Đề tài khảo sát đặc điểm thực vật và mã vạch ADN của cây An xoa (Helicteres hirsute L., Sterculiaceae) nhằm hỗ trợ cho việc định danh loài An xoa phân bố ở Bình Phước.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ MÃ VẠCH ADN CỦA CÂY AN XOA (HELICTERES HIRSUTE L., STERCULIACEAE) Ở BÌNH PHƯỚC, VIỆT NAM Trương Thị Bảy*, Trương Thị Đẹp**, Đỗ Thị Hồng Tươi** TÓMTẮT Mục tiêu: Đề tài khảo sát đặc điểm thực vật mã vạch ADN An xoa (Helicteres hirsute L., Sterculiaceae) nhằm hỗ trợ cho việc định danh lồi An xoa phân bố Bình Phước Phương pháp: Đề tài mô tả đặc điểm hình thái mẫu An xoa thu thập tự nhiên huyện Lộc Ninh, tỉnh Bình Phước Mẫu non sử dụng để phân tích mã mạch ADN dựa vùng gen rbcL ADN lục lạp cloropast ADN (cpDNA) khuyếch đại phản ứng PCR từ ADN toàn phần tách chiết từ mẫu An xoa non Sản phẩm PCR giải trình tự phương pháp Sanger, dùng phần mềm BioEdit 7.0.5 So sánh với trình tự tương ứng cơng bố GenBank phương pháp BLAST để định danh loài dựa mã vạch ADN Kết quả: Quan sát mô tả đặc điểm thực vật, đặc điểm vi phẫu, bột dược liệu thân An xoa Giải trình tự đoạn rbcL mẫu An xoa non thu hái tỉnh Bình Phước cho thấy mẫu có độ tương đồng 100% so với trình tự ADN mẫu đối chứng Helicteres hirsuta L công bố Genbank Kết luận: Kết nghiên cứu cung cấp thông tin đặc điểm thực vật mã vạch ADN loài An xoa tỉnh Bình Phước góp phần cơng tác định danh loài làm nguyên liệu cho nghiên cứu hóa thực vật tác dụng sinh học dược liệu Từ khóa: An xoa, đặc điểm thực vật, mã vạch ADN, rbcL ABSTRACT STUDY ON BOTANICAL CHARACTERISTICS AND DNA BARCODES OF HELICTERES HIRSUTE L., STERCULIACEAE IN BINH PHUOC PROVINCE, VIETNAM Truong Thi Bay, Truong Thi Dep, Do Thi Hong Tuoi * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 670 – 679 Objectives: This work studied on botanical characteristics and DNA barcodes of Helicteres hirsute L., Sterculiaceae to help identification of this plant in Binh Phuoc province Methods: This study described morphological characteristics of H hirsute L collected naturally in Loc Ninh district, Binh Phuoc province Fresh leaf was used to analyze DNA barcodes based on rbcL region of chloroplast DNA Total DNA from leaf were amplified by PCR using rbcL primers DNA products were identified the sequences by Sanger method, using BioEdit 7.0.5 software Comparison to rbcL sequences of control published in GenBank by BLAST will help to identify H hirsuta Results: The study observed, described botanical and microscopic characteristics of H hirsute steam and leaf Results of rbcL sequences of H hirsute leaf collected in Binh Phuoc province showed that its similarity in comparison with H hirsute control published in Genbank is 100% Conclusion: Results of this study provided information about botanical characteristics and DNA barcodes of * Khoa Dược, Trường Cao đẳng Y tế Bình Phước Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS TS Đỗ Thị Hồng Tươi ĐT: 0908683080 ** 670 Email: hongtuoi@ump.edu.vn Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học H hirsute in Binh Phuoc province This could be useful for identify this medicinal plant to research its chemical components as well as biological effects Key words: Helicteres hirsute L., botanical characteristics, DNA barcodes, rbcL Thực vật, Khoa Dược, Đại học Y dược Tp Hồ ĐẶTVẤNĐỀ Chí Minh Vật liệu phân tích mã vạch ADN An xoa (Helicteres hirsuta L.) có nguồn gốc từ mẫu non, tươi thu thập từ An xoa tự Campuchia sử dụng dân gian để nhiên tỉnh Bình Phước điều trị bệnh gan Ở Việt Nam, An xoa Hóa chất tìm thấy khắp tỉnh từ Bắc vào Nam Đệm CTAB (CTAB 2%, Tris-HCl 100 An xoa gọi Dó lơng, dùng làm mM pH 8,0, EDTA 20 mM pH 8,0, NaCl 1,4 M), thuốc chữa ung nhọt; rễ làm thuốc giảm đau, β-mercaptoethanol, cloroform : isoamyl alcohol tiêu độc, kiết lị, cảm cúm, đậu, sởi, sốt rét rắn (24:1), enzym Rnase agarose từ Bio Basic, độc cắn; vỏ thân dùng dệt bao tải(8) Gần đây, An Canada; isopropanol, ethanol 70%, PCR Mix xoa người Việt Nam truyền miệng NEXpro, Korea; thuốc nhuộm GelRed, đệm TAE “thần dược” đối bệnh gan, đặc biệt ung 1X, loading dye 6x, Ladder kb plus, TE pH 8,0, thư gan nhờ khả ức chế phân chia tế nước cất lần vô trùng bào ung thư gan Vì vậy, An xoa bị khai Phương pháp nghiên cứu thác riết làm cho nguồn dược liệu tự nhiên ngày cạn kiệt Việc định danh An Khảo sát đặc điểm hình thái xoa gặp khó khăn có tương đồng Mơ tả phân tích đặc điểm hình thái thân, cao đặc điểm hình thái thân, với lá, hoa, loài thuộc chi Helicteres H angustifolia, H Khảo sát đặc điểm vi phẫu hirsuta, H viscida, H glabriuscula, H lanceolata, H Cắt thân, thành mảnh mỏng, nhuộm isora Để khắc phục nhược điểm việc định làm tiêu vi phẫu Quan sát, mơ tả chụp danh dựa đặc điểm hình thái, phương pháp ảnh đặc điểm vi phẫu qua kính hiển vi định danh dựa đặc điểm di truyền Khảo sát đặc điểm vi học nghiên cứu phát triển Trên thực vật, mã vạch ADN phương pháp phổ biến dựa đoạn ADN ngắn, bảo tồn, thay đổi nhiều tiến hóa, thường trình tự thuộc hệ gen lục lạp matK, rbcL, rpoC1, Hiện nay, Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu đặc điểm mã vạch ADN An xoa Do đó, đề tài tiến hành khảo sát đặc điểm thực vật mã vạch ADN An xoa phân bố tỉnh Bình Phước nhằm hỗ trợ định danh lồi dược liệu Thân, phơi khô, nghiền mịn làm tiêu bột Quan sát, mô tả chụp ảnh đặc điểm qua kính hiển vi ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU theo phương pháp Doyle Doyle (1990)(1) Vật liệu Vật liệu khảo sát đặc điểm thực vật mẫu An xoa thu thập tự nhiên huyện Lộc Ninh, tỉnh Bình Phước vào tháng 910/2017 Tiêu mẫu lưu Bộ môn Chuyên Đề Dược Khảo sát đặc điểm mã vạch ADN Thực phản ứng PCR khuyếch đại vùng trình tự rbcL ADN lục lạp cloropast ADN (cpDNA) mẫu An xoa Tách chiết ADN tồn phần ADN tồn phần từ mơ tách chiết tóm tắt sau: Nghiền non, phá màng tế bào đệm CTAB 2X, ủ 65 oC 15 phút Bổ sung CTAB, trộn đều, ly tâm 13000 rpm 10 phút, loại cắn tế bào Chiết ADN β-mercaptoethanol 65 oC 60 phút, thêm 500 µl cloroform, trộn đều, 671 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 ly tâm 13000 rpm 10 phút Rửa ADN Phân tích số liệu cloroform (2 lần, ly tâm 13000 rpm 10 phút/lần) 13000 rpm 10 phút Thu tủa ADN, rửa lần Trọng lượng phân tử tính tốn phần mềm GelAnalyzer(4) Kết giải trình tự lưu trữ dạng FASTA phân tích phần mềm BioEdit phiên 7.0.5(3) Trình tự so sánh với trình tự tương ứng công bố GenBank phương pháp BLAST, từ kết luận mã vạch phân tử để định danh lồi ethanol 70%, làm khơ giờ, hòa tan KẾTQUẢ Hút lấy 350 µl lớp dịch bên trên, thêm µl RNase, lắc đều, ủ 37 oC Sau đó, thêm CTAB 2X 500 µl cloroform, ly tâm 13000 rpm 10 phút Hút 400 µl lớp dịch, thêm 400 µl isopropanol, trộn đều, ủ -20 oC 30 phút, ly tâm 30 µl TE bảo quản -20 oC Kiểm tra ADN Bằng cách điện di gel agarose 1% TAE 1X Trộn mẫu với µl loading dye 6X, µl ADN, µl GelRed, µl nước cất, bơm mẫu vào giếng, chạy điện di 85V 30 phút Sau đó, chụp ảnh với máy đọc gel UV Khuếch đại AND Sử dụng PCR Kit (NEXproTM Diagnostics) gồm 10X e-Taq Buffer, 10 mM dNTP, e-Taq DNA polymerase, thêm nước cất, cặp mồi rbcL ADN để tích 50 µl Trộn đều, cho vào máy GeneAmp PCR System 2700, thực PCR với chu trình nhiệt sau: phút - 95 oC; (30 giây - 95 oC, 30 giây - 60 oC, 30 giây - 72 oC) x 35 chu kỳ; phút - 72 oC, sau giữ 10 oC 20 phút Sản phẩm PCR điện di kiểm tra gel agarose 1% Bảng 1: Trình tự cặp mồi rbcL sử dụng phản ứng PCR Tên Trình tự (5’-3’) Tm Tác giả o mồi ( C) rbcL.F ATGTCACCACAAACAGAGACT Levin et al., (5) AAAGC 2003 60 Fazekas et rbcL.R GTAAAATCAAGTCCACCRCG (2) al., 2008 Tinh sản phẩm PCR giải trình tự đoạn AND Sản phẩm PCR tinh kit Wizard SV Gel PCR Clean-up System (Promega), xác định trình tự phường pháp Sanger (Sanger et al., 1977) Công ty Phù Sa Biochem, TP Vĩnh Long, tỉnh Vĩnh Long(6) 672 Đặc điểm hình thái Cây bụi cao 1-3 m, nhánh hình trụ, có lơng Lá: Lá hình trái xoan, dài - 17 cm, rộng 2,5 - 7,5 cm Gốc cụt hay hình tim, đầu thon thành mũi nhọn Mép có không Mặt màu trắng, hai măt phủ đầy lơng hình sao; gân gốc 5, cuống dài 0,8 - cm, kèm hình dải, có lông, dễ rụng Hoa: Cụm hoa ngắn, đơn hay xếp đôi nách Hoa màu hồng hay đỏ, cuống hoa có khớp có bắc dễ rụng, đài hình ống phủ lơng hình sao, màu đo đỏ, chia Cánh hoa 5, cuống nhị có vân đỏ, nhị 10, nhị lép nhị, bầu có nhiều gợn, chứa 25-30 màu nỗn Quả: Quả nang hình trụ nhọn đầy lơng xám, hạt nhiều, hình lăng trụ Đặc điểm vi phẫu Đặc điểm vi phẫu thân Mặt cắt ngang gần tròn, biểu bì lớp tế bào có nhiều lông che chở đa bào, phân - nhánh Biểu bì lồi chỗ chân lơng, có nhiều lơng che chở đa bào hình sao, lơng tiết chân đơn bào, đầu đa bào Bần thân già - lớp tế bào hình chữ nhật, bên lục bì gồm - lớp tế bào xếp xuyên tâm Bên biểu bì – lớp mơ dày góc liên tục, tế bào hình đa giác Mô mềm vỏ đạo, – lớp tế bào mơ mềm hình bầu dục, nằm ngang, kích thước khơng đều, chứa nhiều tinh thể calci oxalat hình cầu gai Trụ bì có - lớp tế bào hóa mơ cứng rải rác thành cụm Libe xếp thành cụm bên trụ bì, chứa nhiều tinh thể calci oxalat hình cầu gai Sợi libe kết thành tầng gồm - lớp tế bào hóa mô cứng không Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 liên tục Libe gồm - lớp tế bào hình chữ nhật, rải rác có tinh thể calci oxalat hình cầu gai Gỗ liên tục gồm 15 - 18 lớp tế bào mô mềm gỗ xếp xuyên tâm Mạch gỗ to, rải rác, hình tròn đa giác Gỗ bên gỗ xếp thành Nghiên cứu Y học cụm - bó, phân hóa ly tâm, mơ mềm gỗ tế bào hình đa giác Mơ mềm tủy đặc, hình đa giác, rải rác tinh thể calci oxalat hình cầu gai túi tiết Thân già mơ mềm tủy chứa nhiều tinh bột Hình 1: Cây An xoa Hình 2: Vi phẫu thân non (trái) thân già (phải) Chuyên Đề Dược 673 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Tinh thể calci oxalat hình cầu gai Mơ dày góc Lơng che chở đa bàohình Mơ mềm vỏ Hình : Đặc thể vi phẫu thân An xoa mềm vỏ mô mềm đạo, tế bào hình đa giác, gần Đặc điểm vi phẫu cuống Mặt cắt ngang hình trứng Biểu bì mang tròn, kích thước khơng đều, có nhiều túi tiết nhiều lông che chở phân nhánh thân non tinh thể calci oxalat hình cầu gai Trụ bì hóa mơ nhiều lơng tiết chân đơn bào, đầu đa bào Bên cứng thành cụm - lớp tế bào Libe tập biểu bì mơ dày góc liên tục gồm - lớp trung bên đám trụ bì Gỗ hình vòng tròn tế bào, nhiều phần lồi cuống Mơ Bên mơ mềm tủy có nhiều khuyết Hình 4: Vi phẫu cuống An xoa 674 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Đặc điểm vi phẫu Gân lồi hai mặt Biểu bì biểu bì mang lông che chở phân nhánh lông tiết Bên biểu bì mơ dày góc, phần biểu bì mơ dày nhiều lớp tế bào biểu bì Mô mềm đạo, nhiều túi tiết tinh thể Nghiên cứu Y học calci oxalat hình cầu gai Trụ bì hóa mơ cứng thành cụm 3-4 lớp tế bào Hệ thống mơ dẫn gồm libe ngồi, gỗ xếp thành vòng bán nguyệt Mạch gỗ xếp xuyên tâm, mạch to ngoài, mạch nhỏ Bên mơ mềm tủy Hình 5: Vi phẫu phiến An xoa Hình 6: Đặc điểm vi phẫu An xoa Đặc điểm vi phẫu hoa Hoa tự nách lá, mọc thành cụm bơng, bơng có – 12 hoa mọc thành dãy trục mang hoa Cuống hoa hình trụ, dài - mm, đường kính khoảng mm, màu tím nhạt, có nhiều lơng Lá bắc hình vảy nhỏ, dài khoảng - mm, màu xanh tím, có nhiều lơng, rụng sớm Lá bắc giống bắc, mọc phía đối diện bắc Định hướng: Cánh hoa phía trước, đài phía sau Đài hoa: đài dính thành ống đài hình ống, chia thùy hình tam giác dài khoảng mm Ống đài dài khoảng 1,5 cm, màu tím, có nhiều lơng che chở hình Tiền khai đài van Chuyên Đề Dược Cánh hoa: cánh hoa rời, không cánh to, rộng khoảng mm, có phiến màu tím, phần gân phớt màu vàng, có lơng, quặp lại phía sau, cánh hoa nhỏ hơn, rộng khoảng 1,5 - cm, phần gần phiến chia thùy màu trắng Tiền khai hoa vặn Bộ nhị có hùng thư đài dài 1,5 cm, màu trắng, mang 10 nhị rời, nhị trắng, dài mm Bao phấn ơ, hình bầu dục, nứt dọc, hướng ngoại Hạt phấn màu trắng, rời, hình khối tam giác Bộ nhụy: Bầu thượng, nỗn, bầu ơ, nỗn, đính nỗn trung trụ Bầu hình bầu dục, nhọn phần đỉnh, màu xanh, mang nhiều lông màu hồng vòi nhụy màu trắng đính đỉnh bầu, dài khoảng 1,5 mm, đầu nhụy trắng, chia gờ nhỏ Có đĩa mật đế hoa 675 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Phiến cánh to (trên) nhỏ (dưới) Hùng thư đài Hạt phấn Bầu nhụy Quả cắt ngang Hình 7: Cánh, nhị nhụy hoa An xoa tinh thể calci oxalat hình cầu gai Mảnh mơ Đặc điểm bột dược liệu mềm có túi tiết Lơng che chở đơn bào Bột đa bào hình Lông tiết chân đơn bào, Bột màu xanh, nhiều xơ, không mùi, vị đầu đa bào Sợi xếp thành bó Tinh thể calci đắng Thành phần gồm mảnh biểu bì dưới, tế oxalat cầu gai đường kính 8-30 µm Mảnh bào hình đa giác, vách uốn lượn, mang mạch xoắn, mạch mạng nhiều lỗ khí kiểu dị bào Mơ mềm giậu hình ngang, tế bào hình đa giác chứa tinh bột Lơng che chở đa bào hình Lông che chở đơn bào Lông tiết Mô mềm chứa calci oxalat hình cầu gai Mạch điểm Biểu bì diệp lục hình giậu Lỗ khí nhiều biểu bì Lỗ khí Biểu bì hình đa giác (nhìn từ xuống) Mạch vòng Hình 8: Đặc điểm bột An xoa cầu gai, sợi mang tinh thể calci oxalat hình cầu Bột thân gai, mảnh bần, mạch vòng, mạch xoắn, mạch Bột thân màu nâu, nhiều xơ, không mùi điểm, mạch vạch Thành phần gồm lông che chở đa bào hình sao, mơ mềm chứa tinh thể calci oxalat hình 676 Chun Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Lông che chở đa bào hình Mơ mềm chứa tinh thể calci oxalat hình cầu gai Sợi Sợi mang tinh thể calci oxalat hình cầu gai Mảnh bần Mạch vòng, mạch xoắn Mạch vạch Mảnh mạch điểm Hình 9: Đặc điểm bột thân An xoa Đặc điểm mã vạch ADN đoạn rbcL lồi Helicteres hirsuta L cơng Hình ảnh điện di cho thấy ADN bố Genbank (https:// www.ncbi.nlm.- An xoa non nguyên vẹn, không bị đứt gãy, nih.gov/nuccore/AB925611.1) mẫu đối chứng, đạt yêu cầu cho thí nghiệm Cặp kết trình bày Hình 11 mồi rbcL sử dụng thiết kế dựa Mức độ tương đồng so sánh trình tự trình tự báo cáo trước giúp khuếch đại đoạn rbcL mẫu An xoa Bình Phước thành cơng đoạn rbcL, sản phẩm PCR có với mẫu đối chứng Helicteres hirsuta L [mã kích thước 600 bp (Hình 10) số AB925611.1 – tác giả Toyama et al., Trình tự đoạn rbcL mẫu An xoa xử lý phần mềm BioEdit 7.0.5 So với trình tự 2015(7)] cơng bố Genbank phương pháp BLAST 100% Hình 10: Kết điện di ADN mẫu non (trái) sản phẩm PCR đoạn rbcL (phải) Chuyên Đề Dược 677 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Hình 11: Kết so sánh trình tự mẫu An xoa (Query) mẫu đối chứng (Sbjct) trình tự thiết kế dựa trình tự tham BÀNLUẬN khảo từ báo cáo trước đây(2,5) Kết giải Việc định danh nguyên liệu làm thuốc trình tự đoạn rbcL từ mẫu An xoa non thu hái u cầu đóng vai trò quan trọng tỉnh Bình Phước cho thấy dược liệu khảo sát nghiên cứu dược liệu Kiểm nghiệm có độ tương đồng 100% so với trình tự đoạn dược liệu làm thuốc, tránh sai sót nhầm lẫn rbcL mẫu đối chứng Helicteres hirsuta L nguồn nguyên liệu sử dụng góp phần quan nhóm tác giả Toyama cộng công bố trọng ngăn ngừa pha trộn dược liệu giả GenBank năm 2015(7) Từ gợi ý kết thuốc từ dược liệu Hiện nay, việc định danh phân tích mã vạch ADN đoạn gen rbcL có dược liệu dựa đặc điểm thực vật gặp nhiều thể sử dụng để phân biệt lồi An xoa với lồi khó khăn, lồi có tương khác thuộc chi Helicteres phân bố nhiều đồng cao đặc điểm hình thái Vì vậy, phương tỉnh Việt Nam pháp phân tích đặc điểm di truyền dựa mã KẾTLUẬN vạch ADN ngày quan tâm nghiên cứu, ứng dụng định danh thực vật Đề tài quan sát mô tả đặc điểm thực nói chung dược liệu nói riêng vật, đặc điểm vi phẫu, bột dược liệu thân Đối với An xoa, sử dụng người dân huyện Lộc Ninh, tỉnh Bình Phước trị bệnh gan, kể ung thư gan, đề tài sử dụng đoạn rbcL khuếch đại với cặp đoạn mồi có 678 An xoa Giải trình tự đoạn rbcL mẫu An xoa non thu hái tỉnh Bình Phước cho thấy mẫu có độ tương đồng 100% so với trình tự ADN mẫu đối chứng Helicteres hirsuta L công bố Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Genbank Kết thu góp phần cơng tác định danh lồi làm nguyên liệu cho nghiên cứu hóa thực vật tác dụng sinh học An xoa TÀILIỆUTHAMKHẢO Doyle JJ, Doyle JL (1990) Isolation of plant DNA from fresh tissue Focus, 12: pp.13-15 Fazekas AJ, Burgess KS, Kesanakurti PR, et al (2008) Multiple multilocus DNA barcodes from the plastid genome discriminate plant species equally well PLOS One, 7: pp.e2802 Hall TA (1999) BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT Nucl Acids Symp Ser., 41: pp.95-98 Istvan L (2010) GelAnalyzer version 2010, available at: http://www.gelanalyzer.com Levin RA, Wagner WL, Hoch PC, et al (2003) Family-level relationships of onagraceae based on chloroplast rbcL and ndhF data American Journal of Botany, 90: pp.107-115 Chuyên Đề Dược Nghiên cứu Y học Sanger S, Nicklen S, Coulson AR (1977) DNA sequencing with chain-terminating inhibitors Proc Natl Acad Sci USA, 74(12): pp.5463–5467 Toyama H, Kajisa T, Tagane S, Mase K, Chhang P, Samreth V, Ma V, Sokh H, Ichihashi R, Onoda Y, Mizoue N, Yahara T (2015) Effects of logging and recruitment on community phylogenetic structure in 32 permanent forest plots of Kampong Thom, Cambodia Philos Trans R Soc Lond., B, Biol Sci., 370 (1662) Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, 2, Nhà xuất Y học, tr 1011-1013 Ngày nhận báo: 18/10/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2018 Ngày báo đăng: 15/03/2019 679 ... có cơng trình nghiên cứu đặc điểm mã vạch ADN An xoa Do đó, đề tài tiến hành khảo sát đặc điểm thực vật mã vạch ADN An xoa phân bố tỉnh Bình Phước nhằm hỗ trợ định danh lồi dược liệu Thân, phơi... phân tích đặc điểm di truyền dựa mã KẾTLUẬN vạch ADN ngày quan tâm nghiên cứu, ứng dụng định danh thực vật Đề tài quan sát mô tả đặc điểm thực nói chung dược liệu nói riêng vật, đặc điểm vi phẫu,... nhược điểm việc định làm tiêu vi phẫu Quan sát, mơ tả chụp danh dựa đặc điểm hình thái, phương pháp ảnh đặc điểm vi phẫu qua kính hiển vi định danh dựa đặc điểm di truyền Khảo sát đặc điểm vi