Rối loạn lipid máu là nguyên nhân chính gây xơ vữa động mạch và tăng tỷ lệ tử vong do bệnh lý tim mạch. Do đó điều trị rối loạn lipid máu trở thành mối quan tâm hàng đầu. Lá Sen (LS) và Hà thủ ô đỏ (HTO) là những dược liệu có sẵn trong nước và đã được kết hợp sử dụng trên lâm sàng điều trị rối loạn lipid máu.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID MÁU CỦA CAO LÁ SEN– HÀ THỦ Ô ĐỎ (FOLIUM NELUMBINIS – RADIXPOLYGONI MULTIFLORI) TRÊN THỰC NGHIỆM Huỳnh Thị Mỹ Hiền*, Lê Thị Lan Phương*, Nguyễn Thị Sơn*, Nguyễn Phương Dung* TÓM TẮT Mở đầu: Rối loạn lipid máu nguyên nhân gây xơ vữa động mạch tăng tỷ lệ tử vong bệnh lý tim mạch Do điều trị rối loạn lipid máu trở thành mối quan tâm hàng đầu Lá Sen (LS) Hà thủ ô đỏ (HTO) dược liệu có sẵn nước kết hợp sử dụng lâm sàng điều trị rối loạn lipid máu Tuy nhiên chưa có nghiên cứu chứng minh hiệu điều trị rối loạn lipid máu việc kết hợp Sen Hà thủ ô đỏ Đề tài thực nhằm mục đích cung cấp chứng khoa học cho việc ứng dụng kết hợp Sen Hà thủ ô đỏ điều trị rối loạn lipid máu Mục tiêu: Khảo sát độc tính cấp cao kết hợp Sen - Hà thủ ô đỏ (LS – HTO) tỷ lệ 2-1 Đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu cao kết hợp Sen – Hà thủ ô đỏ thực nghiệm Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Chuột nhắt trắng, chủng Swiss albino, trọng lượng 20 ± g, mua Viện Pasteur TP HCM Nghiên cứu thực nghiệm có nhóm chứng mơ hình rối loạn lipid máu ngoại sinh (bằng uống cholesterol 25 mg/kg) Kết quả: Dmax cao Sen – Hà thủ ô đỏ 8,99 g cao/kg chuột Trên mô hình rối loạn lipid máu ngoại sinh, cao LS-HTO tỷ lệ 2-1 liều LS 0,8 g dược liệu/kg – HTO 0,4 g dược liệu/kg giảm cholesterol toàn phần 40,5%, triglyceride 45,88%, LDL-C 43,16% Cao LS-HTO liều LS 0,4 g dược liệu/kg – HTO 0,2 g dược liệu/kg làm giảm triglycerid 28,51% Kết luận: Dmax cao LS – HTO 8,99 g cao/kg (tương đương 270,39 g dược liệu khô/người 60 kg).Cao Sen – Hà thủ đỏ có tác dụng điều trị rối loạn lipid máu thực nghiệm Từ khóa: Lá sen, Hà thủ đỏ, điều trị rối loạn lipid máu ABSTRACT EVALUATE DYSLIPIDEMIA TREATMENT EFFECTIVENESS OF THE EXTRACT COMBINED FROM FOLIUM NELUMBINIS – RADIX POLYGONI MULTIFLORI IN MICE Huynh Thi My Hien, Le Thi Lan Phuong, Nguyen Thi Son, Nguyen Phuong Dung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 20 - No - 2016: 181 - 185 Background: Dyslipidemia is a major cause of atherosclerosis and increasing mortality due to cardiovascular disease Prevention and treatment of dyslipidemia has become an essential concern Folium Nelumbinis (lotus leaf) and Radix Polygoni Multiflori havebeen available domestic herb They have been combined in dyslipidemia treatment However, no study has demonstrated dyslipidemia prevention effect of Folium Nelumbinis and Polygonum Multiflorum combination This research is conducted to provide scientific evidences for this combination in treatment dyslipidemia Aims of study: Survey the acute toxicity of aqueous extract combined from Folium nelumbinis – Radix Polygoni multiflori (2-1 ratio) Evaluate dyslipidemia treatment effectiveness of Folium Nelumbinis – Radix Khoa Y Học Cổ Truyền – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS BS Huỳnh Thị Mỹ Hiền ĐT: 01682089687 Email: hienhuynh1008@gmail.com 181 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Polygoni Multiflori extract in hyperlipidemic mice Methods: Male and female Swiss albino mice, weighing 20 ± g, were purchased at the Pasteur Institute in HCM City Experimental study was conducted with control group on exogenous dyslipidemia model by oral administration of cholesterol at a dose of 25 mg/kg for weeks Results: Dmax of Folium Nelumbinis - Radix Polygoni Multiflori extract is 11.818 g/kg On the model of exogenous dyslipidemia, Folium Nelumbinis - Radix Polygoni Multiflori combination (Folium Nelumbinis 0.8 g/kg - Radix Polygoni Multiflori 0.4 g/kg) reduced 40.5% total cholesterol, 45.88% triglyceride, and 43.16% LDL-C The combination of Folium Nelumbinis 0.4 g/kg - Radix Polygoni Multiflori 0.2 g/kg decreased 28.51% triglyceride Conclusion: Dmax of Folium Nelumbinis - Radix Polygoni Multiflori extract is 11.818 g/kg (equal to 270,39 g herb/60 kg person) Folium Nelumbinis - Radix Polygoni Multiflori extract has hypolipidemic effect on cholesterol-induced exogenous hyperlipidemia in mice Key words: Folium Nelumbinis, Radix Polygoni Multiflori, dyslipidemia treatment effectiveness ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Rối loạn lipid máu yếu tố thuận lợi gây nhiều bệnh lý tim mạch xơ vữa động mạch (XVĐM) Theo thống kê, tỷ lệ tử vong bệnh nhân XVĐM 45%, bệnh mạch vành chiếm 32% tai biến mạch máu não chiếm 18%(5) Do đó, điều trị rối loạn lipid máu trở thành mối quan tâm hàng đầu chăm sóc sức khỏe nhiều quốc gia Nguyên liệu nghiên cứu Nhiều thuốc vị thuốc từ thiên nhiên chứng minh có tác dụng điều hòa lipid máu Ngưu tất, Qua lâu, Hà thủ ô đỏ, Bán hạ, Se(2, Error! Reference source not found.) Trong thực tế lâm sàng, nhiều thầy thuốc kết hợp Sen Hà thủ ô đỏ điều trị rối loạn lipid máu, nhiên chưa có nghiên cứu chứng minh hiệu điều trị rối loạn lipid máu việc kết hợp dược liệu Đề tài thực nhằm tìm hiểu tác dụng điều trị rối loạn lipid máu phối hợp Sen Hà thủ đỏ mơ hình thực nghiệm Mục tiêu nghiên cứu khảo sát độc tính cấp cao kết hợp Sen – Hà thủ ô đỏ tỷ lệ 2–1 đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu chuột nhắt trắng cao Sen – Hà thủ ô đỏ mô hình chuột nhắt trắng rối loạn lipid máu ngoại sinh (uống cholesterol) 182 Cao Sen (LS), cao Hà thủ ô đỏ (HTO) bào chế cách sắc lần với nước, lọc dịch chiết đem cô để cao Cao LS có hiệu suất chiết 16,34%, độ ẩm 12,94%, độ tro 5,31% Cao HTO có hiệu suất chiết 16,99%, độ ẩm 15,54%, độ tro 4,15% Định tính sắc ký lớp mỏng cao LS, cao HTO cho vết có màu sắc Rf tương tự với mẫu đối chiếu LS, HTO Phương tiện Hóa chất: Cholesterol, acid cholic (Sigma) Thuốc đối chiếu: Atorvastatin 10mg (Stada – Việt Nam) Động vật nghiên cứu Chuột nhắt trắng Swiss albino, khỏe mạnh, đồng giới tính, 6-8 tuần tuổi, trọng lượng 20 ± g, cung cấp Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh Trong suốt q trình thử nghiệm, chuột nuôi dinh dưỡng ổn định Phương pháp nghiên cứu Khảo sát độc tính cấp cao Sen - Hà thủ ô đỏ(1,3) Cho chuột nhịn ăn 12 trước thử nghiệm, uống nước tự Đưa thuốc đường uống kim đầu tù lần với thể tích 0,2 ml cao/10 g thể trọng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Giai đoạn thăm dò (4 chuột/lơ): Khởi đầu từ liều cao bơm qua kim cho uống Xác định LD0 (liều tối đa không gây chết) LD100 (liều tối thiểu gây chết 100%) Giai đoạn xác định (20 chuột /lô): Chuột chia lô, lô cho uống thuốc thử nghiệm liều suy khoảng LD0 LD100 chia theo cấp số nhân Đánh giá kết quả:Theo dõi biểu hành vi vận động chuột vòng 72 sau dùng thuốc Ghi nhận số chuột chết lô Xác định Dmax LD50 theo phương pháp Karber-Behrens (nếu có) để làm sở tính liều cho thử nghiệm dược lý Đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu cao kết hợp Sen – Hà thủ ô đỏ mô hình gây rối loạn lipid máu cholesterol(1,4,7) Chuột thử nghiệm sau nuôi ổn định tuần chia làm lô: - Lô chứng (n=12): Uống nước cất - Lô cholesterol (n=36): Uống cholesterol 25 mg/kg dầu thực vật Dung dịch cholesterol dầu nước cất cho uống vào – sáng ngày với thể tích 0,1 ml/10 g tuần Sau đó, chuột thuộc lơ chứng chuột thuộc lô cholesterol gây mê lấy máu trực tiếp từ tim chuột để định lượng cholesterol TP, TG, HDL-C LDL-C Số chuột lại chia thành lô, lô chuột: - Lô chứng: Uống nước cất - Lô bệnh: Uống cholesterol 25 mg/kg dầu thực vật nước cất - Lô atorvastatin (lô đối chứng): Uống cholesterol 25 mg/kg dầu thực vật atorvastatin 10 mg/kg - Lô LS-HTO (1): Uống cholesterol 25 mg/kg dầu thực vật cao Sen – Hà thủ ô đỏ với liều LS 0,8 g dược liệu/kg HTO 0,4 g dược liệu/kg - Lô LS-HTO (2): Uống cholesterol 25 mg/kg dầu thực vật cao Sen – Hà thủ ô đỏ Nghiên cứu Y học với liều LS 0,4 g dược liệu/kg HTO 0,2 g dược liệu/ kg Dung dịch cholesterol dầu nước cất (đối với lô chứng) cho uống vào – sáng ngày, cao LS – HTO atorvastatin cho uống vào -4 chiều ngày với thể tích 0,1 ml/10 g tuần Sau tuần thử nghiệm, tiến hành gây mê lấy máu trực tiếp từ tim chuột để định lượng cholesterol toàn phần, triglycerid, HDLC LDL-C phương pháp đo quang (thuốc thử định lượng lipid máu công ty Maxmat – Pháp) Phương pháp xử lý thống kê số liệu thực nghiệm Các liệu trình bày dạng Mean ± SEM Xử lý thống kê phần mềm SPSS phiên 16.0 Phương pháp thống kê sử dụng phép kiểm Student cho dãy số liệu độc lập So sánh khác nhóm có tác dụng điều trị rối loạn lipid máu phép kiểm ANOVA chiều, yếu tố Sự khác xem có ý nghĩa giá trị p < 0,05 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Độc tính cấp Trong tuần quan sát, khơng ghi nhận dấu hiệu bất thường chuột thử nghiệm Tất chuột ăn uống hoạt động bình thường, khơng có chuột chết Do khơng tìm LD50 Dmax cao LS – HTO là 8,99 g cao/kg, tương đương 270,39 g dược liệu khô/người 60kg, gấp 34 lần so với liều sử dụng người Điều cho phép nhận định kết hợp cao Sen cao Hà thủ ô đỏ sử dụng thử nghiệm an toàn động vật thử nghiệm, phù hợp với thực tế sử dụng kết hợp Sen Hà thủ ô đỏ chưa ghi nhận tác dụng bất lợi bệnh nhân Đề tài chưa có điều kiện khảo sát tác dụng phụ cao Sen – Hà thủ ô đỏ sử dụng dài ngày Thời gian dùng thuốc điều trị rối loạn lipid 183 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 máu thường kéo dài Vì thế, cần tiếp tục tiến hành nghiên cứu độc tính bán trường diễn cao Sen – Hà thủ ô đỏ để làm sở cho bước triển khai lâm sàng sau Đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu cao kết hợp Sen – Hà thủ mơ hình gây rối loạn lipid máu cholesterol So với lô chứng, chuột uống cholesterol 25 mg/kg dầu thực vật có nồng độ cholesterol TP tăng gấp 1,5 lần (p < 0,05), TG tăng gấp 1,36 lần (p < 0,05) LDL-C tăng gấp 10,35 lần (p < 0,01) Riêng nồng độ HDL-C khác biệt lơ.Như vậy, sau tuần uống cholesterol 25 mg/kg, tạo tình trạng tăng cholesterol TP, TG, LDL-C chuột nhắt trắng có ý nghĩa thống kê Bảng Nồng độ lipid máu chuột nhắt trắng sau tuần gây bệnh cholesterol (mg/dl) Các thông số lipid Lô chứng (n=6) máu Cholesterol TP 112,33 ± 16,56 (mg/dl) TG (mg/dl) 122,92 ± 17,09 LDL-C (mg/dl) 5,76 ± 2,48 HDL-C (mg/dl) 81,99 ± 17,09 Lô cholesterol (n=6) 170,43 ± 50,72 * * 166,65 ± 16,64 ** 59,64 ± 36,53 83,43 ± 16,91 Ghi chú: Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng (*: p < 0,05, **: p < 0,01) Bảng Nồng độ cholesterol toàn phần, triglycerid máu chuột nhắt sau tuần gây mơ hình rối loạn lipid máu ngoại sinh cholesterol Lô (n = 6) Chứng Bệnh Atorvastatin LS-HTO (1) LS-HTO (2) Thuốc thử, Liều Nước cất Cholesterol (25 mg/kg) Cholesterol (25 mg/kg) Atorvastatin (10 mg/kg) Cholesterol (25 mg/kg) LS (0,8 g) – HTO (0,4 g) Cholesterol (25 mg/kg) LS (0,4 g) – HTO (0,2 g) Cholesterol TP (mg/dl) 122,14 ± 23,74 *** 265,58 ± 62,93 175,88 ± 106,13 **# TG (mg/dl) 132,98 ± 19,70 133,99 ± 22,61 101,52 ± 51,20 155,37 ± 94,58 ***# 72,52 ± 44,23 238,04 ± 42,02 *** 95,78 ± 9,15 **# ***## **## Ghi chú: Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng (*: p < 0,05, **: p < 0,01, ***: p < 0,001); Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm bệnh (#: p < 0,05, ##: p< 0,01) (1) có nồng độ cholesterol TP giảm 41,5% (p < Nhận xét: So với chứng, lơ bệnh có nồng 0,05), TG giảm 45,88% (p < 0,01) Lô LS – HTO độ cholesterol TP tăng 2,17 lần (p < 0,001) (2) có nồng độ TG giảm 28,51% (p < 0,01) Chứng tỏ mơ hình rối loạn chuyển hóa cholesterol ngoại sinh trì đến tuần thứ (sau ngưng uống cholesterol tuần) chuột thử nghiệm.Ở lô atorvastatin, nồng độ cholesterol TP giảm 33,77%;TG giảm 24,22% so với lô bệnh (p < 0,05), phù hợp với hiệu điều hòa rối loạn lipid máu statin này(6) So với lô bệnh, chuột lô LS- HTO Như vậy, kết hợp LS – HTO với liều LS 0,8g dược liệu/kg – HTO 0,4 g dược liệu/kg có tác dụng làm hạ cholesterol TP TG; liều thấp (LS 0,4g dược liệu/kg – HTO 0,2 g dược liệu/kg) làm hạ TG chuột nhắt trắng tăng cholesterol ngoại sinh Bảng Nồng độ HDL-C LDL-C máu chuột nhắt sau tuần gây mơ hình rối loạn lipid máu ngoại sinh cholesterol Lô (n = 6) Chứng Bệnh Atorvastatin LS-HTO (1) LS-HTO (2) 184 Thuốc thử, liều Nước cất Cholesterol (25 mg/kg) Cholesterol (25 mg/kg) Atorvastatin (10 mg/kg) Cholesterol (25 mg/kg) LS (0,8 g) – HTO (0,4 g) Cholesterol (25 mg/kg) LS (0,4 g) – HTO (0,2 g) HDL-C (mg/dl) 75,15 ± 20,48 75,90 ± 17,14 LDL-C (mg/dl) 19,36 ± 13,69 *** 164,10 ± 61,48 57,90 ± 31,65 102,11 ± 70,77 48,56 ± 30,62 93,28 ± 56,98 60,70 ± 10,17 158,15 ± 43,44 ***# ***# *** Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học Ghi chú: Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng (***: p < 0,001); Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm bệnh (#: p < 0,05) Nhận xét: So với lô bệnh, nồng độ LDL-C lô LS – HTO (1) giảm 42,2%(p < 0,05),tương tự lô uống atorvastatin Riêng nồng độ LDL-C lô LS – HTO (2) khơng có khác biệt thống kê so với lơ bệnh.Như vậy, cao LS –HTO có tác dụng hạ LDL-C liều LS 0,8 g dược liệu/kg – HTO 0,4 g dược liệu/kg Kết bảng bảng cho thấy cao phối hợp LS-HTO liều LS 0,8 g/kg HTO 0,4 g/kg có tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu chuột nhắt tăng lipid máu ngoại sinh sau tuần điều trị, tác dụng tương đương atorvastatin 10 mg/kg Dựa sở lý luận Y học cổ truyền, Sen Hà thủ đỏ có tiềm điều trị bệnh lý liên quan đến rối loạn chức tạng Tỳ, Tỳ kiện vận sinh thấp, uất kết thành đàm nguyên nhân ẩm thực thuộc nhóm bất nội ngoại nhân Kết hợp dược liệu giảm sinh đàm, giảm tình trạng đàm thấp tắc trở thể, nguyên nhân hình thành bệnh lý đàm thấp theo YHCT.Để kiểm chứng giả định này, cần có nghiên cứu đánh giá hiệu chế phẩm phối hợp Sen – Hà thủ ô đỏ bệnh nhân rối loạn lipid máu thể Tỳ hư đàm thấp, đàm thấp tắc trở kinh lạc ăn uống nhiều chất béo KẾT LUẬN Nghiên cứu xác định liều Dmax cao LS – HTO là 8,99 g cao/kg, tương đương liều 270,39 g dược liệu khô/người 60kg, gấp 34 lần so với liều sử dụng người Trên chuột nhắt trắngtăng lipid máu ngoại sinh cholesterol (uống 25 mg/kg), kết hợp cao Sen với cao Hà thủ ô đỏ tỷ lệ 2-1 với (cao Sen 0,8 g/kg, cao Hà thủ đỏ 0,4 g/kg)có tác dụng làm giảm nồng độ cholesterol toàn phần, TG LDL-C, tương đương với nhóm uống atorvastatin 10 mg/kg Khi sử dụng liều thấp hơn, cao Sen 0,4 g/kg cao Hà thủ đỏ 0,2 g/kg, thuốc thử nghiệm thể tác động giảm TG TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y Tế - Viện Dược liệu (2006) Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo NXB Khoa học kỹ thuật, tr.131-138, 355-386 Đỗ Tất Lợi (1999) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y Học, tr.48-59, 818-836 Đỗ Trung Đàm (1996) Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc Nhà xuất Y Học Hà Nội, tr.6-24, 50-57 Lê Thị Lan Phương, Nguyễn Phương Dung (2013) Đánh giá tác dụng điều hòa lipid máu bột sấy phun từ đài hoa Bụt giấm (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) chuột nhắt Tạp chí Y Học TP Hồ Chí Minh, tập 17, số 1: tr.369-372 Phạm Khuê (2000) Xơ vữa động mạch, bệnh học tuổi già NXB Y Học, tr.8-87, 178-202 Tatyana K, Cherkanova M S, Tuzikov F V, Kalendin V (2011) Influence of atorvastatin on fractional and subfractional composition of serum lipoproteins and MMP activity in mice with Triton WR 1339-induced lipemia J Pharm Pharmacol, 63(6): 833-839 Vương Ngọc Châu, Nguyễn Phương Dung (2013) Nghiên cứu tác dụng dự phòng rối loạn lipid máu cao Sơn Tra (Fructus Mali Doumeri) - Cốc nha (Fructus oryzae Sativae) chuột nhắt trắng Tạp chí Y Học TP Hồ Chí Minh, tập 19, số 5: tr.105-110 Wu C-H, Yang M-Y, Chan K-C, Chung P-J, Ou T-T, Wang C-J (2010) Improvement in high-fat diet-induced obesity and body fat accumulation by a Nelumbo nucifera leaf flavonoidrich extract in mice J Agric Food Chem, 58(11): 7075-7081 Ngày nhận báo: 30/08/2016 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/09/2016 Ngày báo đăng: 25/11/2016 185 ... độc tính cấp cao kết hợp Sen – Hà thủ ô đỏ tỷ lệ 2–1 đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu chuột nhắt trắng cao Sen – Hà thủ ô đỏ mơ hình chuột nhắt trắng rối loạn lipid máu ngoại sinh... tiến hành nghiên cứu độc tính bán trường diễn cao Sen – Hà thủ ô đỏ để làm sở cho bước triển khai lâm sàng sau Đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu cao kết hợp Sen – Hà thủ mơ hình gây rối. .. sử dụng người Điều cho phép nhận định kết hợp cao Sen cao Hà thủ ô đỏ sử dụng thử nghiệm an toàn động vật thử nghiệm, phù hợp với thực tế sử dụng kết hợp Sen Hà thủ ô đỏ chưa ghi nhận tác dụng