Helicobacter pylori (H. pylori) kháng kháng sinh là nguyên nhân chính gây thất bại trong việc điều trị diệt H. pylori. Nhiều nghiên cứu trên người lớn đã tìm thấy mối liên quan giữa kháng kháng sinh và yếu tố độc lực vi khuẩn (gen cagA và VacA). Tuy nhiên, vấn đề này chưa có bằng chứng khoa học đối với bệnh nhân nhi nhiễm chủng H. pylori kháng kháng sinh. Nghiên cứu này nhằm tìm hiểu mối liên quan giữa sự kháng kháng sinh và gen cagA và vacA trên bệnh nhi nhiễm chủng H. pylori kháng kháng sinh. Nghiên cứu được thực hiện từ tháng 1/2012 đến tháng 9/2013, tại Bệnh viện Nhi Trung ương trên 150 bệnh nhi được chẩn đoán nhiễm chủng H. pylori kháng kháng sinh. Các bệnh nhi được xác định kiểu gen cagA, vacA bằng kỹ thuật PCR đa mồi. Kết quả cho thấy 34% chủng H. pylori có gen cagA dương tính. Tỉ lệ vacAs1, vacAs2, vacAm1, vacAm2, vacAs1/m1, vacAs1/m2 và vacAs2/m2 lần lượt là 39,3%, 14,7%, 37,3%, 23,3%, 16,7%, 11,3% và 6,6%. Chủng H. pylori độc lực cao mang cả 3 gen, cagA, vacAm1 và vacAs1 được tìm thấy ở 8% bệnh nhi. Tỉ lệ chủng vi khuẩn mang gen cagA và vacA không có sự khác biệt giữa nhóm kháng amoxicillin, clarithromycin, và metronidazole. Do vậy, việc lựa chọn phác đồ điều trị khác nhau cho bệnh nhi nhiễm chủng H. pylori kháng kháng sinh có cagA, vacA dương tính là không cần thiết.
TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC NGHIÊN CỨU GEN cagA VÀ vacA TRÊN CÁC CHỦNG HELICOBACTER PYLORI KHÁNG KHÁNG SINH PHÂN LẬP TỪ BỆNH NHI TẠI VIỆT NAM Nguyễn Thị Út1, Phạm Diệu Quỳnh2,3, Lê Thanh Hải1, Hoàng Thị Thu Hà Bệnh viện Nhi Trung ương; 2Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương; 3Trường ðại học Khoa học Tự nhiên Helicob acter pylori (H pylori) kháng kháng sinh ngun nhân gây thất bại việc điều trị diệt H pylori Nhiều nghiên cứu người lớn ñã tìm thấy mối liên quan kháng kháng sinh yếu tố ñộc lực vi khuẩn (gen cagA VacA) Tuy nhiên, vấn đề chưa có chứng khoa học ñối với bệnh nhân nhi nhiễm chủng H pylori kháng kháng sinh Nghiên cứu nhằm tìm hiểu mối liên quan kháng kháng sinh gen cagA vacA bệnh nhi nhiễm chủng H pylori kháng kháng sinh Nghiên cứu ñược thực từ tháng 1/2012 ñến tháng 9/2013, Bệnh viện Nhi Trung ương 150 b ệnh nhi chẩn đốn nhiễm chủng H pylori kháng kháng sinh Các b ệnh nhi ñược xác ñịnh kiểu gen cagA, vacA b ằng kỹ thuật PCR ña mồi Kết cho thấy 34% chủng H pylori có gen cagA dương tính Tỉ lệ vacAs1, vacAs2, vacAm1, vacAm2, vacAs1/m1, vacAs1/m2 vacAs2/m2 39,3%, 14,7%, 37,3%, 23,3%, 16,7%, 11,3% 6,6% Chủng H pylori ñộc lực cao mang gen, cagA, vacAm1 vacAs1 tìm thấy 8% bệnh nhi Tỉ lệ chủng vi khuẩn mang gen cagA vacA khơng có khác b iệt nhóm kháng amoxicillin, clarithromycin, metronidazole Do vậy, việc lựa chọn phác ñồ ñiều trị khác cho b ệnh nhi nhiễm chủng H pylori kháng kháng sinh có cagA, vacA dương tính khơng cần thiết Từ khóa: Helicobacter pylori, kháng kháng sinh, gen cagA, vagA, trẻ em I ðẶT VẤN ðỀ nhiễm chủng có gen cagA thường đáp ứng H pylori nguy ên nhân gây viêm viêm nặng có lượng cao cyto- loét dày tá tràng, viêm teo tuyến dày, u kine tiền viêm Vì thế, ñáp ứng viêm lympho dày (MALT, mucosa - associated niêm mạc dày gây bệnh loét lymphoide tissue) ung thư dày Ở trẻ em, tỉ lệ nhiễm H pylori chiếm 70% bệnh dày, tổn thương tiền ung thư ung thư người trưởng thành Khoảng 60% chủng H nhân viêm dày, 90% loét hành tá tràng [ 1] pylori phân lập nước phương Tây có ðộc lực vi khuẩn H pylori biểu yếu tố mang gen cagA, hầu hết chủng ñộc mà tạo thành nguy ñối với kết ñiều khu vực ðơng Á dương tính với gen trị lâm sàng ðộc tố cagA, protein mã hóa Gen cagA (cytotoxin-associated gene) gen gen A có liên quan ñến cytotoxin (cagA) ñược vacA (vacuolating toxin gene) ñược coi quan tâm Ảnh hưởng tế bào gen có liên quan tới yếu tố độc lực chủ protein cagA làm rõ bệnh nhân yếu gây bệnh ñặc trưng vi khuẩn H pylori Sự kết hợp gen cagA týp gen vacA liên quan đến nguy với ðịa liên hệ: Nguyễn Thị Út, Bệnh viện Nhi Trung ương, 18/879 La Thành, ðống ða, Hà Nội Email: nguyenvuthuyduong2003@yahoo.com Ngày nhận: 01/7/2015 Ngày ñược chấp thuận: 9/9/2015 2015 TCNCYH 96 (4) - 2015 mức ñộ biểu lâm sàng khác Protein cagA, có kích thước phân tử từ 128 đến 140 k Da, có khả kích t hích phản ứng phosphoryl hóa tyrosin tế bào ký 41 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC chủ dẫn ñến tăng sinh bất thường tế liên quan kháng kháng sinh bào biểu mơ dày Gen vacA có chứa gen cagA vacA chủng H pylori vùng biến đổi gồm vùng tín hiệu vùng bệnh nhi nhiễm H pylori, bệnh viện Vùng (middle) gen vacA có Nhi Trung ương từ tháng 1/2012 - 9/2013 typ gen m1/m2 vùng tín hiệu (signal) có týp gen s1/s2 Mức ñộ ñộc tố cao II ðỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP hay thấp gen vacA phụ thuộc vào typ gen hai vùng Chủng H pylori với typ gen vacA s1/m1 có độc tố tế bào mạnh ðịa ñiểm thời gian Nghiên cứu tiến hành phòng typ gen vacA s1/m2, chủng khám Tiêu hóa, phòng nội soi dày, Khoa H pylori với typ gen vacA s2/m2 khơng gây Tiêu hóa, Bệnh viện Nhi Trung ương Khoa ñộc tố [2; 3] Vi khuẩn, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ươ ng từ Sự kháng thuốc H pylori ngày gia tăng, nghiên cứu Nguyễn Thị Việt Hà (2006) trẻ em viêm loét dày tá tràng bệnh viện Nhi Trung ương cho thấy tỉ lệ kháng thuốc H pylori với clarithromycin, metronidazole amoxicillin tương ứng 50,9%, 65,3% 0,5% dẫn ñến hiệu tháng 1/2012 ñến tháng 9/2013 Phương phá p: sử dụng phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang ðối tượng Bệnh nhi ñược chọn lựa vào nghiên cứu ñáp ứng tiêu chuẩn sau: phác ñồ ñiều trị diệt H pylori thấp, - Tuổi từ - 14 tuổi có triệu chứng lâm 80% [4] Mặt khác, kết từ số sàng bệnh lý dày tá tràng bao gồm: nghiên cứu tỉ lệ diệt vi k huẩn ñau bụng tái diễn, nôn, buồn nôn, chướng bệnh nhân viêm dày thấp so với bệnh bụng, khó tiêu, nóng rát vùng thượng vị nhân loét dày [5] Do tỷ lệ kháng thuốc tăng xuất huyết tiêu hóa, thiếu máu chưa rõ nguy ên cao t oàn giới ñặt nhiều vấn ñề liên nhân định nội soi tiêu hóa quan, số nhà nghiên cứu tiến hành t ìm hiểu mối liên hệ tính kháng thuốc nhân tố di t ruyền vi khuẩn Nghiên cứu người lớn Ireland thấy tỉ lệ kháng metronidazole nhóm cagA (-) cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm cagA(+) [6] Nghiên cứu - Chưa điều trị kháng sinh t huốc ức chế bơm proton, antacid vòng tháng trước làm nội soi - Có bố/mẹ giải thíc h đồng ý tham gia nghiên cứu Agudo 2010 thấy chủng kháng clarithromycin - Bệnh nhân có kết ni cấy (+) có biểu gen vacA s2/m2 (-) cagA (-) kháng sinh đồ bị nhiễm chủng H pylori có nhữ ng chủng nhạy cảm [7] Trên trẻ em, kháng kháng sinh amoxicillin, Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu độc lực vi khuẩn H pylori Liệu vi khuẩn c ó gen cagA, vacA có ảnh hưởng đến đáp ứ ng điều trị khơng tham gia vào clarithromycin, metronidazole Tiêu chu?n loAi trB bCnh nhân nghiên cEu tỷ lệ loại bỏ vi khuẩn khơng? Xuất phát từ tình Bệnh nhân có tiền sử bệnh ác tính và/ hình thực tế đó, chúng tơi tiến hành đề tài ñã sử dụng kháng sinh, thuốc chống nghiên cứu nhằm mục tiêu tìm hiểu mối tiết acid vòng tuần trước đến khám 42 TCNCYH 96 (4) - 2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Vật liệu nghiên cứu 15µg, metronidazol (MTZ) µg, hãng Bio- - Mẫu mảnh sinh thiết ñược lấy từ bệnh khuẩn ñặt khoanh giấy kháng sinh nhân ñược nội soi dày - Mẫu DNA chứng dương (HP133) viện Tiến hành nghiên cứu khơng kháng chúng tơi tiến hành xác định lại chủng vi khuẩn có kháng hay khơng 5.1 LIy mKu bCnh ph?m Bệnh nhân ñược nội soi, lấy mảnh sinh thiết vùng hang vị thân vị Ngay phòng nội soi, mảnh sinh thiết xác ñịnh có mặt vi khuẩn H pylori xét nghiệm urea (Rapid Urea Test - RUT) Các mảnh sinh thiết cho vào týp ml có chứa mơi trường vận chuyển H pylori [8] Sau đó, týp ñược chuyển ñến khoa Vi khuẩn, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương ñiều kiện lạnh 4o C, - giờ, cất tủ âm 80o C cho ñến tiến hành phân tích Mảnh sinh thiết nghiền thành huyền dịch ñiều kiện vô trùng nuôi cấy môi trường thạch Helicobacter thạch máu ngựa 10% có bổ sung vi chất kháng sinh [9] ðĩa thạch nuôi cấy ñược ủ 37oC, ñiều kiện vi hiếu khí (5% O2, 10% CO2, 85% N2- Campygen™ Oxoid, Anh), theo dõi thời gian từ – ngày Các khuẩn lạc điển hình nhuộm soi, xác định tính chất sinh vật hóa học sinh oxidase, catalase, urease làm thử nghiệm kháng sinh ñồ pháp kháng tối thiểu (MIC) > µg⁄mL, kháng amoxicillin MIC ≥ µg⁄mL, kháng metronidaz ole MIC > µg/mL [4] 5.4 Phương pháp xác đ[nh týp gen cagA, vacA Qui trình tách chiết DNA từ mảnh sinh thiết dày ñược thực theo hướng dẫn DNA Mini Kit, hãng Quiagen (ðức, Cat Xác ñịnh týp gen cagA, vacA H pylori DNA H pylori ñược xác ñịnh dựa vào kỹ thuật PCR ña mồi sử dụng cặp mồi ñặc hiệu cho việc khuếch đại DNA mã hóa gen cagA, vacA H pylori (chi tiết bảng 1) [10] Mỗi 25 µl hỗn hợ p phản ứng bao gồm µl khn DNA, µl loại mồi (50 µM/L) 12,5 µl Taq PCR master mix (QIAgen), lượng vừa đủ nước để có đại ñược thực máy PCR - MyCycle™ sinh khuyếch tán thạch Kirby - Bauer xác ñịnh mức ñộ nhạy cảm với loại kháng sinh theo tiêu chuẩn NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards) [9] 2015 ñịnh kháng clarithromycin nồng ñộ ức chế thể tích cuối 25 µl Q trình khuếch 5.3 Phương pháp kháng sinh ñX phương phương pháp Etest Chủng H pylori xác No.51304) 5.2 Ni cIy phân lPp vi khu?n dụng ñược ủ 37oC, ñiều kiện vi hiếu khí (5% O2, 10% CO2, 85% N2 ), theo dõi ngày Trong trường hợ p trung gian kháng Karolinska, Thụy ðiển cung cấp Sử Rad Các ñĩa thạch ñã láng huyền dịc h vi (Bio Rad) Các c hu t rình PCR thực sau: 94oC phút 94oC phút Dùng mơi trường Muller - Hinton có 5% 55oC 1phút máu ngựa khoanh giấy kháng sinh 72oC phút amoxicillin (AMX) 25µg, clarithromycin (CLA) 72oC 10 phút TCNCYH 96 (4) - 2015 35 chu kỳ 43 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Bảng Các mồi sử dụng cho phản ứng H pylori - PCR đa mồi Gen đích 16S rDNA vacA s1/vacA s2 vacA m1/vacA m2 cagA Mồi Trình tự ðộ dài (bp) 16S rARN - F 5’ – TAA GAGA TCA GCCTA TGTCC – 3’ 16S rARN - R 5’ – TCCCA CGCTTTAAGCGCAA T – 3’ VAI - F 5’ – ATGGAAA TACAA CAAACA CAC – 3’ VAI -R 5’ – CTGCTTGAA TGCGCCAAA C – 3’ VAG - F 5’ – CAA TCTGTCCAA TCAAGCGAG – 3’ VAG - R 5’ – GCGTCAAAA TAA TTCCAA GG – 3’ cag5c - F 5’ – GTTGA TAA CGCTGTCGCTTC – 3’ cag3c - R 5’ – GGGTTGTA TGA TA TTTTCCA TAA – 3’ 10 µl sản phẩm P CR nhỏ vào thạch ñiện di nồng ñộ 1,5% (w/ v) ñể phát sản phẩm PCR mảnh ADN ñược phân chia riêng rẽ ñiện di ñiều kiện 100 V 45 phút sau ñược nhuộm dung dịch SYBR safe DNA (Invitrogen) Mẫu chứng dương HP133 ñược cung cấp khoa Vi sinh lâm sàng, Viện Karolinska, Thụy ðiển 534 259/286 567/642 350 III KẾT QUẢ Tổng số mẫu thu thập 150 bệnh nhi ñược xác ñịnh (+ ) với H pylori có kết kháng sinh đồ kháng với loại: amoxicillin, clarithromycin, metronidazole ðặc ñiểm chung 1.1 Tu]i Tuổi bệnh nhân trung bình 7, 37 ± 2, 69 tuổi, nhỏ tuổi, lớn 14 tuổi Xử lý số liệu Các liệu ñược phân tích phần mềm thống kê SPSS 16.0 ðạo ñức nghiên cứu Nghiên cứu ñã ñược thông qua hội ñồng y ñức Bệnh viện Nhi Trung ương (chấp thuận số 940B ngày 24/12/2012) Phân b^ theo gi_i Tỉ lệ nam/nữ 78/72 = 1,08; khơng có khác biệt giới tính với p > 0,05 1.3 T` lC kháng tBng loAi kháng sinh caa H pylori Bảng Tỉ lệ kháng loại kháng sinh chung Kháng sinh n % Clarit hromycin 91 60,7 Metronidazole 65 43,3 Amoxicillin 56 37,3 Kháng clarithromycin chiếm tỉ lệ cao 60,7% k háng metronidaz ole chiếm tỉ lệ 43,3 % tỉ lệ kháng amoxicillin chiếm tỉ lệ 37,7% 44 TCNCYH 96 (4) - 2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC 1.4 Phân b^ type cagA, vacA caa H pylori Bảng Tỷ lệ phân bố type cagA, vacA chủng H pylori Các gen Dương tính (= n/150) % cagA 51 34 vacA s1 59 39,3 vacA s2 22 14,7 vacA m1 56 37,3 vacA m2 35 23,3 vacA s1/m1 25 16,66 vacA s1/m2 17 11,33 vacA s2/m2 10 6,6 34% chủng H pylori có gen c agA dương t ính, gen vacAs1 dương tính chiếm tỉ lệ cao 39,3% gen vacAm1 dương tính với 37,3 % s ố chủng H pylori kháng kháng sinh Trong số 8% (12/150) bệnh nhi phát c ó nhiễm chủng H pylori có c ả gen cagA, vacAm1 vacAs1 Liên quan gen cagA, vacA kháng kháng sinh 2.1 Liên quan gica gen cagA, vacA kháng amoxicillin Bảng Liên quan gen cagA, vacA kháng amoxicillin Gen Kháng amoxicillin (n,%) Không kháng amoxicillin (n,%) p cagA 17 (30,4) 34 (36,2) > 0,05 vacA s1 21 (37,5) 38 (40,4) > 0,05 vacA s2 10 (17,9) 12 (12,8) > 0,05 vacA m1 19 (33,9) 37 (39,4) > 0,05 vacA m2 16 (28,6) 19 (20,2) > 0,05 vacA s1/m1 (12, 5) 18 (19,1) > 0,05 vacA s1/m2 (16) (8,5) > 0,05 vacA s2/m2 (5,3) (7,4) > 0,05 Tỉ lệ cagA dương tính chiếm 30,4% nhóm kháng amoxicillin, nhóm khơng kháng có 36,2% chủng dương tính với cagA Tỉ lệ vacAs1, vacAs2, vacAm1, vacAm2 56 c hủng kháng amoxicillin 37,5%, 17,9%, 33, 9% 28,6%, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê 2015 TCNCYH 96 (4) - 2015 45 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC tỉ lệ cagA, vacA nhóm kháng khơng kháng amoxicillin (p > 0,05) Tỉ lệ gen vacAs1/ m1 chiếm 12,5%, vacAs1/m2 chiếm 16% vacAs2/m2 chiếm 5,3% nhóm kháng amoxicillin 2.2 Liên quan gica gen cagA, vacA kháng clari thromycin Bảng Liên quan gen cagA, vacA kháng clarithromycin Gen Kháng clarithromycin (n, %) Không kháng clarithromycin (n, %) p cagA 31 (34,1) 20 (33,9) > 0,05 vacA s1 32 (35,2) 27 (45,8) > 0,05 vacA s2 12 (13,2) 10 (16,9) > 0,05 vacA m1 36 (39,6) 20 (33,9) > 0,05 vacA m2 17 (18,7) 18 (30,5) > 0,05 vacA s1/m1 15 (16,48) 10 (14,49) > 0,05 vacA s1/m2 (6,6) 11 (18,64) < 0,05 vacA s2/m2 (5,5) (8,47) > 0,05 Nhóm kháng clarithromycin có tỉ lệ cagA dương tính chiếm 34,1% nhóm khơng kháng chiếm 33,9% Tỉ lệ vacAs1, vacAs2, vacAm1, vacAm2 91 chủng kháng clarithromycin 35,2%, 13,2%, 39,6% 18,7%, khơng c ó khác biệt có ý nghĩa thống kê tỉ lệ cagA, vacA nhóm kháng khơng kháng clarithromycin, (p > 0,05) Tỉ lệ gen vacAs1/m1 chiếm 16,48%, vacAs1/m2 chiếm 6,6% vacAs2/m2 chiếm 5,5% nhóm kháng clarithromycin 2.3 Liên quan gica gen cagA, vacA kháng metronidazole Bảng Liên quan gen cagA, vacA kháng metronidazole Gen Kháng metronidazole (n,%) Không kháng metronidazole (n,%) p cagA 22 (33,8) 29 (34,1) > 0,05 vacA s1 28 (43,1) 31 (36,5) > 0,05 vacA s2 (12, 3) 14 (16,5) > 0,05 vacA m1 25 (38,3) 31 (36,5) > 0,05 vacA m2 15 (23,1) 20 (23,5) > 0,05 vacA s1/m1 13 (20) 12 (14,1) > 0,05 vacA s1/m2 (12, 3) (10, 58) > 0,05 vacA s2/m2 (7,7) (5,88) > 0,05 Tỉ lệ cagA dương t ính chiếm 33,8% nhóm kháng metronidazole, nhiên khơng có khác biệt (p > 0, 05) nhóm không kháng chiếm 34,1% Tỉ lệ vacAs1, vacAs2, vacAm1, vacAm2 46 TCNCYH 96 (4) - 2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC 65 chủng kháng metronidazole 43,1%, 12, 3%, 38,3% 23,1%, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê tỉ lệ cagA, vacA nhóm kháng khơng kháng metronidazole (p > 0,05) Tỉ lệ gen vacAs1/m1 chiếm 20%, vacAs1/m2 chiếm 12, 3% vacAs2/m2 chiếm 7, 7% nhóm kháng metronidazole 2.4 Liên quan gica gen cagA, vacA m1, vacA s1(+) kháng kháng sinh Bảng Tỷ lệ mang gen chủng kháng kháng sinh cagA(+), vacA m1(+), vacA s1(+) (n) % Kháng amoxcixillin 1/56 1,8 Kháng clarithromycin 8/91 8,8 Kháng metronidzole 7/65 10,76 Chủng kháng kháng metronidazole có tỉ lệ mang gen cagA dương tính vacAs1/m1 dương t ính chiếm tỉ lệ cao 10, 76 % kháng amoxcixillin chiếm tỉ lệ thấp 1,8% IV BÀN LUẬN 2015 em Pháp tỉ lệ cagA chiếm 40% tương Tuổi trung bình bệnh nhân tham gia đương với kết chúng tơi [13] Cũng nghiên cứu 7,37 ± 2, 69 tuổi, tuổi nhỏ theo Trần Thiện Trung, tỉ lệ vacAs1, vacAs2, tuổi, tuổi lớn 14 tuổi, tỉ lệ nam vacAm1, vacAm2, vacAs1/m1, vacAs1/m2 nữ gần tương ñương Trong 150 chủng H pylori kháng kháng sinh phân lập ñược, vacAs2/m2 96,7%, 3,3%, 40,7%, 59,3%, 41, 8%, 54,9% 3, 3% [11] So với kết kháng clarithromycin chiếm tỉ lệ cao 39,3%, 14,7%, 60,7%, kháng amoxicillin, metronidazol chiếm 37,3%, 23,3%, 16,7%, 11,3% 6,6 % Tỉ lệ tỉ lệ 37,3%, 43,3% vacAs1 thấp nhiều so với Gen vacA s1 dương tính chiếm tỉ lệ cao nghiên cứu t rên người lớn vacAm1 có kết 39,3%, 34% chủng H pylori có gen cagA tương đương với người lớn [11] Tuy dương tính gen vacA m1 dương t ính với nhiên, so với tỉ lệ vacAs1 73,5%, vacAs2 37,3% số chủng H pylori kháng kháng sinh 26,5%, vacAm1 41, 3%, vacAm2 58,7% c Trong số 8% (12/150) bệnh nhi ñược phát trẻ em Slovenia có vacAm1 c ó kết có nhiễm chủng H pylori có gen, tương tự lại tỉ lệ thấp cagA, vacAm1 vacAs1 Nghiên cứu Tỉ lệ vacAs1/m1 chiếm 41,8% tương ñươ ng người lớn thành phố Hồ Chí Minh Hà với kết nghiên cứu trẻ Slovenia Nội Trần Thiện Trung cộng thấy tỉ lệ (42% ), nhiên tỉ lệ vacAs1/m2 (54,9% ) cagA bệnh nhân viêm dày người lớn vacAs2/m2 (3, 3%) so với trẻ Slovenia lại thấp chiếm 92,3 % cao nhiều so với nghiên cứu [11] So với nghiên cứu Homan [12] Liên quan giữ a gen cagA, vacA kháng trẻ em Slovenia viêm dày tá tràng thấy amoxicillin: Tỉ lệ cagA dương tính chiếm tỉ lệ cagA chiếm 56,4% cao chúng tơi 30,4% nhóm kháng amoxicillin, nhóm không [12], nhiên so sánh với nghiên cứu t rẻ kháng có 36,2% chủng dương tính với cagA TCNCYH 96 (4) - 2015 47 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Tỉ lệ vacAs1, vacAs2, vacAm1, vacAm2 c lệ gen vacA s1 nhóm k háng metronidaz ole 56 chủng kháng amocixillin 37,5%, nghiên cứu Karabiber cao 100% 17,9%, 33,9% 28,6%, khơng có khác cao có ý nghĩa so với nhóm nhạy cảm, so biệt có ý nghĩa thống kê tỉ lệ cagA, vacA với k ết tỉ lệ 43,1% thấp nhóm kháng khơng kháng amoxcixillin (p > 0,05) Tỉ lệ gen vacAs1/m1 chiếm nhiều không t ìm thấy khác biệt có ý nghĩa hai nhóm kháng khơng 12,5%, vacAs1/m2 chiếm 16% vacAs2/m2 kháng Tương tự tỉ lệ vacA m1 chúng chiếm 5,3% nhóm kháng amoxcixillin Kết tơi nhóm kháng khơng kháng metronidazole c giống nghiên cứu 38, 3% 36,5% so với kết c Got aslou người lớn k hơng tìm thấy Karabiber 33,3% 23,5% tỉ lệ chúng khác biệt có ý nghĩa thống kê tỉ lệ cao [15] kháng amoxicillin gen cagA [14] Liên quan gen cagA, vacA kháng Liên quan gen cagA, vacA m1, vacA s1(+) k háng k háng sinh: Nghiên cứu chủng clarithromycin: Nhóm kháng khơng kháng H pylori nhiều tác giả phát clarithromycin có tỉ lệ cagA(+) 34,1% chủng H pylori mang gen cagA gây 33,9%, kết tương tự ñộc tế bào thường chiếm tỷ lệ cao kết Karabiber (2014) trẻ Thổ Nhĩ thể bệnh nặng loét dày tá tràng, Kì 33,3% 31, 3%[15] So với nghiên cứu Franc esco Italia thấy tỉ lệ cagA bệnh nhân kháng clarithromycin chiếm 69,3%, cao so với nghiên cứu Tỉ lệ vacAs1 nhóm k háng clarithromycin nghiên u Karabiber chiếm 91,7% c ao so với nhóm nhạy cảm có ý nghĩa (46,9% ), cao hơ n so với kết 43,1% 36,5% Tuy nhiên giống nghiên cứu Francesco người lớn chúng tơi khơng tìm thấy liên quan tỉ lệ gen cagA, vacA với kháng clarithromycin [16] Liên quan gen cagA, vacA k háng metronidazole: Trong nghiên cứu chúng ung thư dày (70 - 100%) Nếu chủng H pylori có gen cagA gen vacA, k gây bệnh cao Các cơng t rình Việt Nam nghiên cứu ñịnh týp H pylori theo kiểu ñã cho biết: nhiễm H.pylori có kiểu gene vacA s1/m1 kết hợp với cagA (+) nguy ung thư dày tăng lên 7,1 lần (khoảng tin c ậy 95% = 1,4 - 36,1) so với nhiễm H pylori có vacA s1/m1 cagA (-) [17] Tác giả Trần Thiện Trung có nhận định chủng H pylori có mang gen cagA gen vacA s1/m1 có nguy cao liên quan đến bệnh ung thư dày với OR = 2,118 tôi, tỉ lệ cagA (+) nhóm kháng metronidaz ole (khoảng tin cậy 95% = 1,094 - 4, 1) so với chiếm 33,8%, nhóm không kháng chiếm chủng H pylori mang gen cagA vacA 34,1% Trong nghiên cứu Taneike Ire- s1/m2 [11] Trong nghiên cứu tỉ land thấy tỉ lệ kháng met ronidazole nhóm cagA(-) cao nhóm cagA (+) [6], nhiên lệ chủng vi khuẩn có gen cagA , vacAs1/m1 nghiên cứu chúng tơi khơng tìm thấy kháng amoxicillin chiếm tỉ lệ khác biệt nhóm Tương tự kết nghiên cứu Trần Thiện Trung thấy tỉ lệ cagA, Karabiber (2014) khơng tìm thấy khác vacAs1/m1 dương tính nhóm bệnh nhân biệt nhóm với tỉ lệ 50% nhóm viêm dày chiếm 42% cao hơ n so với kháng 30,7% nhóm không kháng [ 15] Tỉ nghiên cứu [11] 48 nhóm kháng metronidazole chiếm 10,76% 1,8% Trong TCNCYH 96 (4) - 2015 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC V KẾT LUẬN Qua nghiên cứu 150 chủng H pylori kháng kháng sinh, 34% chủng H pylori có gen cagA dương tính, tỉ lệ vacAs1, vacAs2, vacAm1, vacAm2, vacAs1/m1, vacAs1/m2 vacAs2/ m2 39,3%, 14,7%, 37,3%, 23,3%, 16,7%, 11,3% 6,6% Trong số đó, 8% bệnh nhi phát có nhiễm chủng H pylori độc lực cao có gen, cagA, vacAm1 vacAs1 Khơng thấy khác biệt tỉ lệ gen cagA, vacA nhóm kháng kháng sinh khơng kháng kháng sinh Việc lựa chọn phác ñồ ñiều trị khác cho bệnh nhi nhiễm chủng H pylori kháng kháng sinh c ó gen cagA, vacA dương tính khơng c ần thiết Cần ñánh giá ñộc lực vi khuẩn nhóm bệnh nhi viêm loét dày tá tràng chủng H pylori kháng thuốc để có hướng theo dõi ñiều trị cho bệnh nhi Cần nghiên cứu thêm mối liên quan gen kháng thuốc ñộc lực vi khuẩn Lời cảm ơn Chúng t ôi chân thành cảm n Tiến sĩ Hoàng Thị Thu Hà (viện Vệ sinh Dich tễ Trung ương) Phạm Diệu Quỳnh (Trường ðại học – Nguyen, H.T V (2009) Diagnosis and treatment of Helicobacter pylori infection in Vietnamese children Thesis degree, paper III, - 19 for doctoral Van Doorn LJ, Schneeberger PM, Nouhan N et al (2000) Importanc e of Helicobacter pylori cagA and vacA sta-tus for the efficacy of antibiotic treatment Gut, 46(3), 321 – 326 TANEIKE* I (2009) A nalysis of drug resistance and virulence-factor genotype of Irish Helicobacter pylori strains: is there any relationship bet ween resistance to metronidazole and cagA status? Aliment Pharmacol Ther, 30, 784 – 790 Agudo S, Perez-Perez G, Alarcon T, Lopez-Brea M (2010) High prevalence of clarithromycin-resistant Helicobacter pylori strains and risk factors associated with resistance in Madrid, S pain J Clin Mic ro-biol 48(10), 3703 – 3707 Antibiotic Susceptibility., Resi stance Francis Megraud et al http:// www.ncbi.nlm.nih.gov/boofself McNulty C, Owen R, Tompkins D et al Khoa học Tự Nhiên) việc giúp ñỡ triển (2002) Helicobacter pylori susceptibility test- khai nghiên cứu ing by disc diffusion J Antimicrob Chemother TÀI LIỆU THAM KHẢO 49(4), 601 – 609 Phạm Hoàng Hưng (2003) Nhận xét 10 Sushil Kumar (2008) Direct detection and analysis of vacA gene of Helicobacter mối liên quan nhiễm Helicobacter pylori pylori from gastric biopsies by a novel multi- bệnh lý dày tá tràng trẻ em bị ñau plex polymerase chain reaction assay Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, bụng tái diễn Tạp chí Y học thực hành, 449, 128 - 129 Basso D, Zambon CF, Letley DP et al (2008) Clinical relevance of Helicobacter pylori cagA and vacA gen polymorphisms Gastroenterology, 135, 91 - 99 Sicheng Wenand Steven F Moss (2009) Helicobacter pylorivirulence factors in 2015 gastric carcinogenesis Cancer Lett, 282(1), TCNCYH 96 (4) - 2015 62, 366 - 373.limentarhar 11 Trần Thiện Trung, Lê Châu Hoàng Quốc Chương, Trần Anh Minh cộng (2010) Kết nghiên cứu túyp gen cagA vacA Helicobacter pylori ung thư dày Y học thành phố Hồ Chí Minh, 14(4), 25 - 34 49 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC 12 Homan M (2014) Prevalence of the Helicobacter pylori babA2 gene and correla- and Antibiotic resistance in children with tion with the degree of gastritis in infected Helicobacter pylori Gastritis JPGN, 58(5), 608 Slovenian children Antonie van Leeuwenhoek 106, 637 – 645 - 612 13 HUSS ON M (1995) Importance in Diagnosis of Gastritis of Det ection by PCR of the cagA Gene in Helicobacter pylori Strains Isolated from Children Journal of clinical microbiology, 33, 3300 – 3303.A 15 Karabiber H (2014) Virulence Factors 16 Francesco V (2006) Claritromycin Resistance and Helicobacter pylori Genotypes in Italy The Journal of Mic robiology, 44( 6), 660 - 664 17 Lê Quý Hưng, Hà Thị Minh Thi 14 Ghota slou R (2013) Relationship B e- (2013) Nghiên cứu xác ñịnh kiểu gene cagA tween Drug Resistance and cagA Gene in Helicobacter pylori Jundishapur J Microbiol, ung thư dày Tạp chí Y Dược học - Trường (10), 8480 ðại học Y Dược Huế, 14, 118 - 125.A VÀ vacA helicobacter pylori bệnh nhân Summary STUDY ON cagA and vacA GENES OF HELICOBACTER PYLORI ANTIBIOTIC RESISTANCE ISOLATED FROM PEDIATRIC PATIENTS IN VIETNAM Helicobacter pylori (H pylori) resistance antibiotic is major cause of failure to eradicate H pylori Recently, a number of studies has showed that virulence genes associated with H pylori antibiotics resistance can be isolated from adult peptic ulcer patients Up to now, however, there is a lack of evidene about this relevance in children patient This study aimed to evaluate the association bet ween H pylori antibiotic resistance and the presence of cagA and vacA genes in pediatric patients Between Jan 2012 t o Sep 2013, 150 pediatric patients of the National Hospital of Pediatrics were identified to be infected with H pylori antibiotic resistance strains, and cagA and vacA gene was det ected by using multiplex PCR The result showed that the c agA gene was detected in 34% H pylori strains The rat e of vacAs1, vacAs2, vacAm1, vacAm2, vacAs1/m1, vacAs1/m2 and vacAs2/m2 were 39.3%, 14.7%, 37.3%, 23.3%, 16.7%, 11.3% and 6.6%, respectiverly 8% strains harboured three virulenc e genes cagA, vacAm1 and vacAs1 The prevalence of cagA and the vacA alleles distribution did not show a significantly difference between susceptible and antibiotics resistance groups Therefore, it may not be necessary to administrate diffirent treatment regimens for children who are infected by antibiotic resistance H pylori with cagA, vacA positive Key words: Helicobacter pylori, resi stance antibiotic, children, cagA, vacA gene 50 TCNCYH 96 (4) - 2015 ... 39,3% gen vacAm1 dương tính với 37,3 % s ố chủng H pylori kháng kháng sinh Trong số 8% (12/150) bệnh nhi phát c ó nhi m chủng H pylori có c ả gen cagA, vacAm1 vacAs1 Liên quan gen cagA, vacA kháng. .. [15] kháng amoxicillin gen cagA [14] Liên quan gen cagA, vacA kháng Liên quan gen cagA, vacA m1, vacA s1(+) k háng k háng sinh: Nghiên cứu chủng clarithromycin: Nhóm kháng khơng kháng H pylori nhi u... 100%) Nếu chủng H pylori có gen cagA gen vacA, k gây bệnh cao Các cơng t rình Việt Nam nghiên cứu định týp H pylori theo kiểu ñã cho biết: nhi m H .pylori có kiểu gene vacA s1/m1 kết hợp với cagA (+)