Nghiên cứu khả năng tạo nguồn vật liệu ban đầu in vitro của cây trầu bà chân rết

Mục lục Nội dung Mục lục i Danh sách hình ii Danh sách bảng iii Tóm tắt iiii Danh mục từ viết tắt iiiii Chương Giới thiệu .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu Chương Lược khảo tài liệu 2.1 Giới thiệu Trầu bà chân rết 21.1 Nguồn gốc phân loại 2.1.2 Đặc điểm giống kiểng 2.1.3 Kỹ thuật trồng kiểng 2.2 Công nghệ nhân giống in vitro 2.2.1 Giới thiệu lịch sử nuôi cấy mô 2.2.2 Những ưu điểm hạn chế phương pháp nhân giống in vitro 2.2.2.1 Ưu điểm phương pháp nhân giống in vitro 2.2.2.2 Hạn chế nhân giống in vitro 2.2.3 Quy trình vi nhân giống 2.3 Thành phần môi trường 2.3.1 Khoáng đa lượng 2.3.2 Khoáng vi lượng 2.3.3 Cacbon nguồn lượng 2.3.4 Vitamin 2.3.5 Các hợp chất hữu không xác định 2.3.6 Yếu tố làm đặc môi trường 2.4 Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật 2.4.1 Auxin 2.4.2 Cytokinin 2.5 PH môi trường 2.6 Một số vấn đề tạo mẫu in vitro .9 2.6.1 Mẫu bị nhiễm 2.6.2 Sự hóa nâu môi trường nuôi cấy 10 2.6.2.1 Các chất có thành phần phenol 10 2.6.2.2 Phản ứng hóa nâu mẫu cấy .10 2.7 Những nghiên cứu liên quan nhân giống Trầu bà chân rết 10 2.7.1 Tình hình nghiên cứu nước 10 2.7.2 Tình hình nghiên cứu nước 11 Chương Phương tiện phương pháp nghiên cứu 12 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 12 3.2 Điều kiện phòng thí nghiệm 12 3.3 Môi trường nuôi cấy 12 3.4 Vật liệu 12 3.5 Phương pháp 12 3.5.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng thích hợp HgCl2 0,1% để tạo nguồn mẫu vô trùng 13 3.5.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến việc tái sinh chồi từ mầm ngủ Trầu bà chân rết 15 3.5.3 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ lát mỏng cuống non 16 Chương Kết thảo luận 18 4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng thích hợp HgCl2 0,1% để tạo nguồn mẫu vô trùng 18 4.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến việc tái sinh chồi từ mầm ngủ Trầu bà chân rết 20 4.3 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ lát mỏng cuống non 26 Chương Kết luận kiến nghị 31 5.1 Kết luận 31 5.2 Kiến nghị 31 Tài liệu tham khảo 32 Phụ chương 34 i Tóm tắt Trầu bà chân rết giống kiểng ưu chuộng nay, nhiên nguồn giống không nhiều chủ yếu phải nhập nội từ nước Thái Lan, Đài Loan…Dẫn đến giá thành giống cao Vì vấy đề tài “Nghiên cứu vật liệu khởi đầu in vitro trầu bà chân rết” tiến hành nhằm tạo nguồn vật liệu ban đầu cho nghiên cứu tiếp theo, tạo số lượng lớn cung cấp cho nhà vườn Kết thí nghiệm cho thấy: Đối với Trầu bà chân rết hóa chất khử trùng HgCl 0,1% thời gian 10 phút thích hợp đạt tỷ lệ mẫu vô trùng đạt 44,2% cuống non 41,7% mầm ngủ Khi sử dụng thủy ngân thời gian 20 phút cho tỷ lệ mẫu chết cao trung bình 40% Môi trường MS + 1mg/l BA + mg/l TDZ thích hợp cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ đạt chiều cao chồi 1,2 cm, cho chồi to mập qua 56 NSKC Môi trường thích hợp cho việc hình thành mô sẹo môi trường MS + mg/l NAA + mg/l BA cho kết mô sẹo xanh, khối chặt đồng thời cho kích thước mô sẹo đạt 0,46 cm sau 56 NSKC iiii Danh mục từ viết tắt 2,4 D 2,4 Dichlopropennolxy acetic acid BA – Benzyl adenin Ctv Cộng tác viên đ/c Đối chứng NSKC Ngày sau cấy MS Musrashige Skoog, 1962 NAA Naphthalen acetic acid TDZ Thidiazuran CĐHTT Chất điều hòa tăng trưởng NT Nghiệm thức iiiii Danh sách hình STT Tên hình Số trang Hình Cây Trầu bà chân rết Hình Chồi Trầu bà chân rết giai đoạn 56 NSKC nghiệm thức A1 (++) 25 Hình Chồi Trầu bà chân rết giai đoạn 56 NSKC nghiệm thức A3 (+++) 25 Hình Mô sẹo Trầu bà chân rết 42 NSKC nghiệm thức A0 30 Hình Mô sẹo Trầu bà chân rết 42 NSKC nghiệm thức A0 30 ii Danh sách bảng Stt Bảng Bảng Bảng Bảng Bảng Tên bảng Ký hiệu nghiệm thức khử trùng cuống non Ký hiệu nghiệm thức khử trùng mầm ngủ Môi trường tái sinh chồi ký hiệu nghiệm thức Môi trường tạo mô sẹo ký hiệu nghiệm thức Ảnh hưởng HgCl2 0,1% đến việc tạo nguồn mẫu vô trùng cuống non Trầu bà chân rết Số trang 13 13 15 16 18 Bảng Ảnh hưởng HgCl2 0,1% đến việc tạo nguồn mẫu vô trùng mầm ngủ Trầu bà chân rết 18 Bảng Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến việc tái sinh chồi từ mầm ngủ sau 14 ngày nuôi cấy (14 NSKC) 20 Bảng Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến việc tái sinh chồi từ mầm ngủ sau 28 ngày nuôi cấy (28 NSKC) 21 Bảng Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến việc tái sinh chồi từ mầm ngủ sau 42 ngày nuôi cấy (42 NSKC) 22 Bảng 10 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến việc tái sinh chồi từ mầm ngủ sau 56 ngày nuôi cấy (56 NSKC) 23 Bảng 11 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến việc tái sinh chồi từ mầm ngủ sau 14 ngày nuôi cấy (14 NSKC) 26 Bảng 12 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến việc tái sinh chồi từ mầm ngủ sau 56 ngày nuôi cấy (56 NSKC) 28 iii Chương Giới thiệu 1.1 Đặt vấn đề Những năm gần đây, nghề trồng hoa kiểng thành phố Hồ Chí Minh tỉnh khác Bến Tre, Đồng Tháp, Đà Lạt, Cần Thơ phát triển mạnh, đặc biệt phong trào trồng kiểng Mỗi loại kiểng có nét đẹp, hấp dẫn phong cách riêng không giống loại bonsai, kiểng cổ thường dựa vào hình cổ điển mà tạo dáng theo Chơi kiểng nội thất không cần không gian rộng, cần khoảng không ban công, góc nhỏ chỗ làm việc hay cạnh sổ phòng ngủ đặt chậu xinh tươi Có nhiều loại kiểng trồng phổ biến Như ý, Thanh tâm, Bình lục… Trầu bà chân rết loại kiểng ưa chuộng Với thuôn dài hai đầu, bề mặt có đốm trắng xen kẽ, đường sọc trắng gân đẹp mắt, chúng có rễ mọc dài theo thân, dày nhìn giống chân rết tạo cho nét đẹp riêng độc đáo Đặc biệt, Trầu bà chân rết đối tượng thích hợp để trồng nhà, quan, văn phòng mà phát triển tốt Ngoài ra, Trầu bà chân rết người chơi kiểng xem vật phong thuỷ, đặt nhà để hy vọng đem lại nhiều may mắn, tiền tài giúp ích nhiều cho nghiệp họ (Thế vinh, 2009) Theo Dược sĩ Phan Đức Bình – Phó tổng biên tập tạp chí Thuốc & Sức khỏe, việc chọn lựa trưng bày loại kiểng Trầu bà chân rết người chơi kiểng không việc quan tâm đến tính thẩm mỹ tạo không gian xanh, thoải mái mà có tác dụng lọc không khí hấp thụ nhiều chất gây ô nhiễm chuyển hóa thành dinh dưỡng nuôi (Phan Đức Bình, 2011) Tuy nhiên, giống nước đối tượng kiểng mới, nguồn giống không nhiều chủ yếu nhập từ Thái Lan Thêm vào đó, Trầu bà chân rết nhân giống phương pháp tách chiết chồi Trong lại phát triển chồi chậm, chồi dẫn đến hệ số nhân giống chậm thấp không đủ cung cấp giống cho thị trường Cho nên giá thành giống cao không đáp ứng nhu cầu Nhân giống phương pháp in vitro phương pháp nhân giống ứng dụng phổ biến thông dụng Áp dụng phương pháp này, nhân giống nhanh với số lượng lớn đồng chất lượng mà không bị ảnh hưởng đặc tính sinh trưởng hay tác động bên thời tiết mùa vụ Ngoài ra, nhân giống in vitro tạo nguồn giống bệnh, giữ đặc tính tốt mẹ Từ hạ giá thành sản phẩm nhằm đáp ứng nhu cầu người tiêu dùng Chính nên đề tài: “Nghiên cứu tạo vật liệu khởi đầu in vitro Trầu bà chân rết” tiến hành nhằm mục đích tìm hiểu rõ khả tái sinh chồi từ mầm ngủ, tạo mô sẹo từ cuống non Trầu bà chân rết 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Xác định thời gian khử trùng thích hợp để tạo nguồn mẫu in vitro cho Trầu bà chân rết Nghiên cứu nồng độ auxin cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo cuống non tái sinh chồi từ mầm ngủ Trầu bà chân rết 1.3 Nội dung nghiên cứu Khảo sát thời gian khử trùng thích hợp HgCl2 0,1% để tạo nguồn mẫu vô trùng in vitro cuống non mầm ngủ Trầu bà chân rết Khảo sát ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ Trầu bà chân rết Khảo sát ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ lát mỏng cuống non in vitro Trầu bà chân rết Hình 2: Chồi Trầu bà chân rết giai đoạn 56 NSKC nghiệm thức C1 (++) Hình 3: Chồi Trầu bà chân rết giai đoạn 56 NSKC nghiệm thức C3 (+++) 25 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ lát mỏng cuống non Trầu bà chân rết Nuôi cấy mô sẹo khâu quan trọng nuôi cấy mô tế bào Mô sẹo nguyên liệu khởi đầu cho nghiên cứu quan trọng khác như: phân hóa mô tế bào, chọn dòng tế bào, nuôi cấy tế bào trần, nuôi cấy tế bào đơn, nuôi cấy phôi soma, sản xuất chất thứ cấp có hoạt tính sinh học…Vì nuôi cấy mô sẹo từ cuống non Trầu bà chân rết bước qua trọng việc tạo nguồn mẫu in vitro Trầu bà chân rết Bảng 11: Ảnh hưởng auxin cytokinin đến việc hình thành mô sẹo giai đoạn 14 NSKC Nghiệm thức 2,4 D (mg/l) BA (mg/l) NAA (mg/l) Kích thước mô sẹo (cm) Đặc điểm mô sẹo D0 0 0,29 Vàng nhạt, khối chặt D1 0,5 0 0,26 Vàng nhạt, khối chặt D2 0,5 0,33 Vàng nhạt, khối chặt D3 0,5 0,5 0,33 Vàng nhạt, khối chặt D4 0 0,35 Vàng nhạt, khối chặt D5 1 Mức ý nghĩa CV (%) 0,34 Vàng nhạt, khối chặt ns 15,18 Ghi chú: Những số cột có chữ số theo sau giống không khác biệt qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 5%, **: khác biệt mức ý nghĩa 1% Kết 14 NSKC, tất mẫu cuống hình thành mô sẹo có tăng trưởng mặt kích thước, nhiên nghiệm thức 26 khác biệt ý nghĩa mặt thống kê Bên cạnh mô sẹo nghiệm thức thí nghiệm có hình dạng, màu sắc cấu trúc gần giống nhau, đa số mẫu mô sẹo hình thành có cấu trúc kết dính lại hình thành khối chặt có màu vàng nhạt Mẫu cấy tiếp tục phát triển kích thước mô sẹo giai đoạn 28 NSKC (bảng 2, phụ chương) đạt đường kính trung bình 0,36 cm nhiên khác biệt ý nghĩa mặt thống kê Về hình thái màu sắc mẫu cấy thay đổi nhiều so với giai đoạn 14 NSKC Sự phát triển tiếp tục diễn giai đoạn 42 NSKC (bảng 3, phụ chương) 56 NSKC, khác biệt ý nghĩa thống kê mặt kích thước nghiệm thức, thấy môi trường có chất điều hòa tăng trưởng cho kích thước mô sẹo tốt môi trường đối chứng (D0) không chứa chất điều hòa sinh trưởng Bên cạnh mô sẹo có tính chất, cấu trúc màu sắc khác nhau, là: Màu vàng nhạt cấu trúc lỏng lẻo hay phát triển thành khối chặt có cấu trúc rắn (compact callus) màu xanh hay vàng xanh Đây phản ứng tăng sinh hỗn loạn mô bị thương điều kiện có tác nhân kích thích giúp hình thành mô sẹo trước phát triển phân hóa 27 Bảng 12: Ảnh hưởng auxin cytokinin đến việc hình thành mô sẹo giai đoạn 56 NSKC Nghiệm thức 2,4 D (mg/l) BA (mg/l) NAA (mg/l) Kích thước mô sẹo (cm) Đặc điểm mô sẹo D0 0 0,39 Vàng xanh, khối chặt D1 0,5 0 0,40 Vàng nhạt, khối chặt D2 0,5 0,43 Xanh nhạt, khối chặt D3 0,5 0,5 0,42 Xanh nhạt, khối chặt D4 0 0,49 Vàng nhạt, khối lỏng D5 1 0,46 Mức ý nghĩa CV (%) Xanh , khối chặt ns 15.18 Ghi chú: Những số cột có chữ số theo sau giống không khác biệt qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 5%, **: khác biệt mức ý nghĩa 1% Kết bảng 12, môi trường có chứa 2,4 D nồng độ từ 0,5 – mg/l cho kết mô sẹo to, có màu vàng nhạt điều cho thấy ảnh hưởng nhiều 2,4 D đến việc hình thành mô sẹo Khi nồng độ auxin cao nghiệm thức D4 kích thích tạo mô sẹo dạng rời rạc giảm auxin nghiệm thức D1, D2 D3 mô sẹo có cấu trúc cứng chắc, khối chặt Mô sẹo tạo thí nghiệm có nhiều dạng cấu trúc khác mô phát triển môi trường nuôi cấy có 2,4 D auxin mạnh có tác dụng tốt cho trình phản biệt hóa, làm tăng kích thước mô sẹo 28 Trong môi trường có 2,4 D thêm vào nhóm thuộc nhóm auxin cytokinin NAA BA cho khích thước nhỏ hình thành khối chặt xuất màu vàng xanh Đều cho thấy chất kích thích tố thuộc nhóm có tác dụng việc hình thành màu xanh mô Tóm lại, kết thí nghiệm sau 56 NSKC cho thấy kết tạo mô sẹo rắn tốt kết hợp NAA BA với với 2,4 D nồng độ thấp Khi nồng độ 2,4 D cao gây độc, ức chế sinh trưởng mô sẹo Theo Gautheret (1966) khả tái sinh trì lâu mô sẹo rắn mô sẹo rời rạc Kết cho thấy vào thời điểm 56 NSKC, mô sẹo có thay đổi màu sắc cấu trúc Ban đầu mô sẹo có màu vàng sáng, rắn sau bắt đầu chuyển sang dạng khối cầu màu xanh, xen lẫn với màu trắng sáng, bề mặt trơn láng, cấu trúc chặt (Hình 5), nhiều nghiệm thức MS + mg/l NAA + mg/l BA nghiệm thức lại Điều cytokinin kích thích phân chia tế bào điều kiện có diện auxin Qua kết 56 NSKC, môi trường thích hợp cho việc hình thành mô sẹo môi trường MS + mg/l NAA + mg/l BA cho kết mô sẹo xanh, khối chặt đạt kích thước 0,46 cm 29 Hình 4: Mô sẹo Trầu bà chân rết 42 NSKC nghiệm thức D0 Hình 5: Mô sẹo Trầu bà chân rết 42 NSKC nghiệm thức D5 30 Chương Kết luận kiến nghị 5.1 Kết luận Đối với Trầu bà chân rết hóa chất khử trùng HgCl 0,1% thời gian 10 phút thích hợp đạt tỷ lệ mẫu vô trùng đạt 44,2% cuống non 41,7% mầm ngủ Khi sử dụng thủy ngân thời gian 20 phút cho tỷ lệ mẫu chết cao trung bình 40% Môi trường MS + 1mg/l BA + mg/l TDZ thích hợp cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ đạt chiều cao chồi 1,2 cm, cho chồi to mập qua 56 NSKC Môi trường thích hợp cho việc hình thành mô sẹo môi trường MS + mg/l NAA + mg/l BA cho kết mô sẹo xanh, khối chặt đồng thời cho kích thước mô sẹo đạt 0,46 cm sau 56 NSKC 5.2 Kiến nghị Nghiên cứu hóa chất khử trùng có tác dụng nhẹ thủy ngân canxi clorua, nước javen Nghiên cứu khả tái sinh chồi từ mô sẹo nhân nhanh chồi từ mầm ngủ Trầu bà chân rết dạng chất điều hòa sinh trưởng khác Nghiên cứu thành phần chất nội sinh có Trầu bà chân rết để tiến hành nhân nhanh đạt hiệu Tiến hành nghiên cứu để nhân nhanh chồi, tạo hoàn chỉnh chuyển vườn ươm, để tạo lượng lớn Trầu bà chân rết tốt cung cấp cho nhà vườn 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Bá Bổng (1995), Nhân giống nuôi cấy mô, An Giang: Khoa học công nghệ môi trường An Giang Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang (2007), Chọn giống trồng phương pháp truyền thống phân tử, Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Nông Nghiệp Bùi Trang Việt (2000), Sinh lý thực vật đại cương (phần II: phát triển), Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Dương Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật, Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Dương Công Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật (II), Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Đặng Phương Trâm (2005), Giáo trình nuôi cấy mô thực vật ứng dụng, Cần Thơ: Đại học Cần Thơ Đặng Phương Trâm (2005), Nuôi cấy mô thực vật ứng dụng, Cần Thơ: Đại học Cần Thơ Đặng Văn Đông Đinh Thế Lộc (2004), Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao (tập 6), Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Lao động xã hội Lê Văn Hòa, Nguyễn Bảo Toàn Đặng Phương Trâm (1999), Sinh lý thực vật, Cần Thơ: Đại học Cần Thơ Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nghị Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải biến giống trồng, Hà Nội: NXB Nông Nghiệp Gautheret (1966) Factors affecting differentiation of plant tissue grown in vitro, In Cell Differentiation and Morphogenesis, ed W Beermann, Amsterdam, North-Holland Hiếu Giang (2003), Đăng Sở Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn Tỉnh Bến Tre, Việt Nam Nguyễn Hành (2013), Đăng trang Nông Nghiệp Việt Nam, Việt Nam Nguyễn Đức Lượng Lê Thị Thủy Tiên (2002), Công nghệ tế bào, Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2007), Bài giảng nuôi cấy mô tế bào thực vật, Đại học An Giang, An Giang Nguyễn Văn Uyển (1984), Nuôi cấy mô thực vật phục vụ cho công tác chọn giống trồng, Thành phố Hồ Chí Minh: NXB Thành phố Hồ Chí Minh Một số hình ảnh http://caycanhnamtoan.com/cay/cay-trau-ba-chan-ret Murthy B.N.S, Murch S.J & Saxena P.K 1998 Thidiazuron: A potent regulator of in vitro plant morphogenesis In viteo cell Dev Biol – Plant 34, (267 -275) 32 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng Lê Hồng Điệp (2005), Công nghệ sinh học tế bào (tập hai), Hà Nội: NXB: Hà Nội Teresa, E.V., M Alexander, A Mejias and M Oropeza (2004) Plant regeneration of Anthurium andreanum cv Rubrun, Electronic Journal of Biotechnology (282-286) XIULI SHEN (2007), Nhân nhanh chồi tạo dòng đột biến giống Dieffenbachia 33 Phụ chương Bảng 1: Thành phần môi trường MS (Musrashige Skoog, 1962) Thành phần Hàm lượng (mg/l) Khoáng đa lượng KNO3 NH4NO3 CaCl2.2H2O KH2PO4 MgSO4.7H2O Fe – EDTA FeSO4.7H2O Na2.EDTA Khoáng vi lượng 1.CoCl2.6H2O CuSO4.5H2O MnSO4.4H20 KI Na2MoO4.2H2O ZnSO4.7 H2O H3BO3 Vitamin chất hữu Glycine Thiamin HCl (B1) Pyridoxin (B6) Acid nicotinic (B5) 1.900,000 1.650,000 440,000 170,000 370,000 27,800 37,200 0,025 0,025 22,300 0,830 0,025 8,600 6,200 2,000 0,100 0,500 0,500 (Nguồn: Đặng Phương Trâm, 2005) 34 Phụ chương A Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ nuôi cấy lát mỏng cuống non Trầu bà chân rết Bảng 2: Ảnh hưởng auxin cytokinin đến việc hình thành mô sẹo giai đoạn 56 NSKC Nghiệm thức 2,4 D (mg/l) BA (mg/l) NAA (mg/l) Kích thước mô sẹo (cm) Đặc điểm mô sẹo D0 0 0,44 Vàng nhạt, khối chặt D1 0,5 0 0,43 Vàng nhạt, khối chặt D2 0,5 0,45 Xanh nhạt, khối chặt D3 0,5 0,5 0,50 Xanh nhạt, khối chặt D4 0 0,52 Vàng nhạt, khối lỏng D5 1 Mức ý nghĩa CV (%) 0,47 ns 15.18 35 Xanh , khối chặt Bảng 3: Ảnh hưởng auxin cytokinin đến việc hình thành mô sẹo giai đoạn 56 NSKC Nghiệm thức 2,4 D (mg/l) BA (mg/l) NAA (mg/l) Kích thước mô sẹo (cm) Đặc điểm mô sẹo D0 0 0,48 Xanh nhạt, khối chặt D1 0,5 0 0,46 Xanh nhạt, khối chặt D2 0,5 0,52 Xanh nhạt, khối chặt D3 0,5 0,5 0,54 Xanh nhạt, khối chặt D4 0 0,56 Vàng nhạt, khối lỏng D5 1 0,50 Xanh , khối chặt Mức ý nghĩa CV (%) ns 15.18 36 Phụ chương B: Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng thích hợp HgCl2 0.1% để tạo nguồn mẫu vô trùng cuống non mầm ngủ Trầu bà chân rết Bảng 4: Phân tích ANOVA _ Tỷ lệ mẫu vô trùng cuống non sau 14 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính P động phương bình phương Nghiệm thức 0.1123 0.0275 0.47 0.0032 Sai số 0.3466 0.0362 Tổng 0.4589 CV (%) 21.1 Bảng 5: Phân tích ANOVA _ Tỷ lệ mẫu nhiễm cuống non sau 14 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính P động phương bình phương Nghiệm thức 0.4571 0.0451 0.81 0.0679 Sai số 0.7453 0.0872 Tổng 1.2024 CV (%) 33.5 Bảng 6: Phân tích ANOVA _ Tỷ lệ mẫu chết cuống non sau 14 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính P động phương bình phương Nghiệm thức 0.2319 0.0231 1.23 0.02624 Sai số 0.4509 0.0728 Tổng 0.6828 CV (%) 28.7 Bảng 7: Phân tích ANOVA _ Tỷ lệ mẫu vô trùng mầm ngủ sau 14 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính P động phương bình phương Nghiệm thức 0.2564 0.0574 1.21 0.03289 Sai số 0.3214 0.9563 Tổng 0.5778 CV (%) 19.4 Bảng 8: Phân tích ANOVA _ Tỷ lệ mẫu nhiễm mầm ngủ sau 14 ngày Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng CV (%) Độ tự 37.3 Tổng bình phương 0.4591 0.2763 0.7354 37 Trung bình bình phương 0.0275 0.0884 F tính P 0.94 0.1423 Bảng 9: Phân tích ANOVA _ Tỷ lệ mẫu chết mầm ngủ sau 14 ngày Nguồn biến động Nghiệm thức Sai số Tổng CV (%) Độ tự 32.7 Tổng bình phương 0.1867 0.0914 0.2881 Trung bình bình phương 0.0425 0.0869 F tính P 1.02 0.0012 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ Trầu bà chân rết Bảng 10: Phân tích ANOVA _ Cao chồi sau 14 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính P động phương bình phương Nghiệm thức 0.1829 0.0304 0.93 0.5049 Sai số 14 0.4600 0.0329 Tổng 20 0.6429 CV (%) 48.80 Bảng 11: Phân tích ANOVA _ Cao chồi sau 28 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính P động phương bình phương Nghiệm thức 0.4524 0.0754 1.51 0.2466 Sai số 14 0.7000 0.0500 Tổng 20 1.1523 CV (%) 40.48 Bảng 12: Phân tích ANOVA _ Cao chồi sau 42 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính P động phương bình phương Nghiệm thức 0.8228 0.1371 2.72 0.0578 Sai số 14 0.7067 0.0504 Tổng 20 1.5295 CV (%) 32.32 Bảng 13: Phân tích ANOVA _ Cao chồi sau 56 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính P động phương bình phương Nghiệm thức 1.4247 0.2375 5.42 0.0044 Sai số 14 0.6133 0.0438 Tổng 20 2.0380 CV (%) 23.89 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ nuôi cấy lát mỏng cuống non Trầu bà chân rết 38 Bảng 14: Phân tích ANOVA _ Kích thước mô sẹo sau 14 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính động phương bình phương Nghiệm thức 0.0177 0.0035 1.54 Sai số 12 0.0275 0.0022 Tổng 17 0.0451 CV (%) 15.18 Bảng 15: Phân tích ANOVA _ Kích thước mô sẹo sau 28 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính động phương bình phương Nghiệm thức 0.0134 0.0146 1.31 Sai số 12 0.0215 0.0233 Tổng 17 0.0349 CV (%) 28.13 Bảng 16: Phân tích ANOVA _ Kích thước mô sẹo sau 42 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính động phương bình phương Nghiệm thức 0.0270 0.0053 0.83 Sai số 12 0.0783 0.0065 Tổng 17 0.1053 CV (%) 18.83 Bảng 17: Phân tích ANOVA _ Kích thước mô sẹo sau 56 ngày Nguồn biến Tổng bình Trung bình Độ tự F tính động phương bình phương Nghiệm thức 0.0221 0.0044 0.98 Sai số 12 0.0541 0.0045 Tổng 17 0.0762 CV (%) 13.22 39 P 0.2490 P 0.5631 P 0.5544 P 0.4693 [...]... thời gian khử trùng thích hợp của HgCl2 0,1% để tạo nguồn mẫu vô trùng đối với cuống lá non và mầm ngủ của cây Trầu bà chân rết 12 3.5.1.1 Mục tiêu Xác định thời gian khử trùng thích hợp đối với hóa chất khử trùng là HgCl2 0,1% để tạo nguồn mẫu in- vitro đối với cây Trầu bà chân rết 3.5.1.2 Vật liệu Cuống lá non và đoạn thân dài từ 3 – 4 cm chứa mầm ngủ của cây Trầu bà chân rết 3.5.1.3.Bố trí thí nghiệm... khi cấy (NSKC)  Thống kê và xử lí số liệu bằng phần mềm SAS 9.3.1 3.5.3 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu sự ảnh hưởng của auxin và cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ lát mỏng cuống lá non của cây Trầu bà chân rết 3.5.3.1 Mục tiêu Xác định nồng độ auxin và cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ nuôi cấy lát mỏng cuống lá non của cây Trầu bà chân rết 3.5.3.2 Vật liệu Cuống lá non vô trùng từ thí nghiệm... trong 14 ngày Thống kê và xử lý bằng phần mềm SAS 9.3.1 3.5.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu sự ảnh hưởng của auxin và cytokinin thích hợp cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ của cây Trầu bà chân rết 3.5.2.1 Mục tiêu Xác định nồng độ auxin và cytokinin thích hợp cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ của cây Trầu bà chân rết 3.5.2.2 Vật liệu Mẫu mầm ngủ vô trùng từ thí nghiệm 1 3.5.2.3 Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm... với cuống lá non và mầm ngủ của cây Trầu bà chân rết thì khử trùng bằng HgCl2 0,1% trong thời gian 10 phút là thích hợp nhất đạt tỷ lệ mẫu vô trùng là cao nhất đạt 44,2% đối với cuống lá non và 41,7% đối với mầm ngủ 19 4.1 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của auxin và cytokinin thích hợp cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ của cây Trầu bà chân rết Sau 14 ngày, mầm ngủ đã bắt đầu thích nghi với môi trường... Trầu bà chân rết Theo kết quả bảng 8, đối với cây Trầu bà chân rết thì môi trường MS + 1mg/l BA + 1 mg/l TDZ là thích hợp nhất cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ và đạt chồi cao chồi là 1,2 cm, cho chồi to mập 24 Hình 2: Chồi Trầu bà chân rết ở giai đoạn 56 NSKC ở nghiệm thức C1 (++) Hình 3: Chồi Trầu bà chân rết ở giai đoạn 56 NSKC ở nghiệm thức C3 (+++) 25 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của auxin và... của auxin và cytokinin thích hợp cho việc tạo mô sẹo từ lát mỏng cuống lá non của cây Trầu bà chân rết Nuôi cấy mô sẹo là khâu rất quan trọng trong nuôi cấy mô tế bào Mô sẹo là nguyên liệu khởi đầu cho các nghiên cứu quan trọng khác như: phân hóa mô và tế bào, chọn dòng tế bào, nuôi cấy tế bào trần, nuôi cấy tế bào đơn, nuôi cấy phôi soma, sản xuất các chất thứ cấp có hoạt tính sinh học…Vì vậy nuôi... Haberlandt, nhà sinh lý học Đức là cha đẻ của ngành nuôi cấy mô thực vật, kể từ năm 1902, đã khai thác hiện tượng toàn năng của tế bào thực vật Đó là khả năng của tế bào cho ra một cây hoàn chỉnh trong điều kiện nuôi cấy thích hợp (Bùi Chí Bửu và Nguyễn Thị Lang, 2007) 4 Đến năm 1922, Kotte và Robins lặp lại thí nghiệm của Haberlandt trên vật liệu là đỉnh sinh trưởng của rễ một cây hòa thảo (Nguyễn Đức Lượng... nuôi cấy tế bào đơn, nuôi cấy phôi soma, sản xuất các chất thứ cấp có hoạt tính sinh học…Vì vậy nuôi cấy mô sẹo từ cuống lá non cây Trầu bà chân rết là một bước đi rất qua trọng trong việc tạo nguồn mẫu in vitro cây Trầu bà chân rết Bảng 11: Ảnh hưởng của auxin và cytokinin đến việc hình thành mô sẹo ở giai đoạn 14 NSKC Nghiệm thức 2,4 D (mg/l) BA (mg/l) NAA (mg/l) Kích thước mô sẹo (cm) Đặc điểm mô... sắc của mô sẹo Thời gian lấy chỉ tiêu: 14, 28, 42, 56 ngày sau khi cấy Thống kê và xử lí số liệu bằng phần mềm SAS 9.3.1 17 Chương 4 Kết quả và thảo luận 4.1 Thí nghiệm 1 Khảo sát thời gian khử trùng thích hợp của HgCl2 0,1% để tạo nguồn mẫu vô trùng đối với cuống lá non và mầm ngủ của cậy Trầu bà chân rết Bảng 5: Ảnh hưởng HgCl2 0.1% đến việc tạo nguồn mẫu vô trùng đối với cuống lá non cây Trầu bà chân. ..Chương 2 Lược khảo tài liệu 2.1 Giới thiệu cây Trầu bà chân rết 2.1.1 Nguồn gốc và phân loại Họ : Araceae Hình 1: Cây Trầu bà chân rết 2.1.2 Đặc điểm giống kiểng lá Đây là loại cây thích hợp trồng cả trong nhà và ngoài vườn Lá của nó trở nên đậm hơn khi trồng trong bóng râm Đây là cách điều tiết để lá tận dụng tốt nguồn ánh sáng yếu để quang hợp Lá lớn và mịn màng, ... giá thành giống cao Vì vấy đề tài Nghiên cứu vật liệu khởi đầu in vitro trầu bà chân rết tiến hành nhằm tạo nguồn vật liệu ban đầu cho nghiên cứu tiếp theo, tạo số lượng lớn cung cấp cho nhà... rõ khả tái sinh chồi từ mầm ngủ, tạo mô sẹo từ cuống non Trầu bà chân rết 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Xác định thời gian khử trùng thích hợp để tạo nguồn mẫu in vitro cho Trầu bà chân rết Nghiên cứu. .. vô trùng in vitro cuống non mầm ngủ Trầu bà chân rết Khảo sát ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp cho việc tái sinh chồi từ mầm ngủ Trầu bà chân rết Khảo sát ảnh hưởng auxin cytokinin thích hợp