Bài thuốc Bạch hoa xà – Bán chi liên đã được sử dụng chữa ung thư lâu đời trong dân gian nhưng chưa có dữ liệu khoa học rõ ràng. Do đó trong nghiên cứu này chúng tôi xác định tác động kháng ung thư in vitro và đánh giá độc tính cấp của bài thuốc.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ IN VITRO VÀ ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG CỦA BÀI THUỐC BẠCH HOA XÀ – BÁN CHI LIÊN Nguyễn Phương Nam*, Nguyễn Thị Mỹ Nương **, Võ Đình Hưng*, Đỗ Tân Khoa*, Dương Hồng Tố Qun* TĨM TẮT Tình hình chung mục tiêu nghiên cứu: Bài thuốc Bạch hoa xà – Bán chi liên sử dụng chữa ung thư lâu đời dân gian chưa có liệu khoa học rõ ràng Do nghiên cứu xác định tác động kháng ung thư in vitro đánh giá độc tính cấp thuốc Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Tác động gây độc tế bào ung thư Hep G2 MCF-7 cao chiết nước cao cồn 45 % thuốc xác định phương pháp SRB Cao chiết tiềm tiếp tục đánh giá độc tính cấp chuột chuẩn hóa cao theo tiêu chuẩn Dược điện Việt Nam Kết quả: Cao cồn 45% có khả gây độc dòng tế bào Hep G2, MCF- hiệu cao nước với IC50 0,61 ± 0,01 (Hep G2) 0,38 ± 0,01 (MCF-7) mg/mL Cao chiết cồn 45 % độc tính cấp chuột thử nghiệm với liều tối đa 21,18 g cao/kg chuột, tương ứng với 18,20 g cao chiết/kg Kết luận: Kết nghiên cứu cho thấy thuốc có khả gây độc dòng tế bào Hep G2 MCF-7 không gây độc chuột liều 21,18 g/kg chuột Kết đề tài sở để tiến hành nghiên cứu in vivo Từ khóa: Bạch hoa xà, Bán chi liên, độc tính tế bào, độc tính cấp ABSTRACT IN VITRO ANTICANCER ACTIVITY AND IN VIVO ACUTE TOXICITY OF BẠCH HOA XÀ – BÁN CHI LIÊN REMEDY Nguyen Phuong Nam, Nguyen Thi My Nuong, Vo Dinh Hung, Do Tan Khoa, Duong Hong To Quyen * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 136 – 141 Background and Objectives: The remedy of Hedyotis diffusa and Scutellaria barbata is empirically used for cancer treatment, but the scientific data has not been clear In this study we identified in vitro anticancer activity and acute toxicity of this remedy Materials and Methods: The in vitro anticancer activity of aqueous and 45% ethanol extract of the remedy was determined by SRB assay on Hep G2 and MCF-7 cells The potential extract was performed the in vivo acute toxicity and evaluated the criteria for quality control following Vietnamese Pharmacopoeia guideline Results: The result of SRB assay showed that ethanol extract had a cytotoxicity on Hep G2 and MCF-7 cell line higher aqueous extract with IC50 0.61 ± 0.01 (Hep G2) and 0.38 ± 0.01 (MCF-7) mg/mL There was no mortality was observed in mice at Dmax 21.18 g extract/kg body weight corresponding to 18.20 g plant powder/kg The remedy was quality control Conclusions: The 45 % ethanol extract expressed the antiproliferation on Hep G2 and MCF-7 cells and no toxicity in mice at 21.18 g/kg The further studies should be done to confirm in vivo anticancer activity of this extract Keywords: Hedyotis diffusa, Scutellaria barbata, cytotoxicity, acute toxicity Bệnh viện Y học Cổ truyền TP HCM Tác giả liên lạc: Ths DS Dương Hồng Tố Quyên 136 ** ĐH Khoa học tự nhiên TP HCM ĐT: 0941791133 Email: dsduongquyen@gmail.com Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư bệnh có nguy tử vong cao mang lại nhiều gánh nặng cho thân, gia đình người bệnh xã hội Hiện nay, phẫu thuật, xạ trị hóa trị phương pháp dùng điều trị ung thư nhằm tiêu diệt loại bỏ trực tiếp khối u Tuy nhiên phương pháp thường gây tác dụng phụ, làm thể bệnh nhân suy yếu nghiêm trọng, gây đau đớn, suy nhược(7) Y học cổ truyền (YHCT) quan niệm hình thành khối u hậu khí trệ, huyết ứ, đàm ứ, thấp trệ, nhiệt độc nội uẩn, khí hư tổn Do nguyên tắc điều trị YHCT dưỡng khí, giải tà khí; điều chỉnh âm dương; bồi bổ thể; giải khí thơng huyết; nhiệt giải độc; nhuyễn kiên tán kết; dưỡng âm nhiệt kiện tỳ ích thận, lấy ngun tắc dưỡng khí, bồi bổ thể chính(7,8) Bán chi liên Bạch hoa xà hai vị nhiều thuốc hỗ trợ điều trị ung thư sử dụng dân gian từ lâu Bài thuốc chữa u ác, ung thư gan thời kỳ đầu: Bạch hoa xà 80 g, Bán chi liên 40 g đông y sử dụng nhiều(5), nguồn ngun liệu có giá rẻ dễ tìm Tuy nhiên, vấn đề sử dụng dược liệu Bạch hoa xà thường nhầm lẫn với Phòng hoa xà vấn đề quan tâm, ảnh hưởng đến hiệu điều trị(5) Bên cạnh đó, nước ta chưa có cơng trình nghiên cứu có hệ thống sở khoa học chữa bệnh thuốc Do đó, đề tài bước đầu nghiên cứu tác động kháng ung thư in vitro khảo sát độc tính cấp thuốc nhằm củng cố thêm sở cho việc sử dụng thuốc tương lai PHƯƠNGTIỆN-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Bán chi liên (Radix Scutellariae) phơi khô định danh TS Võ Văn Lẹo thuộc trường ĐH Y Dược Tp.HCM, với độ ẩm (10,1%), tro toàn phần (7,4%), chất chiết dược Nghiên cứu Y học liệu (6,2%) Bạch hòa xà (Herba Hedyotidis diffusae) phơi khô kiểm tra đạt chất lượng theo DĐVN IV Cả hai dược liệu cung cấp Bệnh viện Y học cổ truyền Tp HCM Động vật – tế bào thí nghiệm Dòng tế bào ung vú MCF-7 dòng tế bào ung thư gan Hep G2 công ty ATCC, Hoa Kỳ (the American Type Culture Collection) cung cấp nuôi môi trường E’MEM có bổ sung L-glutamine (2 mM), HEPES (20 mM), amphotericin B (0,025 µg/ml), penicillin G (100 UI/ml), streptomycin (100 µg/ml), 10% (v/v) huyết bào thai bò ủ 37oC, % CO2 Các tế bào nuôi cấy bảo quản phòng thí nghiệm Sinh học phân tử, Bộ môn Di truyền, trường ĐH Khoa học Tự nhiên TP.HCM Các tế bào sử dụng cho thử nghiệm thuộc hệ từ P4 đến P20 Chuột nhắt trắng, phái đực chủng DDY khỏe mạnh, - tuần tuổi trọng lượng 22 ± g, mua Viện Pasteur TP.HCM Chuột nuôi ổn định tuần trước thử nghiệm mơi trường nhiệt độ phòng 28oC – 30oC chu trình 12 sáng tối Chuột cho uống nước ăn cám viên viện Vắc xin sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp Dung mơi – hóa chất, trang thiết bị Dung môi dùng chiết xuất sắc ký lớp mỏng: chloroform, methanol, n-butanol, nhexan, ethyl acetat (đạt tiêu chuẩn dùng cho sắc ký), ethanol (cơng nghiệp) Các hóa chất dùng cho định tính thành phần hóa học pha chế theo Dược điển Việt Nam IV Các hóa chất ni cấy tế bào thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào ung thư: môi trường E’MEM, huyết thanh, L-glutamine, penicillin, amphotericin, trypsin, sulforhodamine B (SRB) mua từ Sigma Các loại muối PBS, HEPES, NaHCO3, EDTA, Tris, trichloroacetic acid, acid acetic mua từ Merck Máy móc, trang thiết bị: Cân điện tử, cân đo độ ẩm, tủ sấy, bếp cách thủy, máy quay chân khơng, kính hiển vi Tủ cấy, tủ ni tế bào, kính 137 Nghiên cứu Y học hiển vi soi ngược, máy đọc đĩa Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu thực nghiệm xử lý thống kê công cụ phân tích số liệu (Data analysis) Microsoft Excel, so sánh giá trị trung bình phương pháp thống kê sử dụng phép kiểm t- Student Phương pháp nghiên cứu Thiết kế thực nghiệm, đo lường độc lập Chiết xuất cao Quy trình chiết cao n ớ{ Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 sófg64922ni rà 6:0 n}.0Phần trām"gäy$đổc8tắ bà} *I%) đ ợc tí~h theo wơ~g thứg 1!(OD mẫu0tbí0nkhiệ}/_D mấu đềi(cxứpg=) x,100 Giý trớ GC;0&c tớ~h0bng thnÔmm$Gralhpad Tr}sa.4Cem~tetheail $Calfi{chea) e q*dng de ihng d no ciểm s át aự ổl địth8cụa$qqi(tzìjh qaa(céc0lần lòm Error! Reference source not found.), Hás ĉịnh0đớc tïnh cấp đưỏn{ uống LX54 &leềy |àe chặt85(%0độnw tậd vhợ ng`iễm7( DEB ORef52 44804? \r"\r X*&MERME^OZMET.Error! Reference source not found.5 Fạsh:h a0xâ 100 rà Bán cpi liêb 650 đei tár vhưnp fột dhơ,0c`o2n ớc dàk dỷ0lề fược liệi % nưỗc>(-:7) Ngêm030 phàt4 kắc nấc `ưểc lận01, Vã(d ợo ~iểu(cjo tmế| jưộc&vúo58 rráne sẵn Dsnm a khqi triọn: gl rgforo ctxyl icutat (3:/)* 104 yl< chmết zằzg eth l"auedat m ll (mi4ln,1 gl0cdo(ti58 rráne sẵn Dsnm yôa khqi triọn: gl rgforo ctxyl icutat (3:/)* Giới hấn$kim l ạk bặhg> Viến hên` bằlg.pdươnw phñp&qmang pjổ0hấp tdu$ngu}êf tử> Thực heệb dại drung `â} dịyh8vụ nhỉn$tõc| rhí bg`iịm"TPHAM> Ēịvh tõnj 耠 Já` ghi liên: chấm$riêfg bgệt lêf bảz oỏng