Khảo sát đặc điểm thực vật học và thành phần hóa học của cây mã đề plantago major l plantaginaceae

Phản ứng với thuốc thử chung alkaloid Bốc hơi trên chén sứ đến cắn.. Cho tác dụng với kiềm, soi trong UV 365 Phản ứng Borntrager Bốc hơi đến cắn hoà tan trong cồn.. làm phản ứng cya

MỤC LỤC

CHƯƠNG 1

CHƯƠNG 1 MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2

1 THỰC VẬT HỌC 2

1.1 Tên gọi 2

1.2 Nguồn gốc xuất xứ 2

1.3 Vị trí phân loại 2

1.4 Mô tả thực vật 2

1.5 Phân bố và sinh thái 3

1.6 Bộ phận dùng 3

1.7 Thu hái, chế biến 4

2 HÓA HỌC 4

2.1 Thành phần hóa học 4

2.2 Định tính (theo Dược điển Việt Nam IV) 6

3 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ 6

4 CÔNG DỤNG 6

4.1 Y học dân gian 6

4.2 Y học hiện đại 6

4.3 Bài thuốc 6

5 TÍNH VỊ, QUY KINH 7

6 MỘT SỐ SẢN PHẨM LƯU HÀNH 8

Mẫu dược liệu được thu hái tại Phường Tân Hưng, Huyện Thốt Nốt, Thành phố Cần Thơ vào ngày 12/01/2018 10

1 THỰC VẬT HỌC 10

1.1 Mô tả đặc điểm hình thái 10

1.2 Phương pháp vi học 10

2 XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM DƯỢC LIỆU 12

3 HÓA HỌC 13

3.1 Phân tích sơ bộ 13

3.2 Sắc ký lớp mỏng 20

CHƯƠNG IV KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 21

1 THỰC VẬT HỌC 21

1.1 Mô tả lá 21

1.2 Vi phẫu lá 21

1.3 Bột dược liệu 25

2 XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM 28

3 PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HÓA THỰC VẬT 29

3.1 Phân tích sơ bộ 29

3.2 Tính phát quang của bột dược liệu 34

3.3 Định tính bằng sắc ký lớp mỏng 35

CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37

TIÊU CHUẨN ĐỀ NGHỊ 38

Nhận xét 40

TÀI LIỆU THAM KHẢO 42

1 KẾT LUẬN

2 KIẾN NGHỊ

DANH MỤC BẢNG BIỂU ĐỒ

Bảng 1 Axit béo phân lập từ P.major

Bảng 2 Xác định độ ẩm của dược liệu Mã đề 30Bảng 3 Tóm tắt phân tích sơ bộ thành phần hoá thực vật của dược liệu 31

DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ

Hình 1 Sơ đồ phương pháp nhuộm kép đỏ carmin – lục iod 12Hình 2 Cân hồng ngoại AND MX50 13Hình 3 Sơ đồ quy trình chiết dược liệu 15

CHƯƠNG 1 MỞ ĐẦU

Ngày nay, khi chất lượng cuộc sống con người ngày càng được nâng cao về vậtchất lẫn tinh thần thì nhu cầu chăm sóc sức khỏe ngày càng được chú trọng Để đápứng nhu cầu đó, các loại thuốc tân dược không ngừng ra đời và đem lại hiệu quả điềutrị tích cực Tuy nhiên, bên cạnh những lợi ích mang lại, thuốc tân dược cũng có một

số tác dụng phụ không mong muốn ảnh hưởng đến sức khỏe Vì thế, cùng với xuhướng hiện nay là “Trở về với thiên nhiên” thì việc tìm ra các loại thuốc chữa bệnh cónguồn gốc từ thảo dược ngày càng được quan tâm Việc nghiên cứu này bắt đầu từkhảo sát đặc điểm thực vật học, thành phần hóa học… đến việc xác định những tácdụng dược lý sẽ góp phần làm phong phú hơn nguồn dược phẩm trong và ngoài nước

Mã đề là loài cây mọc hoang và được trồng phổ biến ở nhiều nơi trên khắpnước ta Đây là một dược liệu phổ biến với nhiều tác dụng dược lý có giá trị: lợi tiểu,chữa ho, kháng sinh, chữa lỵ cấp và mạn tính Do đó, các vị thuốc từ cây Mã đề đãđược quan tâm nghiên cứu và được tiêu chuẩn hoá trong Dược điển Việt Nam

Hiện nay, mặc dù cây Mã đề đã được biết nhiều cả về thành phần hoá học vàhoạt tính sinh học, song nó vẫn đang thu hút được sự quan tâm của các nhà nghiên cứutrên thế giới bởi những ưu điểm vượt trội của nó cần được khai thác sâu hơn Vì vậy,để góp phần phát triển dược liệu Mã đề (đặc biệt với bộ phận dùng là lá), chúng tôitiến hành tiểu luận: “Khảo sát đặc điểm thực vật học và thành phần hóa học của cây

Mã đề - Plantago major L Plantaginaceae”.

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1 THỰC VẬT HỌC

1.1 Tên gọi

Tên Việt Nam: Mã đề

Tên khác: Xa tiền, bông mã đề, mã đề thảo, nhã én dứt (Thái)

Tên khoa học: Plantago major Linnaeus.

Mã đề là cây thân thảo, sống lâu năm, thân ngắn

Lá: mọc thành cụm ở gốc, cuống dài, phiến lá hình thìa hay hình trứng, có gândọc theo sống lá và đồng quy ở ngọn và gốc lá

Hoa: mọc thành bông có cán dài, xuất phát từ kẻ lá Hoa đều lưỡng tính, đài 4xếp chéo, hơi dính nhau ở gốc Tràng màu nâu tồn tại, gồm 4 thuỳ nằm xen kẽ giữa các

lá đài Nhị có 4 chỉ nhị mảnh, dài, 2 lá noãn chứa nhiều tiểu noãn

Hoa thức:

Hoa đồ:

Quả: quả hộp, bên trong chứa nhiều hạt nâu đen bóng

1.5 Phân bố và sinh thái

Mã đề mọc hoang hay được trồng nhiều nơi trên đất nước ta, thường trồng vàomùa xuân hay mùa thu nhưng tốt nhất vào mùa thu Mã đề ưa đất tốt, ẩm vừa phải chocây rất to

Ngoài ra, Mã đề còn được trồng ở Ấn Độ, Nêpan, Mianma, Trung Quốc, TriềuTiên, Nhật Bản, Lào, Campuchia, Thái Lan

1.6 Bộ phận dùng

Toàn cây trên mặt đất gọi là xa tiền thảo ( Herba Plantaginis), hạt gọi là xa tiền

tử (Semen Plataginis).

K4C(4)A4G(2)

1.7 Thu hái, chế biến

Thu hái: lá thu hái quanh năm, có thể dùng tươi hay khô Hạt thu hái vào tháng

7 – 8 Khi quả chín, thu hái toàn cây, đem về phơi sấy khô, loại bỏ tạp chất, dập và giữlấy hạt, rây qua rây và bảo quản

nhầy từ P.major dưới dạng tinh khiết với tên “Plantasan” hiệu suất 6,8% Thành phần

cấu tạo của Platasan gồm có D-xylose, L-arabinose, acid D-galacturonic, L-rhamnose

và D-galactose theo tỉ lệ tương ứng là 15:3:4:2:0,4

2.1.2 Lipid

Một số axit béo được phân lập từ P.major được hệ thống lại ở bảng dưới đây:

Bảng 1 Axit béo phân lập từ P.major

S

2.1.3 Caffeic và dẫn xuất

Từ dịch chiết methanol P.major đã phân lập được axit caffeic và một số dẫn xuất

của nó

O

O

OH O

N N

N N O

Một số flavonoid đã phân lập từ P.major bao gồm: apigenin, quercetin,

scutellarein, baicalein, lutein 7-glucosit, hispidulin 7-glucuronit, luteolin 7-diglucosit,apigenin 7-glucosit, nepetin 7-glucosit, luteolin 6-hydroxy 4’-methoxy 7-galactosit,plantaginin, homoplantaginin,…Trong đó, các hoạt chất như planaginin, homoplantaginin

và luteolin 7-glucosit có tác dụng ức chế HIV- reverse transcriptaza (in vitro)

Một số triterpenoid phân lập được từ lá P.major bao gồm: axit oleanolic, axit

ursolic, 18 β-glycyrrhetinic axit và sitosterol Axit ursolic ức chế cyclooxygenase-2 và

cyclooxygenase-1 là các enzym xúc tác sinh tổng hợp prostaglandin (in vitro) Do đó hoạt

chất này có tác dụng lợi tiểu, chống ung thư, chống viêm loét và xơ hoá, ức chế hoạtđộng của virus HIV (kìm hãm HIV-1 protease) Axit oleanolic có tác dụng sinh học:chống viêm khớp, chống độc, chống rối loạn gan và tăng cường hệ miễn dịch của cơ thể

O H

CH3 CH3

CH3

CH3

O OH

C

H3

axit oleanolic

O H

CH3 CH3

CH3

CH3

O OH

2.2 Định tính (theo Dược điển Việt Nam IV)

A Lấy 1 g bột dược liệu, tiến hành vi thăng hoa, soi kính hiển vi thấy có tinhthể hình kim

B Lấy 0,5 g bột dược liệu, thêm 5 ml nước, đun sôi 1 phút rồi để nguội, lọc.Lấy 1 giọt dịch lọc nhỏ lên phiến kính, hơ nhẹ trên đèn cồn cho khô, đem soi kính hiển

vi thấy có tinh thể hình vuông và hình chữ nhật

C Dưới ánh sáng tử ngoại, bột dược liệu phát quang màu nâu

ức chế trực khuẩn lỵ

4.3 Bài thuốc

1) Chữa lỵ: Mã đề, mơ lông, cỏ sẹo gà, mỗi vị 20 g, sắc uống

2) Chữa tiểu khó ở người già: Hạt Mã đề 1 chén (dung tích 50 ml), bỏ vào túi,sắc lấy nước Dùng nước này nấu cháo lúa kê mà ăn.

3) Chữa đái ra máu: Lá Mã đề, cỏ ích mẫu, giã vắt lấy nước cốt uống

4) Chữa sưng dương vật: Hạt Mã đề tán nhỏ, mỗi lần uống 1 thìa, ngày 2 lần.5) Chữa khó tiểu ở trẻ em: Mã đề giã vắt lấy nước, hoà với 1 ít mật ong, uống.6) Chữa đau mắt: Mã đề giã nát lấy nước cốt, hoà với nước măng tre vòi, lọctrong, nhỏ mắt

7) Thuốc lợi tiểu: Hạt Mã đề 10 g , cam thảo 2 g, nước 600 ml Sắc còn 200

ml Chia 3 lần uống trong ngày

8) Chữa ho đờm: Hạt Mã đề 10 g, cam thảo 2 g, nước 600 ml Sắc còn 200 ml.Chia 3 lần uống trong ngày Có thể thay cam thảo bằng đường

9) Chữa phù thũng và tiêu chảy kèm sốt, ho và nôn: Hạt Mã đề, ý dĩ sao đềubằng nhau Tán bột, uống mỗi lần 10 g, ngày dùng 30 g

10) Chữa tiêu chảy: Mã đề tươi 1-2 nắm, rau má 1 nắm, cỏ nhọ nồi (hay lá phènđen) 1 nắm Sắc đặc, chia làm nhiều lần uống

11) Chữa sốt xuất huyết: Mã đề 40 g, cỏ nhọ nồi 40 g, rau má (hoặc cát căn) 40

g, rau sam 40 g, kim ngân 30 g, hoa hoè 10 g, thảo huyết minh 10 g Sắc với

300 ml nước, lấy 100 ml nước đầu uống, sau đó sắc nước thứ 2 và thứ 3,uống tiếp trong ngày

12) Chữa bỏng: Nước sắc Mã đề đậm đặc 100% (100 ml = 100 g mã đề khô),trộn điều với lanolin 50 g, dầu parafin 50 g Bôi thhuốc mỡ lên vết bỏng rồibăng lại

13) Chữa giai đoạn đầu của bệnh lao phổi: Hạt Mã đề 10 g, đảng sâm 16 g, sơn

dược 15 g, ý dĩ 10 g, mạch môn 10 g, hạt mơ Trung Quốc (Prunus mume)

10 g, cam thảo 3 g Sắc với 600 ml nước, còn lại 200 ml Chia 2 - 3 lần uốngtrong ngày

14) Chữa đái tháo đường: Hạt Mã đề 6 g, sơn dược 15,5 g, sinh địa 15,5 g, phụclinh 15,5 g, phụ tử 15,5 g, sơn thù du 10 g, trạch tả 10 g, quế 10 g, ngưu tất

10 g, mẫu đơn bì 6 g Làm thanh viên 2,5 g, mỗi lần uống 4 viên, ngày uống

2 lần Hoặc sắc 800 ml nước, còn 450 ml, uống 150 ml, ngày 3 lần

15) Chữa viêm gan mạn tính: Mã đề 12 g, nhân trần 20 g, đảng sâm, ý dĩ mỗithứ 16 g , bạch truật, phục linh, trạch tả, mỗi vị 12 g, trư linh 8 g Sắc uốngmỗi ngày 1 thang

5 TÍNH VỊ, QUY KINH

Cam, hãn Vào các kinh can, phế, thận, tiểu trường, bàng quang

6 MỘT SỐ SẢN PHẨM LƯU HÀNH

Cốm Kanguru Fiber Kid

Cốm Kanguru Fiber Kid của công ty cổ phần dược phẩm Amigo Việt Nam số

18 Miếu Đầm, phường Mễ Trì, quận Nam Từ Liêm, Hà Nội Sản phẩm chứa chất xơhòa tan được chiết xuất từ vỏ hạt Mã đề và bột rau cải xoong kết hợp bổ sung vitaminnhóm B, tạo thành công thức hoàn hảo giúp bổ sung chất xơ, phòng chống táo bón chotrẻ Chất xơ hòa tan không bị hấp thu, khi vào đến đường ruột sẽ tạo thành các thểnhầy, giúp phân mềm và xốp hơn, đồng thời giúp tăng thể tích phân, kích thích tạo nhuđộng ruột đẩy phân ra ngoài

Thành phần:

− Vitafiber (Chiết xuất vỏ mã đề) 1500 mg

− Bột rau cải xoong 300 mg

− Vitamin B1 200 mcg

− Vitamin B3 3 mg;

− Hương vị táo, Glucoso, Lactose vừa đủ 3 g

Thực phẩm chức năng OVATA

Thực phẩm chức năng "Thảo dược Ovata" chiết xuất từ vỏ hạt Mã đề chứa 70%chất xơ hòa tan, 30% chất nhầy và không bị hấp thu bởi cơ thể Khi gặp nước trongđường tiêu hóa, thực phẩm chức năng "Thảo dược Ovata" sẽ trương nở giúp giữ nước,

tăng thể tích và làm mềm phân, tạo nhuận trường khối kích thích nhu động ruột, giúpphân trơn, tránh cọ xát thành ruột, giảm đau rát và tránh xuất huyết hậu môn, đẩy chấtthải ra ngoài nhanh chóng và dễ dàng.

Công dụng:

− Điều trị táo bón, trĩ

− Hỗ trợ tiêu hoá

Thực phẩm chức năng BOGINUT

Thành phần 1 viên:

Bột anh đào đen 10:1 (Black cherry fruit), lá húng tây (Thyme leaf), hạt cần tây(celery seed), lá bạc hà 15:1 (juniper berry), chiết xuất hạt nhãn (longan), chiết xuấtcây bách xù (Juniper berry), chiết xuất ngưu bàng tử (Artium lappa), chiết xuất trạch tả(Alisma plantago-aquatica), Hạt Mã đề (Semen plantaginis), chiết xuất gừng (Ginger),chiết xuất rễ cây tầm ma (Sting nettle Root), chiết xuất kim sa (Arnica montana).Công dụng:

- Ức chế sự hình thành axit uric trong máu, lợi tiểu, tăng đào thải tinh thể axituric ở quanh khớp xương, do đó làm giảm nồng độ axit uric trong máu

- Chống oxy hóa mạnh bảo vệ các khớp khỏi bị tổn thương bởi các gốc tự do cóhại

- Giúp chống viêm, giảm đau nhức các khớp xương, hỗ trợ điều trị bệnh gout

- Tăng cường chức năng của thận, bàng quang, sức khỏe đường tiết niệu

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Mẫu dược liệu được thu hái tại Phường Tân Hưng, Huyện Thốt Nốt, Thành phốCần Thơ vào ngày 12/01/2018

1 THỰC VẬT HỌC

1.1 Mô tả đặc điểm hình thái

Tiến hành quan sát trên thực địa với mẫu tươi, chú trọng đến các điểm đặc trưngnhư hình dạng, kích thước, màu sắc, mùi vị… Tất cả các chi tiết được chụp lại bằngmáy ảnh kỹ thuật số

1.2 Phương pháp vi học

1.2.1 Khảo sát vi phẫu dược liệu

Cấu tạo giải phẫu của các cơ quan thực vật là một đặc điểm quan trọng trong kiểmnghiệm dược liệu Hình dạng và các cấu trúc vi học của vách tế bào có ý nghĩa quantrọng nhất trong khảo sát vi học Vì vậy khi quan sát các mẫu, người ta thường loại bỏ

tế bào chất, nhuộm màu màng tế bào để việc quan sát được dễ dàng hơn Tiêu bản viphẫu thực vật được chuẩn bị qua các giai đoạn:

- Chọn mẫu: chọn mẫu tươi Mẫu được chọn phải chính xác, đại diện, không

chọn mẫu quá già hoặc quá non

- Cắt vi phẫu: dùng lưỡi lam để cắt mẫu thành các lát thật mỏng Nếu mẫu có

kích thước nhỏ thì cắt cả thiết diện, kích thước to thì cắt phần đại diện Mẫu cắt

là lá thường lấy đoạn 1/3 gân giữa kể từ nơi tiếp giáp với cuống và một phầnphiến lá ở hai bên Nếu là thân thường cắt ở lóng Nếu là rễ, thường cắt ở phầngiữa, không quá non cũng không quá già

Có 2 loại phẫu thức được dùng trong kiểm nghiệm dược liệu :

Phẫu thức ngang: thông dụng nhất Lát cắt nằm trong mặt phẳng vuông góc với

trục của mẫu cắt

Phẫu thức dọc: thường để quan sát ống tiết hay ống nhựa mủ Lát cắt nằm trong

mặt phẳng song song với trục mẫu cắt Lát cắt có thể đi qua trục tâm (cắt xuyên tâm)hay song song với trục tâm (cắt tiếp tuyến)

- Nhuộm vi phẫu: dùng phương pháp nhuộm kép đỏ carmin – lục iod Vi phẫu

sau khi nhuộm xong có thể bảo quản trong nước cất hay dung dịch glycerin30% Phương pháp nhuộm được trình bày trong hình 2.1

Hình 1 Sơ đồ phương pháp nhuộm kép đỏ carmin – lục iod.

- Quan sát vi phẫu: quan sát bằng kính hiển vi ở các vật kính 4X, 10X, 40X và

ghi nhận các đặc điểm vi học Dùng máy ảnh để chụp lại

1.2.2 Khảo sát bột dược liệu

- Chuẩn bị bột để soi: lá sau khi thu hái được phải để riêng, loại bỏ đất cát, rửa

sạch, cắt nhỏ và sấy ở nhiệt độ 60oC trong 24 giờ, tán nhỏ, nghiền nát hoặcdùng máy xay Rây qua rây mịn Phần còn lại trên rây được tán hoặc xay và râytiếp (có thể sấy lại cho dễ xay nếu cần) cho đến khi tất cả dược liệu trở thànhbột mịn (không được bỏ qua phần bột còn lại trên rây)

Trước khi quan sát bột bằng kính hiển vi, phải quan sát bột bằng cảm quan(màu sắc, mùi vị, độ mịn…) để có thêm yếu tố kiểm nghiệm Tiêu bản bột dượcliệu được quan sát dưới kính hiển vi và chụp ảnh

- Cách lên tiêu bản bột soi:

Phương pháp thường: cho một giọt nước cất vào giữa phiến kính, dùng que

sạch trộn đều bột, lấy một ít bột cho vào giữa giọt chất lỏng, khuấy nhẹ để phân tánbột và đậy lá kính lại Lấy ngón tay trỏ di nhẹ trên lá kính để các phần tử của bột táchrời nhau và phân tán đều Loại bỏ phần bột và nước thừa nằm ngoài lá kính bằng giấythấm, lau sạch mặt trên phiến kính và lá kính trước khi soi kính hiển vi

Trường hợp đặc biệt: đối với tinh bột và các dược liệu chứa nhiều tinh bột (hạt,

củ…), bột thường có màu trắng ngà Để quan sát cấu trúc các hạt tinh bột có thể giảmbớt ánh sáng Nếu không thấy rõ vân và tễ, có thể thêm 1 giọt KOH 5% ở mép lá kínhrồi quan sát ngay, KOH sẽ khuếch tán vào bột làm cho vân và tễ của bột rõ hơn Nếuđể lâu, hạt tinh bột sẽ bị thủy phân và tan rã

1.2.3 Bóc tách biểu bi

Lá Mã đề được tách lấy lớp biểu bì bằng cách xé hoặc dùng dao lam tách haycạo lấy lớp ngoài cùng và quan sát dưới kính hiển vi Các bộ phận thường được quansát là: tế bào biểu bì, lớp cutin, cấu tạo của lỗ khí, lông che chở, lông tiết…

2 XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM DƯỢC LIỆU

Trong điều kiện bảo quản bình thường, tất cả dược liệu đều chứa một tỉ lệ %theo khối lượng một lượng nước nhất định, gọi là độ đẩm của dược liệu Muốn bảoquản dược liệu tránh hiện tượng lên meo mốc, hoạt chất bị biến đổi thì dược liệu phảicó độ ẩm không vượt quá một giới hạn nào đó (gọi là độ ẩm an toàn) Theo DĐVN IV,với đa số dược liệu, giá trị này khoảng 13%

Độ ẩm của dược liệu được xác định bằng phương pháp mất khối lượng do làmkhô bằng cách sử dụng cân phân tích độ ẩm hồng ngoại

Hình 2 Cân hồng ngoại

Cách tiến hành: trải mỏng khoảng 3 – 5 g dược liệu đã được nghiền mịn lên

đĩa cân sao cho phủ kín mặt đĩa Cho cân hoạt động ở chế độ sấy với nhiệt độ 105oC;cân tự động dừng lại khi độ ẩm thay đổi một lượng nhỏ hơn 0,05% trong một phút

Ghi nhận kết quả độ ẩm hiển thị Tiếp tục thực hiện với 2 mẫu khác Độ ẩm của dượcliệu là trung bình cộng kết quả độ ẩm của 3 lần đo.

3 HÓA HỌC

3.1 Phân tích sơ bộ

Các chất trong nguyên liệu lá Mã đề được chiết tách thành 3 phân đoạn với 3loại dung môi có độ phân cực khác nhau: ete dầu hỏa (kém phân cực), etanol 96% vànước (phân cực mạnh) Sau đó định tính nhanh các hợp chất trong các phân đoạn bằngcác phản ứng đặc trưng Quá trình phân tích sơ bộ cần tiến hành theo tuần tự theo các

sơ đồ Hình 2.3

Lấy 1/3 lượng dịch chiết cồn

thêm lượng tương đương HCl

10% Cách thuỷ 100oC/ 30 phút

Nước x 3 lần

Cách thuỷ 90oC/ 15 phút

Lấy 1/3 lượng dịch chiết nước

thêm lượng tương đương HCl

10% Cách thuỷ 100oC/ 30 phút

Đun cách thuỷ loại bỏ bớt khoảng 75% cồn trước khi lắc chiết với ether

Hình 3 Sơ đồ quy trình chiết dược liệu

Dịch chiết ether

sứ Có mùi thơm, Thêm vài giọt cồn, Bốc hơi hết cồn

Bốc hơi trên chén

sứ đến cắn

Bốc hơi trên chén

sứ đến cắn

Làm phản ứng Liebermann- Burchard

Bốc hơi đến cắn, hoà tan trong nước acid Phản ứng với thuốc thử chung alkaloid

Bốc hơi trên chén

sứ đến cắn

Cho tác dụng với kiềm, soi trong UV 365

Phản ứng Borntrager

Bốc hơi đến cắn hoà tan trong cồn làm phản ứng cyanidin

Có vết

trong mờ

Lớp phân cách có

màu đỏ

nâu- tím và vòng màu lục hay tím khuyết tán lên

Có tủa

Tăng cường độ phát quang khi soi UV

Dung dịch kiềm có

màu đỏ

Có màu đỏThuốc thử

Carr-Price màu xanh chuyển sang đỏ

Acid sulfuric đặc màu lục- xanh dương đậm

Chất béo Tinh dầu Carotenoid Triterpenoid Alkaloid Coumarin Anthraquinon Flavonoid

sứ đến cắn

Cho tác dụng với kiềm, soi trong UV 365

Bốc hơi đến cắn

Cho tác dụng với

TT Raymond- Marthoud

và Xanthydrol

Làm phản ứng cyanidin

Đun cách thuỷ 10 phút với HCl 10%

Phản ứng với dung dịch FeCL3

và dung dịch gelatin muối

Bốc hơi tới cắn hoà tan trong nước, lắc mạnh

Phản ứng với thuốc thử Fehling

Có tủa Tăng

cường độ phát quang khi soi UV

Có màu đỏ Có màu đỏ Xanh rêu-

xanh đen với FeCl3tủa bông với gelatin muối

Cột bọt bền trên 15 phút

Tủa đỏ gạchTím với

thuốc thử Raymond- Marthoud

Đỏ với Xanthydrol

Alkaloid Coumarin Glycosid

tim Flavonoid-ϒ-pyron -ProanthocFlav

yanidin

Tannin Saponin Hợp chất

khử

Thêm 1 ít tinh thể Na

2CO

3

Có bọt khí bay lên

Acid hữu cơ

Thêm vài giọt HCl 10% và KOH 10%

Đỏ với dung dịch acid, xanh với dung dịch kiềm

Flav

-anthocyanidin

Glycosid timanthraquinon

CoumarinTriterpenoid

Có màu đỏTím với thuốc thử

Raymond- Marthoud

Có màu đỏ

Tăng cường độ phát quang trong UV

Có màu đỏ nâu-

Bốc hơi tới cắn, làm phản ứng với thuốc thử Raymond- Marthoud

Phản ứng Borntrager

Bốc hơi tới cắn

Nhỏ dung dịch kiềm 10% soi trong UV 365

Bốc hơi tới cắn

ether

Cho tác dụng với

TT Raymond- Marthoud

và Xanthydrol

Bốc hơi tới cắn, hoà lại trong cồn 25% Làm phản ứng cyanidin

Đun cách thuỷ 10 phút với HCl 10%

Phản ứng với dung dịch FeCl

3

và dung dịch gelatin muối

Bốc hơi tới cắn hoà tan trong cồn 25%., Pha loãng với nước, lắc mạnh

Bốc hơi tới cắn, hoà tan lại trong cồn 25% Phản ứng với thuốc thử Fehling

Có tủa Có màu đỏ Có màu đỏ Xanh rêu-

xanh đen với FeCl3tủa bông trắng ngà với gelatin muối

Cột bọt bền trên 15 phút

Tủa đỏ gạchTím với

thuốc thử Raymond- Marthoud

Đỏ với Xanthydrol

Alkaloid Glycosid

tim

ϒ-pyron -ProanthocFlav

Flavonoid-yanidin

Tannin Saponin Hợp chất

khử

Pha loãng trong 5 thể tích cồn 95% hay aceton

Có tủa bông trằng

Polyuronid

Thêm 1 ít tinh thể

Na2CO3

Có bọt khí bay lên

Acid hữu cơ

Thêm vài giọt HCl 10% và KOH 10%

Đỏ với dung dịch acid, xanh với dung dịch kiềm

Flav

-anthocyanidin

HCl/ cách thuỷ 30 phút, chiết bằng ether

ethylic

Glycosid timAnthraquinon

Triterpenoid

Có màu đỏTím với thuốc thử

Raymond- Marthoud

Có màu đỏ

Có màu đỏ nâu-

Bốc hơi tới cắn, làm phản ứng với thuốc thử Raymond- Marthoud

Phản ứng Borntrager

Bốc hơi tới cắn

3.2 Sắc ký lớp mỏng

3.2.1 Sắc ký lớp mỏng nhóm triterpenoid

Các nghiên cứu gần đây cho thấy một số triterpenoid phân lập được từ lá P.major

bao gồm: axit oleanolic, axit ursolic có tác dụng ức chế cyclooxygenase-2 và

cyclooxygenase-1 là các enzym xúc tác sinh tổng hợp prostaglandin (in vitro) do đó các

hoạt chất này có tác dụng chống ung thư, chống viêm loét và xơ hoá, ức chế hoạt độngcủa virus HIV

Triterpenoid tự do trong lá mã đề có tác dụng dược lý nhưng không đặc trưngcho việc định tính Nên chúng tôi đề xuất khảo sát thêm sắc ký lớp mỏng saponin

Mẫu thư: Lấy khoảng 10 g dược liệu cho vào bình nón có nút mài Sau đó chiết

với 20 ml ete dầu hỏa trong 15 phút (chiết 2 lần) Gộp dịch chiết lại và loại clorophinbằng than hoạt Lấy dịch lọc đem cô cách thủy đến cắn Cho khoảng 2ml ete dầu hỏahòa tan cắn rồi đem chấm sắc ký

Bản sắc ký: bản mỏng silicagel F254 (Merk) tráng sẵn, kích thước 2,5x10 cm Dung môi khai triển là Ete dầu hỏa : Aceton ( 9:1 và 8:2)

Cách tiến hành: Chấm vạch lên bản mỏng Sau khi triển khai trong bình sắc ký

xong, để khô bản mỏng ngoài nhiệt độ phòng, quan sát và đếm số vạch bằng mắtthường Soi UV (365 nm, 254 nm) và hiện vết bằng thuốc thử vanillin - sullfuric

3.2.2 Sắc ký lớp mỏng nhóm saponin

Mẫu thư: Lấy khoảng 3 g dược liệu cho vào bình nón có nút mài Đun cách

thủy với 20 ml cồn 70% trong 15 phút Cô dịch chiết đến cắn, hòa tan cắn với một ítnước rồi lọc Cho 10ml dung dịch HCl 10% vào dịch lọc và đun cách thủy ở 100oCtrong 10 phút Dịch thủy phân được chiết với 20 ml CHCl3 Lấy lớp CHCl3 cô đến cắnrồi hòa tan lại trong 2 ml CHCl3

Bản sắc ký:bản mỏng silicagel F254 (Merk)tráng sẵn, kích thước 2,5x10 cm Dung môi khai triển: CHCl3: MeOH: H2O (65:35:10).

Cách tiến hành: Chấm vạch lên bản mỏng Sau khi triển khai trong bình sắc ký

xong, để khô bản mỏng ngoài nhiệt độ phòng, quan sát và đếm số vạch bằng mắtthường Soi UV (365 nm, 254 nm) và hiện vết bằng thuốc thử vanillin - sullfuric

Soi UV (365 nm, 254 nm) và hiện vết bằng thuốc thử vanillin - sullfuric