1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Báo cáo đồ án tốt nghiệp: Nghiên cứu xác định các loại axit amin trong một số loài nấm lớn ở khu vực Bắc Trung Bộ bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC)

38 171 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 38
Dung lượng 1,74 MB

Nội dung

Protein trong nấm có giá trị dinh dưỡng cao hơn so với hầu hết các protein thực vật. Protein khi đi vào cơ thể được chuyển hóa thành các axit amin, trong đó có 9 axit amin thiết yếu. Nhằm giúp các bạn hiểu hơn về vấn đề này, mời các bạn cùng tham khảo nội dung bài báo cáo đồ án tốt nghiệp Nghiên cứu xác định các loại axit amin trong một số loài nấm lớn ở khu vực Bắc Trung Bộ bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) dưới đây.

BÁO CÁO ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TÊN ĐỀ TÀI:  “NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CÁC LOẠI AXIT AMIN TRONG MỘT SỐ LỒI  NẤM  LỚN Ở KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ  LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)” GVHD:  Th.S Hồng Văn Trung SVTH: Nguyễn Duy Trọng Hồng Thị Nga Lớp: 51K_CNTP MỞ ĐẦU   1. Lí do chọn đề tài  Với cấu trúc địa chất độc đáo, địa lý thủy văn đa dạng, khí hậu  nhiệt  đới gió mùa đã góp phần tạo nên sự đa dạng của hệ nấm  Việt Nam, đây là nguồn có giá trị tài ngun rất to lớn  Hiện nay khơng chỉ  ở Việt Nam mà trên thế giới đều cơng nhận  giá trị khoa học các lồi nấm, nấm được coi là một thực phẩm chức  năng, có ý nghĩa rất quan trọng trong đời sống con người, chúng là  nguồn thực phẩm giàu chất dinh dưỡng, nguồn dược phẩm q.   Protein trong nấm có giá trị dinh dưỡng cao hơn so với hầu hết các  protein thực vật. Protein khi đi vào cơ thể được chuyển hóa thành  các  axit amin, trong đó có 9 axit amin thiết yếu. Axit amin là thành phần  quan trọng  thực hiện các chức năng đa dạng của cơ thể, là tiền thân  của  nhiều  sinh  chất  quan  trọng  trong  cơ  thể  sống.  Vì  vậy  việc  xác  định axit amin trong nấm là rất cần thiết       Trong  những  năm  gần  đây,  HPLC  được  ứng  dụng  rộng  rãi  trong  phân tích, đánh giá chất lượng thực phẩm như axit amin, vitamin, kháng  sinh, phụ gia thực phẩm  Xuất phát từ thực tế đó, chúng tơi lựa chọn  đề tài : “Nghiên cứu xác định hàm lượng các axit amin trong một số  lồi nấm lớn ở vùng Bắc Trung Bộ bằng phương pháp sắc ký lỏng  hiệu năng cao HPLC” 2. Mục đích nghiên cứu       Xây dựng phương pháp tách và định lượng đồng thời các axit amin  trong  các  loại  nấm  khác  nhau,  cung  cấp  số  liệu  về  thành  phần  dinh  dưỡng (axit amin) trong một số loại nấm được nghiên cứu 3. Đối tượng nghiên cứu           Nghiên  cứu  xác  định  các  axit  amin   nấm  tự  nhiên  được  thu  thập từ  rừng Quốc gia Pù Mát, Phong Nha Kẻ Bàng  thuộc  vùng Bắc  Trung Bộ Tuần hoàn  vật chất Dược phẩm,  chống lão hóa Ngăn ngừa, điều  trị bệnh NẤM Các chất  có hoạt tính  sinh học cao Thực phẩm giàu  dinh dưỡng Vitamin, khống  chất 1.3. Hệ thống sắc kí lỏng hiệu năng cao ­ HPLC Chú thích:  1.  Bình  chứa  dung  mơi pha động 2. Bộ phận khử khí 3. Bơm cao áp 4. Bộ phận tiêm mẫu  5. Cột sắc ký  6. Đầu dò   7. Hệ thống máy tính  8. Máy in     1.2. Axit amin H R N C H H H O C H O N _ R + C O C H H O H Bảng 1.1: Cấu trúc của 17 axit amin tiêu chuẩn   L­Alanin    L­Arginin      L­Histidin  L­Methionin    L­Leucin    L­Lysin    Axit L­Aspartic  L­Cystin      Axit L­Glutamic  L­isoleucin      L­Phenylalanin    L­Prolin      L­Serin        L­Thrionin  L­Tyrosin    L­Valin    L­Glycin  Chương 2. PHƯƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM   2.1. Thu thập mẫu  nấm Các mẫu  Nấm Thượng hoàng, nấm PL1, nấm PL2, nấm PL3,  nấm PL4  được thu thập từ các rừng Quốc Gia Pù Mát và rừng Phong  Nha Kẻ Bàng vào 8­2013. Sau khi đưa về phòng thí nghiệm được làm  khơ và bảo quản ở nhiệt độ phòng   Hình 2.1: Mẫu nấm PL1   Hình 2.2: mẫu nấm PL2 Hình 2.3: mẫu nấm PL3      Hình 2.4: Mẫu nấm PL4                         Hình 2.5: Mẫu nấm Thượng hồng       2.6: Mẫu nấm Linh Chi 2.2 Quy trình phân tích Bảng 3.5: Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp   TT  Axit amin  LOD (pmol)  LOQ (pmol)  1  Asp  0,0019  0,0063  2  Glu  0,0027  0,0090  3  Ser  0,0021  0,0070  4  His  0,0060  0,0200  5  Gly  0,0037  0,0125  6  Thr  0,0025  0,0084  7  Ala  0,0006  0,0020  8  Try  0,0046  0,0153  9  Cys­ss­cys  0,0029  0,0097  10  Val  0,0036  0,0120  11  Met  0,0010  0,0033  12  Phe  0,0022  0,0073  13  Ile  0,0013  0,0043  14  Leu  0,0014  0,0047  15  Lys  0,0015  0,005  16  Pro  0,0029  0,0097    3.5. Độ thu hồi của phương pháp        Dựa vào việc thêm chuẩn vào mẫu thực cùng với làm mẫu thực  khơng thêm chuẩn song song chúng tơi tiến hành tính độ thu hồi như sau :       Hiệu suất thu hồi H% Cs m C so Cm 100       Tiến hành thí nghiệm trên nấm Thượng hồng, nấm Thượng hồng  thêm chuẩn 25pmol, thực hiện phân tích 5 lần lặp lại và lấy kết quả  trung bình. Các kết quả được chỉ ra ở bảng 3.6 Bảng 3.6: Hiệu suất thu hồi của axit amin trong nấm Thượng Hồng Cso+mẫu  Axit amin  g / ml       Cmẫu   ( g / ml )    Cso   ( g / ml )  H (%)  Asp  20,4077  16,1328  3,2028  133,47  Glu  KPH  KPH  3,5528  KPH  Ser  6,4624  3,9026  2,5776  99,31  His  16,1418  12,5187  3,8410  94,32  Gly  4,2489  2,6338  1,8349  88,02  Thr  KPH  0,2749  2,9451  KPH  Ala  7,8525  5,5600  2,2060  103,92  Arg  ­  ­  ­  ­  Tyr  4,9700  0,6301  4,5359  95,68  Cys – ss –  Cys  8,3112  5,4216  3,0462  94,86  Val  9,0238  6,2981  2,9727  94,88  Met  4,4149  1,0545  3,7433  89,77  Phe  13,4033  8,8533  4,1191  110,46  Ile  3,4496  0,4465  3,2420  92,63  Leu  7,9043  5,0144  3,2500  88,92  Lys  7,0297  3,4539  3,6675  97,50  Pro  8,4506  5,6383  2,9027  96,88    Hình 3.10: Sắc đồ tách axit amin trong dịch thủy phân mẫu nấm Thượng hồng    Hình 3.11: Sắc đồ tách axit amin trong dịch thủy phân nấm Thượng hồng thêm  Bảng 3.7: Hàm lượng axit amin trong nấm Thượng hồng TT  Axit amin  Diện tích  Thr  Hàm lượng  ( g / g )  23,0217  134,44516  3.6. Xác đị1  nh hàm lượng các axit amin trong các m ẫu n527,4791  ấm 4615,22412    2  Val  3  Met  773,26526  88,3166  4  Ile  506.93848  37,3953  5  Leu  3684,11597  419,9665  6  Phe  3645,38525  741,4824  7  Lys  834,16046  289,2747  8  His  3816,34302  1048,4690  Tổng axit amin thiết yếu  3175,4053  9  Asp  6654,29736  1351,1558  10  Glu  KPH  KPH  11  Ser  3118,96802  326,8509  12  Gly  3090,88110  220,5863  13  Cys – ss – Cys  1194,14832  454,0703  14  Ala  8312,14355  469,0075  15  Arg  ­  ­  16  Tyr  344,86682  52,7696  17  Pro  4175,47900  472,2161  Tổng axit amin không thiết yếu  3346,6565  Tổng  6522,0618  EAA/TAA  48,68%  Bảng 3.8: Hàm lượng (μg/g) axit amin trong các mẫu nấm    TT  1  2  3  4  5  6  7  8  Axit  amin  Thr  119  Val  117  Met  149  Ile  131  Leu  131  Phe  165  Lys  146  His  155  Nấm  Nấm  Nấm  Nấm  Nấm  Linh  PL1  PL2  PL4  PL3  Linh Chi  Chi Đen  0.5313  0.7976  0.9042  0.9842  0.5479  0.5019  KPH  7.32  7.62  KPH  27,96  69.56  2039.50  KPH  1195.31  1197.4  1498,76  2717.84  149.43  51.90  15.11  9.36  321,18  148.73  729.08  108.66  219.41  251.45  396,45  1294.49  1785.60  537.61  1052.79  1062.11  952,02  2271.51  3175.21  747.98  1624.62  1737.25  2258.77  888.37  493.46  207.77  690.36  483.99  672.97  453.82  4348.93  1037.40  2488.49  2510,92  2421.66  4863.67  12721.1  2698,64  7365.71  7252.48  8549.77  12707.9  Tổng axit  amin thiết  yếu  Bảng 3.9: Hàm lượng (μg/g) axit amin trong các mẫu nấm    Asp  9  3876.80  882.97  1812.52  1797.90  1558.60  4190.67  KPH  KPH  KPH  KPH  KPH  KPH  1286.11  0  771.86  762.50  277.79  1008.87  1052.69  KPH  560.67  609.05  313.02  1033.28  3082.47  1980.87  1410.38  1955.63  1018.8  3804.60  1192.51  270.37  723.62  685.38  935.96  491.86  _  _  _  _  _  _  266.17  83.64  102.65  108.27  130.41  459.84  1511.82  556.47  825.85  973.07  1251.27  2638.57  12268.7  3774.32  6207.55  6891.8  5485.85  13627.9  Tổng  24989.8  6472.96  13573.26  14144.8  14035.62  26335.8  EAA/TAA  50.91%  41.69%  54.27 %  51.28%  60.91  48.25  133  10  11  12  Glu  147  Ser  105  Gly  75  Cys –  13  ss –  Cys  121  14  15  16  17  Ala  89  Arg  174  Tyr  181  Pro  115  Tổng axit  amin khơng  thiết yếu    Bảng 3.10: Hàm lượng (μg/g) axit amin trong các mẫu nấm theo  phương pháp xử lí mẫu khác nhau Nấ m PL3 Nấm  Nấm PL1 TT Nấm PL1 Nấm PL1 Axit amin   PL2 HL­ ĐK HL­ CK HL­ T Thượng Hoà ng  Nấ m PL2 HL­ HL­ T CK   HL­ T  HL­ T   Nấ m PL4 HL­ CK   Thr 114,34 KPH 24,04 KPH 0 0 Val  1647,34 2019,58 2582,3 1997,9 2401,8 Met  300,80 217,27 107,05 369,65 418,02 128,03 106,10 234,19 Ile  160,42 198,67 232,34 286,23 KPH Leu 1219,18 1433,88 464,26 2318,08 3120,5 462,75 2544,2 1251,18 Phe  135,11 1555,73 481,56 2389,19 2987,1 498,79 2543,5 1233,3 Lys  667,68 627,64 201,09 861,04 1091,0 319,69 751,48 1011,4 His  1817,90 1688,69 783,28 2587,22 3407,9 1246,9 2770,8 2055,3 4415,43 7369,22 2061,28 10777,1 13893,1 2656,16 10713,9 8187,2 Tổng axit amin thiết  yếu Asp 1386,88 1203,08 296,17 2285,56 2818,5 749,18 2860,2 1202,9 10 Glu KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 11 Ser KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 12 Gly  KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 4951,88 3601,55 2701,1 4531,36 5943,4 3059,7 1439,6 5905,8 13 Cys – ss –  Cys 14 Ala  KPH KPH 0 0 15 Arg _ _ _ _ _ _ _ _ 16 Tyr 614,84 608,27 294,29 364,36 921,29 279,65 272,96 1033,8 17 Pro 4988,89 3460,9 1536,1 5020,9 4633,5 3519,9 3852,8 5634,6 11942,49 8873,8 4827,66 12202,18 14316,7 7608,43 8425,56 13777,1 Tổng 16357,92 16243,02 8888,94 22979,28 28209,8 10264,6 19139,4 21964,3 EAA/TAA 26,99% 45,37% 29,92% 46,90% 49,25% 25,88% 55,98% 37,28% Tổng axit amin khơng  thiết yếu   Hình 3.12: Sắc đồ tách axit amin trong dịch thủy phân mẫu nấm PL1   Hình 3.13: Sắc đồ tách axit amin trong dịch thủy phân mẫu nấm PL2 Hình 3.14: Sắc đồ tách axit amin trong dịch thủy phân mẫu nấm PL3     Hình 3.15: Sắc đồ tách axit amin trong dịch thủy phân mẫu nấm PL4   Hình 3.16: Sắc đồ tách axit amin trong dịch thủy phân mẫu nấm Linh chi KẾT LUẬN   1. Khảo sát tối  ưu hóa một số điều kiện trong quy trình thủy phân xử lý  mẫu xác định hàm lượng axit amin trong nấm:       + Thời gian thủy phân mẫu tối ưu là 24h       + Nồng độ HCl thủy phân tối ưu là 6M 2. Đã xây dựng được phương trình đường chuẩn  của các axit amin và xác  định được khoảng nồng độ nghiên cứu nằm trong khoảng tuyến tính 3. Xác định  được giới hạn phát hiện LOD và giới hạn  định lượng LOQ  của phương pháp là rất nhỏ: LOD từ 0,0006 ­ 0,006 pmol, LOQ từ 0,002 ­  0,0153pmol 4. Quy trình phân tích đưa ra đã được đánh giá bằng đường chuẩn, độ thu  hồi. Độ thu hồi với các loại axit amin nằm trong khoảng 85,6 – 1 33,8%  trong vùng đường chuẩn tuyến tính KẾT LUẬN   5. Xác định được hàm lượng axit amin thủy phân trong 7 mẫu nấm tự nhiên, cụ  thể: Hàm lượng axit amin thủy  TT    Mẫu nấm  phân(μg/g)  1.   Nấm PL1  24989.8  2.  Nấm PL2  6472.96  3.  Nấm PL3  13573.26  4.  Nấm PL4  14144.8  5.   Nấm Thượng hoàng  6522.06  6.   Nấm Linh chi  7.  Nấm Linh chi đen  14035.62  26335.8  Từ các kết quả thu được chúng tơi thấy phương pháp phân tích hàm  lượng axit amin trong các mẫu nấm với độ tin cậy cao và đề nghị được áp dụng  phương pháp phân tích axit amin này cho nhiều đối tượng thực phẩm khác nhau ... đề tài :  Nghiên cứu xác định hàm lượng các axit amin trong một số lồi nấm lớn ở vùng Bắc Trung Bộ bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC” 2. Mục đích nghiên cứu       Xây dựng phương pháp tách và định lượng đồng thời các axit amin ... Xây dựng phương pháp tách và định lượng đồng thời các axit amin trong các loại nấm khác  nhau,  cung  cấp  số liệu  về  thành  phần  dinh  dưỡng  (axit amin) trong một số loại nấm được nghiên cứu 3. Đối tượng nghiên cứu         Nghiên cứu xác ... 6955,32373  Hình 3.3: Sắc đồ hỗn hợp chuẩn các axit amin ở nồng độ 10pmol Hình 3.4: Sắc đồ hỗn hợp chuẩn các axit amin ở nồng độ 25pmol Hình 3.5: Sắc đồ chạy hỗn hợp chuẩn các axit amin ở nồng độ 100pmol

Ngày đăng: 15/01/2020, 08:07

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w