghiên cứu .17 2.1.1 Đối tượng mục tiêu nghiên cứu 17 2.1.2 Nội dung nghiên cứu .17 2.2 Phương pháp nghiên cứu – Phương pháp RP HPLC 18 2.2.1 Nguyên tắc chung trang bị phương pháp HPLC 18 Chun ngành Hố Phân tích Luận văn Thạc sĩ 2.2.2 Sắc Trần Thị Dung ký hấp phụ pha ngược RP HPLC 20 2.2.3. Detector huỳnh quang 22 2.2.4 Một số đại lượng đặc trưng của HPLC 23 2.2.5 Phân tích định lượng bằng HPLC 25 2.3 Kỹ thuật dẫn xuất hóa β Lactam với thuốc thử NBD F .26 2.4 Dụng cụ hóa chất .28 2.4.1 Máy móc dụng cụ .28 2.4.2. Hóa chất 28 Chương 3: Kết thảo luận 30 3.1. Khảo sát các điều kiện tạo dẫn xuất giữa β Lactam và thuốc thử NBDF 30 3.1.1 Khảo sát nhiệt độ phản ứng dẫn xuất hóa .30 3.1.2 Khảo sát thời gian phản ứng dẫn xuất hóa 33 3.2 Khảo sát điều kiện chạy sắc ký .36 3.2.1 Chọn thể tích loop) 36 Chun ngành Hố Phân tích vòng mẫu (sample Luận văn Thạc sĩ 3.2.2 Trần Thị Dung Chọn bước sóng của detector 37 3.3 Chọn pha tĩnh 37 3.4 Chọn pha động .38 3.4.1 pH dung dịch đệm 38 3.4.2 Tỉ lệ thành phần pha động .40 3.4.3 Nồng độ đệm acetat pha động 44 3.4.4 Tốc độ pha động 47 3.5 Đánh giá phương pháp phân tích 50 3.5.1.Khảo sát khoảng tuyến tính lập đường chuẩn 50 3.5.2.Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) .54 3.5.3. Độ đung c ́ ủa phép đo .55 3.5.4 Độ lặp lại phép đo 57 3.6 Phân tích mẫu thực 58 3.6.1 Phân tích phẩm .58 Chun ngành Hố Phân tích mẫu dược Luận văn Thạc sĩ 3.6.2 Trần Thị Dung Phân tích mẫu sinh học 63 3.7 Kết số phương pháp khác xác định kháng sinh cùng loại 68 3.8 Hướng phát triển đề tài 70 KẾT LUẬN 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 PHỤ LỤC .79 Chun ngành Hố Phân tích Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung DANH MỤC BẢNG STT 10 11 12 13 14 15 16 Tên bảng Bảng 1.1. Phân loại và cấu trúc một số Penicillin Bảng 1.2. Phân loại và cấu trúc một số Cephalosporin Bảng 1.3. Hằng số axit của các kháng sinh nghiên cứu Bảng 3.1. Sự phụ thuộc của Spíc vào nhiệt độ phản ứng Bảng 3.2. Sự phụ thuộc của Spíc vào thời gian phản ứng Bảng 3.3. Sự phụ thuộc của thời gian lưu của các chất vào pH pha động Bảng 3.4. Sự phụ thuộc k’ vào pH pha động Bảng 3.5. Sự phụ thuộc của thời gian lưu vào tỉ lệ giữa dung mơi hữu cơ và đệm Bảng 3.6. Sự phụ thuộc của thời gian lưu vào tỉ lệ giữa ACN và MeOH Bảng 3.7. Sự phụ thuộc của k’ vào tỉ lệ giữa ACN và MeOH Bảng 3.8. Thời gian lưu của chất phụ thuộc vào nồng độ đệm Bảng 3.9. Diện tích píc chất phân tích tại nồng độ đệm khác nhau Bảng 3.10. Thời gian lưu của các chất phân tích phụ thuộc vào tốc độ pha động Bảng 3.11. Diện tích pic của các chất phân tích phụ thuộc vào tốc độ pha động Bảng 3.12. Sự phụ thuộc của Spic vào nồng độ chất phân tích Bảng 3.13. Các giá trị Ftính, Fbảng và phương trình đường chuẩn của các kháng sinh β Lactam Chun ngành Hố Phân tích Trang 32 35 38 39 41 43 43 44 45 47 47 51 53 Luận văn Thạc sĩ 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Trần Thị Dung Bảng 3.14. Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của các chất chuẩn kháng sinh β Lactam Bảng 3.15. Độ đung c ́ ủa phép đo tại nồng độ các chất 0,15ppm Bảng 3.16. Độ đung c ́ ủa phép đo tại nồng độ các chất 0,40ppm Bảng 3.17. Độ đung c ́ ủa phép đo tại nồng độ các chất 0,80ppm Bảng 3.18. Khảo sát độ lặp lại của phép đo theo diện tích pic Bảng 3.19. Thơng tin mẫu thuốc phân tích Bảng 3.20. Kết quả độ thu hồi xác định βLactam theo phương pháp thêm chuẩn trong mẫu thuốc Bảng 3.21. Kết quả tính nồng độ Cx và sự sai khác hàm lượng so với kết quả in trên nhãn thuốc Bảng 3.22. Hiệu suất thu hồi của mẫu nước tiểu Bảng 3.23. Hiệu suất thu hồi của mẫu máu Chun ngành Hố Phân tích 55 56 56 57 58 59 61 63 64 66 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung MỞ ĐẦU Ngày nay, khi xã hội ngày càng phát triển thì vấn đề sức khỏe của con người ngày càng được quan tâm, đặc biệt là các sản phẩm liên quan trực tiếp đến sức khỏe con người. Trong y học hiện đại, các β Lactam là thuốc kháng sinh tổng hợp quan trọng chữa bệnh con người, thú y từ khi chúng được giới thiệu vào thị trường vào năm 1938 và là loại kháng sinh được dùng nhiều nhất hiện nay. Nhờ các thuốc kháng sinh mà y học có thể loại bỏ được các dịch bệnh nguy hiểm như dịch hạch, tả, thương hàn, và điều trị hiệu quả nhiều bệnh gây ra bởi vi khuẩn Nhưng, nếu liều lượng và cách dùng kháng sinh khơng đúng sẽ dễ bị vi khuẩn nhờn thuốc, kháng thuốc, từ đó việc chữa trị càng khó khăn. Ngồi ra, còn gây lãng phí cho người bệnh vì có những bệnh do vi rút khơng chữa được bằng kháng sinh nhưng vẫn dùng kháng sinh, gây khó khăn cho việc chuẩn đốn các bệnh và ảnh hưởng tới sức khỏe người bệnh. Đơi v ́ ơi nh ́ ưng ng ̃ ươi cao tuôi, l ̀ ̉ ượng dư khang sinh trong n ́ ươc tiêu nhiêu, con gây ra cac bênh vê thân. ́ ̉ ̀ ̀ ́ ̣ ̀ ̣ Đông th ̀ ơi, l ̀ ượng dư nay thai ra môi tr ̀ ̉ ương se gây lên nh ̀ ̃ ững hâu qua vơ cung nghiêm trong. Vì v ̣ ̉ ̀ ̣ ậy, kiểm sốt và phân tích thuốc kháng sinh đối với người bệnh là biện pháp cần thiết để nâng cao hiệu quả sử dụng chúng Có rất nhiều phương pháp tách khác nhau. Trong đó, phương pháp tách sắc ký là phương pháp tách chọn lọc có độ nhạy cao, lượng mẫu bơm ít, thời gian phân tích ngắn Tách và xác định đồng thời kháng sinh β Lactam bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) sử dụng detector huỳnh quang trong mẫu sinh học và dược phẩm là một hướng nghiên cứu mới, với những ưu điểm của nó ngày càng được áp dụng nhiều trong các phòng thí nghiệm và phân tích mẫu dịch vụ. Chun ngành Hố Phân tích 10 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung + pH = 5,0 + Tỷ lệ ACN/MeOH/đệm là 25/25/50 + Nồng độ đệm 10mM + Tốc độ 1ml/phút + Chạy đẳng dòng + Thể tích mẫu 20 l + Detector huỳnh quang. Bước sóng kích thích là E x=470nm, bước sóng phát xạ Em=530nm Đánh giá phương pháp phân tích: Xây dựng đường chuẩn kháng sinh khoảng 0,05ppm đêń 2,00ppm, hệ số tương quan các đường chuẩn R2 > 0,99 Giới hạn phát hiện LOD của các kháng sinh từ 0,009ppm đến 0,013ppm. Giới hạn định lượng LOQ từ 0,029ppm đến 0,044ppm Độ chính xác nồng độ 0,15ppm; 0,40ppm; 0,80ppm nằm khoảng 0,10% – 6,83 % Hệ số biến động các nồng độ 0,15ppm; 0,40ppm; 0,80ppm nằm trong khoảng 0,65% 4,75% Phân tích hàm lượng kháng sinh trong mẫu thuốc, nước tiểu và mẫu máu Cach x ́ ử li mâu tiên hanh đ ́ ̃ ́ ̀ ơn gian, không phai lam giau, hiêu suât thu hôi la kha cao: ̉ ̉ ̀ ̀ ̣ ́ ̀ ̀ ́ Với mẫu thuốc: hiệu suất thu hồi đạt được từ 99,00% đến 106,00% Với mẫu nước tiểu: hiệu suất thu hồi từ 96,00% tới 99,50% Với mẫu máu: hiệu suất thu hồi là 93,50% Chun ngành Hố Phân tích 83 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y Tế (2007), Hóa dược, tập 2, NXB Y học, Hà Nội. Bộ Y Tế (2002), Dược điển Việt Nam, xuất bản lần thứ 3, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội Lê Thị Huyền Dương (2000), Tách và phân tích đồng thời một số chất quan trọng trong nhóm vitamin A bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và điện di mao quản, Luận án tiến sĩ, ĐH Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Văn Đích (2005), "Khơng nên lạm dụng kháng sinh", Báo y học và đời sống, số 27, pp 5557 Trần Thị Thu Hằng (2009), Tách xác định βLactam đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản, luận văn thạc sĩ, Chun ngành Hố Phân tích 84 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung ĐH Quốc gia Hà Nội Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xn Trung (2003), Hố học phân tích Các phương pháp phân tích cơng cụ Phạm Luận (1998), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao, ĐH Quốc gia Hà Nội Phạm Luận (2004), Giáo trình về những vấn đề cơ sở của kỹ thuật xử lý mẫu, trường ĐH KHTN – ĐHQG Hà Nội Ngọc Phương ( 2006), "Thảm họa lạm dụng kháng sinh cho trẻ", Báo 10 laodong.com.vn, 10102006 Nguyễn Văn Ri (2007), Các phương pháp tách sắc ký, chun đề cao 11 học trường ĐH KHTN ĐHQG Hà Nội Tạ Thị Thảo (2005), Bài giảng chun đề thống kê trong hóa phân tích, 12 ĐH Quốc gia Hà Nội Lại Thị Thu Trang (2010), Nghiên cứu các phương pháp sắc kí xác định thuốc kháng sinh họ β – Lactam, luận văn thạc sĩ, ĐH Quốc gia 13 Hà Nội Trường ĐH Dược Hà Nội (1999), Hóa Dược, Tài liệu lưu hành nội bộ cho sinh viên trường ĐH Dược Hà Nội, NXB ĐH Dược Hà Nội TIẾNG ANH 14 Alison L. Spongberg, Jason D. Witter (2008), “ Pharmaceutical compounds in the wastewater process stream in Northwest Ohio”, science of the total 15 environment 397 (2008), 148157. Althea W. McCormick (2003), " Geographic diversity and temporal trends of antimicrobial resistance in Streptococcus pneumoniae in the United States", 16 Journal Nature medicine, 9, 424 – 430 Attila Gaspar, Melinda Andrasi, Szilvia Kardos (2002), “Application of capillary zone electrophoresis to the analysis and to a stability study of 17 cephalosporins”, Journal of Chromatography B, 775(2), pp 239246 A FernandezGonzalez, R Badia and M.E.DiazGar (2003), “Micelle mediated spectrofluorinetric determination of ampicillin based on metal ion 18 catalysed hydrolysis”, Analytica Chimica Acta, 484(2), pp 239246 Bilal Awadallah, Peter C. Schmidt, Martin A. Wahl (2002), “ Quantitation of Chun ngành Hố Phân tích 85 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung the enantiomers in the parts per billion concentration range for in vitro drug 19 absorption studies” , Journal of Chromatography A, 988 (2003)135 – 143 Biyang Deng, Aihong Shia, Linqiu Lia and Yanhui Kang (2008), "Pharmacokinetics of amoxicillin in human urine using online coupled capillary electrophoresis with electrogenerated chemiluminescence detection", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 48(4), 1249 20 1253 C Y W Yang, W.H Luo, E.B Hansen, j.p Freeman, H,C Thompson (1996), “Determination of amoxicillin in catfish and salmon tissues by liquid chromatography with precolumn formaldehyde”, Journal of AOAC 21 International, 79(2), 389396 C Y W Yang, W.H Luo, E.B Hansen, j.p Freeman, H,C Thompson (1996), "Rapid determination of ampicillin in bovine milk by liquid chromatography with fluorescence detection", Journal of AOAC 22 International, 80(1),. 107190 Dieter Adam (2002), “Global Antibiotic Resistance in S.pneumoniae” 23 Journal of antimicrobial Chemotherap, 50 (Topic T1), 15 David Felmingham (2002), “Increasing prevalence of antimicrobial resistance among isolates of S. pneumoniae from the PROTEKT surveillance study, and comparative invitro activity of the ketolide, telithromycin”, 24 Journal of Antimicrobial Chemotherap, 50, suppl 1, 2537 D Hurtaud, Deleeine B; Sanders P (1994), “Particle beam liquid chromatographymas spectrometry method with negative ion chemical ionization for the confirmation of oxacillin, cloxacillin and dicloxacillin 25 residues in bovine muscle”, Analyst, 199(12), 27312736 Daniela P. Santos, Marcio F. Bergamini and Maria Valnice B. Zanoni (2008), “Voltammetric sensor for amoxicillin determination in human urine using polyglutamic acid/glutaraldehyde film”, Sensors and Actuators B: Chemical, 133(2), pp 398403 Chun ngành Hố Phân tích 86 Luận văn Thạc sĩ 26 Trần Thị Dung D.P. Raymond (2001), " Impact of a rotating empiric antibiotic schedule on infectious mortality in an intensive care unit", Journal of Critical Care 27 Medicin, 29(6):11011108 Duoglas A Skoog., Donald M.West, James F.Holler (1996), Fundamentals of 28 Analytical chemistry, 7th edition, Saunders College E. Benitopena, A.I.PartalRodera, M.E.LeonGonzalez, M.C.MorenoBondi (2005), “Evaluation of mixed mode solid phase extraction cartridges for the preconcentration of betalactam antibiotics in wastewater using liquid chromatography with UVDAD detection”, Analytical Chimica Acta, 556(2), 29 415422 Elena Katz, Roy E. Steen, Peter Schoenmarker, Neil Miller (1998), Hand 30 book of HPLC, Marcel Dekker, New York F. Belal, M. M. ElKerdawy, S. M. ElAshry and D. R. ElWasseef (2000), "Kinetic spectrophotometric determination of ampicillin and amoxicillin in 31 dosage forms", Il Farmaco, 55(1112), pp 680686 JaeHoon Song and ANSORP members (2004), “Macrolide resistance and genotypic characterization of Streptococcus pneumoniae in Asian countries: a study of the Asian Network for Surveillance of Resistant Pathogens 32 (ANSORP)”, Journal of Antimicrobial Chemotherapy; 53, 457463 J.M. Cha, S. Yang, K.H. Carlson (2006), ,"Trace determination of βlactam antibiotics in surface water and urban wastewater using liquid chromatography combined with electrospray tandem mass spectrometry", 33 Journal of Chromatography A, 1115(12), 4657 J.O.Boison, and Keng, L.J.Y. (1998), “Multiresidue liquid chromatographic method for determining resideues of mono and dibasic penicillins in bovine 34 muscle tissues”, Journal of AOAC International,81(6), 11131120 J.O.Boison, and Keng, L.J.Y (1998), “ Improvement in the Multiresidue liquid chromatographic analysis of residues of mono and dibasic penicillins 35 in bovine muscle tissues”, Journal of AOAC International,81(6), 12671272 Kazuoiwaki, Norio Okumuru and Mitsuru Yamazaki and noriyuki Nimura and Toshio Kinoshita (1990), “Precolumn derivatization technique for high Chun ngành Hố Phân tích 87 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung performance liquid chromatographic determination of penicillins with fluorescence detection”, Journal of Chromatography, 504(1), 359367 36 Kimai and Y. Watanabe (1981), “Fluorimetric determination of secondary amino acids by 7Chloro4nitrobenzyl2oxa1,3diazole”, Analytica 37 chimica Acta, 130, 377383 L.Nozal,L.Arce1,A.R´ıos2,M.Valcárcel(2004),"Development of ascreening method for analytical control of antibiotic residues by micellar electrokinetic capillary chromatography", Journal of AnalyticaChimicaActa, 523(2004), 38 21–28 M.I BailonPerez, A.M.GarciaCampana, C CrucesBlanco, M del Olmo Iruela (2008), "Trace determination of βlactam antibiotics in environmental aqueous samples using offline and online preconcentration in capillary 39 electrophoresis", Journal of Chromatography A, 185(2), pp 273280 Michael R Jacobs. (2003), “The Alexander Project 19982000: susceptibility of pathogens isolated from communityacquired respitatory tract infection to commonly used antimicrobial agenta”, Journal of antimicrobial 40 Chemotherap, 52, 229246 Masaaki Kai, Hiromi Kinoshita, Mikio Morizono(2003), “Chromatographic determinations of a βlactam antibiotic, cefaclor by means of fluorescence, chemiluminescence and massspectrometry”, Journal of Mass Spectrometry, 41 39(3), 329 – 340 Merk (1996), The Merck Index, 12th edition 42 Nigel J.K Simpson (2000), Solidphase extraction, Marcel Dekker, New York 43 Osama AlDirbasi, Naotaka Kuroda, Kenichiro Nakashimab (1998), “ Characterzation of the Fluorescence properties of 4 fluoro7nitro benzo2 oxa1,3diazole”, Analytica Chimica Acta, 365, 169176. 44 Pradyot Patnaik (1989), Dean’s Analytical Chemistry Handbook, McGraw Hill Companies, New york 45 R Gonzales (2001), "linical infectious diseases", University of Chicago. Chun ngành Hố Phân tích 88 Luận văn Thạc sĩ 46 Trần Thị Dung Press, 23, 757762 Richard P Wenzel, M.D Michael B Edmond, M.D, M.P.H (2000), " Managing Antibiotic Resistance", New England Journal of Medicine, 343, 47 19611963 Rolando GonzalezHenandez, NuevasPez Lauro, SotoMulet Laritza, Lopez Lopez Miguel, Hoogmartens Joseph (2001), “ Reversed phase high performance liquid chromatographic determination of cefixime in bulk drugs”, Journal of liquid Chromatography and related technologies, 24(15), 23152324 48 Toshimasa Toyoka, Yoshihico Watanabe and Kzuhiro Imai (1983), “Reaction of biological important with 7Chloro4nitrobenzo2oxa1,3 49 diazole”, Analytica Chimica Acta, 149, 305312. Wei Liu, Zhujun Zhang, Zuoqin Liu(2007), "Determination of lactam antibiotics in milk using microflow chemiluminescence system with online 50 solid phase extraction", Analytica Chimica Acta, 592(2), 187–192 WJ Blanchflower, Hewitt SA, Kennedy DG (1994), "Confirmatory assay for the simultaneous detection of five penicillins in muscle, kidney and milk using liquid chromatography electrospray mass spectrometry", Analyst, 119(12), 25952601 Chun ngành Hố Phân tích 89 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung PHỤ LỤC Sắc đồ sắc ký của chất chuẩn kháng sinh β – Lactam vơi NBDF ́ Chun ngành Hố Phân tích 90 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) 600 % 200 A.Press.(Status) 90 90 550 175 80 80 500 150 450 70 70 400 125 60 60 350 100 50 40 75 40 30 50 20 25 50 300 250 200 30 150 20 100 10 50 10 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 (a) CEP 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 (b) CEF mV 550 Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) 500 90 450 80 400 70 350 60 300 50 250 200 40 150 30 100 20 50 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 (c) AMP Sắc đồ sắc ký của cac ́ β lactam vơi NBDF trong m ́ ẫu thuốc Chun ngành Hố Phân tích 91 12.5 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) 30 mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm 90 % A.Press.(Status) 120 90 80 25 110 70 80 100 20 90 70 60 80 60 15 50 70 50 60 10 40 50 30 40 40 30 30 20 10 10 -5 10 0.0 2.5 5.0 7.5 0.0 (a) CEP mV 550 Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) 500 90 450 80 400 70 350 60 300 50 250 200 40 150 30 100 20 50 10 2.5 2.5 (b) CEF 0.0 20 20 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 (c) AMP Chun ngành Hố Phân tích 92 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Sắc đồ sắc ký của các chất vơi NBDF trong m ́ ẫu nước tiểu mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % 90 mV 17.5 Detector A:Ex:470nm,Em:530nm A.Press.(Status) % A.Press.(Status) 90 90 80 15.0 80 80 70 12.5 70 70 60 60 10.0 60 50 50 50 7.5 40 40 40 30 5.0 30 30 20 2.5 20 20 10 10 0.0 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 (a) Mẫu nước tiểu cua Blank ̉ 15.0 0.0 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 (b) Mâu n ̃ ươć tiêu ̉ sau khi uông ́ thuôć CEP Chun ngành Hố Phân tích 2.5 93 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm 400 mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % A.Press.(Status) 20.0 90 17.5 80 15.0 70 % A.Press.(Status) 60 12.5 90 350 50 10.0 80 300 40 250 200 70 7.5 60 5.0 30 20 50 2.5 10 40 150 0.0 30 100 20 50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 10 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 (c) Mâu n ̃ ước tiêu sau khi uông CEF ̉ ́ Sắc đồ sắc ký của AMP vơi NBDF trong m ́ ẫu máu Chun ngành Hố Phân tích (d) Mâu n ̃ ước tiêu sau khi ng AMP ̉ ́ 0.0 15.0 94 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm % mV Detector A:Ex:470nm,Em:530nm A.Press.(Status) 40 A.Press.(Status) 15.0 90 35 % 90 80 80 12.5 30 70 25 60 70 10.0 50 20 60 50 7.5 40 15 40 5.0 30 30 10 20 20 2.5 10 10 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 0.0 (a) Mẫu máu cua Blank ̉ 2.5 5.0 7.5 10.0 50000 45000 40000 35000 30000 25000 20000 15000 10000 5000 2.5 (b) Mâu mau sau khi uông thuôc AMP ̃ ́ ́ ́ Độ lặp lại 0.0 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Đồ thị của các chất chuẩn kháng sinh vơi NBDF đi qua đi ́ ểm 0 Chun ngành Hố Phân tích 95 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung 800000 800000 700000 700000 600000 600000 500000 500000 S (mAu.s) S(mAu.s) 400000 Y= B*X Thongso gia tri sai so -B 362925,16737 1432,61607 -R SD N 0,99998 3298,90765 300000 200000 100000 0,0 0,5 1,0 1,5 400000 200000 100000 0,0 2,0 0,5 1,0 1,5 2,0 C(ppm) C(ppm) (a) CEP Chun ngành Hố Phân tích Y= B*X Thongso gia tri sai so -B 388856,33192 2199,89118 -R SD N 0,99999 5065,72415 300000 (b) CEF 96 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung 1000000 800000 S(mAu.s) 600000 Y= B*X Thongso gia tri sai so -B 467966,86469 2784,45768 -R SD N 0,99999 6411,81466 400000 200000 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 C(ppm) (c) AMP Chun ngành Hố Phân tích 97 ... Chun ngành Hố Phân tích 10 Luận văn Thạc sĩ Trần Thị Dung Trên cơ sở đó, chúng tơi chọn đề tài là: Nghiên cứu điều kiện phân tích thuốc kháng sinh họ β Lactam trong các mẫu sinh học và dược phẩm ”. ... Độ đúng và độ lặp lại của phép đo 4. Phân tích mẫu thực, đánh giá khả năng áp dụng của phương pháp Phân tích mẫu dược phẩm (mẫu thuốc) Phân tích mẫu sinh học (mẫu nước tiểu và mẫu máu)... Nói chung, khi phân tích kháng sinh trong các đối tượng mẫu phức tạp như thực phẩm, mẫu sinh học, mẫu nước thải, việc xử lý mẫu đối với các phương pháp đều đòi hỏi qui trình xử lý phức tạp do các kháng sinh liên kết chặt chẽ với