“NGHIÊN cứu điều CHẾ, PHÂN bố SINH học và KHẢ NĂNG gắn với tế bào UNG THƢ của PHỨC hợp MIỄN DỊCH PHÓNG xạ 131I–RITUXIMAB

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ THU “NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ, PHÂN BỐ SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG GẮN VỚI TẾ BÀO UNG THƢ CỦA PHỨC HỢP MIỄN DỊCH PHÓNG XẠ 131I–RITUXIMAB” Chuyên ngành: Mô - phôi tế bào học Mã số: 62420117 (DỰ THẢO) TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội – 2016 Công trình hoàn thành tại: Viện Nghiên cứu hạt nhân, Đà Lạt, Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Mai Trọng Khoa PGS.TS Võ Thị Thương Lan Phản biện: Phản biện: Phản biện: … Luận án bảo vệ trước Hội đồng cấp Đại học Quốc gia chấm luận án tiến sĩ họp Vào hồi ngày tháng năm 20 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Trung tâm Thông tin - Thư viện, Đại học Quốc gia Hà Nội MỞ ĐẦU Trong năm gần việc nghiên cứu điều chế dược chất phóng xạ gắn kháng thể đơn dòng dùng điều trị miễn dịch phóng xạ quan tâm lớn y học Nhiều nghiên cứu giai đoạn thử nghiệm lâm sàng Việc chữa trị bệnh u lympho ác tính không Hodgkin áp dụng hóa trị, xạ trị phẫu thuật Tuy nhiên tỷ lệ chết cao Việc tìm phương thức điều trị hiệu thách thức nhà khoa học Cho đến chưa có phương pháp hiệu để điều trị bệnh u lympho ác tính không Hodgkin, dược chất phóng xạ sử dụng lâm sàng sử dụng Bexxar Zevalin, nhiên, kháng thể sử dụng kháng thể mang chất chuột Để khắc phục nhược điểm trên, kháng thể đơn dòng hệ có chất humanized rituximab đời, rituximab chọn để đánh dấu với đồng vị phóng xạ 131I tạo thành thuốc phóng xạ phức hợp miễn dịch 131 131 I-rituximab Với nhiều ưu điểm I-rituximab gắn đặc hiệu lên kháng nguyên CD20 biểu mật độ cao tế bào lympho B ung thư, diệt tế bào ung thư chế tác động kép, chế xạ ion hóa chế sinh học, tạo hiệu tiêu diệt tế bào ung thư cao Để điều chế phức miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab ứng dụng lâm sàng, nâng cao hiệu điều trị bệnh u lympho ác tính không Hodgkin, đề tài “Nghiên cứu điều chế, phân bố sinh học khả gắn với tế bào ung thư phức hợp miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab” thực luận án Mục tiêu luận án: Bao gồm hai phần, thứ nghiên cứu xây dựng quy trình điều chế phức miễn dịch phóng xạ I-rituximab kiểm tra chất lượng Thứ hai nghiên 131 cứu đánh giá tiền lâm sàng 131I-rituximab bao gồm đánh giá tính đặc hiệu kháng thể sau đánh dấu với đồng vị phóng xạ, đánh giá phân bố, đào thải đánh giá tính an toàn động vật thí nghiệm Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu luận án: Bao gồm nghiên cứu đánh dấu kháng thể đơn dòng rituximab với đồng vị phóng xạ I để tạo thành dược chất phóng xạ nghiên cứu 131 hoạt tính miễn dịch, tính an toàn 131 I-rituximab phân bố thuốc chuột, thỏ thí nghiệm nghiên cứu thăm dò liều thám thính người bệnh Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án:  Về ý nghĩa khoa học: Tạo sản phẩm thuốc phóng xạ nhắm đích dùng điều trị ung thư lymphòao B không Hodgkin kỹ thuật miễn dịch phóng xạ, có tác động kép trình điều trị, vừa tiêu diệt ung thư chế sinh học vừa tiêu diệt ung thư xạ ion hóa  Ý nghĩa thực tiễn: - Có khả cạnh tranh với thuốc phóng xạ nhập ngoại - Khi kết hợp với đồng vị phóng xạ, dược chất phóng xạ có tác động kép trình điều trị, vừa tiêu diệt ung thư chế sinh học vừa tiêu diệt ung thư xạ ion hóa - Góp phần nâng cao lực nghiên cứu điều chế nước Ứng dụng điều trị miễn dịch phóng xạ bệnh viện nước - Mở hướng chẩn đoán điều trị mới, có ý nghĩa thiết thực cho bệnh nhân, nâng cao sức khỏe cho cộng đồng, giảm chi phí nước điều trị, tiết kiệm cho xã hội Những điểm luận án: Luận án nghiên cứu điều chế kiểm tra chất lượng dược chất phóng xạ 131 I- rituximab dùng điều trị u lympho ác tính không Hodgkin Các điểm luận án là: - Điều chế sản phẩm 131I-rituximab để điều trị ung thư phương pháp miễn dịch phóng xạ - Kết hợp phân tử kháng thể rituximab với đồng vị phóng xạ kỹ thuật đánh dấu phóng xạ dùng chất oxy hóa, chất khử với hàm lượng tối thiểu kỹ thuật đánh dấu phóng xạ luận án đảm bảo hoạt tính kháng thể - Kỹ thuật gắn phức hợp 131 I-rituximab lên cột sắc ký lực kỹ thuật gắn với tế bào lấy từ bệnh nhân ung thư ác tính khôg Hodgkin Cấu trúc luận án: Gồm phần Mở đầu: Gồm trang Tổng quan: Gồm 15 trang Giới thiệu kháng thể đơn dòng phương pháp điều trị miễn dịch phóng xạ, giới thiệu đồng vị phóng xạ dùng chẩn đoán điều trị Phương pháp nghiên cứu: Gồm 19 trang Trình bày phương pháp nghiên cứu sử dụng luận án Kết bàn luận: Gồm 54 trang Trình bày kết nghiên cứu đánh giá, bàn luận Kết luận kiến nghị: Gồm trang Trình bày tóm tắt kết nghiên cứu theo mục tiêu đề hướng CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Ứng dụng kháng thể đơn dòng điều trị miễn dịch phóng xạ Từ sản xuất, kháng thể đơn dòng có nhiều ứng dụng lĩnh vực y học, chăn nuôi, công nghiệp Đặc biệt chẩn đoán điều trị bệnh, kháng thể đơn dòng gắn với chất phóng xạ hoá chất, phát sớm bệnh ung thư, phát lan truyền ung thư, ngăn chặn loại trừ phát triển ung thư, điều trị ung thư ác tính Điều trị kháng thể đơn dòng phương pháp điều trị hiệu tế bào ung thư mức độc thấp tế bào bình thường Sau tiêm, kháng thể khắp nơi thể gắn vào kháng nguyên đặc hiệu tế bào ung thư Dựa vào đặc điểm kháng thể đơn dòng gắn với đồng vị phóng xạ để phát huy hiệu điều trị Rituximab cho phép sử dụng người vào năm 1997, sản xuất kỹ thuật di truyền, dung hợp vùng biến đổi chuỗi nặng nhẹ chuột với vùng định IgG1/κ người (Hình 1.1) Kháng thể tạo thành có khả tiêu diệt tế bào B in vitro làm giảm lượng tế bào B máu ngoại vi in vivo Sự giảm tế bào B tủy xương, lách hạch lympho nghiên cứu kỹ sau nhiều năm điều trị lâm sàng Hình 1.1: Cấu trúc kháng thể rituximab Việc sử dụng rituximab phê chuẩn phần lớn dựa thử nghiệm u lympho tế bào B không Hodgkin tái phát nhẹ Tỷ lệ đáp ứng nhóm khó chữa khoảng 50% sử dụng rituximab 1.2 Phƣơng pháp đánh dấu kháng thể với đồng vị phóng xạ I: Từ kỹ thuật sản xuất kháng thể đơn dòng phát triển, 131 người ta đánh dấu với đồng vị phóng xạ 111 In, 123 I, 131 I, 67Ga, Tc, 90Y … Việc chọn đồng vị phóng xạ dựa 99m đặc điểm thời gian bán rã phải từ đến ngày thích hợp, lượng gamma từ 70 - 300 keV, độ giàu gamma đơn phân rã phải cao, xạ đặc biệt khác, đồng vị phải ổn định sản phẩm dạng chất mang Phức nhân phóng xạ protein phải ổn định hóa học invivo Việc chọn nhân phóng xạ thích hợp cho trình đánh dấu tính chất riêng nhân phóng xạ thích hợp cho chụp hình hay điều trị phụ thuộc vào tính chất dược động học phân tử kháng thể Đồng vị phóng xạ 131I dùng chẩn đoán có nhiều thuận lợi giá thành thấp, dễ sản xuất, nhiều nhược điểm tồn iod tự do, liều xạ cao cho bệnh nhân, thời gian bán rã dài Năng lượng phát tia gamma cho chụp hình 131I 364 keV, mức lượng cực đại 131 I Emax: 0,25, 0,33, 0,47, 0,61, 0,81 MeV, Eav 192 keV Kháng thể gắn 131 I dùng cho chẩn đoán điều trị Có hai cách để gắn phóng xạ vào 131 I, phương pháp thay trực tiếp iot phóng xạ vào vị trí ortho hoạt hoá vòng thơm, hầu hết tyrosine, cách khác cộng hợp phân tử hữu iod hoá với nhóm chức dây chuyền phản ứng phân tử kháng thể Phương pháp thay trực tiếp dùng chất oxy hoá nhẹ để bảo toàn hoạt tính miễn dịch kháng thể, chất oxy hóa thường dùng chloramin T, tetrachlorodiphenylglycouril (iodogen) hydrogenperoxidase (lactoperoxidase) Các vấn đề chủ yếu liên quan đến kỹ thuật không gắn tyrosine dư thừa làm duỗi phân tử protein Phân tử duỗi làm thay đổi cấu trúc toàn vẹn protein môi trường phản ứng Ngoài ra, xạ phân xảy ra, làm giải phóng iod tự tích lũy tuyến giáp dày Tuy nhiên năm gần đây, nhà nghiên cứu tiến hành nghiên cứu đánh dấu kháng thể với 131 I cho mục đích điều trị bệnh ngày nhiều Việc điều trị u lympho B không Hodgkin kháng thể đơn dòng mở đầu Gerald DeNardo, Sally DeNardo, David trường đại học California năm 2006 Bên cạnh đó, kháng thể đơn dòng gắn phóng xạ 131 I-rituximab thực lâm sàng tác giả Sang Mao Lim cộng từ năm 2007 đến nay, hiệu điều trị cho thấy khả thành công đáng kể Các tác giả Leahy MF, Turner JH (2011) có nhiều thành công sau 10 năm điều trị lâm sàng dùng 131 I-rituximab PHƢƠNG PHÁP GHIÊN CỨU Các nghiên cứu thực nghiệm thực Viện Nghiên cứu hạt nhân, Bệnh viện Bạch Mai Học viện Quân y Các phương pháp nghiên cứu trang thiết bị, nguyên vật liệu sử dụng trình bày sau: 2.1 Phƣơng pháp gắn kháng thể đơn dòng rituximab với đồng vị phóng xạ vị phóng xạ 131 131 I: Dùng phương pháp oxy hóa khử, đồng I bị oxi hóa tạo thành iodine-131[131I+] gắn vào phân tử tyrosine vị trí ortho vòng phenol với hiệu suất gắn cao Kháng thể đơn dòng rituximab khảo sát đánh dấu với đồng vị phóng xạ 131 I Các khảo sát hàm lượng chloramin T, khảo sát pH, khảo sát hàm lượng kháng thể, thời gian phản ứng Kết tính toán phần mềm máy quét phóng xạ Bioscan Cyclone Hiệu suất đánh dấu kháng thể tính toán cách chia hoạt độ phóng xạ vị trí đỉnh 131I- rituximab cho hoạt độ tổng cộng 2.2 Phƣơng pháp sắc ký lọc gel dùng sephadex G25: Để tách phân đoạn kháng thề đánh dấu với đồng vị phóng xạ khỏi hỗn hợp phản ứng, cột sephadex PD10 pharmacia, GE Healthcare sử dụng Phức hợp 131I-rituximab tách khỏi 131 I tự thành phần khác Dung môi rửa giải nước muối sinh lý 0,9% đệm PBS Vận tốc rửa giải 30cm3/giờ Hoạt độ phóng xạ phức hợp hiệu suất đánh dấu xác định 2.3 Phƣơng pháp xác định độ tinh khiết hóa phóng xạ: Dùng phương pháp điện di phương pháp sắc ký lớp mỏng TLC, TCC, sử dụng mỏng thích hợp TLC aluminum sheet silica gel 60 F254 TecControl Biodex 150771 Độ tinh khiết hóa phóng xạ hiệu suất đánh dấu tính toán cách scan băng sắc ký thiết bị quét phóng xạ Bioscan máy phóng xạ tự chụp Cyclone, tính toán phần mềm OptiQuan 5.0, phần mềm Biochrom Thử theo Tiêu chuẩn sở DPPX-13:2010 ISO 17025 2.4 Phƣơng pháp xác định độ tinh khiết hạt nhân phóng xạ: Bằng phương pháp đo phổ gamma hệ phổ kế gamma, thử theo Tiêu chuẩn sở (TCCS-DPPX-14:2010 ISO 17025) Chấm l dung dịch mẫu lên tâm giấy lọc hình tròn có đường kính 1,5 cm Đo tốc độ đếm phổ kế gamma ORTEC® DSPEC jrTM (USA) Nhận diện hạt nhân phóng xạ phát tia gamma qua đỉnh lượng ghi phổ kế gamma Tính diện tích đỉnh gamma chương trình GammaVision 32 phần trăm hoạt độ phóng xạ 131I đỉnh 364 keV so với tổng hoạt độ Hoạt độ phóng xạ 131I lớn 99,90 % 2.5 Các phƣơng pháp kiểm tra chất lƣợng sinh học: Sản phẩm kiểm tra độ vô khuẩn, chí nhiệt tố, kiểm tra phân bố sinh học động vật Thử nội độc tố vi khuẩn thực máy Endosafe PTS100 Thử theo Tiêu chuẩn sở DPPX15:2010 ISO 17025 Thử vô khuẩn phương pháp cấy thuốc vào môi trường thioglicolat ủ nhiệt độ 30 - 350C, môi trường soya - bean casein ủ nhiệt độ 20 -250C, quan sát 14 ngày liên tục, thử theo Tiêu chuẩn sở DPPX-13:2010 ISO 17025 Kiểm tra tính ổn định cách bảo quản điều kiện 40C -200C Sau khoảng thời gian lấy sản phẩm phân tích độ tinh khiết hoá phóng xạ phương pháp sắc ký lớp mỏng TLC Để làm ổn định sản phẩm huyết người, pha phương pháp phân tích Schatchard dùng phần mềm Graphpad Prism 7,01 * Các trang thiết bị chủ yếu đƣợc sử dụng - Máy phóng xạ tự chụp Cyclone Plus Phosphor Scanner, B431200, PerkinElmer, Mỹ - Máy đo hoạt độ phóng xạ Capintec, miền đo từ 0,0018000mCi, Mỹ - Hệ phổ kế gamma đa kênh, độ phân giải đỉnh lượng 1332keV Co-60 1,9keV hãng Ortec, Mỹ - Máy SPECT hãng SIEMENT - Máy sắc ký lỏng cao áp FPLC 6850A, Perkin Elmer, cột Agilentb Zorbax GF-250 - Máy đo nhanh nội độc tố vi khuẩn Endosafe - PTSTM Portable Test System 100, Mỹ - Phòng vô trùng, class 95,0% > 98,0% > 99,9% > 95,0% Sắc ký lớp mỏng > 95,0% Sắc ký điện di Độ vô khuẩn Đạt Nội độc tố vi khuẩn < EU/ml TCCS-DPPX 162010 TCCS-DPPX 152010, pha loãng mẫu 1:40 lần Kết nghiên cứu tính ổn định sản phẩm rituximab huyết nhiệt độ 37 C, (Hình 3.7): 16 131 I- Độ tinh khiết hóa phóng xạ (%) 120 100 80 60 40 20 0 10 12 14 16 18 Thời gian (ngày) Hình 3.7: Đồ thị ổn định 131I-rituximab huyết - Kết gắn tế bào với phức hợp 131I-rituximab: Tế bào Raiji nguyên bào sợi dùng thực nghiệm gắn với phức hợp 131I-rituximab (Hình 3.8) Tế bào Raji thu hoạch Tế bào nguyên bào sợi Hình 3.8: Hình chụp tế bào ung thư Raji nguyên bào sợi Kết gắn bão hòa 131 I-rituximab với tế bào ung thư Raji kết tính số Kd Bmax trình bày Hình 3.9: 17 I - r it u x im a b b o u n d ( a m o l/ c e ll) 131 R a ji c e lls F ib r o b la s t c e lls N o n s p e c ific b in d in g 0 25 50 131 75 100 125 I - r it u x im a b ( n M ) Hình 3.9: Đồ thị gắn 131I-rituximab với tế bào ung thư Raji Trục hoành nồng độ tăng dần 131 I-rituximab, phần gắn đặc hiệu amol/cell vẽ trục tung số vị trí gắn kháng thể tế bào Kết phân tích phương pháp làm khớp với hàm phi tuyến (nonlinear regression) dùng phần mềm Graphpad Prism Phần gắn không đặc hiệu NSB tính cạnh tranh với 500 g kháng thể rituximab không phóng xạ Đồ thị đạt đến giá trị cực đại cho thấy bão hòa Giá trị Kd 6,2 nmol/L, Bmax 1,24 amol/tế bào từ số vị trí gắn kháng thể tế bào x 105 Phần gắn không đặc hiệu 3%, phần gắn với nguyên bào sợi nhỏ 15% Các tế bào nguyên bào sợi tế bào không mang dấu ấn CD20, khả gắn với tế bào lành phức hợp xảy ra, tỉ lệ phần nói lên có phản ứng chéo không đặc hiệu kháng thể với kháng nguyên khác bề mặt tế bào không đáng kể Các kết cho thấy lực kháng thể sau đánh dấu phóng xạ đảm bảo 18 hoạt tính miễn dịch số vị trí gắn tế bào đạt 10 phù hợp so sánh với nghiên cứu công bố Kết gắn 131I-rituximab với tế bào bạch cầu tách từ máu ngoại vi bệnh nhân 22,5 ± 9,52 Vì bệnh lý ung thư tế bào lympho thể, chủ yếu bệnh biểu hạch, quan bạch huyết Tế bào ung thư lưu thông theo đường bạch huyết vào máu ngoại vi lưu thông tuần hoàn Tế bào lympho mang dấu ấn CD20 máu ngoại vi tế bào lympho bình thường tế bào NHL chúng gắn với kháng thể 131I-rituximab Kết kiểm tra hoạt tính miễn dịch phức hợp 131 I- rituximab với kháng nguyên CD20: Đồ thị biểu diễn kết gắn I-rituximab với kháng nguyên CD20 lên cột niken 131 Phức 131I-rituximab gắn CD20 (%) agarose hình 3.10: 100 99 98 97 96 95 94 93 92 91 90 10 20 30 50 100 1000 5000 10000 Hàm lượng kháng nguyên CD20 (ng) Hình 3.10: Hoạt tính gắn 131I-rituximab với CD20 Phản ứng gắn phức hợp 131 I-rituximab lên kháng nguyên CD20 cho kết hoạt tính gắn đạt 97% miền từ 50ng đến 10g Số liệu cho thấy kháng thể đơn dòng rituximab đánh dấu với đồng vị phóng xạ 19 131 I không bị hoạt tính Biểu đồ cho thấy khả gắn cực đại kháng thể gắn phóng xạ với kháng nguyên CD20 đạt đến 98% Số liệu cho thấy hoạt tinh miễn dịch phức hợp đảm bảo cho sử dụng điều trị - Kết kiểm tra phân bố đào thải động vật: Kết phân bố sinh học chuột: 131 I-rituximab phân bố máu sau tiêm, khoảng 10-30% liều tiêm/gam có máu sau tiêm từ ngày đến ngày, phức hợp tập trung thận 10%, tập trung gan, tuyến giáp, sai số phân bố gan cao Thuốc đào thải khỏi máu sau khoảng tuần tiết qua thận nhanh Phân bố sinh học thỏ: Hình SPECT cho thấy tập trung nhiều khu vực lồng ngực, gan, thận hàm mặt Hình 3.11 Hình 3.11: Phân bố 131I-rituximab thỏ thí nghiệm, SPECT 20 Kết chụp hình phân bố 131 I-rituximab bệnh nhân có chẩn đoán CD20 dương tính, dạng NHL, điều trị hoá chất nhiều chu kỳ tái phát, phân bố thuốc chụp máy SPECT Vì đặc điểm bệnh NHL mô bạch huyết có mặt nơi thể, NHL xảy node lympho đơn, nhóm node, quan, kiểu ung thư trải dài hầu hết phần thể gan, tủy xương, lách Kết theo dõi đào thải thuốc thỏ sau: Liều 500 5000 Ci Đồ thị thấy ngày khoảng 3040% liều tiêm tập trung máu Trong ngày thuốc đào thải dần, không nhanh chậm Sau khoảng 120 giờ, thuốc đào thải hoàn toàn khỏi động vật 131 I-ritu x im a b d io a c tiv ity (x 0 C P M ) thí nghiệm, (Hình 3.12) 8000 131 I-ritu x im a b (5 0  C i) 131 I-ritu x im a b (1 0  C i) 131 I-ritu x im a b (1 0  C i) 4000 131 I-ritu x im a b (2 0  C i) 3000 131 I-ritu x im a b (5 0  C i) 7000 6000 5000 2000 1000 0 25 50 75 100 125 150 175 200 T im e (h o u r) Hình 3.12: Đồ thị đào thải 131I-rituximab theo liều tiêm - Kết kiểm tra tính an toàn động vật: Kết đo số an toàn thỏ sau tiêm 131 I-rituximab bảng 4.3 sau: Kết cho thấy, số lượng hồng cầu ổn định khoảng T/L Nồng độ huyết sắc tố thỏ dao động 21 quanh mức 11 g/dl tất nhóm Số lượng bạch cầu máu ngoại vi thời điểm trước nghiên cứu có khác biệt nhóm Nồng độ men gan SGOT máu ngoại vi thỏ ổn định trình thực nghiệm Bảng 3.3: Chỉ số huyết học sinh hóa nhóm thỏ thời điểm nghiên cứu (   SE) Tóm lại: Tiêm phức hợp miễn dịch phóng xạ vào thỏ với liều từ thấp đến cao không ảnh hưởng đến sức khỏe thỏ Kết phân tích cho thấy tính an toàn thuốc động vật thực nghiệm Hình ảnh mô bệnh học mô gan mô thận cho hình ảnh cấu trúc bình thường, (Hình 3.13) Hình ảnh mô gan (hình A) tiêu nhuộm H.E cho thấy bè gan xếp thành dải, cấu trúc rõ, tế bào gan tế bào nội mô lót lòng xoang tĩnh mạch có cấu trúc bình thường; cấu trúc khoảng cửa bình thường 22 A B Hình 3.13 Hình ảnh mô học tổ chức gan (A) thận (B) sau đợt thử nghiệm tiêm 131I-rituximab liều 5mCi/thỏ KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận: Luận án thực nội dung đáp ứng mục tiêu đề ra:  Xây dựng quy trình điều chế phức miễn dịch phóng xạ 131 I- rituximab kiểm tra chất lượng - Xây dựng quy trình điều chế 131 I-rituximab: 131 I-rituximab điều chế với hoạt độ riêng 6,6 Ci/g Ci/g, hiệu suất đánh dấu đạt 94 - 97 % - Kiểm tra chất lượng: 131 I-rituximab đạt tiêu chuẩn thuốc phóng xạ, độ tinh khiết hóa phóng xạ đạt 98% độ tinh khiết hạt hạt nhân phóng xạ 99,9%, đạt tiêu độ vô khuẩn, nội độc tố vi khuẩn ổn định  Nghiên cứu đánh giá tiền lâm sàng 131 I-rituximab bao gồm đánh giá tính đặc hiệu kháng thể sau đánh dấu với đồng vị phóng xạ, đánh giá phân bố, đào thải đánh giá tính an toàn động vật thí nghiệm - Tính đặc hiệu 131I-rituximab: Gắn với tế bào ung thư Raji đạt 50% nồng độ x 106 tế bào, Kd 6,2 nmol/L, Bmax 1,24 amol/tế bào, phần gắn không đặc hiệu 131I-rituximab 23 3% gắn với nguyên bào sợi 15% 131 I-rituximab gắn với tế bào bạch cầu bệnh nhân ung thư NHL 22,5%± 9,52 gắn với kháng nguyên CD20 93-98% - Phân bố, đào thải 131 I-rituximab: Khoảng 10-30% liều tiêm/gam phân bố máu sau tiêm đến ngày, tập trung thận 10%, tập trung gan, tuyến giáp Thuốc đào thải khỏi máu sau khoảng tuần tiết qua thận nhanh - Tính an toàn 131 I-rituximab: Các số huyết học, sinh hóa bình thường xét nghiệm vi thể tế bào bất thường hay tổn thương Phức hợp 131 I-rituximab nghiên cứu điều chế đánh giá tiền lâm sàng, đạt tiêu chuẩn chất lượng thuốc phóng xạ dùng điều trị lâm sàng thời gian tới Kiến nghị: Bệnh U lympho ác tính không Hodgkin bệnh phức tạp ung thư huyết học, để đưa dược chất phóng xạ 131I-rituximab sử dụng điều trị lâm sàng, đề nghị: - Nghiên cứu cần hoàn thiện thêm phương pháp liều lượng để tính toán liều tiêm bao gồm liều thám thính liều toàn thân, tính hoạt độ phóng xạ để đưa vào điều trị lâm sàng - Cần thử nghiệm điều trị bệnh nhân phase I phase II lâm sàng - Xin cấp phép Bộ Y Tế 24 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Mai Trọng Khoa, Nguyễn Thị Thu, Trần Đình Hà, Võ Thị Cẩm Hoa, Bùi Văn Cường (2013), “Nghiên cứu điều chế kháng thể đơn dòng gắn đồng vị phóng xạ 131I-rituximab dùng điều trị u lympho ác tính không hodgkin”, Tạp chí Y học thực hành số (858), tr 60-64 Mai Trọng Khoa, Nguyễn Thị Thu, Trần Đình Hà, Võ Thị Cẩm Hoa, Dương Văn Đông Bùi Văn Cường, Nguyễn Thị Khánh Giang (2013) “Nghiên cứu đánh giá tính đặc hiệu phức miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab gắn kháng nguyên CD20, tế bào bạch cầu bệnh nhân ung thư NHL tế bào Raji”, Tạp chí Y học thực hành, số (859), tr 14-17 Mai Trọng Khoa, Nguyễn Thị Thu, Trần Đình Hà, Võ Thị Cẩm Hoa, Nguyễn Thị Khánh Giang, Nguyễn Lĩnh Toàn, Hồ Anh Sơn (2013) “Nghiên cứu đánh giá tiền lâm sàng phức miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab động vật thí nghiệm”, Tạp chí Y học thực hành (ISSN 1859-1663), số (860), tr 30-34 Nguyễn Thị Thu, Mai Trọng Khoa, Trần Đình Hà, Võ Thị Cẩm Hoa, Dương Văn Đông Bùi Văn Cường, Nguyễn Thị Khánh Giang (2013) “Kiểm tra chất lượng kháng thể đơn dòng gắn đồng vị phóng xạ 131I-rituximab dùng điều trị u lympho ác tính không Hodgkin”, Tạp chí Khoa học - Đại học Quốc gia Hà Nội, tập 29(3), tr 51-58 Nguyễn Thị Thu, Nguyễn Thị Ngọc, Nguyễn Thị Khánh Giang, (2016), “Đánh giá khả gắn với tế bào ung thư dược chất phóng xạ 131I-rituximab”, Tạp chí Y dược lâm sàng 108, tập 11, tr 10-15 ... Hodgkin, đề tài “Nghiên cứu điều chế, phân bố sinh học khả gắn với tế bào ung thư phức hợp miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab” thực luận án Mục tiêu luận án: Bao gồm hai phần, thứ nghiên cứu xây dựng... amol /tế bào từ số vị trí gắn kháng thể tế bào x 105 Phần gắn không đặc hiệu 3%, phần gắn với nguyên bào sợi nhỏ 15% Các tế bào nguyên bào sợi tế bào không mang dấu ấn CD20, khả gắn với tế bào. .. 131I-rituximab huyết - Kết gắn tế bào với phức hợp 131I-rituximab: Tế bào Raiji nguyên bào sợi dùng thực nghiệm gắn với phức hợp 131I-rituximab (Hình 3.8) Tế bào Raji thu hoạch Tế bào nguyên bào sợi Hình 3.8: