Nghiên cứu khả năng bất động tế bào nấm men saccharomyces cerevisae của gel calci alginat

BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ NGỌC MAI N G H IÊN cúu K H Ả NÃNG BẤT Đ Ộ N G TÊ BÀO NẤM M EN SAC CH ARO M YCES CEREVISIAE CỦA GEL CALCI-ẠLGINAT (Khóa luân tốt nghiêp dươc sỹ khóa 2002 - 2007) \ piỉóm í ịuiííW Ngưòi hướng dẫn : TS. Đàm Thanh Xuân Nơi thực : Bộ môn Công nghiệp Dược Trường Đại học Dược Hà Nội Thời gian thực : Từ 12/2006 đến 5/2007 Hà Nội, tháng năm 2007 LỜI CẢM ƠN Vói tất kính trọng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: TS. Đàm Thanh Xuân, môn Công nghiệp Dược trường Đại học Dược Hà Nội - người thầy trực tiếp hướng dẫn thực khóa luận này. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS. TS. Từ Minh Koóng, hiệu trưởng trường Đại học Dược Hà Nội, ThS. Lê Xuân Hoành, môn Công nghiệp Dược trường Đại học Dược Hà Nội cho nhiều ý kiến quý báu giúp đỡ nhiều trình thực khóa luận. Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô, anh, chị kỹ thuật viên môn Công nghiệp Dược tạo điều kiện giúp đỡ thực khóa luận. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể thầy cô trường dạy dỗ, dìu dắt năm học trường. Cuối cùng, vói lòng biết ơn sâu sắc xin gửi lòi cảm ơn đến gia đình - bố, mẹ, anh chị tất người thân, bạn bè động viên, khích lệ, ủng hộ nhiệt thành giúp đỡ trình học tập nghiên cứu. Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2007 Sinh viên Trần Thị Ngọc Mai MỤC LỤC ĐẶT VẤN Đ Ể .1 PHẦN I-T Ổ N G QUAN 1.1. SACCHAROMYCES CEREVISIAE . 1.2. LÊN MEN SẢN XUẤT ETHANOL . 1.2.1. Các phương pháp sản xuất alcol truyền thống từ vi sinh v ậ t .4 1.2.2. Nhược điểm sản xuất alcol theo phương pháp truyền thống . . . . 1.3. PHƯƠNG PHÁP BẤT ĐỘNG TẾ BÀO 1.3.1. Các phương pháp bất động tế bào . 1.3.2. Các ứng dụng phương pháp bất động tế bào . 12 1.4. ALGINAT . 14 1.4.1. Cấu trúc alginat 14 1.4.2. Tính chất algỉnat 15 1.4.3. ứng dụng alginat . 18 PHẦN II - THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ . 19 2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THựC NGHIỆM . 19 2.1.1. Nguyên vật liệu 19 2.1.2. Phương pháp thực nghiệm 20 2.2. KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT . 25 2.2.1. Sô lượng tế bào có hạt gel calci alginat . 25 2.2.2. Số lượng tế bào có dịch lên men . 31 2.3. BÀN LUẬN .33 KẾT LUẬN 36 ĐỂ XUẤT .36 ĐẶT VẤN ĐỂ Bất động tế bào công nghệ tiên tiến, dù đời chưa lâu thể nhiều ưu điểm vượt trội so với phương pháp truyền thống sử dụng tế bào tự so với kỹ thuật bất động enzym - sở phương pháp bất động tế bào. Sản xuất phương pháp bất động tế bào cho - suất tạo sản phẩm cao hơn, sản phẩm tinh khiết hơn, đặc biệt sản xuất liên tục qui trình tự động hóa. Bởi vậy, bất động tế bào thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học giới. Ngày có nhiều sản phẩm sinh học sản xuất phương pháp bất động tế bào qui mô công nghiệp, kể đến vài ví dụ tiêu biểu như: sản xuất siro fructose từ tinh bột, sản xuất - APA tiền chất để tổng hợp nhiều kháng sinh nhóm p - lactam, sản xuất ethanol dùng nhiều ngành công nghiệp lượng . Việt Nam, bất động tế bào vấn đề mẻ nghiên cứu qui mô phòng thí nghiệm. Trong đó, nhu cầu ngưòi sản phẩm sinh học ngày tăng lên đòi hỏi phải tiếp cận với tiến giói để nâng cao suất, chất lượng sản phẩm tạo nhiều sản phẩm mới. Bởi vậy, tiến hành nghiên cứu kỹ thuật bất động tế bào lĩnh vực sản xuất liên tục ethanol với khóa luận tốt nghiệp: “Nghiên cứu khả bất động tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae gel calci alginat”. Nghiên cứu nhằm mục tiêu: 1. Đánh giá khả cố định tế bào nấm men gel caỉci alginat nồng độ algỉnat khác nồng độ tế bào khác nhau. 2. Đánh giá khả cố định tế bào nấm men gel calci alginat trạng thái lên men liên tục lên men tĩnh. 3. So sánh khả cố định tế bào calci alginat thạch agar trạng thái lên men tĩnh. PHẦN I - TỔNG QUAN 1.1. SACCHAROMYCES CEREVISIAE Nấm men vi sinh vật điển hình cho nhóm nhân thật, chúng phân bố rộng rãi tự nhiên, chất có chứa đường, pH thấp mật mía, ri đường, rau . Loại nấm men để làm rượu bia thường sử dụng s. cerevỉsiae có kích thước khoảng từ 2,5 - 10|im X 4,4 - 21|j.m, nhìn thấy rõ kính hiển vi quang học. s. cerevisiae có nhiều hình dạng: hình trứng, hình ovan, hình chanh . Chúng chủ yếu sinh sản theo lối nảy chồi. Ở phương thức sinh sản này, từ tế bào mẹ nảy chồi nhỏ lớn dần lên tách ra. Có trường hợp tế bào không tách rời mà kết thành chuỗi tạo thành khuẩn ty giả. Khi gặp điều kiện không thuận lợi s. cerevisiae sinh sản bào tử. [3], [8] ứng dụng s. cerevỉsỉae: Từ xa xưa, loài ngưòi biết sử dụng nám men để làm rượu, làm bánh mỳ, nước hoa làm loại nước có gas . Ngày nay, ứng dụng nấm men tiếp tục sử dụng rộng rãi đời sống. Trong công nghiệp, nấm men dùng để sản xuất loại đồ uống chứa cồn (rượu, rượu vang, bia, nước giải khát .). Nấm men nuôi cấy điều kiện hiếu khí để thu sinh khối. Từ sinh khối nấm men người ta tạo nhiều sản phẩm có ích cho sống. Một số ứng dụng sinh khối nấm men kể đến như: - Sinh khối nấm men dạng men ép dùng làm men bánh mỳ, bột nở sản xuất bánh mỳ, bánh bao loại bánh làm từ bột nhào. - Men ép dùng để sản xuất cao nấm men, bột nấm men dùng làm môi trường lên men vi sinh vật phòng thí nghiệm - Sinh khối nấm men để sản xuất protein đơn bào làm thực phẩm loại thức ăn tốt chăn nuôi - Từ sinh khối nấm men chiết tách nhiều loại enzym như: amylase, lactase, uricase . - Sinh khối nấm men có chứa hàm lượng cao vitamin nhóm B, p - caroten, ergosterol, acid ribonucleic amino acid không thay lysin, cystein methionin . dùng làm thuốc bổ. [4], [5] Trong y dược, nhờ áp dụng thành tựu kỹ thuật di truyền, nhà khoa học tạo chủng nấm men có khả siêu tổng hợp ngoại bào. Những chủng sinh lượng enzym ngoại bào vượt xa nhu cầu sử dụng trao đổi chất chúng, lượng enzym thừa chiết lấy để làm thuốc. Những enzym sản xuất theo cách amylase, glucoamylase, lipase dùng làm thuốc hỗ trợ tiêu hóa. Một số biệt dược chế phẩm đông khô nấm men có mặt thị trường Bioflor, Ultra - Levue . để dự phòng điều trị tiêu chảy, điều trị hội chứng kích thích ruột trường hợp ỉa chảy loạn khuẩn đường ruột sử dụng kháng sinh. [4] Chủng nấm men s. cerevisiae có nhiều ứng dụng thực tế. Nuôi s. cerevisiae điều kiện đặc biệt chúng tạo hàm lượng cao vitamin D ergosterin để bào chế thành thuốc quí có giá trị y học. Không thế, s. cerevỉsỉae sử dụng vector để mang AND tái tổ hợp phục vụ cho việc sản xuất sản phẩm sinh học có hiệu điều tri cao như: insulin, interferon, kháng thể . s. cerevisiae dùng bất động tế bào để sản xuất liên tục ethanol vài sản phẩm khác; nhiều nước giói đưa công nghệ vào sản xuất công nghiệp thay cho phương pháp truyền thống lên men mẻ. [5], [7] 1.2. LÊN MEN SẢN XUẤT ETHANOL Lên men rượu trình biến đổi đường thành rượu khí cacbonic dưói tác dụng vi sinh vật, thường gặp lên men bỏi nấm men. Lên men rượu tóm tắt theo phương trình sau: C6H120 ( glucose) -> 2C2H5OH + 2CƠ2 + Q ( alcol ethylic) ( cacbonic) Lên men rượu trình hóa sinh phức tạp, qua nhiều giai đoạn, sản phẩm rượu tạo nhiều sản phẩm phụ glycerin, aldehyd acetic, acid acetic, acid lactic, acid citric, sinh khối rượu bậc cao. [8] Nguyên liệu dùng cho lên men rượu nguyên liệu chứa đường, tinh bột, cellulose dịch thuỷ phân từ gỗ, dịch thải nhà máy giấy dạng kiềm Sulfit . Nguồn đường sử dụng monosaccharid glucose fructose; disaccharid saccharose maltose; nguyên liệu chứa đường ri đường, mía, củ cải đường . Tinh bột cellulose lên men trực tiếp nên cần qua giai đoạn thuỷ phân thành đường lên men. Nồng độ đường 10 - 20%, nhiệt độ 28 - 30°c pH khoảng từ 3,5 - 4,5 điều kiện thuận lọi cho việc lên men. Rượu sinh tích tụ dần dịch lên men lại trở thành chất ức chế, kìm hãm tế bào nấm men. Ở nồng độ - 5%, rượu có tác dụng kìm hãm nấm men phát triển, nồng độ - 6% rượu làm nấm men đình sinh sản lên men tiếp tục. Các nấm men rượu vang lên men độ rượu 16%, riêng s. ovifornis lên men độ rượu tới 19 - 22%. Kỵ khí yêu cầu quan trọng lên men rượu. Trong điều kiện kỵ khí, lên men xảy mạnh mẽ (alcol ethylic tạo thành nhiều) nấm men thu lượng để trì hoạt động sống cách lên men glucose thành rượu mà sinh sản tạo sinh khối. Khi có không khí, nấm men chuyển sang chu trình hô hấp hiếu khí tạo nhiều sinh khối lên men yếu đi. Lên men rượu thường dùng s. cerevisiae chúng có khả sinh trưởng nhanh, lực lên men cao có khả chịu độ cồn lớn. Có chủng chịu nồng độ cồn đến 16 -18%, có cao hơn, thông thường vào khoảng 12%. Trong công nghiệp lên men cồn thường sử dụng chủng nấm men đáp ứng điều kiện sau: - Lên men nhiều loại đường khác đạt tốc độ lên men nhanh, tạo tạp chất - Chịu độ cồn cao: 10 - 12% - Thích nghi với điều kiện không thuận lợi môi trường, đặc biệt chất sát trùng. [8], [11] 1.2.1. Các phương pháp sản xuất aỉcol truyền thống từ vỉ sinh vật 1.2.1.1. Đường hoá bánh men thường hay bánh men thuốc bắc Đây phương pháp dùng phổ biến dân gian nấu rượu từ nguyên liệu có chứa tinh bột (gạo, ngô, khoai, sắn .)- Trong bánh men có tập hợp vi sinh vật như: nấm sợi, nấm men, vi khuẩn . nuôi cấy phát triển môi trường tinh bột sống. Nếu bánh men thuốc bắc bổ xung thêm từ 10 - 20 vị thuốc bắc (quế, hồi, thảo quả, sa nhân .) để tạo hương vị. Cho bánh men ủ với tinh bột nấu chín ta thu rượu qua giai đoạn: HTJ I t thủy phân „ . lên men _ Tỉnh b ộ t----- — -----> Đường----- —---- > Rượu * Rượu làm theo phương pháp có mùi vị thơm ngon tự nhiên song hiệu suất thu thấp. Do vậy, phương pháp chủ yếu sử dụng để đường hoá tinh bột thành đường sản xuất rượu theo phương thức thủ công. [6], [9] 1.2.1.2. Phương pháp Maltase Phương pháp dựa nguyên tắc sử dụng enzym (chủ yếu enzym a ß - amylase) thóc đại mạch, tiểu mạch nảy mầm (malt) để chuyển hoá tinh bột hồ hoá thành đường cho lên men rượu nhờ s. cerevisiae. Phương pháp thường dùng sản xuất bia. Tuy nhiên, thóc malt chủ yếu trồng vùng ôn đới nên ngày người ta cố gắng nghiên cứu bổ xung hay thay dần phức hệ amylase mâm thóc malt amylase nấm mốc vi khuẩn để sử dụng rộng rãi hơn. [6], [9] 1.2.1.3. Phương pháp Amylose Khi sản xuất cồn theo phương pháp này, người ta cho nấm sợi Rhizopus spp. Mucor spp. phát triển hẳn dung dịch chất. Trong trình phát triển, loài nấm sợi sinh tổng hợp loại enzym thủy phân tinh bột, protein cellulose thành đường. Nấm men có mặt bình lên men song song chuyển hóa đường thành rượu. Phương pháp Amylose có hiệu sử dụng nguồn tinh bột có độ nhớt cao môi trường nước để lên men. [6], [9] 1.2.1.4. Phương pháp Mycomalt Đây phương pháp dùng phổ biến nước nước ngoài. Nguyên tắc phương pháp dùng enzym vi sinh vật để đường hóa tinh bột, công đoạn đường hóa hoàn toàn tách hẳn công đoạn lên men. Enzym để thuỷ phân tinh bột thường a - amylase từ nấm mốc vi khuẩn. Các chủng nấm mốc sử dụng để đường hoá tinh bột nuôi cấy theo hai phương pháp: nuôi cấy bề mặt nuôi cấy chìm. Thòi gian đường hoá dài hay ngắn tuỳ thuộc vào chủng giống nấm mốc nguyên liệu sử dụng. Sản phẩm trình đường hoá hỗn hợp dextrin, maltose glucose, glucose chiếm tỷ lệ cao nhất. Sau đường hóa, s. cerevisỉae cho vào để lên men rượu. [6], [9], [11] 1.2.2. Nhược điểm sản xuất alcol theo phương pháp truyền thống Tuy việc sản xuất alcol theo phương pháp truyền thống có nhiều cải tiến để đạt hiệu cao phương pháp có nhiều nhược điểm: - Thời gian lên men kéo dài nên tốn nhân công, xây dựng nhà xưởng . - Lên men theo mẻ nên không tiến hành liên tục - Không thể sử dụng lại nấm men dùng - Dịch lên men tĩnh nên không tạo chênh lệch cao nồng độ chất sản phẩm bên bên tế bào nấm men, ra, alcol ethylic sinh ức chế ngược nấm men nên hiệu suất tạo alcol không cao - Tế bào nấm men dễ bị tác động chất ức chế có môi trường. [4], [13], [15] Ngày nay, bất động tế bào xem giải pháp hữu hiệu để khắc phục nhược điểm lên men truyền thống. Ở nhiều nước giới, kỹ thuật bất động tế bào ứng dụng nhiều công nghiệp sản xuất ethanol, amino acid, kháng sinh . cho sản phẩm tinh khiết suất tạo sản phẩm cao hơn. Ở Việt Nam, việc nghiên cứu bất động enzym, bất động tế bào để sản xuất chế phẩm sinh học tiến hành điều kiện phòng thí nghiệm mà chưa áp dụng thực tế. 1.3. PHƯƠNG PHÁP BẤT ĐỘNG TẾ BÀO Năm 1916, Nelson Griffin tình cờ nhận thấy enzym invertase nấm men hấp phụ lên than hoạt giữ hoạt tính xúc tác cho phản ứng thủy phân đường mía. Đây phát bất động enzym. Sau đó, nhiều nghiên cứu vấn đề thực nhiều noi giói. Năm 1969, bất động enzym lần đưa vào ứng dụng qui mô công nghiệp nhà máy Tanabe Seiyaku. Co Nhật Bản. Từ đến chất xúc tác sinh học bất động ngày thu hút quan tâm toàn giói. [13] Nguyên tắc phương pháp bất động enzym mô tả tóm tắt sau: enzym tinh chế dạng tinh khiết gắn gói polymer không hòa tan nước. Các hạt enzym nhồi vào cột hình trụ có kích thước thích hợp, sau cho dung địch chất chảy qua, enzym thực phản ứng phân cắt chất thành sản phẩm tương ứng. [5], [15] So với enzym dạng tự sử dụng lần thường bị lẫn vào sản phẩm enzym bất động có nhiều ưu điểm bật hơn. Những ưu điểm là: - Enzym sử dụng nhiều lần để biến đổi chất thời gian dài - Enzym không lẫn vào sản phẩm, tránh ảnh hưỏng không tốt đến sản phẩm - Có thể ngừng nhanh chóng phản ứng cần thiết cách tách enzym khỏi chất. [10] Tuy vậy, bất động enzym gặp phải nhiều khó khăn như: - Việc tách chiết, tinh chế enzym phức tạp tốn - Các enzym thường bị giảm hoạt tính bị ảnh hưởng phản ứng để cố định enzym - Các enzym thường ổn định bị tách khỏi tế bào. [5], [16] Để khắc phục nhược điểm này, người ta tìm cách bất động toàn tế bào thay cho bất động enzym. Khi đó, không cần chiết tách enzym từ tế bào nên tránh việc làm hoạt tính enzym phá tế bào, tránh qui trình đắt tiền cho phép sử dụng enzym trạng thái ổn định hơn. [5] Về nguyên tắc bất động tế bào phương pháp giữ cố định tê bào vị trí xác định mặt không gian mà không làm thay đổi hoạt tính xúc tác chúng. Các tế bào sử dụng lại nhiều lần sử dụng liên tục. [13], [16] Bất động dạng chất xúc tác sinh học (gồm đơn enzym, hệ thống gồm nhiều enzym liên kết, tế bào quan tế bào) nói chung bất Cột bố trí lắp đặt hình vẽ: Hình 4: Cấu tạo cột lên men sản xuất alcol ethylic Sau khoảng thòi gian định, tiến hành lấy mẫu dịch để xác định số lượng tế bào có dịch lên men. [14] 2.1.2.8. Phương pháp nuôi cấy tĩnh tế bào bất động hạt gel calci alginat Chuẩn bị môi trường nuôi cấy tĩnh: pha 100 ml dung dịch glucose 10% bình nón dung tích 250 ml, nút bông, hấp tiệt trùng 0,6 at/ 20 phút, để nguội (dung dịch B). Cân 10 gam hạt vừa tạo xong cho vào dịch đường đem ủ tủ 30°c 24h. Sau lấy gam hạt nuôi cấy tĩnh rửa dung dịch NaCl 0,9% nước cất vô trùng phá hạt để đếm số lượng tế bào có gam hạt. Đồng thời đếm số lượng tế bào có lml dịch nuôi cấy tĩnh sau 24h. 23 2.1.2.9. Phương pháp bất động tế bào thạch Pha 50 ml dung dịch thạch 5%, hấp tiệt trùng 0,6 at/ 20 phút, để nguội xuống khoảng 40 - 45°c, cho 50 ml dịch tế bào vào khuấy nhanh để trộn đổ đĩa petri tiệt trùng thành lớp dày khoảng 0,5 cm. Dùng dao tiệt trùng cắt thạch thành miếng nhỏ kích thước x x mm. Cân 10 gam hạt thạch cho vào 100 ml dung dịch B trên, đem ủ tủ 30°c 24h. Đếm số lượng tế bào có lml dịch nuôi cấy tĩnh sau 24h. 2.1.2.10. Phương pháp xác định số lượng tế bào cố lml dịch có Ig hạt nồng độ pha loãng định khảo sát dịch tế bào cấy lần thành đĩa, ủ tủ 30°c 48h, sau thòi gian ủ đếm số khuẩn lạc dĩa, lấy kết trung bình đĩa, nhân kết trung bình với nồng độ pha loãng dịch tế bào ta kết số lượng tế bào có lml dịch lg hạt gel. Trường hợp xác định số lượng tế bào có lg hạt, hạt phá 20ml dung dịch natri citrat lấy lml dịch đem pha loãng để xác định số lượng tế bào nên kết đếm cần nhân vói 20 để số lượng tế bào có lg hạt. 24 2.2. KẾT QUẢ THựC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 2.2.1. Số lượng tế bào có hạt gel calci alginat 2.2.1.1. Hạt vừa gói xong * Để khảo sát khả cố định tế bào alginat nồng độ khác nhau, tiến hành tạo hạt với alginat ba nồng độ 2,0%, 2,5% 3,0%. Sau lần tạo hạt, tiến hành đếm số lượng tế bào gói lg hạt calci alginat thu kết sau: Chú thích: (-): Đĩa khuẩn lạc mọc không tiến hành thí nghiệm (+): Đĩa có nhiều khuẩn lạc không đếm Bảng 1: Số lượng tế bào gối gam hạt calci alginat 2,0% Số lượng tế bào Lần TN x io x io x io X lơ6 - 30,67 253 - 8,67 27,33 214,8 - 7,33 46 6,67 34,67 Trung bình - Ổ ỵ 233,9 Nhận xét: - Kết bảng cho thấy số lượng tế bào gói lg hạt alginat 2,0% vào khoảng 2,34 - 6,67 X 108 tế bào. 25 Bảng 2: Số lượng tế bào gói gam hạt calcỉ alginat 2,5% Số lượng tế bào Lần TN x io x io x io x io 31 + 9,33 73,33 + - 41,33 286,67 - 41,33 296 10,67 25,33 306 - 14 36 266 Trung bình 2,67 8,83 41,39 288,67 Nhận xét: - Kết bảng cho thấy số lượng tế bào gói lg hạt alginat 2,5% vào khoảng 2,89 X 108- 2,67 X 109 tế bào. Bảng 3: Số lượng tế bào gói gam hạt calci alginat 3,0% Lần TN Số lượng tế bào x io x io x io x io 24 45,33 261,33 - 33,33 296 - 14 77,33 370,67 Trung bình 15,33 52 309,33 Nhận xét: - Kết bảng cho thấy số lượng tế bào gói lg hạt alginat 3,0% vào khoảng 3,09 X 108 - X 109 tế bào. * Sau có kết quả, tiến hành so sánh số lượng tế bào trung bình gói lg hạt gel calci alginat nồng độ trên. Kết thu bảng 4: Bảng 4: So sánh số lượng tế bào gói ỉg hạt nồng độ alginat khác Nồng độ alginat 2,0% 2,5% 3,0% Số lượng tế bào trung bình (x 108) 4,16 ± 1,06 9,13 ±3,51 15,91 ±(7,33/ 26 Nhận xét: - Số lượng tế bào gói lg hạt nằm khoảng 108- 109 tế bào. - So sánh số lượng tế bào gói trong lg hạt ba nồng độ 2,0%, 2,5% 3,0% cho thấy khác biệt nhiều số lượng tế bào gói nồng độ alginat khác nhau. * Để khảo sát mối liên hệ số lượng tế bào có dịch tế bào dùng để tạo hạt số lượng tế bào gói hạt, tiến hành cố định tế bào với 1, bình giống. Số lượng tế bào trung bình có bình giống vào khoảng 108- 109 tế bào/lOOml dịch nuôi cấy. Kết thu bảng 5: Bảng 5: So sánh số lượng tế bào trung bình gói gam hạt tăng mật độ tế bào Số bình giống sử dụng Sô lượng tế bào ( x ĩo 8) 0,08 0,67 Trung bình (x 108) 0,92 ±0,46 8,37 18,89 5,36 9,07 17,79 6.75 4.76 8,48 10,75 ± 2,28 6,66 ±0,88 Nhận xét: - Khi dùng bình giống để cung cấp tế bào cho trình bất động, lượng tế bào gói lg hạt tương đối thấp (< 108). - Khi sử dụng bình giống để tạo hạt, số lượng tế bào gói vào khoảng 10,8 X 108tế bào/ lg hạt. - Khi sử dụng bình giống để tạo hạt, số lượng tế bào gói vào khoảng 6,66 X 108tế bào/ lg hạt. - Không có khác nhiều số lượng tế bào gói lg hạt việc sử dụng bình giống hay bình giống để tạo hạt. 27 2.2.1.2. Hạt sau 24h lên men liên tục Để đánh giá khả sinh sản tế bào nấm men trạng thái bất động khả cố định tế bào alginat trình lên men liên tục, tiến hành lến men liên tục 24h. Sau 24h, lấy lg hạt cột rửa nước cất vô trùng đếm số lượng tế bào. Kết thu thể bảng đây: Bảng 6: Số lượng tế bào có gam hạt sau 24h lên men liên tục với alginat 2,5% Số lượng tế bào L ầnT N x io x io x io 11,33 98,67 932,67 8,67 95,33 576,66 12 101,33 480 209,33 342,67 - 6,67 68 353,33 Trung bình 9,67 114,53 537,07 Trung bình có (8,83 ± 1,47) X 109tế bào / lg hạt Bảng 7: Số lượng tế bào có gam hạt sau 24h lên men liên tục với alginat 3% Số lượng tế bào Lần TN x io x io x io 12,67 150,67 829,33 - 12 114 - 16 144 59,56 362,44 Trung bình 12,67 Trung bình có (7,42 ± 2,21) X 109tế bào / lg hạt Nhận xét: - Vói alginat 2,5%, số lượng tế bào lại hạt vào khoảng 8,83 X 109tế bào/lg hạt - Với alginat 3,0%, số lượng tế bào lại hạt vào khoảng 7,42 X 109tế bào/lg hạt - Sau 24h lên men liên tục, lượng tế bào lại hạt lớn (khoảng 109 - 1010 tế bào/lg hạt) - So sánh hai nồng độ alginat 2,5% 3% cho thấy số lượng tế bào lại hạt sau 24h lên men liên tục khác biệt rõ rệt. 2.2.1.3. Hạt sau 24h lên men tĩnh Chúng tiến hành khảo sát khả cố định tế bào alginat trạng thái lên men tĩnh hai nồng độ alginat 2,5% 3%. Sau 24h lên men tĩnh, lấy lg hạt rửa nước cất vô trùng tiến hành xác định số lượng tế bào . Bảng 8: Số lượng tếbào có gam hạt sau 24h lên men tĩnh với alginat 2,5% Sô lượng tế bào Lần TN x io x lữ x io 6,67 56,67 447,33 14,67 21,33 72 13,33 52 - 10,67 21,33 93,33 24 234,67 Trung bình 27,33 179,87 Trung bình có (4,51 ± 1,85) X 109tế bào / lg hạt Bảng 9: Số lượng tế bào có gam hạt sau 24h lên men tĩnh với alginat 3% Số lượng tế bào LầnTN x io x io x io 7,33 37,33 154 - 8,67 64 1,33 30 Trung bình 4,33 18 82,67 Trung bình có (2,32 ± 0,85) X 109tế bào / lg hạt Nhận xét: - Số lượng tế bào có gel alginat 2,5% khoảng 4,51 X 109tế bào / lg hạt - Số lượng tế bào có gel alginat 3,0% khoảng 2,32 X 109tế bào / lg hạt 29 - Sau 24h lên men tĩnh, lượng tế bào lại hạt lớn - Không có khác biệt nhiều số lượng tế bào lại hạt sau 24h lên men tĩnh alginat 2,5% 3,0%. 2.2.1.4. So sánh số lượng tế bào có Ig hạt trước lên men, sau 24h lên men liên tục sau 24h lên men tĩnh Kết thu bảng 10: Bảng 10: So sánh số lượng tế bào trung bình có gam hạt trước lên men, sau 24h lên men liên tục sau 24h lên men tĩnh Hạt trước lên men (x io 8) Hạt sau 24h lên men liên tục (x 108) Hạt sau 24h lên men tĩnh (XI08) 8,4 101,8 56 18,9 79,9 58,4 89,8 - 5,4 121,8 9,3 9,1 - 45,8 - 56,7 29,2 LầnTN 6,8 17,8 120,1 42 1,4 11,7 7,6 10 8,5 15,2 8,1 Trung bình ±1,8 74,6 ± 14,3 32,1 ±7,13 - - Nhận xét: - Số lượng tế bào trung bình có lg hạt trước lên men vào khoảng X108tế bào - Số lượng tế bào trung bình có lg hạt sau 24h lên men liên tục khoảng 74,6 X 108 tế bào - Số lượng tế bào trung bình có lg hạt sau 24h lên men tĩhh khoảng 32,1 X 108tế bào - Số lượng tế bào hạt sau lên men không giảm so với hạt trước lên • men, chí cao hơn. 30 - Số lượng tế bào trung bình có lg hạt sau 24h lên men liên tục sau 24h lên men tĩnh khác biệt rõ rệt. 2.2.2. Số lượng tế bào có dịch lên men 2.2.2.1. Số lượng tế bào có lml dịch lên men liên tục thời điểm khác Đánh giá trình bị rửa trôi tế bào trạng thái bất động lên men liên tục tiến hành cách đếm số lượng tế bào dịch lên men thòi điểm khác nhau, kết thể bảng 11: Bảng 11: Số lượng tế bào có lml dịch lên men sau lh, 6h, -lOh sau 24h lên men liên tục Thòi gian lh 6h 8h - lOh 130 Số lượng tế 60 bào 3,2 70 ( x i o 4) 3,4 120 45 47 7,3 4,3 87 Trung bình 4,53 ± 1,01 93,4 ± 12,25 24h 46 ±0,71 5,4 ±0,67 Nhận xét: - Trong dịch lên men có tế bào nấm men vói lượng từ 104 - 105 tế bào/ml - Số lượng tế bào nấm men có dịch lên men thời điểm 6h cao - Số lượng tế bào nấm men có dịch lên men thời điểm lh 24h thời điểm 6h - lOh. Thời gian (h) Hình 2.2: Đồ thị biểu diễn sốỉượng tếbào có dịch lên men theo thời gian 31 222.2. Số lượng tếbào có lml dịch lên men sau 24h lên men tĩnh Để khảo sát khả rửa trôi tế bào bất động trạng thái lên men tĩnh xác định số lượng tế bào có lml dịch lên men sau 24h lên men tĩnh. Kết thu bảng 12: Bảng 12: Số lượng tế bào trung bình có lml dịch lên men sau 24h lên men tĩnh Lần TN Sô lượng tế bào (x l 4) 6,66 21 Trung bình 10,55 ±4,31 Nhận xét: - Trong dịch lên men tĩnh có tế bào nấm men vói lượng 104- 5tế bào/ml. 2.223. Số lượng tế bào có lml dịch lên men sau 24h lên men tĩnh bất động tế bào thạch Agar Để khảo sát khả bất động tế bào số chất khác, thử bất động tế bào thạch nuôi cấy tĩnh 24h. Tiến hành xác định số lượng tế bào có lml dịch lên men tĩnh sau 24h ta kết bảng 13: Bảng 13: Số lượng tếbào có lml dịch sau 24h lên men tĩnh tế bào bất động thạch Agar Số lượng tế bào Lần TN x io x lO s 15,33 13 130 - 23,34 10,78 76,67 Trung bình Trung bình có (1,62 ± 0,57) X x io - 106 tế bào/ lml dịch. Nhận xét: - Trong dịch lên men có lượng tế bào khoảng 106 tế bào/ lml dịch - Lượng tế bào có lml dịch lên men tĩnh trường hợp bất động tế bào thạch nhiều hon so vói bất động tế bào alginat. 32 2.3. BÀN LUẬN Khi bất động tế bào alginat Đại học Thủy sản Nha Trang nhận thấy gel nhanh chóng tạo thành, hạt gel chắc. Như vậy, thấy nguồn alginat tạo gel tốt. Điều nêu nghiên cứu tác giả Ngô Đăng Nghĩa. Đây yêu cầu quan trọng alginat sử dụng làm chất mang để cố định tế bào. [7] Nghiên cứu khả cố định tế bào nấm men s. cerevisiae nồng độ alginat 2,0%, 2,5%, 3,0% nhận thấy số lượng tế bào gói lg hạt gel nồng độ vào khoảng 108 -109 tế bào. Kết cho thấy: khoảng nồng độ - 3%, thay đổi nồng độ alginat làm ảnh hưởng đến số lượng tế bào cố định hạt. Sự thay đổi nồng độ chủ yếu ảnh hưởng đến khả tạo gel alginat. Chúng không tiến hành nghiên cứu nồng độ alginat nhỏ theo kết nghiên cứu Lê Huy Tường, nồng độ alginat < 1,5% tạo gel không xảy ra, nồng độ 1,5% hạt bất đầu tạo thành hạt mềm có lớp mỏng bên tạo gel. Còn nồng độ cao, dung dịch alginat đặc tạo gel khó khăn. [11] Nghiên cứu khả cố định tế bào alginat thay đổi mật độ tế bào đưa vào dung dịch tạo hạt, kết bảng cho thấy: sử dụng bình giống số lượng tế bào gói hạt tương đối thấp. Khi sử dụng bình giống, số lượng tế bào gói hat tăng lên. Số lượng tế bào gói hạt sử đụng hay bình giống không khác nhiều. Như vậy, thấy gel alginat có khả cố định lượng tế bào định vào khoảng 108 - 109 tế bào/ lg hạt. Tăng lượng tế bào đưa vào không làm tăng số lượng tế bào gói hạt, lượng tế bào thừa không cố định bị loại ta rửa hạt. Kết cho thấy lượng tế bào bình giống cung cấp đủ tế bào cho việc tạo hạt. Lượng tế bào cố định hạt lớn (108 - 109 tế bào/ lg hạt). Điều tạo mật độ tế bào cao cột lên men cho phép lên men vói tốc độ nhanh. Sau chất chảy qua cột ta thu cồn thoát đầu cột. Theo kết nghiên cứu Ngô Đăng Nghĩa thời điểm sau - 9h lên men, nồng độ cồn thu > 4%. 33 ,) ( Lượng tế bào có gam hạt sau 24h lên men liên tục lên men tĩnh không giảm so với hạt trước lên men. Điều chứng tỏ gel alginat cố định tế bào tốt. Thêm vào đó, dịch lên men có tế bào nấm men chứng tỏ tế bào tiếp tục sinh sản trình lên men bất động. Như vậy, thấy khả bù đắp tế bào bất động trình lên men lớn. Đây yêu cầu quan trọng để lên men liên tục thời gian dài. Các nhà khoa học nghiên cứu trình bất động tế bào trạng thái phát triển nhận thấy rằng: bất động tế bào trạng thái phát triển cách cung cấp chất dinh dưỡng cho chúng để trì chức sinh học chúng có lợi bỏi tế bào pha phát triển sinh tế bào làm tăng thêm tái tạo lại chất xúc tác sinh học có hoạt tính trì chúng suốt thời gian sử dụng. Tuy nhiên, bất động tế bào pha phát triển gặp phải nhược điểm định. Những nhược điểm là: - Các chất dinh dưỡng nguồn lượng bị tiêu thụ tế bào bất động pha tăng trưởng để trì phát triển chúng. Điều làm giảm hiệu suất trình tế bào bất động tiêu thụ chất và/ sản phẩm thể chất dinh dưỡng lượng chúng. - Sản phẩm lẫn nhiều tế bào tế bào thoát khỏi chất mang. [13] Kết nghiên cứu bảng 11 cho thấy dịch lên men liên tục thời điểm khác có tế bào. Ở thòi điểm lh 24h, số lượng tế bào vào khoảng 104 tế bào/ lml dịch, thời điểm 6h - lOh, số lượng tế bào khoảng 106107 tế bào/ lml dịch. Số lượng tế bào phù hợp vói trạng thái phát triển tế bào nấm men cột lên men. Trong đó, lượng tế bào hạt gel ổn định nên thấy phần lớn tế bào thoát tế bào sinh thêm trình lên men. Sau 6h lên men liên tục, tế bào trạng thái phát triển mạnh thể lượng C 02 sinh nhiều, trạng thái kéo dài khoảng 10 h yếu dần đi. Lượng tế bào có dịch lên men tuân theo qui luật này. Như vậy, alginat cố định lượng tế bào định nên tế bào sinh sản nhiều lượng tế bào thoát nhiều. Chính chế giúp cho lượng tế bào cột lên men định. 34 Xác định số lượng tế bào dịch lên men sau 24h lên men tĩnh, kết cho thấy lượng tế bào khoảng 104- 105 tế bào/ lml dịch. Đây lượng tế bào sinh thêm trình lên men tĩnh. Qua trình thực nghiệm thấy số ưu điểm lên men liên tục phương pháp bất động tế bào gel alginat là: - Cồn tạo đưa liên tục nên không gây ức chế ngược cồn lên tế bào nấm men. Đường đưa vào liên tục tạo nồng độ chất cao thuận lợi cho lên men. - Trong trình lên men có chuyển động hạt gel bọt khí làm khuấy động dung dịch lên men, chất sản phẩm phân bố khắp cột, tế bào tiếp xúc với chất. - Lượng tế bào hạt gel không giảm suốt trình lên men, cho thấy tính ổn định khả bù đắp tế bào bất động lớn. Khi thử bất động tế bào thạch Agar nhận thấy: dịch lên men tĩnh sau 24h lên men bất động tế bào thạch Agar có nhiều tế bào thoát lên men bất động tế bào alginat điều kiện. Như vậy, thạch cố định tế bào gel alginat nên lượng tế bào bị rửa trôi nhiều hơn. Hơn nữa, thạch dễ bị đông nên việc bất động tế bào khó khăn hơn, thạch dễ bị vỡ tạo hạt gel alginat nên khó nhồi cột để lên men liên tục. Do điều kiện thòi gian nguyên liệu hạn chế, mói thực trình lên men liên tục 24h mà chưa thể nghiên cứu thời gian dài hơn. Tuy vậy, khoảng thời gian nhận thấy giai đoạn cuối lên men có biểu yếu đi. Lý khiến cột lên men ổn định thòi gian dài nghiên cứu nhiều nhà khoa học ra? Sự sinh sản nhiều tế bào nấm men bên cạnh ưu điểm giúp trì lượng tế bào ổn định cột có nhược điểm làm cho sản phẩm tinh khiết, liệu có làm giảm hiệu suất lên men? Chúng mong có nghiên cứu khác để làm sáng tỏ vấn đề phương pháp bất động tế bào. 35 KẾT LUẬN Với kết nghiên cứu đưa số kết luận ban đầu: 1. Khả tạo gel cố định tế bào nấm men nguồn alginat Việt Nam sản xuất: khoảng nồng độ - 3%, gel alginat cố định tế bào tốt, lượng tế bào hạt trì ổn định suốt trình lên men. Lượng tế bào cố định hạt vào khoảng 108 - 109 tế bào/lg hạt, lượng tế bào không phụ thuộc vào nồng độ alginat nồng độ tế bào sử dụng để bất đông tế bào. 2. Trong trình lên men liên tục lên men tĩnh, gel calci - alginat cố định tế bào tốt, lượng tế bào hạt sau lên men không giảm so vói hạt trước lên men. Trong suốt trình lên men, tế bào bất động có khả sinh sản tạo tế bào mới. Phần lớn tế bào thoát khỏi hạt gel nên lượng tế bào có gel vân ốn định. ; 3. Alginat cố định tế bào nấm men s. cerevisiae tốt thạch Agar: gel hơn, hạt gel hình cầu cho phép nhồi vào cột để lên men liên tục khả cố định tế bào alginat tốt thạch nên lượng tế bào thoát điều kiện lên men. ĐỂ XUẤT Do điều kiện thời gian nguyên liệu có hạn nên số vấn đề liên quan chưa thể nghiên cứu được. Để tìm hiểu sâu phương pháp bất động tế bào nhằm phát huy ưu điểm khắc phục nhược điểm phương pháp mong muốn: - Tiếp tục nghiên cứu thông số khác trình lên men liên tục sản xuất ethanol bất động tế bào nhằm tối ưu hóa phương pháp để đưa vào áp dụng thực tế. - Tiếp tục nghiên cứu phương pháp bất động tế bào giai đoạn phát triển khác nấm men. - Tiếp tục nghiên cứu phương pháp bất động tế bào với chất mang khác - Nghiên cứu phương pháp bất động tế bào sản xuất sản phẩm khác phục vụ nhu cầu ngành dược. 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Bộ môn Công nghiệp Dược - Trường Đại Học Dược Hà Nội (2007), Giáo trình thực tập sản xuất thuốc, trường Đại Học Dược Hà Nội, tr. 22 - 25. 2. Nguyễn Lân Dũng (1976), Một số phương pháp nghiên cứu vỉ sinh vật học, NXB Khoa học kỹ thuật, tr. 9. 3. Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2002), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục, tr. 84 - 87. 4. Lê Xuân Hoành (2003), Phân lập tuyển chọn nấm men sinh tổng hợp ¡3 — carotene, Khóa luận tốt nghiệp - trường Đại Học Dược Hà Nội, tr. 10 -11. 5. Từ Minh Koóng (2005), Cơ sở công nghệ sinh học sản xuất dược phẩm, NXB Y học, tr. 55, 61 - 69, 79. 6. Nguyên Đức Lượng (2004), Công nghệ enzym, NXB Đại học Quốc Gia TP. Hồ Chí Minh, tr. 453. 7. Ngô Đăng Nghĩa (1998), Nghiên cứu động học phản ứng trình lên men ethanol tế bào Saccharomyces cerevisiae cố định gel alginat, Tạp chí khoa học công nghệ, tr. 19 - 24. 8. Lương Đức Phẩm (2000), Vi sinh vật học an toàn vệ sinh thực phẩm, NXB Nông nghiệp, tr. 35 - 38, 75 - 80. 9. Lê Xuân Phương (2001), Vi sinh vật công nghiệp, NXB Xây dựng, tr. 150 -157. 10. Lê Ngọc Tú (2002), Hóa Sinh công nghiệp, NXB Giáo dục, tr. 15. 11. Lê Huy Tường (2005), Nghiên cứu bất động tế bào sản xuất alcol ethylic, Khóa luận tốt nghiệp - trường Đại Học Dược Hà Nội. 12. A. Steinbiichee & K. s. Phee (2005), Polysaccharides & Polyamides in the Food Industry, Properties, production & Patents, Weinheim. 13. Atsuo Tanaka and Takuo Kawamoto, Cell immobilization, Kyoto University Kyoto, Japan, tr. 505 - 512. 14. Bregni c, Degrossi J, Garcia R (2000), Alginate microspheres of Bacillus subtilis, Ars Pharmaceutica, 41: 3, tr. 245 - 248. 15. Jiyeon Ha (2005), Bioremediation of the organophosphate pesticide, coumaphos, using microorganisms immobilized in calcium - alginate gel beads, Submitted to the Office of Graduate Studies of Texas A&M University in partial fulfillment of the requirements for the degree of doctor of philosophy, tr. 26. 16. http://www.ias.ac.in/currsci/jull0/articlesl7.htm 17. http://www.fao.org/docrcp/X5822F/5822e04.htm Production, properties & use of alginates. [...]... 0,57) X x io 4 - 106 tế bào/ lml dịch Nhận xét: - Trong dịch lên men có lượng tế bào khoảng 106 tế bào/ lml dịch - Lượng tế bào có trong lml dịch lên men tĩnh trong trường hợp bất động tế bào bằng thạch nhiều hon so vói khi bất động tế bào bằng alginat 32 2.3 BÀN LUẬN Khi bất động tế bào bằng alginat của Đại học Thủy sản Nha Trang chúng tôi nhận thấy gel nhanh chóng được tạo thành, hạt gel đều và chắc Như... lên men tĩnh Kết quả thu được trong bảng 12: Bảng 12: Số lượng tế bào trung bình có trong lml dịch lên men sau 24h lên men tĩnh Lần TN Sô lượng tế bào (x l ơ 4 ) 1 6,66 2 4 3 21 Trung bình 10,55 ±4,31 Nhận xét: - Trong dịch lên men tĩnh có tế bào nấm men vói lượng 104- 1 0 5tế bào/ ml 2.223 Số lượng tế bào có trong lml dịch lên men sau 24h lên men tĩnh bất động tế bào bằng thạch Agar Để khảo sát khả năng. .. dụng để cố định tế bào nấm men, Ca - alginat còn được dùng để cố định tế bào vi khuẩn và các tế bào động thực vật khác [13], [16] Nguyên tắc chung của bất động tế bào trên cơ chất alginat là: trộn lẫn dung dịch Na - alginat và dịch huyền phù chứa tế bào cần cố định, khuấy trộn để các tế bào phân tán đều Dịch huyền phù thu được cho nhỏ giọt vào một dung dịch tạo gel như calci clorid, hạt gel sẽ nhanh chóng... lượng tế bào nấm men có trong dịch lên men ở thời điểm lh và 24h ít hơn ở thời điểm 6h và 8 - lOh Thời gian (h) Hình 2.2: Đồ thị biểu diễn sốỉượng t bào có trong dịch lên men theo thời gian 31 222.2 Số lượng t bào có trong lml dịch lên men sau 24h lên men tĩnh Để khảo sát khả năng rửa trôi của tế bào bất động ở trạng thái lên men tĩnh chúng tôi xác định số lượng tế bào có trong lml dịch lên men sau... 10 9tế bào / lg hạt Nhận xét: - Số lượng tế bào có trong gel alginat 2,5% là khoảng 4,51 X 10 9tế bào / lg hạt - Số lượng tế bào có trong gel alginat 3,0% là khoảng 2,32 X 10 9tế bào / lg hạt 29 - Sau 24h lên men tĩnh, lượng tế bào còn lại trong hạt khá lớn - Không có sự khác biệt nhiều về số lượng tế bào còn lại trong hạt sau 24h lên men tĩnh giữa alginat 2,5% và 3,0% 2.2.1.4 So sánh số lượng tế bào. .. lên men liên tục Để đánh giá khả năng sinh sản của tế bào nấm men ở trạng thái bất động và khả năng cố định tế bào của alginat trong quá trình lên men liên tục, chúng tôi tiến hành lến men liên tục trong 24h Sau 24h, lấy lg hạt trong cột rửa sạch bằng nước cất vô trùng rồi đếm số lượng tế bào Kết quả thu được thể hiện trong bảng dưới đây: Bảng 6: Số lượng tế bào có trong 1 gam hạt sau 24h lên men liên... nguồn alginat này tạo gel khá tốt Điều này cũng đã được nêu ra trong nghiên cứu của tác giả Ngô Đăng Nghĩa Đây là một yêu cầu quan trọng khi alginat được sử dụng làm chất mang để cố định tế bào [7] Nghiên cứu khả năng cố định tế bào nấm men s cerevisiae ở các nồng độ alginat 2,0%, 2,5%, 3,0% chúng tôi nhận thấy số lượng tế bào gói được trong lg hạt gel ở mỗi nồng độ đều vào khoảng 108 -109 tế bào Kết... thấy gel alginat có khả năng cố định được một lượng tế bào nhất định vào khoảng 108 - 109 tế bào/ lg hạt Tăng lượng tế bào đưa vào không làm tăng số lượng tế bào gói được trong hạt, lượng tế bào thừa không được cố định sẽ bị loại đi khi ta rửa hạt Kết quả cũng cho thấy lượng tế bào trong 2 bình giống cung cấp đủ tế bào cho việc tạo hạt Lượng tế bào được cố định trong hạt khá lớn (108 - 109 tế bào/ ... dụng rất phổ biến trong kỹ thuật bất động tế bào Tế bào vi khuẩn, nấm men cũng như các tế bào động vật, thực vật đều có thể được bất 9 động bằng phương pháp này Tuy nhiên, phương pháp bẫy cũng có những nhược điểm riêng như: các cơ chất có khối lượng phân tử lớn sẽ rất khó tiếp cận với các tế bào bất động và khó có thể tái sử dụng lại các chất mang đã dùng để bất động tế bào Bẫy dạng lưới là phương pháp... lượng tế bào trung bình có trong lg hạt trước khi lên men vào khoảng 9 X10 8tế bào - Số lượng tế bào trung bình có trong lg hạt sau 24h lên men liên tục là khoảng 74,6 X 108 tế bào - Số lượng tế bào trung bình có trong lg hạt sau 24h lên men tĩhh là khoảng 32,1 X 10 8tế bào - Số lượng tế bào trong hạt sau khi lên men không giảm so với hạt trước khi lên • men, thậm chí còn cao hơn 30 - Số lượng tế bào trung . nghiệp: Nghiên cứu khả năng bất động tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae của gel calci alginat . Nghiên cứu này nhằm các mục tiêu: 1. Đánh giá khả năng cố định tế bào nấm men của gel caỉci alginat. nồng độ tế bào khác nhau. 2. Đánh giá khả năng cố định tế bào nấm men của gel calci alginat trong trạng thái lên men liên tục và lên men tĩnh. 3. So sánh khả năng cố định tế bào của calci alginat. PHƯƠNG PHÁP BẤT ĐỘNG TẾ BÀO 6 1.3.1. Các phương pháp bất động tế bào 8 1.3.2. Các ứng dụng của phương pháp bất động tế bào 12 1.4. ALGINAT 14 1.4.1. Cấu trúc của alginat 14 1.4.2. Tính chất của algỉnat