Rối loạn lipid máu là nguyên nhân chính gây xơ vữa động mạch và tăng tỷ lệ tử vong do bệnh lý tim mạch. Do đó điều trị rối loạn lipid máu trở thành mối quan tâm hàng đầu. Lá Sen (LS) và Hà thủ ô đỏ (HTO) là những dược liệu có sẵn trong nước và đã được kết hợp sử dụng trên lâm sàng điều trị rối loạn lipid máu.
Trang 1ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID MÁU
CỦA CAO LÁ SEN– HÀ THỦ Ô ĐỎ (FOLIUM NELUMBINIS –
RADIXPOLYGONI MULTIFLORI) TRÊN THỰC NGHIỆM
Huỳnh Thị Mỹ Hiền*, Lê Thị Lan Phương*, Nguyễn Thị Sơn*, Nguyễn Phương Dung*
TÓM TẮT
Mở đầu: Rối loạn lipid máu là nguyên nhân chính gây xơ vữa động mạch và tăng tỷ lệ tử vong do bệnh lý
tim mạch Do đó điều trị rối loạn lipid máu trở thành mối quan tâm hàng đầu Lá Sen (LS) và Hà thủ ô đỏ (HTO)
là những dược liệu có sẵn trong nước và đã được kết hợp sử dụng trên lâm sàng điều trị rối loạn lipid máu Tuy nhiên chưa có nghiên cứu chứng minh hiệu quả điều trị rối loạn lipid máu của việc kết hợp lá Sen và Hà thủ ô đỏ
Đề tài này được thực hiện nhằm mục đích cung cấp các bằng chứng khoa học cho việc ứng dụng kết hợp lá Sen và
Hà thủ ô đỏ trong điều trị rối loạn lipid máu
Mục tiêu: Khảo sát độc tính cấp của cao kết hợp lá Sen - Hà thủ ô đỏ (LS – HTO) tỷ lệ 2-1 Đánh giá tác
dụng điều trị rối loạn lipid máu của cao kết hợp lá Sen – Hà thủ ô đỏ trên thực nghiệm
Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Chuột nhắt trắng, chủng Swiss albino, trọng lượng 20 ± 2 g, mua
tại Viện Pasteur TP HCM Nghiên cứu thực nghiệm có nhóm chứng trên mô hình rối loạn lipid máu ngoại sinh (bằng uống cholesterol 25 mg/kg)
Kết quả: Dmax của cao lá Sen – Hà thủ ô đỏ là 8,99 g cao/kg chuột Trên mô hình rối loạn lipid máu ngoại
sinh, cao LS-HTO tỷ lệ 2-1 liều LS 0,8 g dược liệu/kg – HTO 0,4 g dược liệu/kg giảm cholesterol toàn phần 40,5%, triglyceride 45,88%, LDL-C 43,16% Cao LS-HTO liều LS 0,4 g dược liệu/kg – HTO 0,2 g dược liệu/kg làm giảm triglycerid 28,51%
Kết luận: D max cao LS – HTO là 8,99 g cao/kg (tương đương 270,39 g dược liệu khô/người 60 kg).Cao lá Sen – Hà thủ ô đỏ có tác dụng điều trị rối loạn lipid máu trên thực nghiệm
Từ khóa: Lá sen, Hà thủ ô đỏ, điều trị rối loạn lipid máu.
ABSTRACT
EVALUATE DYSLIPIDEMIA TREATMENT EFFECTIVENESS OF THE EXTRACT COMBINED FROM
FOLIUM NELUMBINIS – RADIX POLYGONI MULTIFLORI IN MICE
Huynh Thi My Hien, Le Thi Lan Phuong, Nguyen Thi Son, Nguyen Phuong Dung
* Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 20 - No 6 - 2016: 181 - 185
Background: Dyslipidemia is a major cause of atherosclerosis and increasing mortality due to cardiovascular
disease Prevention and treatment of dyslipidemia has become an essential concern Folium Nelumbinis (lotus leaf) and Radix Polygoni Multiflori havebeen available domestic herb They have been combined in dyslipidemia treatment However, no study has demonstrated dyslipidemia prevention effect of Folium Nelumbinis and Polygonum Multiflorum combination This research is conducted to provide scientific evidences for this combination in treatment dyslipidemia.
Aims of study: Survey the acute toxicity of aqueous extract combined from Folium nelumbinis – Radix
Polygoni multiflori (2-1 ratio) Evaluate dyslipidemia treatment effectiveness of Folium Nelumbinis – Radix
Khoa Y Học Cổ Truyền – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh
Trang 2Polygoni Multiflori extract in hyperlipidemic mice
Methods: Male and female Swiss albino mice, weighing 20 ± 2 g, were purchased at the Pasteur Institute in
HCM City Experimental study was conducted with control group on exogenous dyslipidemia model by oral administration of cholesterol at a dose of 25 mg/kg for 8 weeks
Results: D max of Folium Nelumbinis - Radix Polygoni Multiflori extract is 11.818 g/kg On the model of exogenous dyslipidemia, Folium Nelumbinis - Radix Polygoni Multiflori combination (Folium Nelumbinis 0.8 g/kg - Radix Polygoni Multiflori 0.4 g/kg) reduced 40.5% total cholesterol, 45.88% triglyceride, and 43.16% LDL-C The combination of Folium Nelumbinis 0.4 g/kg - Radix Polygoni Multiflori 0.2 g/kg decreased 28.51% triglyceride
Conclusion: D max of Folium Nelumbinis - Radix Polygoni Multiflori extract is 11.818 g/kg (equal to 270,39
g herb/60 kg person) Folium Nelumbinis - Radix Polygoni Multiflori extract has hypolipidemic effect on cholesterol-induced exogenous hyperlipidemia in mice
Key words: Folium Nelumbinis, Radix Polygoni Multiflori, dyslipidemia treatment effectiveness
ĐẶT VẤN ĐỀ
Rối loạn lipid máu là yếu tố thuận lợi gây
nhiều bệnh lý tim mạch do xơ vữa động
mạch (XVĐM) Theo thống kê, tỷ lệ tử vong ở
bệnh nhân XVĐM là 45%, trong đó bệnh
mạch vành chiếm 32% và tai biến mạch máu
não chiếm 18%(5) Do đó, điều trị rối loạn
lipid máu trở thành một trong những mối
quan tâm hàng đầu trong chăm sóc sức khỏe
của nhiều quốc gia
Nhiều bài thuốc và vị thuốc từ thiên nhiên
đã được chứng minh là có tác dụng điều hòa
lipid máu như Ngưu tất, Qua lâu, Hà thủ ô đỏ,
Bán hạ, lá Se(2, Error! Reference source not found.) Trong
thực tế lâm sàng, nhiều thầy thuốc đã kết hợp
lá Sen và Hà thủ ô đỏ trong điều trị rối loạn
lipid máu, tuy nhiên chưa có nghiên cứu
chứng minh hiệu quả điều trị rối loạn lipid
máu của việc kết hợp 2 dược liệu trên Đề tài
này được thực hiện nhằm tìm hiểu tác dụng
điều trị rối loạn lipid máu khi phối hợp lá Sen
và Hà thủ ô đỏ trên mô hình thực nghiệm
Mục tiêu của nghiên cứu là khảo sát độc tính
cấp của cao kết hợp lá Sen – Hà thủ ô đỏ tỷ lệ
2–1 và đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid
máu trên chuột nhắt trắng của cao lá Sen – Hà
thủ ô đỏ trên mô hình chuột nhắt trắng rối
loạn lipid máu ngoại sinh (uống cholesterol)
ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu nghiên cứu
Cao lá Sen (LS), cao Hà thủ ô đỏ (HTO) được bào chế bằng cách sắc 2 lần với nước, lọc dịch chiết đem cô để được cao Cao LS có hiệu suất chiết 16,34%, độ ẩm 12,94%, độ tro 5,31% Cao HTO có hiệu suất chiết 16,99%, độ ẩm 15,54%, độ tro 4,15% Định tính bằng sắc ký lớp mỏng cao
LS, cao HTO cho các vết có màu sắc và Rf tương
tự với mẫu đối chiếu LS, HTO
Phương tiện
Hóa chất: Cholesterol, acid cholic (Sigma) Thuốc đối chiếu: Atorvastatin 10mg (Stada – Việt Nam)
Động vật nghiên cứu
Chuột nhắt trắng Swiss albino, khỏe mạnh, đồng đều về giới tính, 6-8 tuần tuổi, trọng lượng
20 ± 2 g, cung cấp bởi Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh Trong suốt quá trình thử nghiệm, chuột được nuôi trong dinh dưỡng ổn định
Phương pháp nghiên cứu
Khảo sát độc tính cấp của cao lá Sen - Hà thủ
ô đỏ(1,3) Cho chuột nhịn ăn 12 giờ trước khi thử nghiệm, uống nước tự do Đưa thuốc đường uống bằng kim đầu tù một lần duy nhất với thể tích 0,2 ml cao/10 g thể trọng
Trang 3Giai đoạn thăm dò (4 chuột/lô): Khởi đầu từ
liều cao nhất có thể bơm được qua kim cho
uống Xác định LD0 (liều tối đa không gây chết)
và LD100 (liều tối thiểu gây chết 100%)
Giai đoạn xác định (20 chuột /lô): Chuột
được chia lô, mỗi lô được cho uống thuốc thử
nghiệm một liều suy nhất trong khoảng LD0 và
LD100 chia theo cấp số nhân
Đánh giá kết quả:Theo dõi các biểu hiện về
hành vi và vận động của chuột trong vòng 72 giờ
sau khi dùng thuốc Ghi nhận số chuột chết
trong từng lô Xác định Dmax hoặc LD50 theo
phương pháp Karber-Behrens (nếu có) để làm cơ
sở tính liều cho các thử nghiệm dược lý
Đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu
của cao kết hợp lá Sen – Hà thủ ô đỏ trên mô
hình gây rối loạn lipid máu bằng cholesterol(1,4,7)
Chuột thử nghiệm sau khi nuôi ổn định 1 tuần
được chia làm 2 lô:
- Lô chứng (n=12): Uống nước cất
- Lô cholesterol (n=36): Uống cholesterol 25
mg/kg trong dầu thực vật
Dung dịch cholesterol trong dầu hoặc nước
cất được cho uống vào 8 – 9 giờ sáng mỗi ngày
với thể tích 0,1 ml/10 g trong 6 tuần Sau đó, 6
chuột thuộc lô chứng và 6 chuột thuộc lô
cholesterol được gây mê và lấy máu trực tiếp từ
tim chuột để định lượng cholesterol TP, TG,
HDL-C và LDL-C Số chuột còn lại được chia
thành 5 lô, mỗi lô 6 chuột:
- Lô chứng: Uống nước cất
- Lô bệnh: Uống cholesterol 25 mg/kg trong
dầu thực vật và nước cất
- Lô atorvastatin (lô đối chứng): Uống
cholesterol 25 mg/kg trong dầu thực vật và
atorvastatin 10 mg/kg
- Lô LS-HTO (1): Uống cholesterol 25 mg/kg
trong dầu thực vật và cao lá Sen – Hà thủ ô đỏ
với liều LS 0,8 g dược liệu/kg và HTO 0,4 g dược
liệu/kg
- Lô LS-HTO (2): Uống cholesterol 25 mg/kg
trong dầu thực vật và cao lá Sen – Hà thủ ô đỏ
với liều LS 0,4 g dược liệu/kg và HTO 0,2 g dược liệu/ kg
Dung dịch cholesterol trong dầu hoặc nước cất (đối với lô chứng) được cho uống vào 8 – 9 giờ sáng mỗi ngày, cao LS – HTO hoặc atorvastatin cho uống vào 3 -4 giờ chiều mỗi ngày với thể tích 0,1 ml/10 g trong 2 tuần
Sau 8 tuần thử nghiệm, tiến hành gây mê
và lấy máu trực tiếp từ tim chuột để định lượng cholesterol toàn phần, triglycerid,
HDL-C và LDL-HDL-C bằng phương pháp đo quang (thuốc thử định lượng lipid máu của công ty Maxmat – Pháp)
Phương pháp xử lý thống kê số liệu thực nghiệm
Các dữ liệu được trình bày dưới dạng Mean
± SEM Xử lý thống kê bằng phần mềm SPSS phiên bản 16.0 Phương pháp thống kê được sử dụng là phép kiểm Student cho 2 dãy số liệu độc lập So sánh sự khác nhau giữa các nhóm có tác dụng điều trị rối loạn lipid máu bằng phép kiểm ANOVA một chiều, một yếu tố Sự khác nhau được xem là có ý nghĩa khi giá trị p < 0,05
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Độc tính cấp
Trong 2 tuần quan sát, không ghi nhận được bất kỳ dấu hiệu bất thường nào trên chuột thử nghiệm Tất cả chuột đều ăn uống và hoạt động bình thường, không có chuột chết Do đó không tìm được LD50
Dmax của cao LS – HTO là là 8,99 g cao/kg, tương đương 270,39 g dược liệu khô/người 60kg, gấp 34 lần so với liều sử dụng trên người Điều này cho phép nhận định rằng kết hợp cao lá Sen và cao Hà thủ ô đỏ sử dụng trong thử nghiệm an toàn đối với động vật thử nghiệm, phù hợp với thực tế sử dụng kết hợp
lá Sen và Hà thủ ô đỏ chưa ghi nhận các tác dụng bất lợi trên bệnh nhân
Đề tài chưa có điều kiện khảo sát tác dụng phụ của cao lá Sen – Hà thủ ô đỏ khi sử dụng dài ngày Thời gian dùng thuốc điều trị rối loạn lipid
Trang 4máu thường kéo dài Vì thế, cần tiếp tục tiến
hành nghiên cứu độc tính bán trường diễn của
cao lá Sen – Hà thủ ô đỏ để làm cơ sở cho các
bước triển khai lâm sàng sau này
Đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu
của cao kết hợp lá Sen – Hà thủ ô trên mô hình
gây rối loạn lipid máu bằng cholesterol
So với lô chứng, chuột uống cholesterol 25
mg/kg trong dầu thực vật có nồng độ
cholesterol TP tăng gấp 1,5 lần (p < 0,05), TG
tăng gấp 1,36 lần (p < 0,05) và LDL-C tăng gấp
10,35 lần (p < 0,01) Riêng nồng độ HDL-C
không có sự khác biệt giữa 2 lô.Như vậy, sau 6
tuần uống cholesterol 25 mg/kg, đã tạo được tình trạng tăng cholesterol TP, TG, LDL-C trên chuột nhắt trắng có ý nghĩa thống kê
Bảng 1 Nồng độ lipid máu của chuột nhắt trắng sau
6 tuần gây bệnh bằng cholesterol (mg/dl)
Các thông số lipid
Lô cholesterol (n=6)
Cholesterol TP (mg/dl) 112,33 ± 16,56 170,43 ± 50,72
*
TG (mg/dl) 122,92 ± 17,09 166,65 ± 16,64 * LDL-C (mg/dl) 5,76 ± 2,48 59,64 ± 36,53 ** HDL-C (mg/dl) 81,99 ± 17,09 83,43 ± 16,91
Ghi chú: Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng (*: p < 0,05, **: p < 0,01)
Bảng 2 Nồng độ cholesterol toàn phần, triglycerid trong máu chuột nhắt sau 8 tuần gây mô hình rối loạn lipid
máu ngoại sinh bằng cholesterol
Bệnh Cholesterol (25 mg/kg) 265,58 ± 62,93 *** 133,99 ± 22,61 Atorvastatin Cholesterol (25 mg/kg)
Atorvastatin (10 mg/kg) 175,88 ± 106,13
**#
101,52 ± 51,20 **# LS-HTO (1) Cholesterol (25 mg/kg)
LS (0,8 g) – HTO (0,4 g) 155,37 ± 94,58
***#
72,52 ± 44,23 ***## LS-HTO (2) Cholesterol (25 mg/kg)
LS (0,4 g) – HTO (0,2 g) 238,04 ± 42,02
***
95,78 ± 9,15 **##
Ghi chú: Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng (*: p < 0,05, **: p < 0,01, ***: p < 0,001); Khác biệt có ý
nghĩa thống kê so với nhóm bệnh (#: p < 0,05, ##: p< 0,01)
Nhận xét: So với chứng, lô bệnh có nồng
độ cholesterol TP tăng 2,17 lần (p < 0,001)
Chứng tỏ mô hình rối loạn chuyển hóa
cholesterol ngoại sinh vẫn duy trì đến tuần
thứ 8 (sau khi đã ngưng uống cholesterol 2
tuần) trên chuột thử nghiệm.Ở lô atorvastatin,
nồng độ cholesterol TP giảm 33,77%;TG giảm
24,22% so với lô bệnh (p < 0,05), phù hợp với
hiệu quả điều hòa rối loạn lipid máu của statin
này(6) So với lô bệnh, chuột trong lô LS- HTO
(1) có nồng độ cholesterol TP giảm 41,5% (p < 0,05), TG giảm 45,88% (p < 0,01) Lô LS – HTO (2) có nồng độ TG giảm 28,51% (p < 0,01) Như vậy, kết hợp LS – HTO với liều LS 0,8g dược liệu/kg – HTO 0,4 g dược liệu/kg có tác dụng làm hạ cholesterol TP và TG; trong khi liều thấp hơn (LS 0,4g dược liệu/kg – HTO 0,2 g dược liệu/kg) chỉ làm hạ TG trên chuột nhắt trắng tăng cholesterol ngoại sinh
Bảng 3 Nồng độ HDL-C và LDL-C trong máu chuột nhắt sau 8 tuần gây mô hình rối loạn lipid máu ngoại sinh
bằng cholesterol
Bệnh Cholesterol (25 mg/kg) 75,90 ± 17,14 164,10 ± 61,48*** Atorvastatin Cholesterol (25 mg/kg)
Atorvastatin (10 mg/kg) 57,90 ± 31,65 102,11 ± 70,77
***#
LS-HTO (1) Cholesterol (25 mg/kg)
LS (0,8 g) – HTO (0,4 g) 48,56 ± 30,62 93,28 ± 56,98
***#
LS-HTO (2) Cholesterol (25 mg/kg)
LS (0,4 g) – HTO (0,2 g) 60,70 ± 10,17 158,15 ± 43,44
***
Trang 5Ghi chú: Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng (***: p < 0,001); Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm bệnh (#: p < 0,05)
Nhận xét: So với lô bệnh, nồng độ LDL-C
của lô LS – HTO (1) giảm 42,2%(p < 0,05),tương
tự lô uống atorvastatin Riêng nồng độ LDL-C
của lô LS – HTO (2) không có sự khác biệt thống
kê so với lô bệnh.Như vậy, cao LS –HTO có tác
dụng hạ LDL-C ở liều LS 0,8 g dược liệu/kg –
HTO 0,4 g dược liệu/kg
Kết quả bảng 2 và bảng 3 cho thấy cao phối
hợp LS-HTO ở liều LS 0,8 g/kg và HTO 0,4 g/kg
có tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu trên
chuột nhắt tăng lipid máu ngoại sinh sau 2 tuần
điều trị, tác dụng này tương đương atorvastatin
10 mg/kg
Dựa trên cơ sở lý luận của Y học cổ truyền, lá
Sen và Hà thủ ô đỏ có tiềm năng điều trị các
bệnh lý liên quan đến rối loạn chức năng tạng
Tỳ, Tỳ mất kiện vận sinh thấp, uất kết thành
đàm do nguyên nhân ẩm thực thuộc nhóm bất
nội ngoại nhân Kết hợp 2 dược liệu này có thể
giảm sinh đàm, giảm tình trạng đàm thấp tắc trở
trong cơ thể, đây là một trong những nguyên
nhân hình thành bệnh lý đàm thấp theo
YHCT.Để kiểm chứng giả định này, cần có
những nghiên cứu đánh giá hiệu quả của chế
phẩm phối hợp lá Sen – Hà thủ ô đỏ trên bệnh
nhân rối loạn lipid máu thể Tỳ hư đàm thấp,
đàm thấp tắc trở kinh lạc do ăn uống nhiều chất
béo ngọt
KẾT LUẬN
Nghiên cứu này đã xác định được liều Dmax
của cao LS – HTO là là 8,99 g cao/kg, tương
đương liều 270,39 g dược liệu khô/người 60kg,
gấp 34 lần so với liều sử dụng trên người
Trên chuột nhắt trắngtăng lipid máu ngoại sinh do cholesterol (uống 25 mg/kg), kết hợp cao
lá Sen với cao Hà thủ ô đỏ tỷ lệ 2-1 với (cao lá Sen 0,8 g/kg, cao Hà thủ ô đỏ 0,4 g/kg)có tác dụng làm giảm nồng độ cholesterol toàn phần,
TG và LDL-C, tương đương với nhóm uống atorvastatin 10 mg/kg Khi sử dụng liều thấp hơn, cao lá Sen 0,4 g/kg và cao Hà thủ ô đỏ 0,2 g/kg, thì thuốc thử nghiệm chỉ thể hiện tác động giảm TG
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Bộ Y Tế - Viện Dược liệu (2006) Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý của thuốc từ dược thảo NXB Khoa học và kỹ thuật, tr.131-138, 355-386
2 Đỗ Tất Lợi (1999) Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam Nhà xuất bản Y Học, tr.48-59, 818-836
3 Đỗ Trung Đàm (1996) Phương pháp xác định độc tính cấp của thuốc Nhà xuất bản Y Học Hà Nội, tr.6-24, 50-57
4 Lê Thị Lan Phương, Nguyễn Phương Dung (2013) Đánh giá tác dụng điều hòa lipid máu của bột sấy phun từ đài hoa Bụt giấm (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) trên chuột nhắt Tạp chí Y Học TP Hồ Chí Minh, tập 17, số 1: tr.369-372
5 Phạm Khuê (2000) Xơ vữa động mạch, bệnh học tuổi già NXB Y Học, tr.8-87, 178-202
6 Tatyana K, Cherkanova M S, Tuzikov F V, Kalendin V (2011) Influence of atorvastatin on fractional and subfractional composition of serum lipoproteins and MMP activity in mice with Triton WR 1339-induced lipemia J Pharm Pharmacol, 63(6): 833-839
7 Vương Ngọc Châu, Nguyễn Phương Dung (2013) Nghiên cứu tác dụng dự phòng rối loạn lipid máu của cao Sơn Tra (Fructus Mali Doumeri) - Cốc nha (Fructus oryzae Sativae) trên chuột nhắt trắng Tạp chí Y Học TP Hồ Chí Minh, tập 19,
số 5: tr.105-110
8 Wu C-H, Yang M-Y, Chan K-C, Chung P-J, Ou T-T, Wang C-J (2010) Improvement in high-fat diet-induced obesity and body fat accumulation by a Nelumbo nucifera leaf flavonoid-rich extract in mice J Agric Food Chem, 58(11): 7075-7081
Ngày phản biện nhận xét bài báo: 20/09/2016