Bài viết tiến hành nghiên cứu nhằm tìm hiểu liên quan giữa rs10181656 thuộc gen STAT4 và rs3761847 thuộc TRAF – C5 Locus với bệnh Lupus ban đỏ hệ thống và đặc biệt là viêm thận Lupus.
TCNCYH Phụ trương 91 (5) - 2014 MỐI LIÊN QUAN CỦA rs10181656 THUỘC GEN STAT4 VÀ rs3761847 THUỘC TRAF1 - C5 LOCUS VỚI BIỂU HIỆN BỆNH LUPUS Vương Tuyết Mai1, Iva Gunnasson2, Leonid Padyukov2, Stefan H Jacobson2 Trư ng h YH N n r n t h Thụ n Ngh n t n h nh nh t h n ng r 101 th g n T T4 r th - C5 nh n h th ng t th n Ngh n th h n tr n 2 nh nh n n h th ng tr ng 10 nh nh n th n nh h ng g ngư h nh Phương h h n t h tr n T n ụng h nh g n n th g n T T4 T - C5 t h th t g n r 101 th g n T T4 h th t CC nh n h th ng nh th n th nh h ng 0001 T r 101 th g n T T4 h nh g nh n h th ng th n nh h ng h t ngh th ng -09 -02 Ngư t g n r th T - C5 h ng th h t ngh th ng nh ngh n T Từ khoá: Gen STAT4, TRAF1 - C5, lupus ban đỏ hệ thống, viêm thận lupus I ĐẶT VẤN ĐỀ STAT4 (Signal transducers and activator of transcription 4) yếu tố dẫn truyền tín hiệu nội tế bào có số tế bào hỗ trợ biệt hóa tế bào miễn dịch tự kháng thể có vai trò thúc đẩy phát triển bệnh tự miễn có lupus ban đỏ hệ thống Một số nghiên cứu di truyền xác định STAT4 gen có vai trò quan trọng chế bệnh sinh lupus ban đỏ hệ thống ví dụ đa hình đơn (SNP - single nucleotide polymorphism) rs7582694, rs7574865 cho thấy có khác biệt có ý nghĩa thống kê tỷ lệ kiểu gen alleles nhóm bệnh nhóm chứng [1; 2; 3] TRAF1 (TNF receptor-associated factor 1) C5 (Complement component 5) (TRAF1 - C5) nằm liền kề với nhiễm sắc thể q33 - 34 TRAF1 liên kết với nhiều thành viên nhóm cảm thụ TNF điều khiển tín hiệu kết nối liên lạc cytokine, có TNFα thơng qua protein adapter protein kinase, C5 rối loạn điều hòa dẫn đến kích hoạt bổ thể vô tổ chức sinh bệnh tự miễn dịch Gen TRAF1 - C5 nhiều nghiên cứu cho thấy đóng vai trò quan trọng chế bệnh sinh bệnh tự miễn mà đặc biệt lupus ban đỏ hệ thống [4] Lupus ban đỏ hệ thống bệnh tự miễn gây tình trạng viêm mạn tính điển hình nhiều h trư ng Ng Ng n h ương T t h YH N ngt t g nh n 24 2014 h th n 11 2014 n N t ng h quan mà thận quan đích Viêm thận lupus tổn thương trầm trọng lupus ban đỏ hệ thống Tùy thuộc vào mức độ nghiêm trọng bệnh mà 10 - 30% bệnh nhân tiến triển đến bệnh thận giai đoạn cuối Viêm thận lupus đặc trưng có mặt kháng thể kháng DNA chuỗi kép (ds) đáp ứng miễn dịch mức gây tổn thương cầu thận mạch máu thận [1; 4] Nhiều yếu tố môi trường di truyền chứng minh nghiên cứu có liên quan đến thay đổi bất thường hệ miễn dịch sinh bệnh học lupus ban đỏ hệ thống viêm thận lupus Một số gen xác định đóng vai trò quan trọng chế bệnh sinh viêm thận lupus quần thể bệnh nhân khu vực địa lý khác Trong bệnh lupus ban đỏ hệ thống, tế bào miễn dịch tế bào T tế bào B cho thấy có nhiều bất thường chức mà dẫn đến thay đổi q trình tổng hợp cytokine Vì thế, chúng tơi tiến hành nghiên cứu nhằm mục tiêu: tìm hiểu mối liên quan số điểm đa hình đơn rs 10181656 gen STAT4 rs3761847 gen TRAF1 - C5 với lupus ban đỏ hệ thống đặc biệt viêm thận lupus II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng Nghiên cứu thực viện Karolinska, Thụy Điển 272 bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống chẩn đoán xác định theo tiêu chuẩn chẩn đốn ACR [5], 106 bệnh nhân viêm thận lupus 35 TCNCYH Phụ trương 91 (5) - 2014 166 bệnh nhân khơng có triệu chứng viêm cầu thận, nhóm chứng bao gồm 307 người khỏe mạnh Phương pháp Phương pháp “salting out” sử dụng cho việc tách chiết DNA từ mẫu máu tồn phần có EDTA (5 – 10 ml) Các mẫu DNA với chất lượng không tốt cho xác định kiểu gen (tỷ lệ thành công < 95%) bị loại khỏi phân tích Phương pháp phân tích di truyền allele dựa vào TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, Hoa Kỳ) sử dụng để phát kiểu gen số điểm đa hình đơn Phương pháp phát kiểu gen gen STAT4 TRAF1 - C5 sử dụng đa cặp mồi đoạn DNA ngắn khoảng 20 - 30 nucleotides (microDNA) Q trình phân tích kiểu gen thực theo qui trình chuẩn đĩa 384 giếng với 10 ng DNA đối tượng nghiên cứu PCR tiến hành máy GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems, Foster City, Hoa Kỳ) dấu hiệu màu huỳnh quang gắn mẫu dò phản ứng đọc 7900 Sequence Detector (7900HT Real - Time PCR Systems: Applied Biosystems, Foster City, Hoa Kỳ) Các SNP lựa chọn cho nghiên cứu: rs10181656 thuộc gen STAT4 rs3761847 thuộc TRAF1 - C5 locus nghiên cứu Bảng Tóm tắt thơng tin rs10181656 thuộc gen STAT4 rs3761847 thuộc TRAF1 - C5 locus nghiên cứu SNP Vị trí Nhiễm sắc thể Vị trí nhiễm sắc thể Alleles Phương pháp rs10181656 Intron 2q32.2-q32.3 191969879 C/G TaqMan rs3761847 5’ flanking region 9q33-q34 123690239 A/G TaqMan Gen T T4 T 1-C5 Thông tin điểm đa hình nghiên cứu bao gồm rs10181656 thuộc gen STAT4 rs3761847 thuộc TRAF1 - C5 locus nghiên cứu lấy từ sở liệu dbSNP (Database of single nucleotide polymorphisms) 3.Xử lý số liệu: Để so sánh tỷ lệ phần trăm kiểu gen, allele kiểu hình, test χ bình phương Fisher’s exact sử dụng với phần mềm SPSS 17.0 Haplotype phân tích chương trình HaploView [6], kiểm tra thử nghiệm hoán vị đặt 105 permutations cho marker haplotypes Đạo đức nghiên cứu: Các bệnh nhân hoàn tồn tưn nguyện tham gia nghiên cứu rút khỏi nghiên cứu thời điểm Thông tin cá nhân bảo mật sử dụng cho mục đích nghiên cứu III KẾT QUẢ Tỷ lệ kiểu gen rs10181656 thuộc gen STAT4 rs3761847 thuộc TRAF1 - C5 locus Bảng Tỷ lệ kiểu gen rs10181656 thuộc gen STAT4 rs3761847 thuộc TRAF1 - C5 locus lupus ban đỏ hệ thống nhóm chứng Tỷ lệ kiểu gen* mơ hình đồng phối hợp gen SNPs STAT4 rs10181656 Nhóm nghiên cứu 36 Tổng CC CG Bệnh 272 (100%) 107 (39,3%) 129 (47,4%) 36 (13,2%) Chứng 304 (100%) 187 (61,5%) 107 (35,2%) 10 (3,3%) x2 - 5,3 2,98 4,4 p < 0,0002 0,003 < 0,0002 x2 p 36,9 < 0,0001 GG TCNCYH Phụ trương 91 (5) - 2014 Tỷ lệ kiểu gen* mô hình đồng phối hợp gen SNPs TRAF1 - C5 rs3761847 Nhóm nghiên cứu Tổng AA AG p 4,2 0,12 GG Bệnh 265 (100%) 77 (29,1%) 123 (46,4%) 65 Chứng 296 (100%) 90 (30,4%) 154 (52,0%) 52 (17,6%) (24,5%) x2 -0,35 -0,06 2,03 p 0,72 0,18 0,043 *Tổng số khác tỷ lệ dương tính đạt thí nghiệm khác Tỷ lệ kiểu gen STAT4, rs10181656 cho thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê nhóm bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống nhóm chứng với p < 0,0001 Tỷ lệ kiểu gen CC cho thấy có tỷ lệ thấp nhóm bệnh cao nhóm chứng có ý nghĩa thống kê Tỷ lệ kiểu gen CG GG cho thấy có tỷ lệ cao nhóm x2 bệnh thấp nhóm chứng có ý nghĩa thống kê Tuy nhiên, tỷ lệ kiểu gen AA AG rs3761847 thuộc gen TRAF1 - C5 cho thấy khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, có khác biệt thống kê nhóm có kiểu gen GG cao nhóm bệnh So sánh tổng thể không cho thấy khác biệt thống kê tỷ lệ kiểu gen rs3761847 thuộc gen TRAF1 - C5 nhóm bệnh nhóm chứng Bảng Tỷ lệ kiểu gen rs10181656 thuộc gen STAT4 rs3761847 thuộc TRAF1 - C5 locus viêm thận lupus nhóm chứng Tỷ lệ kiểu gen* mơ hình đồng phối hợp gen SNPs STAT4 rs10181656 Nhóm nghiên cứu Tổng CC CG GG Bệnh 106 (100%) 40 (37,7%) 53 (50%) 13 (12,3%) Chứng 304 (100%) 187 (61,5%) 107 (35,2%) 10 (3,3%) x2 - 4,24 2,69 3,46 P