Kết quả nghiên cứu gen caga và các gen vaca của helicobacter pylori trên bệnh nhân viêm dạ dày bằng phương pháp multiplex PCR

Nghiên cứu với mục tiêu nhằm đánh giá tỷ lệ các gen của vi khuẩn Helicobacter pylori (H. pylori) phát hiện được trên bệnh nhân viêm dạ dày đến khám và điều trị tại Cơ sở 2‐ Bệnh viện Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh.

Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU GEN CAGA VÀ CÁC GEN VACA   CỦA HELICOBACTER PYLORI TRÊN BỆNH NHÂN VIÊM DẠ DÀY   BẰNG PHƯƠNG PHÁP MULTIPLEX PCR  Trần Thiện Trung*, Nguyễn Tuấn Anh*, Qch Hữu Lộc*, Trần Thiện Khiêm*,   Trần Ái Anh*, Nguyễn Thị Minh Tâm*,Hồ Huỳnh Thùy Dương*, Trần Anh Minh**  TĨM TẮT  Mục  tiêu: Đánh giá tỷ lệ các gen của vi khuẩn Helicobacter pylori (H. pylori) phát hiện được trên bệnh  nhân viêm dạ dày đến khám và điều trị tại Cơ sở 2‐ Bệnh viện Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh.  Phương pháp: Nghiên cứu cắt ngang trên 172 bệnh nhân viêm dạ dày. Chẩn đốn các gen H. pylori bằng  phương pháp multiplex PCR. Quản lý số liệu và phân tích kết quả bằng phần mềm SPSS (phiên bản 10.0, SPSS  Inc, Chicago, Ill).   Kết  quả:  Trên  66,7%  (172/258)  trường  hợp  viêm  dạ  dày  có  H.  pylori‐dương  tính.  Bằng  phương  pháp  multiplex PCR, kết quả gen cagA‐dương tính chiếm 91,3% (157/172) trường hợp và gen vacA‐dương tính là  98,3% (169/172). Trong số này các gen vacA s1/s2 của H. pylori được xác định lần lượt là 93,6% (161/172) và  1,2% (2/172); các gen vacA m1/m2 lần lượt là 37,2% (64/172) và 48,3 (83/172) trường hợp. Một trường hợp  (0,6%) có cả hai gen s1 và s2, và 17 trường hợp (9,9%) có cả hai gen m1 và m2. Qua nghiên cứu khơng thấy có  liên  quan  giữa  gen  cagA‐dương  tính  với  các  gen  vacA  s1/s2  (p  =  0,636),  và  với  tổ  hợp  các  gen  vacA  s1/s2,  m1/m2 (p = 0,120), nhưng gen cagA‐dương tính có mối liên quan với các gen vacA m1/m2 (p=0,018)   Kết  luận: Trên bệnh nhân viêm dạ dày có H. pylori‐dương tính, có mối liên quan giữa gen cagA‐dương  tính với vacA m1. Tổ hợp các gen của vi khuẩn H. pylori chủ yếu là cagA‐dương tính, vacA s1m1; và cagA‐ dương tính, vacA s1m2. Một số tổ hợp các gen mới được phát hiện trong nghiên cứu của chúng tơi như cagA‐ dương tính vacA s2m1; cagA‐dương tính vacA s2m2; và cagA‐âm tính vacA s1m1.  Từ khóa: H. pylori, multiplex PCR, cagA, vacA.  ABSTRACT  CagA STATUS AND vacA GENOTYPES OF HELICOBACTER PYLORI IN PATIENTS WITH  GASTRITIS BY MULTIPLEX PCR  Tran Thien Trung, Nguyen Tuan Anh, Quach Huu Loc, Tran Thien Khiem, Tran Ai Anh,   Nguyen Thi Minh Tam, Ho Huynh Thuy Duong, Tran Anh Minh   * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ Supplement of No 4 ‐ 2013: 11 ‐ 17  Purpose: To evaluate cagA status and vacA genotypes of Helicobacter pylori (H. pylori) in patients with  gastritis at University Medical Center, Ho Chi Minh city‐ Campus 2.  Methods:  A  cross‐sectional  study  was  conducted  in  172  patients  with  gastritis  before  eradication.  CagA  status and vacA genotypes of H. pylori were determined by multiplex PCR. Data were stored and analyzed by  SPSS software (version 10.0, SPSS Inc, Chicago, Ill).  Results:  Over  66.7%  (172/258)  cases  with  gastritis  were  H.  pylori  positive.  By  multiplex  PCR,  91.3%  * Bệnh viện Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh  ** Trường Đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch, TP. Hồ Chí Minh  Tác giả liên lạc: PGS.TS.BS Trần Thiện Trung‐ ĐT: 0903645659‐ Email: drtranthientrung@ yahoo.com.  12 Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học   Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013  Nghiên cứu Y học (157/172) cases were cagA‐positive and 98.3% (169/172) cases were vacA‐positive. Among these cases, the vacA  s1/s2 was detected in 93.6% (161/172) and 1.2% (2/172) respectively, and the vacA m1/m2 was 37.2% (64/172)  and 48.3% (83/172) correspondingly. One case (0.6%) was positive with both vacA s1 and vacA s2. Seventeen  cases (9.9%) were positive with both vacA m1 and vacA m2. The study did not recognize the association between  cagA‐positive and vacA s1/s2 (p = 0.636), as well as the combination of vacA s1/s2 and vacA m1/m2 (p = 0.120).  However, cagA‐positive was associated with vacA m1/m2 (p = 0.018).  Conclusions: Of patients with gastritis, there was an association between cagA‐positive and vacA m1. The  main genotype combinations of H. pylori were cagA‐positive, vacA s1m1 and cagA‐positive, vacA s1m2. There  were  some  new  genotype  combinations  discovered  in  this  study,  such  as  cagA‐positive,  vacA  s2m1;  cagA‐ positive, vacA s2m2 and cagA‐negative vacA s1m1.   Keywords: H. pylori, multiplex PCR, cagA, vacA  ĐẶT VẤN ĐỀ  sinh  bệnh  là  do  độc  tính  khác  nhau  của  các  Ung thư dạ dày là nguyên nhân gây tử vong  đứng hàng thứ hai trên thế giới. Các trường hợp  ung  thư  dạ  dày  mới  xuất  hiện  chủ  yếu  ở  các  nước đang phát triển(17,22). Tỷ lệ ung thư dạ dày  mới mắc vẫn cao ở các nước Đông Á như Nhật  Bản,  Hàn  Quốc,  Trung  Quốc,  và  Việt  Nam.  Trong  đó,  Việt  Nam  đứng  đầu  các  nước  Đơng  Nam Á về tỷ lệ tử vong do ung thư dạ dày(9,22).  chủng H. pylori(22).   Trong các yếu tố nguyên nhân của ung thư  dạ  dày,  nhiễm  H. pylori  là  một  yếu  tố  nguy  cơ  chủ  yếu  và  bằng  nhiều  con  đường  bệnh  sinh  khác nhau, từ viêm dạ dày mạn có thể diễn tiến  thành các thương tổn tiền ung thư như viêm teo,  dị sản, loạn sản và ung thư dạ dày(6,18,20,22). Nguy  cơ ung thư dạ dày tăng từ 2‐6 lần đối với bệnh  nhân nhiễm H. pylori. Năm 1994, Tổ chức nghiên  cứu ung thư quốc tế và Tổ chức y tế thế giới đã  xếp H. pylori là tác nhân nhóm 1 gây ung thư dạ  dày‐carcinoma ở người(3,22). Hơn nửa dân số thế  giới  nhiễm  H.  pylori,  tỷ  lệ  nhiễm  từ  25%  ở  các  nước  phát  triển  đến  hơn  90%  ở  các  nước  đang  phát triển. Hầu hết những người nhiễm H. pylori  mạn tính đều khơng có triệu chứng lâm sàng rõ  rệt(22),  ở  những  cá  thể  nhạy  cảm  sẽ  có  những  thương tổn dạ dày khác nhau như viêm, loét và  hoặc  ung  thư  dạ  dày(12,15,18,19,20).  Trong  số  những  người bị nhiễm H. pylori, một tỷ lệ nhỏ từ 1‐2%  phát  triển  thành  ung  thư  dạ  dày  với  quá  trình  Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Gen  cagA  được  tìm  thấy  ở  vùng  đảo  sinh  bệnh cag PAI và được xem là “dấu ấn sinh học”  biểu hiện độc tính của vi khuẩn H. pylori khi có   gen  cagA  hoặc  vùng  PAI.  Những  người  nhiễm  H. pylori có cagA‐dương tính sẽ có nguy cơ phát  triển  lt  và  ung  thư  dạ  dày  cao  hơn  so  với  người  nhiễm  H. pylori  có  cagA‐âm  tính(1,22).  Bên  cạnh các độc tố của vi khuẩn có tiềm năng gây  ung  thư  dạ  dày  như  protein  CagA,  thì  tính  đa  dạng  di  truyền  của  gen  mã  hóa  cho  protein  VacA cũng được xem là quan trọng(8,10). Sự hiện  diện của gen vacA gây viêm niêm mạc dạ dày từ  nhẹ  đến  nặng(16,18,20).  Mặc  dù  hầu  hết  các  chủng  H. pylori đều có vacA‐dương tính, nhưng chỉ 50‐ 60% biểu hiện hoạt tính gây độc tế bào. Sự khác  biệt  này  có  thể  bắt  nguồn  từ  tính  đa  dạng  di  truyền  của  gen  vacA.  Phân  tích  di  truyền  các  chủng H. pylori cho thấy có các kiểu gen vacA với  những tổ hợp khác nhau của vùng tín hiệu s1, s2  và  vùng  giữa  m1,  m2.  Các  kiểu  gen  vacA  đặc  trưng có liên quan ý nghĩa đến hoạt tính gây độc  tế bào và viêm, lt đường tiêu hóa. Vì vậy, việc  xác định các gen của H. pylori góp phần hữu ích  trong  chẩn  đoán  nhiễm  H.  pylori  và  liên  quan  đến các bệnh ở dạ dày(7,18,19,20).  Trong  bài  báo  này,  chúng  tôi  giới  thiệu  nghiên  cứu  về  gen  cagA  và  các  gen  vacA  thực  hiện  trên  những  bệnh  nhân  viêm  dạ  dày  đến  khám và điều trị tại bệnh viện Đại học Y Dược  TP. Hồ Chí Minh‐Cơ sở 2. Từ đó, giúp chúng ta  có thêm hiểu biết về sự hiện diện cũng như liên  13 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 quan  giữa  các  gen  của  vi  khuẩn  H. pylori  trong  quần thể bệnh nhân được khảo sát làm cơ sở cho  những nghiên cứu tiếp theo trong tương lai.  PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Đối tượng nghiên cứu  Nghiên  cứu  cắt  ngang  thực  hiện  từ  tháng  8/2012 – 2/2013 tại bệnh viện Đại học Y Dược TP.  Hồ Chí Minh‐Cơ sở 2. Bệnh nhân đến khám tiêu  hóa đáp ứng các tiêu chuẩn sau:  Tiêu chuẩn nhận bệnh  Bệnh nhân đồng ý tham gia nghiên cứu.  Tiêu chuẩn loại trừ  Bệnh nhân là trẻ em hoặc phụ nữ mang thai.  Phương pháp nghiên cứu  Mẫu  sinh  thiết  dạ  dày  của  bệnh  nhân  thu  thập  qua  nội  soi,  lấy  ở  vùng  hang  vị  phía  bờ  cong  lớn,  cách  môn  vị  khoảng  3cm.  Phương  pháp  multiplex  PCR  được  dùng  để  xác  định  đồng thời sự  hiện  diện/không  hiện  diện  của  H.  pylori và xác định các gen của vi khuẩn H. pylori.   Kết  quả  H.  pylori‐dương  tính  được  chẩn  đốn  ngồi  phương  pháp  multiplex  PCR  kết  hợp với ít nhất một trong hai thử nghiệm khác là  CLO‐test hoặc/và huyết thanh‐dương tính.   Phương  pháp  multiplex  PCR  với  khả  năng  đồng  thời  phát  hiện  và  xác  định  H.  pylori  dựa  trên  gen  cagA  và  vacA  được  sử  dụng  trong  nghiên  cứu.  Multiplex  PCR  dựa  trên  sự  nhân  bản đồng thời  nhiều  vùng  gen  cagA,  vacA  khác  nhau,  bằng  nhiều  cặp  mồi  đặc  trưng  với  H.  pylori trong cùng một phản ứng. Vì vậy, tính đặc  hiệu của phản ứng được đảm bảo.  Để đảm bảo cho tính chính xác sự hiện diện  của các gen H. pylori trong quần thể khảo sát, chỉ  những  bệnh  phẩm  dương  tính  với  multiplex  PCR,  và  dương  tính  với  ít  nhất  một  trong  hai  phương  pháp  chẩn  đoán  khác  (CLO  test  và  huyết thanh) mới được đưa vào phân tích thống  kê. Các trường hợp âm tính với multiplex PCR,  khơng xác định được týp  gen, và được loại trừ  khi CLO test và huyết thanh âm tính.  14 Phương  pháp  phân  tích  thống  kê  sử  dụng  các phép kiểm chi bình phương (χ2) để đánh giá  kết quả nghiên cứu có ý nghĩa thống kê khi p