Sự phát triển của trứng sán lá phổi Paragonimus Heterotremus; sự phát triển của ấu trùng sán lá phổi trong cơ thể vật chủ trung gian thứ nhất; kết quả gây nhiễm Miracidium sán lá phổi cho ốc.
26(2): 6-10 Tạp chí Sinh học 6-2004 Sự phát triển trứng sán phổi - Paragonimus heterotremus giai đoạn ấu trùng thể vật chủ trung gian thứ phạm ngọc doanh Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Những công trình nghiên cứu điều tra sán phổi nớc ta năm gần đ xác định bệnh sán phổi bệnh nguy hiểm cho ngời động vật; đặc biệt số tỉnh miền núi phía Bắc, số lợng ngời nhiễm sán phổi tơng đối cao [1, 3-7] Đây bệnh ký sinh trùng lây nhiễm qua thực phẩm đợc Tổ chức Y tế giới quan tâm Để góp phần vào công tác phòng trị bệnh sán phổi việc nghiên cứu đặc điểm sinh học vòng đời phát triển chúng cần thiết Bài công bố sù ph¸t triĨn cđa trøng s¸n l¸ phỉi Paragonimus heterotremus giai đoạn ấu trùng sán thể vật chủ trung gian thứ Đây giai đoạn đầu vòng đời phát triển sán phổi lần đợc nghiên cứu Việt Nam i Phơng pháp nghiên cứu - Trứng sán phổi thu từ sán trởng thành cho đẻ nớc muối sinh lý, sau rửa trứng nuôi điều kiện nhiệt độ khác Hàng ngày theo dâi sù ph¸t triĨn cđa trøng d−íi kÝnh hiĨn vi - Khi trứng nở thành miracidium gây nhiễm cho ốc cách đếm số lợng miracidium cho tiếp xúc với ốc sạch, sau tiếp tục nuôi ốc, định kỳ mổ ốc để theo dõi phát triển ấu trùng sán phổi thể ốc ii Kết nghiên cứu Sự phát triển trứng sán phổi - P heterotremus Trứng sán đợc nuôi điều kiện nhiệt độ khác nhau, hàng ngày rửa thay nớc Kết cho thấy phát triĨn cđa trøng phơ thc rÊt nhiỊu vµo nhiƯt ®é ë nhiƯt ®é mïa ®«ng (12-25oC), thêi gian trøng phát triển đến nở 24-30 ngày Trứng giữ điều kiện 12oC tủ lạnh phát triển, nhiên thời gian kéo dài tới 90-120 ngày Trong khi, điều kiện ổn định 30oC tủ ấm nhiệt độ phòng thí nghiệm mùa hè (25-35oC), trứng phát triển nhanh hơn, 13-17 ngày (bảng 1) Tỷ lệ nở trứng điều kiện nhiệt độ khác có khác nhau, nhng không đáng kể: mùa hè 25-35oC, nhiệt độ ổn định 30oC tỷ lệ trứng nở cao so với điều kiện nhiệt độ mùa đông 12-25oC (95,696,3% so víi 75,0-81,0%) Sù ph¸t triĨn cđa trøng cã thĨ quan sát dới kính hiển vi Khi đẻ, tế bào phôi nhỏ, xung quanh tế bào no n hoàng Gặp điều kiện thuận lợi, tế bào phôi phát triển phân chia, tăng số lợng tế bào cuối hình thành miracidium có lông - giai đoạn ấu trùng Đến thành thục, miracidium thờng bật nắp vỏ trứng thoát vào buổi sáng, đặc biệt có ánh sáng kích thích Miracidium rÊt nhá, víi kÝch th−íc 0,112 × 0,07 mm, có hàng tế bào; thể nhìn rõ tế bào lửa tế bào mầm, phần đầu có tuyến xâm nhập; xung quanh thể phủ đầy tiêm mao, nhờ tiêm mao mà chúng hoạt động nhanh để tìm vật chủ (hình 1) Sức sống miracidium dựa vào lợng dự trữ, mà không dinh dỡng môi trờng ngoài, nên khả sống chúng giảm dần theo thời gian Sau nở, ấu trùng hoạt động mạnh để tìm xâm nhập vào vật chủ trung gian thứ ốc nớc ngọt; không xâm nhập vào đợc loài ốc thích hợp Bảng Sự phát triển trứng sán phổi điều kiện nhiệt độ khác Điều kiện t0 Lần thí nghiệm lÇn Sè trøng theo dâi 100 Sè trøng në 95 Tû lƯ në (%) 95,0 Mïa hÌ (25-35oC) lÇn 100 95 95,0 lÇn 100 97 97,0 lÇn 100 95 95,0 lÇn 100 96 96,0 lÇn 100 98 98,0 lÇn 100 80 80,0 lÇn 100 81 81,0 lÇn 100 75 75,0 lÇn 100 73 73,0 lÇn 100 79 79,0 lÇn 100 81 81,0 o Tñ Êm (30 C) Mïa đông (12-25oC) o Tủ lạnh (12 C) a b c d Trung bình Thời gian (ngày) (%) 95,6 13-17 96,3 13-17 78,6 24-30 77,6 90-120 e Hình Sự phát triển trứng sán phổi điều kiện mùa hè a trứng đẻ; b trứng phát triển sau ngày; c trứng phát triển sau ngày; d trứng phát triển sau 10 ngày; e miracidium chúng chÕt vßng 6-24 giê Tuy miracidium cã thĨ sèng đợc tới 24 giờ, nhng sức sống đ giảm; chúng có khả xâm nhập vào ốc thời gian bao lâu, cần nghiên cứu thêm Sự phát triển ấu trùng sán phổi thể vật chủ trung gian thứ Gây nhiễm miracidium sán phổi cho loài ốc: Menaloides tuberculatus, Katayama nosophora, Katayama sp., Oncomelania sp.1 Oncomelania sp.2 (ảnh loài ốc sau đăng tạp chí Sinh học [5]) víi mËt ®é 20 miracidium/èc, thÊy r»ng chØ cã loài ốc Oncomelania sp.1 Oncomelania sp.2 bị nhiễm với tỷ lệ cao 100% 80,0% tơng ứng; loài ốc lại Menaloides tuberculatus, Katayama nosophora, Katayama sp không bị nhiễm (bảng 2) Bảng Kết gây nhiễm miracidium sán phổi cho ốc Loài ốc Sè èc g©y nhiƠm Sè miracidium/èc 40 20 Oncomelania sp.1 200 20 Oncomelania sp.2 200 20 Menaloides tuberculatus 100 20 Katayama nosophora 100 20 Katayama sp Kết gây nhiễm phù hợp với kết xác định vật chủ trung gian sán phổi tự nhiên: xét nghiệm 13 loài ốc vùng phát có sán phổi tỉnh Tây Bắc có loài ốc Oncomelania sp.1 Oncomelania sp.2 bÞ nhiƠm Êu trïng a Sè èc nhiƠm Tû lƯ nhiƠm (%) 40 100,0 160 80,0 0 0 0 sán phổi [5] Kết nghiên cứu khẳng định loài ốc Menaloides tuberculatus vật chủ trung gian sán l¸ phỉi P heterotremus [6], hay Katayama nosophora (Pachydrobia duporti [8] a d b c Hình Các giai đoạn ấu trùng sán phổi thể ốc a Sporocyt; b Redia mÑ; c Redia con; d Cercaria Bảng Thời gian phát triển sán phổi qua giai đoạn ấu trùng thể ốc Thời gian Thời gian phát triển giai đoạn Êu trïng (ngµy) Sporocyt Redia mĐ Redia Cercaria Mïa ®«ng 15-20 25-30 65-70 80-120 Mïa hÌ 10-15 20-28 55-65 75-100 Trong thể ốc, ấu trùng phát triển qua giai đoạn sporocyt, redia mẹ, redia cercaria Sau xâm nhập vào ốc, miracidium phát triển thành sporocyt, vào mùa đông đến ngày thứ 15-20 sporocyt thành thục có dạng hình túi, kích thớc 0,41-0,50 ì 0,16-0,20 mm, cã chøa 2-3 redia mĐ (h×nh 2a) Tõ ngày thứ 25-30 redia mẹ thoát khỏi sporocyt có thời gian nghỉ, tiếp tục phát triển đến thành thục khoảng 30-34 ngày (tức sau gây nhiễm 65-70 ngày); redia mẹ (hình 2b) thờng chứa 1-2 redia con, redia (hình 2c) thoát khỏi redia mẹ phát triển đến thành thục có chứa cercaria, đến ngày thứ 80-120 cercaria chui khỏi ốc Nh vậy, thời gian phát triển thể ốc nhiệt độ mùa đông khoảng 80-120 ngày; điều kiện mùa hè, thời gian phát triển ngắn (bảng 3) Cercaria gồm phần: thân có kích thớc 0,24-0,30 ì 0,08-0,11 mm đuôi hình nắm đấm có chùm lông, kích thớc 0,05 ì 0,02 mm Thân có giác bám: giác miệng 0,05-0,07 ì 0,05-0,06 mm giác bụng nhỏ giác miệng, đờng kính 0,028-0,030 mm, phần đầu có mang stylet 0,02 ì 0,004 mm, bên thể có tế bào xâm nhập xếp thành chùm xung quanh giác bụng (hình 2d) Một ®iỊu rÊt lý thó quan s¸t cercaria tho¸t khỏi thể ốc chúng thờng chui vào bi chiỊu tèi tõ 17-19 h, tËp trung nhÊt vµo lúc 18 h Điều đợc giải thích thÝch nghi cđa Êu trïng s¸n l¸ phỉi Êu trïng chui vào buổi chiều tối, tơng ứng với thời gian hoạt động kiếm mồi cua suối - vật chủ trung gian Khi đó, cercaria dễ có hội tiếp xúc để xâm nhập vào vật chủ trung gian Còn ban ngày, cua suối thờng ẩn nÊp hang, nÕu cercaria chui vµo thêi gian có hội xâm nhập vào vật chủ trung gian Sau thoát khỏi thể ốc, cercaria không tìm xâm nhập vào vật chủ trung gian thích hợp chúng bị chết vòng 24-48 Nh vậy, kết nghiên cứu rằng, gây nhiễm thực nghiệm sán phổi, cần phải ý theo dõi thờng xuyên Sau nuôi trứng sán phổi 13 ngày (mùa hè) sau 23 ngày (mùa đông), phải thu miracidium vào buổi sáng để gây nhiễm cho ốc - vËt chđ trung gian Sau g©y nhiƠm miracidium cho ốc đến ngày thứ 70 (mùa hè) ngày thứ 80 (mùa đông) trở đi, phải theo dõi ốc thờng xuyên dới kính lúp vào lúc chiều tối (17-19 h) để thu cercaria gây nhiễm cho vật chủ trung gian III KÕt ln Thêi gian ph¸t triĨn trứng sán phổi nhiệt độ mùa hè 25-35oC hay tủ ấm 30oC 13-17 ngày, mùa đông 12-25oC 24-30 ngày, tủ lạnh 12oC kéo dài tới 90-120 ngày Trứng sán thờng nở vào buổi sáng, miracidium sống đợc tối đa môi trờng 24 h Hai loµi èc Oncomelania sp.1 vµ Oncomelania sp.2 vật chủ trung gian thích hợp sán phổi P heterotremus Với mật độ gây nhiễm 20 miracidium/ốc, tỷ lệ nhiễm 100% 80,0% tơng ứng Còn loài ốc Melanoides tuberculatus, Katayama nosophora Katayama sp vật chủ trung gian s¸n l¸ phỉi Thêi gian ph¸t triĨn cđa Êu trùng sán phổi thể ốc vào mùa đông 80-120 ngày qua giai đoạn sporocyt, redia mẹ, redia cercaria Mỗi sporocyt chứa 2-3 redia mẹ, redia mẹ chứa 1-2 redia con, redia chứa 6-12 cercaria Cercaria thờng thoát khỏi ốc vào lóc chiỊu tèi tõ 17-19 h, t−¬ng øng víi thêi gian cua suối hoạt động để kiếm ăn Sức sống cercaria giảm dần chết sau 24-48 Tài liệu tham khảo Cao Văn Viên, 1997: Kỷ yếu Hội nghị khoa học-công nghệ-môi trờng lần thứ V tỉnh miền núi phía Bắc: 81-84 Đặng Ngọc Thanh, Thái Trần Bái, Phạm Văn Miên, 1980: Định loại động vật không xơng sống nớc Bắc Việt Nam: 380439 Nxb KH&KT, Hµ Néi Kino H et al., 1995: Japanese Journal of Parasitology, 44: 470-472 Ph¹m Ngäc Doanh, Đặng Tất Thế, Nguyễn Thị Lê, 1998: Tạp chí Thú y, 5(4): 65-69 Phạm Ngọc Doanh, Nguyễn Thị Lê, Đặng Tất Thế, 2002: Tạp chí Sinh học, 24(1): 1422 Nguyễn Văn Đề cs., 1998: Nghiên cứu bệnh sán sán dây Hội thảo quốc gia phòng chống bệnh giun sán: 41-45 Nguyễn Thị Lê, Đặng Tất Thế, Phạm Ngọc Doanh, 1997: Tạp chí Y dợc, 213(2): 35-39 Nguyễn Thị Lê, Đặng TÊt ThÕ, Ph¹m Ngäc Doanh, 1999: T¹p chÝ Sinh häc, 21(2B): 179-180 Development of the Paragonimus heterotremus eggs and it's larvae stages in the first intermediate host Pham Ngoc Doanh Summary The eggs of the lung fluke Paragonimus heterotremus were cultured in laboratory and experimentally infected to the first intermediate hosts The eggs require 13-17 days in summer or 24-30 days in winter for completing the embryonation to hatch into miracidium The miracidia are collected to expose to snail species (Oncomelania sp.1; Oncomelania sp.2; Melanoides tuberculatus; Katayama nosophora and Katayama sp.) As results, only species Oncomelania sp.1 and Oncomelania sp.2 are susceptible to be infected at very high rate 100% and 80.0%, respectively Within the snail body, the larvae develop through stages: sporocyt, mother redia, daughter redia and cercaria The development time of all stages require 80-120 days The living ability of miracidia and cercaria as well as the time at which cercaria escape from snails are also disscused Ngµy nhËn bµi: 28-2-2003 10 ... b Redia mĐ; c Redia con; d Cercaria Bảng Thời gian phát triển sán phổi qua giai đoạn ấu trùng thể ốc Thời gian Thời gian phát triển giai đoạn ấu trùng (ngày) Sporocyt Redia mẹ Redia Cercaria... tuberculatus, Katayama nosophora Katayama sp vật chủ trung gian cđa s¸n l¸ phỉi Thêi gian ph¸t triển ấu trùng sán phổi thể ốc vào mùa đông 80-120 ngày qua giai đoạn sporocyt, redia mẹ, redia cercaria... th−êng Èn nÊp hang, nÕu cercaria chui vào thời gian có hội xâm nhập vào vật chủ trung gian Sau thoát khỏi thể ốc, cercaria không tìm xâm nhập vào vật chủ trung gian thích hợp chúng bị chết vòng 24-48